遗传实验课总结

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,有丝分裂,材料：黑麦根尖。,1,）材料的准备和取材,选取黑麦种子浸泡于水中，使种子吸胀,(,浸泡时间视不同作物而异,),。,然后将吸胀的种子捞出，放在垫有滤纸的培养皿中。,再将培养皿置于,25,度条件下（温箱）发芽。,待根长约,1,1.5cm,时此时大量细胞进行分裂时剪根,(,一般以上午,10:30-11:30,为宜,),。,2,）预处理：,a,：目的：,为了有利于对有丝分裂中染色体的观察和计数，在固定之前应用理化因素进行预处理，这样可以改变细胞质的粘度，抑制或破坏纺锤丝的形成，促使染色体缩短和分散等。,b,：预处理方法：,低温预处理：,剪取黑麦根尖放入盛有蒸馏水的指形管中，再将指形管置于冰水共存的冰瓶中，将冰瓶置,0-3,度冰箱处理,24,小时。染色体数较多的材料可适当延长处理时间。,）固定：,a:,目的：采用各种渗透力强的固定液将植物的组织、细胞迅速杀死，使蛋白质沉淀并尽量保持其原有状态。,b:,固定液的配制：,Carnoy s,固定液,:,冰醋酸：纯酒精,1:3,固定时间：,24hr,4,）解离、染色,解离,：酸解法；用清水冲洗根尖几次，将根放入,1mol/L,盐酸溶液中。解离是为了使胞间连丝离解掉，使细胞分散，便于压片。,染色,：,染液：醋酸洋红,将根取出后，用清水冲洗几次，冲掉残留在组织间地酸。用醋酸洋红染色。,5,）制片,取一条根置于载玻片上，切取根尖分生组织约,0.5mm,，大小,2-3,段,加一滴醋酸洋红,盖上盖玻片,用挑针尖轻敲根尖材料成雾状,用拇指轻压材料,镜检,减数分裂,偶线期,：同源染色体相互纵向靠拢配对，称为,联会,。这样联会的一对同源染色体，称为,二价体,。偶线期所表现的这一特征时间很短，一般较难观察到。,粗线期：,配对后的染色体逐渐缩短变粗，含有两条姐妹染色单体，这样一个二价体中就包含了四条染色单体，故又称为四合体。在此期间各同源染色体的非姐妹染色单体间可能发生片段,交换,。,中期,：核仁和核膜消失，所有二价体排列在赤道板两侧，细胞质里出现纺锤体，每个二价体的两条染色体的着丝点分别趋向纺锤体的两极，,此时最适于计数染色体的数目和观察各染色体的形态特征。,第一次减数分裂后期完成染色体数目的减半。,二分体,：减数分裂末期,I,出现，一个细胞分裂形成两个染色体数目减半的子细胞。,四分体,：减数分裂,II,末期形成，最终形成四个配子。,1.,取材及固定,：,取材的时间及材料大小必须十分恰当，才能获得更多的花粉母细胞分裂相，以供观察。,蚕豆：蚕豆现蕾后，于上午,8,10,时（视气温而定，但必须在上午,11,时前）摘取茎顶有效花序，将周围小叶与苞叶去掉，将花苞放入卡诺固定液中。,减数分裂,2.,染色制片：,取出经固定的花苞，至于吸水纸上，吸去保存液或固定液，移至载玻片上，剥出花药。用解剖针截断花药。轻轻挤压，使花粉母细胞在切口处散出。滴一小滴醋酸洋红染色液。,用镊子把药壁夹碎,将细胞壁残渣除去,静置染色,5,10mim,再盖上盖玻片,后用挑针背部或铅笔橡皮头处轻敲,用拇指压片,镜检,果蝇唾腺染色体的观察,双翅目昆虫的幼虫期都具有很大的唾腺细胞。,因为这些细胞发育到一定阶段后就不再进行有丝分裂，停止在间期。但是染色质还是不断地复制，形成约,10004000,拷贝的染色质丝，比普通的有丝分裂中期的染色体大得多，称为多线染色体和巨大染色体。,巨大，是多线染色体；,正常：间期,DNA,复制 两条染色单体 着丝点裂开,子染色体 核分裂 胞质分裂,果蝇：有丝分裂停止在分裂间期，,DNA,不断自我复制，着丝点不裂开,同源染色体紧密配对：,体细胞联会,，所以染色体只呈现单倍数；,形成染色中心，从染色体中心处伸出,5,条长臂，,1,条短臂；,染色后，出现一系列宽窄不同、染色深浅不一的横纹。,这些横纹的数目、位置、宽窄及排列顺序都具有种的特异性。一旦染色体上发生了缺失，重复，倒位，易位等，也可较容易地在唾腺染色体上观察识别出来。,可见唾腺染色体技术是遗传学研究中一项基本的技术。,果蝇唾腺染色体特点：,1,、幼虫选取,果蝇的三龄幼虫活体,当幼虫爬上瓶壁准备,化蛹前，即为三龄幼,虫。,肥大、行动迟缓。,一龄幼虫,两龄幼虫,三龄幼虫,取三龄幼虫，,置于载玻片上，并滴加一滴生理盐水，观察幼虫结构：具一钝尾和带黑色口器的尖头端,2,、腺体剖取：,取两支解剖针，一针压住幼虫身体的近头端,1/3,处，固定幼,虫，另一针压住幼虫头部，压点尽可能靠头部口器处。,将解剖针平稳前移，使头部与身体拉开，口器部分断开，,体内各器官从切口挤出，一对唾腺也随之而出,。,唾腺,脂肪体,解剖针,解剖针,3,染色：用,1%,醋酸洋红染色,10,20min,。,4,压片：用铅笔轻轻敲盖片几下，然后用拇指压片。,5,镜检：先在低倍镜下找到染色体分散良好的图像，再在高倍镜下仔细观察唾腺染色体的特征。,果蝇的杂交试验,果蝇作为遗传学研究的材料的优点,果蝇的,生活史,四个阶段：卵，幼虫，蛹，成虫,在,20-25,培养下，,14,天完成一个周期。卵到幼虫大约一周左右,幼虫到成蝇大约一周左右,成蝇的寿命大约在一个月左右,.,为了不让亲本与,F,1,、,F,1,和,F,2,成虫交配，导致数据不正确，因此，要在配好组合后,一星期内,移去亲本。,左：雄性果蝇的左前足 中：跗节基部的性梳 右：雌果蝇无性梳,白眼,红眼,眼色性状,翅形性状,长翅,小翅,刚毛性状,直刚毛,卷刚毛,我们实验课涉及的果蝇类型：,黑体：黑体、红眼、长翅、直刚毛,三隐性：灰体、白眼、小翅、卷刚毛,野生型：灰体、红眼、长翅、直刚毛,处女蝇,因为雌果蝇生殖器官有受精囊，可保存交配所得的大量的精子，能使大量的卵细胞受精。因此，在做果蝇杂交实验的时候，,亲本雌果蝇必须是处女蝇,，保证实验结果的可靠性。雌果蝇自羽化开始,12,小时之内尚未成熟而无交配能力。选择处女蝇时，先把培养瓶中的老果蝇全部除去，收集,12,小时之内羽化出来的新果蝇，麻醉后用放大镜在白瓷板上将果蝇雌雄分开，这时得到的雌果蝇应该全部都是处女蝇。如果要验证选取的处女蝇是否准确，先不要放入雄蝇，,3,天后看雌蝇是否产卵，如果产卵就不是处女蝇了。当证明确实是处女蝇的情况下再放入雄蝇，进行遗传杂交实验。,分离规律,一对等位基因的杂合子中，各自保持其独立性，在配子形成时，彼此分开，随机进入不同的配子，在一般情况下：,F1,杂合子的配子分离比例为：,1,:,1,；,F2,表型分离比是,3,:,1,；,F2,基因型分离比为,1,:,2,:,1,。,自由组合定律,支配两对（或两对以上）不同性状的等位基因，在杂合状态保持其独立性。配子形成时，各等位基因彼此独立分离，不同对的基因自由组合。在一般情况下，,F1,配子分离比是,1,:,1,:,1,:,1,；,F2,基因型分离比：（,1,:,2,:,1,）,2,F2,表型比为：,9,:,3,:,3,:,1,。,伴性遗传,由性染色体所携带的基因在遗传时与性,别相联系的遗传方式。,正交,:,黑体,(,aaX,+,X,+,),三隐性,(,AX,W,Y,),F,1,灰体红眼,(,Aa,X,+,X,W,Aa,X,+,Y,),F,2,(,灰红,9,:,灰白,3,:,黑红,3,:,黑白,1,),两对性状的独立遗传实验,反交,:,三隐性,(,AAX,W,X,W,),黑体,(,aaX,+,Y,),F,1,:,灰体红眼,:,灰体白眼,(,Aa,X,+,X,W,:,Aa,X,W,Y,),F,2,:,灰红,3,:,灰白,3,:,黑红,1,:,黑白,1,考察性状,:,眼色，性别,正交,:,X,+,X,+,X,w,Y,反交,:,X,w,X,w,X,+,Y,配子,X,+,X,w,Y X,w,X,+,Y,F,1,X,+,X,w,X,+,Y X,w,X,+,X,w,Y,F,2,X,+,X,+,X,+,Y X,+,X,w,X,w,Y,X,w,X,w,X,+,Y X,+,X,w,X,w,Y,红眼与白眼的比例为,3:1,红眼与白眼的比例为,1:1,雌雄各占一半,没有白眼雌蝇,.,伴性遗传,隔代遗传,交叉遗传,连锁遗传,X,w,sn,m,X,w,sn,m,（三隐性）,X,+,Y,（野生型）,F,1,（三杂合体）,X,w,sn,m,X,+,，,X,w,sn,m,Y,（三隐性）,配子,X,w,sn,m,X,+,X,w,+,m,X,+,sn,+,X,w,sn,+,X,+,m,X,+,sn,m,X,w,+,X,w,sn,m,Y,姊妹交,F,t,眼色,w,、刚毛,sn,、翅形,m,（三点测验）,对于果蝇连锁遗传实验：,眼色、刚毛和翅型基因在,X,染色体上的排列顺序以及相互间的遗传距离可以参考书本,100,102,页。,卡方测验,参考书本,81-82,页。,实验结果分析,相符：,不相符合的原因：,由于果蝇麻醉过渡，致使群体数量有限；,雌雄果蝇的发育不同步，雌果蝇相对发育的比较快，而雄果蝇发育的比较慢；,果蝇雌雄识别以及性状的鉴别可能有误。,卡方测验：,遗传研究中，,检验杂交试验得到的,k,种表现型的数目是否符合一个预期的理论比例。,公式中,o,是实际观察值，,e,为理论预期值，为积加符号。,df,自由度，等于类型数减,1,。,如自由度（,df,）等于,1,，需要矫正：将观察值与理论值之差的绝对值应减去校正,系,数,0.5,，上式可写为：,（,|o-e|-0.5,）,2,2,=,e,df=k-1=3,；,2,=0.47 0.05,接受无效假设,结论：,YyRr,个体自交后代四种表现型的比例与,9:3:3:1,的理论比例间差异不显著。,