胃癌HER检测亚太工作组建议

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2015/8/13,#,胃癌HER2检测,亚太工作组建议,目的,了解制订亚太胃癌HER2检测建议的,必要性,了解HER2亚太工作组建议以及这些建议与国际,指南,的不同,了解亚太建议对多学科诊断,及,治疗亚太胃癌患者的意义,HER2，人表皮生长因子受体2.,制订适用于亚太地区的,指南,的必要性,关于胃癌HER2检测的,现有指南,主要依据欧洲的检测经验,1,很多APAC国家的当地检测环境不同于欧洲、澳大利亚和美国,APAC建议必须考虑到该区域实验室日常工作中所面临的挑战,1Ruschoff,et al.Mod Pathol,2012;25:63750.,HER2，人表皮生长因子受体2.,制订适用于亚太地区的指南的必要性,修订或扩充了,国际,指南,以体现APAC,实验室,的特有经验,1,强调本地检测环境,提高区域,适,用性,1Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol 2014.,亚太,指南,：概述,Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol,2014.,HER2，人表皮生长因子受体2；IHC，免疫组织化学,HER2多学科检测团队的原则,实验室操作建议,适当的标本类型,胃癌的独有特征,HER2基因扩增评估,IHC HER2染色评估,HER2检测解读和评分,质量控制,处理和固定,抗原修复,染色,对照,HER2多学科检测团队的原则,HER2检测需要多学科协同,准确及时地诊断患者的HER2状态需要肿瘤外科、肿瘤内科和病理团队关键成员之间的协作,多学科团队应共同推动数个关键原则以,保证,检测质量,Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol,2014.,HER2，人表皮生长因子受体2.,胃癌检测的关键原则,应在诊断时常规检查不可手术、局限性晚期、复发性和转移性胃癌和胃食管结合部（,GEJ,）癌患者的HER2过表达情况,1,HER2状态对于胃和GEJ癌同时具有预后和预测价值,25,能否获取HER2靶向治疗不应影响受试患者的决策,确定HER2状态胃癌组织学诊断的时间应尽可能短,1,胃和GEJ癌病情进展迅速、复发率高,必须借助对患者HER2状态的全面了解制定治疗计划,1,HER2报告应提供确定性诊断,不应提交或接受不确定的结果,HER2检测应尽可能自动化以提供更精确和可靠的结果,1,1Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol,2014; 2.Bang,et al.Lancet,2010;28:68797; 3.Ruschoff,et al.Mod Pathol,2012;25:63750; 4.Kim,et al.Ann Surg,Oncol,2011;18:283340; 5.Gomez-Martin,Transl,Oncol,2011;13:63651.,GEJ，胃食管结合部；HER2，人表皮生长因子受体2.,实验室建议,影响检测结果的重要参数,合格,的标本,手术切除和活检标本均可接受,1,更常使用活检标本，因为很多晚期/转移性胃癌常不可手术,4-6处新鲜肿瘤组织的活检标本可以接受,1,肿瘤组织数量不足不能解释异质性，并会提高假阴性结果的风险,2,3,受测活检组织数量不同可能是亚太地区HER2阳性率不同的原因,4-6处活检标本较国际,指南,中的6-8处活检标本更有可操作性,4,不建议使用组织微阵列进行常规标本评估,1,不能完全代表异质性,1Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol,2014; 2.Warneke,et al.Ann Oncol,2013;24:72533; 3.Lee,et al.Eur J Cancer,2013;49:144857; 4.Ruschoff,et al.Mod Pathol,2012;25:63750.,HER2，人表皮生长因子受体2.,处理和固定,应在切除,20分钟内,将,活检标本,置于 10% NBF内,1,应在切除后,1小时内,将,手术切除标本,置于,10% NBF内,1Ruschoff,et al.Mod Pathol,2012;25:63750.,NBF，中性缓冲福尔马林,冷缺血时间和经验证的方案,1,冷缺血时间 = 组织切除到开始福尔马林固定之间的时间,可影响蛋白表达，使HER2检测结果解释不准确，导致假阴性结果,2,3,采用指南建议范围之外的冷缺血时间,必须,经过,验证,应分别验证活检和手术切除标本。,验证必须将标本固定地点（是新鲜转运至实验室，还是在手术室内开始固定）考虑在内,在手术室需要做的：,应在检查申请单中注明切除和置于固定剂的时间,应将标本置于耐用的尺寸适当的容器内，浸泡于10% NBF内,在浸入前应切开手术标本并标记方向,1Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol,2014; 2.Yildiz-Aktas,et al.Mod Pathol,2012;25:1098-105; 3.Neumeister,et al.J Natl Cancer Inst,2012;104:181524.,HER2，人表皮生长因子受体2；NBF，中性缓冲福尔马林,固定：一个影响检测结果的重要因素,可变且未经验证的检测流程在亚太地区常见，这是结果不可靠的主要原因,标本固定受以下因素影响：,温度,渗透速率,标本尺寸（最好厚度不超过4mm）,固定剂与组织体积的比值,pH值,固定时间,必须优化并验证这些参数,Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol,2014.,指南对固定的建议概述,参数,建议,冷缺血至置于固定剂的时间,活检标本 20分钟,手术切除标本 1小时,固定剂类型,10% NBF,固定剂与组织体积的比值,10：1,固定时间,872 小时,（应分别验证活检和手术切除标本的时间）,Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol,2014.,NBF，中性缓冲福尔马林,远距离的样本运送,检测实验室应与当地实施组织采样的中心密切协同以确保对标本进行适当的运送准备,如果标本将在已验证的固定时间内到达HER2检测实验室：,当地中心应根据建议开始固定,应固定标本，密封在适合长距离运输的容器内,如果标本将在已验证的固定时间以外到达HER2检测实验室：,应在运输之前处理标本，用蜡块包埋,Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol,2014.,HER2，人表皮生长因子受体2.,抗原修复,1,推荐自动控温抗原修复,即使是自动化系统也必须优化，并根据生产商建议进行验证,抗原修复不佳是导致假结果的常见原因,过度修复可能活化内源性生物素，导致基于亲和素-生物素染色检测中过强的背景染色，并可导致假阳性结果,2,1Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol,2014; 2.Bussolati,et al.Histopathology,1997;31:4007.,检测,1,实验室应使用标准化的商用IHC和ISH分析,可能与可靠性和,重复,性差相关,应建立并验证胃癌标本专用的检测流程,所有,检测,必须在实验室内验证,不同的IHC抗体导致不同的染色强度,可能影响阳性率,2,为无、低和高水平的HER2蛋白表达生成参考图像以进行标准化评分,1Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol,2014; 2.Cho,et al.Mod Pathol,2013;26:677-84.,HER2，人表皮生长因子受体2；IHC，免疫组织化学；ISH，原位杂交,对照,每个标本玻片上都应有HER2表达水平明确的对照,用于检测假阳性和假阴性结果,IHC：,对照应包括无（IHC 0）和强IHC染色（IHC 3+)的切片,如果可能还应包括不确定染色（IHC 2+),应使用与胃癌标本相似的固定剂、处理和石蜡包埋技术准备对照样品,Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol,2014.,HER2，人表皮生长因子受体2；IHC，免疫组织化学,胃癌HER2检测结果解读和评分建议,胃癌的独有特征,胃癌是一种形成腺体和生成粘液的肿瘤，呈不完全基底侧方/侧方染色模式,胃癌的结果解读和评分指导原则不同于乳腺癌,将乳腺癌的指导原则用于胃癌标本将使HER2阳性标本评为阴性,Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol,2014.,HER2，人表皮生长因子受体2.,乳腺癌和胃癌的区别,乳腺癌图像由Dako回赠；胃癌图像来自F.Hoffmann-L；a Roche,GOJ，胃-食管结合部；IHC,免疫组织化学,IHC 0,IHC 1+,IHC 3+,IHC 2+,乳腺癌,胃癌,由于组织和生物学差异，乳腺癌和胃及胃食管癌的评分不同,胃癌中异质性染色常见,1,2,存在于高达30%的HER2阳性胃癌病例中,3,更常见于IHC2+病例或混合组织学分型内,4,影响检测的各个阶段，从采样到评分,问题,尽管使用现行评分标准分类为HER2阴性，,阳性染色细胞10%的肿瘤对HER2靶向治疗有染色吗？,1Hofman, et al.Histopathology 2008;52:797805; 2.Jouret-Mourin, et al.Acta Gastroenterol Belg 2012;75:913; 3.Ruschoff, et al.Mod Pathol 2012;25:63750; 4.Cho, et al.Ann Surg Oncol 2013;20:47784.,HER2，人表皮生长因子受体2；IHC，免疫组织化学,解释异质性：IH,C,评分,Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol,2014.,HER2，人表皮生长因子受体2；IHC，免疫组织化学,在10%的细胞中观察到强、完全/基底侧方或侧方膜染色,在不同的蜡块切片上重复ICH染色,仍不能确定?,使用ISH确定HER2基因扩增和最终HER2状态,原发和转移性肿瘤的不一致性,原发和转移性胃癌间的HER2状态不一致并不罕见,1,2,IV期病变：应在原发和远端转移样本中进行HER2检测（如可能）,3,应在做出最终治疗决定前将不一致的证据报告至肿瘤学家,3,1Cho,et al.Mod Pathol,2013;26:677-84; 2.Lee,et al.Eur J Cancer,2013;49:144857; 3.Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol,2014.,HER2，人表皮生长因子受体2.,胃癌HER2检测程序,IHC是胃癌的主要检测方法,1,曲妥珠单抗可为高表达HER2蛋白的患者提供最大获益(曲妥珠单抗胃癌ToGA试验),2,ISH用于IHC不确定病例的HER2状态确认,1,首选亮视野ISH法以有效确定HER2扩增区域,澳大利亚胃癌HER2检测研究(GaTHER)认为IHC 3+强烈提示阳性ISH结果,3,1Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol,2014; 2.Bang,et al.Lancet,2012;376:68797; 3.Fox,et al.Am J Surg,Pathol,2012;36:57782.,HER2，人表皮生长因子受体2；IHC，免疫组织化学；ISH，原位杂交,使用IHC HER2染色评估侵袭性癌,评分,手术标本染色模式,活检标本染色模式,IHC 0 (阴性),无染色或,2.0；如存在，记录扩增的多体,ISH阴性,HER2,:CEP17比值 90%,包括至少5个HER2阳性病例（10-20%验证病例）,验证必须独立于乳腺癌方案,如果检测条件、试剂、材料和方法变更必须重新验证,病理学家应每年至少评分50个胃癌病例,Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol 2014.,HER2，人表皮生长因子受体2；IHC，免疫组织化学；ISH，原位杂交,外部质控程序,帮助实验室确保日常检测的标准一致,允许实验室之间长期互相检查HER2检测质量,Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol 2014.,HER2，人表皮生长因子受体2.,总结,关键,点,概述,就诊,应在诊断时常规检查不可手术、局限性晚期、复发性和转移性胃和GEJ癌患者的HER2过表达情况,适当的标本类型,接受手术切除和活检标本,可接受,46*,处活检标本,样品处理和固定,活检标本冷缺血至置于固定剂的时间20分钟，手术切除标本1小时,10% NBF为唯一可接受的固定剂,固定持续时间为,872*,小时,HER2检测结果解释和评分,IHC是胃癌的主要检测方法,ISH用于IHC不确定病例的HER2状态确认,首选亮视野、双探针法进行ISH检测,质量控制,验证必须独立于乳腺癌方案,病理学家应每年至少评分50个胃癌病例,Kim,et al,.Asia Pac J Clin,Oncol 2014.,对亚太实验室有何意义？,亚太,指南,极大的扩充和明确了现有的国际指导原则,所有修订都旨在使现有,指南,更贴近于亚太实验室环境和他们所面对的日常挑战,实验室应尽力符合最佳实践指导原则以提高胃癌中HER2检测的精确性和可靠性,应对一些建议进行调整，以适应国家其他政策，例如,I,H,C,不确定病例的ISH复检,要点概述,制订亚太,指南,以强调当地检测环境，提高国际指南在该区域的可应用性。,强调了多学科协作对晚期/转移性胃癌患者治疗的重要性,涵盖了HER2检测的各阶段,在所有HER2检测实验室中应执行并遵守最佳实践指导原则，以确保胃癌患者,获得,精确和可靠的HER2检查,