植物生理学实验操作(部分)

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,植物生理学实验操作指南,植物生理实验室,2005,，,9,实验一 淀粉酶的提取及作用,原理：,1.,淀粉 淀粉酶水解 蓝色糊精 红色糊精 无色糊精 麦芽糖 葡萄糖,2.,葡萄糖,+,斐林试剂,Cu,2,O,(,砖,红色）,植物材料与实验器具,：,植物材料：,萌动的小麦,实验器具：,试管；玻棒；量筒,；,研钵；漏斗；电炉；水浴锅,试 剂：,2%,淀粉溶液；稀,I-KI,溶液（原液稀释,5,倍）；斐林试剂,操作步骤：,1.,取,5-10,粒萌动的小麦种子放入研钵中，用量筒取,10ml,蒸馏水作为淀粉酶提取液总量,（,包括研钵清洗、种子研磨），分三次加入，将小麦研成浆状，用脱脂棉过滤于试管中,摇匀。滤液静置,5-10min,上清液为淀粉酶的提取液。,操作步骤：,2.,取,2,只刻度试管做标记,A,管、,B,管,A,管：,2ml 2%,淀粉液,+2ml,蒸馏水,38,B,管：,2ml 2%,淀粉液,+2ml,淀粉酶提取液,20min,加,I-KI 2,3,滴 观察并比较两管颜色变化。,3.,B,管,+3ml,斐林试剂 沸水浴,2,5min,观察颜色变化,作业：,1.,记录观察结果并作必要的分析。,操作步骤：,实验二 植物组织水势的测定,原理：,根据渗透作用的原理，用小液滴法测得蔗糖溶液与植物组织中之间的等渗浓度，根据公式,W(,细胞水势,)=,s=CRT,求得溶液的水势，从而得知植物组织的水势。,材料与实验器具,：,植物材料：,女贞,叶片,实验器具：,细滴管；试管及指形管；烧杯；镊子、剪刀；移液管；标签纸,试 剂：,1 mol/L,蔗糖溶液；甲烯蓝溶液,操作步骤：,1.,用短滴管吸取,1M,蔗糖溶液取,0.5ml,、,1ml,、,2ml,、,3ml,、,4ml,分别放入,10ml,刻度试管中，加蒸馏水至,10ml,，,盖上塞子上下倒转混匀，配成,0.05M,、,0.1M,、,0.2M,、,0.3M,、,0.4M,的糖,液。,操作步骤：,2.,用移液管从浓度各试管中吸出,1ml,注入对应的指形管内，各管均加塞，并贴上标签。,操作步骤：,3.,将女贞叶片在叠在一起,，,沿中脉两边用钻孔器打取,10,片小圆片，分别放入小指形管内，盖上木塞，放置,20min(,期间摇动,2,3,次）后，加甲烯蓝,2,滴摇匀。,操作步骤：,4.,用长滴管吸取着色溶液放入原相应的蔗糖溶液中，慢慢放出一滴蓝色溶液，在白色纸片上观察小液滴升降情况，并作记录。,作业：,1.,记录小,溶液浓（,mol/L,）,0.05,0.1,0.2,0.3,0.4,小液流方向,解释,作业：,2.,按下列公式计算组织的水势：,W(,细胞水势,)=,s=CRT,式中：,s,溶液的渗透势，以,MPa,为单位。,R,气体常数，为,0.008314,MPaL,/,（,molK,）。,T,绝对温度，即,273+t,单位为,K,。,C,溶液的摩尔浓度，以,mol/L,为单位。,思考题：,1.,用小液流法测定植物组织水势时，为什么应强调所用试管、毛吸管应保持干燥,2.,打取小圆片并投入试管中时动作应迅速，加入甲烯蓝不能太多？,实验三 叶绿素含量的测定,原理：,根据朗伯,比尔定律，某有色溶液的吸光度,A,与其中溶质浓度,C,和液层厚度,L,成正比,。,叶绿素在,652nm(,混合）、,663nm,、,645nm,有,最大吸收峰。,根据在分光光度计下测定的吸光度，求得叶绿素的含量。,材料与实验器具,：,植物材料：,女贞、海桐叶片,实验器具：,分光光度计；电子天平；研钵；试管；小漏斗；滤纸；吸水纸；移,液管,；量筒；剪刀,试 剂：,95,乙醇（或,80,丙酮）；石英砂；碳酸钙粉,操作步骤：,1.,称取剪碎的新鲜样品,0.1g,左右，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及,3,5ml 95,乙醇，研成均浆，继续研磨至组织变白。静置,3,5min,。,操作步骤：,2.,取滤纸,1,张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到,10ml,试管中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。,操作步骤：,3.,用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至,10 ml,，,摇匀。,操作步骤：,4.,把叶绿体色素提取液倒入光径,1cm,的比色杯内。以,95,乙醇为空白，在波长,663nm,、,645nm,下或,652nm,测定吸光度。,操作步骤：,5.,计算公式：,叶绿素的含量（,mg/g,）,=O.D,652,/34.5,提取液体积,稀释倍数,/,样品鲜重（或干重）。,Ca=13.95A,663,6.88A,645,；,Cb,=24.96A,645,7.32A,663,作业：,1.,计算并比较两种植物叶绿素含量。,思考题：,为什么提取叶绿素时干材料一定要用,80,的丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取？,实验六 过氧化氢酶活力测定,原理：,过氧化氢酶（,catalase,）,属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化,H,2,O,2,分解为水和,O,2,，,可根据,H,2,O,2,的消耗量或,O,2,的生成量测定该酶的活力大小。用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的,H,2,O,2,的量。,KMnO,4,与,H,2,O,2,反应方程式如下：,5H,2,O,2,+2KMnO,4,+3H,2,SO,4,K,2,SO,4,+,MnSO,4,+8H,2,O+5O,2,材料与实验器具：,植物材料：,海桐茎、叶片等,实验器材：,研钵；电炉；水浴锅；酸式滴定管；量筒；锥形瓶；漏斗；试管；移液管,试 剂：,0.1mol/L,高锰酸钾标准液；,1%H,2,O,2,；,10%H,2,SO,4,；,CaCO,3,粉,操作步骤：,1.,酶液提取：取叶片,0.5 g,（或,茎）加入少量蒸馏水，加,CaCO,3,粉及石英砂少许，研磨成匀浆，再加蒸馏水至总量,25ml,，,在室温下浸提,10,分钟，不时摇动，用脱脂棉过滤于小烧杯中,静置上清液即为过氧化氢酶的粗提液。,操作步骤：,2.,吸取,5ml,酶,提取液放入一试管中，置沸水中加热,5,分钟，使酶失活,。,3.,取,50ml,三角瓶,2,个（,1,个测定,另,1,个为对照）,失活酶液,(,对照,),CAT,酶液,+20ml,蒸馏水,+1%1ml H,2,O,2,摇匀,40,度水浴反应（,10min,）,+2ml10%H,2,SO,4,终止反应,0.1mol/LKMnO,4,滴定,操作步骤：,4.,滴定终点以瓶中溶液保持浅红色,20,秒不消失为准,记录所用的高锰酸钾的量。,5.,酶活性用每,g,鲜重样品,1min,内分解,H,2,O,2,的,mg,数表示：过氧化氢酶活性（,H,2,O,2,mg/g.min,）,（,A,B,）,V,T,1.7/(WV,S,t),操作步骤：,式中：,A,对照,KMnO,4,滴定,ml,数；,B,酶反应后,KMnO,4,滴定,ml,数；,VT,提取酶液总量（,ml,）；,VS,反应时所用酶液量（,ml,）；,W,样品鲜重（,g,）；,t,反应时间（,min,）；,1.7,为,1ml 0.1mol/L KMnO,4,相当于,1.7mg H,2,O,2,。,作业：,计算,CAT,活性的大小。,查找资料测定,CAT,其它的方法。,思考题：,实验中加碳酸钙的作用是什么？,实验四 叶绿素的提取、分离 及化学性质鉴定,实验目的：,掌握植物中叶绿体色素的成分分离和定性、定量分析的原理和方法。,一、提取、分离原理：,1,、溶解性。,叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用,95%,的乙醇或,80%,的丙酮提取,？,？,？,？,2,、吸附性。,滤纸对,Chlb,、,Chla,、,叶黄素、胡萝卜素的吸附能力不同,(,？,),，当用石油醚作推动剂时，其在滤纸上的移动速度不同，可相互分离。,植物材料,冬青叶片,1.0g,