观察细胞中DNA和RNA的分布

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验三,观察,DNA,和,RNA,在细胞 中的分布,原理：甲基绿和吡罗红两种染色剂对,DNA,和,RNA,的亲和力不同，甲基绿使,DNA,呈现绿色，吡罗红使,RNA,呈现红色。利用甲基绿和吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示,DNA,和,RNA,在细胞中的分布。盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中的,DNA,与蛋白质分离，有利于,DNA,和染色剂结合。,Unna,染色法：,Unna,染色法：,1899,年,Pappenheim,首创了甲基绿,-,哌洛宁（,mehtyl-green-pyronim,）染色法。,1902,年,Unna,对这一方法进行了改良。,1940,年,Brachet,研究证明用甲基绿,哌洛宁对,DNA,和,RNA,有选择性的染色效果。碱性的甲基绿,-,哌洛宁混合染料处理细胞后，由于,DNA,、,RNA,对染料具有的亲和力不同，而使这两种染料对两类核酸具有了选择性。,DNA,被甲基绿染成绿色，,RNA,被哌洛宁染成红色，这样就能使细胞中两种核酸分布显示出来。,实验目的,1,、学会准备本实验。,2,、练习并熟练掌握本实验操作过程。,3,、学会指导学生实验。,课前准备,1,、实验材料用具：人的口腔上皮细胞或蚕豆叶表皮，洋葱表皮,大烧杯，小烧杯，温度计，滴管，消毒牙签，载玻片，盖玻片，铁架台，石棉网，火柴，酒精灯，吸水纸，显微镜,2,、质量分数为,0.9%,的,NaCl,溶液，质量分数为,0.8%,的盐酸，吡罗红甲基绿染色剂（取,A,液,20 mL,B,液,80 mL,配成染色剂，使用时现配。,A,液：取吡罗红甲基绿粉,1 g,，加入,100 mL,蒸馏水中溶解，放入棕色瓶中备用。,B,液：取乙酸钠,16.4 g,用蒸馏水溶解至,1 000 mL,。取乙酸,12 mL,，用蒸馏水稀释至,1 000 mL,。取稀释的乙酸钠溶液,30 mL,和乙酸,20 mL,，加蒸馏水,50 mL,配成,pH,为,4.8,的溶液），蒸馏水。,Unna,试剂,甲液,5%,派洛宁水溶液，,6ml,2%,的甲基绿水溶液，,6ml,蒸馏水，,16ml,乙液，,1mol/L,乙酸钠，,16ml,用时混合。,乙液，,1mol/L,乙酸钠，,A,、取乙酸,6 mL-100mL,B,、乙酸钠,13.5 g-100mL,A 40mL+B,60ml,即可。,学生预习实验。,学生预习实验。,（一）老师介绍实验的原理以及科学认识的模式,原理：甲基绿和吡罗红两种染色剂对,DNA,和,RNA,的亲和力不同，甲基绿使,DNA,呈现绿色，吡罗红使,RNA,呈现红色。利用甲基绿和吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示,DNA,和,RNA,在细胞中的分布。盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中的,DNA,与蛋白质分离，有利于,DNA,和染色剂结合。,科学认识模式是“假设检验”，即在提出问题后，接着提出猜测性的假设，然后用观察和实验来检验。这种科学认识模式的程序是问题试探性假设批判与检验。这是科学探究的一般程序，也是探究性学习的一般程序。,（二）找一个预习作业做得比较好的同学，,（二）找一个预习作业做得比较好的同学，陈述实验如何进行,A.,问题的提出：,DNA,和,RNA,在细胞中是怎么分布的？,B.,试探性假设：,DNA,分布在细胞核，,RNA,分布在细胞质。,C.,实验检验：甲基绿使,DNA,呈现绿色，吡罗红使,RNA,呈现红色，通过观察两种颜色出现的部位来判断,DNA,和,RNA,在细胞中的分布。,实验方法步骤,1.,取口腔上皮细胞,（,1,）在洁净的载玻片上，滴一滴质量分数为,0.9%,的,NaCl,溶液。,（,2,）用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻轻地刮几下，把牙签上附有碎屑的一端，放在载玻片的液滴中涂抹几下。,（,3,）点燃酒精灯，将涂有口腔上皮细胞的载玻片烘干。,2.,水解,（,1,）在小烧杯中加入,30 mL,质量分数为,8%,的盐酸，将烘干的载玻片放入小烧杯中。,（,2,）在大烧杯中加入,30,温水。,（,1,）用吸水纸吸去载玻片上的水分。,（,2,）将吡罗红甲基绿染色剂滴,2,滴在载玻片上，染色,5 min,。,（,3,）吸去多余染色剂，盖上盖玻片。,5.,观察,低：在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；,高：转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。,洋葱表皮细胞,结论：通过各种动植物实验材料的观察，同学们观察到的结果非常相似，在细胞核部分被染成了绿色，而在细胞质部分被染成了红色。说明,DNA,主要分布在细胞核中，,RNA,主要分布在细胞质中。,注意事项,1.,材料的选择,选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察；,常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞,(,为避免原有颜色的干扰，不可使用紫色表皮细胞,),2.,取材要点,取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；,取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。,3.,冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗。,4.,安全要点,用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂；,烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却,1,分钟。,5.,换用高倍镜观察材料时，只能用细准焦螺旋进行调焦，切不可动粗准焦螺旋。,1,、原理与解析,(1),真核细胞的,DNA,主要分布在细胞核内，,RNA,主要分布在细胞质中。,(2),甲基绿和吡罗红两种染色剂对,DNA,和,RNA,的亲和力不同，甲基绿对,DNA,亲和力强，使,DNA,显现出绿色，而吡罗红对,RNA,的亲和力强，使,RNA,呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示,DNA,和,RNA,在细胞中的分布。,(3),盐酸的作用,盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；,盐酸使染色体中的,DNA,与蛋白质分离，便于,DNA,与染色剂的结合。,请你把观察到的实验现象记录在下表中，分析得出结论。,选用材料,细胞核颜色,细胞质颜色,口腔上皮细胞,洋葱表皮细胞,自选材料,结论,1,绘一简图，显示,Unna,染色法制作的标本，在细胞质及细胞核内的染色结果上有何区别。这种染色差异说明什么？,2,、盐酸有什么作用？,3,、简述实验原理。,