DNA的粗提取和鉴定

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,DNA的粗提取和鉴定,基础知识,染色体成分,蛋白质,DNA,提取,DNA,的基本思路：,利用,DNA,与蛋白质等在物理和化学性质方面的差异，提取,DNA,，去除其他成分。,1,）不同浓度,NaCl,中,DNA,溶解度不同。,2,）,DNA,与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，,DNA,不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。,3,）,DNA,和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性,蛋白酶水解蛋白质。但是对,DNA,没有影响。,4,）,DNA,和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、,DNA,热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受,60,80,高温，而,DNA,在,80,以上才会变性。,5,）,DNA,和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对,DNA,没有影响。,DNA,的粗提取,实验原理,案例一：以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取,1、,实验原理,实验案例,1,）不同浓度,NaCl,中,DNA,溶解度不同。,2,）,DNA,与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，,DNA,不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。,2.,实验材料,动物,提醒：,人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有,DNA,，不适于作为,DNA,提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。,鸡血细胞液的优点：,鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，,含大量的,DNA,既经济又易取,。,植物：,洋葱、新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。,3,、方法与过程,1).,制鸡血细胞液,0.1,g/mL,柠檬酸钠,100,mL,活,鸡鲜血,180mL,500mL,烧杯中，玻棒,搅拌,，离心或静置沉淀。,离心或静置后去掉上清液,血浆,血细胞,6,提取细胞核物质：,溶解核内,DNA,：,析出,DNA,：,DNA,黏稠物再溶解：,提取较纯净的,DNA,：,DNA,的鉴定：,滤取,DNA,黏稠物：,过滤含,DNA,的,NaCl,溶液,：,2),实验方法步骤：,在上述溶液中缓缓,加入蒸馏水，,并沿一个方向,轻轻搅拌,，出现丝状物；,当丝状物不在增加时，停止加水,（此时,NaCl,溶液的浓度相当于,0.14mol/L,）。,用多层纱布,过滤,，含,DNA,的粘稠物留在纱布上。,用两层纱布过滤。,滤液中含有,DNA,。,所得的滤液体积分数为,95%,的冷却酒精,50mL,，用玻棒沿一个方向,轻缓搅拌,，溶液中（,析出,）出现乳白色丝状物，用,玻棒,将,丝状物,卷起。,利用细胞吸水破裂，细胞核内物质释放出来，用,纱布,过滤取其滤液。,在滤液中加,2,mol/L,的,NaCl,溶液并搅拌，使染色质中,DNA,与蛋白质分离，,DNA,充分溶解，,过滤,(,除杂质,),在烧杯中用,2,mol/L,的,NaCl,溶液溶解,DNA,。,DNA,与,二苯胺试剂,反应使溶液呈,现蓝色,。,鉴定,不变蓝,对照组,溶液逐渐,变蓝,丝状物,(DNA),实验组,图示,结果,加入物质,比较,均加入：,4 mL,二苯胺试剂,2mol/LNaCl,溶液,5 mL,自变量,你能采用其他方法对,DNA,进行鉴定吗？,取少许丝状物，置玻片中央，加,1,滴,甲基绿,溶液，丝状物变成,绿色。,注意：鉴定所用的试剂是,二苯胺,或,甲基绿,。,用,二苯胺,须加热。用,甲基绿不用水浴,加热。,注 意 事 项,制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠，静置后上层是血清，下层为所需要的血细胞。,整个实验中,加入,“,两次蒸馏水，,三次,NaCl,溶液,，一次酒精,”,两次加蒸馏水的目的不同，一是涨破细胞，二是稀释溶液。,酒精最好用,95%,的冷酒精,;,加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时,动作要,轻缓且朝一个方向,。,保证,DNA,分子的完整性。,使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底。鉴定,DNA,时需沸水浴加热。二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定的效果,.,二苯胺是一种有毒性的试剂,使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位,.,盛放鸡血细胞的容器,最好是塑料容器,（鸡血细胞破碎后释放的,DNA,，容易被玻璃容器吸附，造成提取过程中,DNA,的损失）,小结：,DNA,的粗提取与鉴定,实验原理,DNA,在不同浓度,NaCl,溶液中溶解度不同,DNA,与其他细胞成分在酒精中溶解度不同,DNA,和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同,DNA,与二苯胺呈现蓝色反应,DNA,粗提取,选择适宜材料,破碎细胞,DNA,的溶解和析出,DNA,的纯化,鉴定,DNA,与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应,练习,1下列图示中能反映DNA溶解度与NaCI溶液浓度之间关系的是（）,2在DNA的粗提取和鉴定的实验中，提取鸡血细胞的核物质和析出含DNA的粘稠物的操作过程中均用到蒸馏水，其作用在于(),A前者用来溶解血细胞，后者用来溶解DNA,B前者使血细胞吸水破裂，后者用来稀释NaCl溶液,C前者用来分离细胞核与细胞质，后者用来提取DNA,D前者使DNA从核中分离出来，后者使DNA析出,C,B,3,、下图为,“,DNA,粗提取和鉴定,”,实验的相关操作。这些操作目的正确的是（）,A.,是洗涤血细胞，去除血细胞表面的杂质,B.,是溶解,DNA,，去除不溶于酒精的杂质,C.,是溶解,DNA,，去除不溶于,2 mol/L NaCl,溶液的杂质,D.,是稀释,NaCl,溶液，去除不溶于低浓度,NaCl,溶液的杂质,是释放核物质,是提纯,DNA,，去除溶于酒精的杂质，,稀释,NaCl,溶液，析出,DNA,。,C,