细胞破碎解析

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,细胞破碎常用方法,破碎方式,机械法,非机械法,研磨法,组织捣碎法,酶溶,法,化学法,物理法,细胞破碎常用方法,高压,匀浆,超声破碎,细胞破碎机理,组织捣碎匀浆机,（一）组织捣碎法,利用组织捣碎机的高速旋转叶片所产生的剪切力将细胞捣碎。,一 机械法,作用机理：,利用匀浆器所产生的剪切力将组织细胞破碎。,（二）匀浆法,HC23-高压细胞破碎机,DY89-1 型电动玻璃匀浆机,（三）超声波破碎,破碎原理：,超声波作用下液体发生空化作用，产生极大的,冲击波和剪切力,，使细胞破碎。,超声波破碎仪,（一）,酶溶法,1,原理：利用酶反应分解破坏细胞壁组分的特殊化学键，从而达到破碎细胞的目的。,2,方法,（,1,）外加酶法：根据细胞壁的组分组成特点，选用合适的酶，分解破坏细胞壁，然后在低渗溶液中使细胞破裂。,例如：溶菌酶（,lysozyme,），它能专一地分解细胞壁上糖蛋白分子的,1,4,糖苷键。,（,2,）自溶法：,特殊的酶溶方式 ，所需的溶胞酶由生物细胞自身产生 。 当细胞在一定的,pH,和适宜的温度条件下保温一段时间后 ， 即可通过细胞自身存在的酶系将细胞破坏 ，使细胞内物质释出 ，其效果取决于自溶条件 。,影响因素：温度 、时间 、,p H,、激活剂和细胞代谢途径,二 非机械法,（二）,化学破碎法,1 概念,利用某 些化学试剂 改变细胞壁或细胞膜的通透性（渗透性）使胞内物质有选择地渗透出来 的处理方法叫化学破碎法,。,2常用的化学试剂,（1）有机溶剂法,有机溶剂可破坏细胞壁或膜中的类脂结构 ，从而改变细胞壁或细胞膜的透过性 ，再经提取可使膜结合的酶或胞内酶等释放到胞外 。,常用的有机溶剂：甲苯 、丙酮 、丁醇 、氯仿等 。,（2）表面活性剂法,可促使细胞某些组分溶解 ，其增溶作用有助于细胞破碎 。,常用的表面活性,剂,： Trition X 、Tween等,（三）物理方法,1.,反复冻融法,利用细胞在快速冷冻时，细胞内水很快结晶，形成大量晶核，体积增大，将细胞胀破,2.,温度差破碎法,利用温度的突然变化使细胞通过热胀冷缩的作用而破碎的方法,例如：,将待破碎细胞在90维持数分钟，立即放入冰水浴使之冷却，如此反复多次，绝大部分细胞可以被破碎。从细菌或病毒中提取蛋白质和核酸时可用此法。,3.,干燥法,主要通过在干燥过程中使细胞壁膜结合的水分丧失，细胞渗透性发生改变，当用丙酮、丁醇或缓冲液等对干燥细胞进行处理时，胞内物质就容易被抽提出来。可分为：空气干燥、真空干燥、冷冻干燥和喷雾干燥。,4.,渗透压冲击法,细胞在高渗透压介质中平衡后，再突然将其转至低渗透压环境中，水会大量进入细胞，使细胞壁和膜胀破,5.,撞击破碎法,细胞冷冻后成为刚性球体，降低破碎难度。,操作：细胞喷雾高速冻结高速载气（300 m/s氮气流）将冻结的微粒子送入破碎室，高速撞击撞击板。,冷冻细胞,高速氮气,方法,技术,原理,效果,成本,举例,机,械,法,研磨法,细胞被研磨物磨碎,适中,便宜,组织捣碎法,细胞被捣碎机捣碎,适中,适中,匀浆法（孔型）,须使细胞通过的小孔，使细胞受到剪切力而破碎,剧烈,适中,细胞悬浮液大规模处理,超声波法,用超声波的空穴作用使细胞破碎,适中,昂贵,细胞悬浮液小规模处理,细胞壁的破碎方法总结,方法,技术,原理,效果,成本,举例,酶法,酶消化法,细胞壁被消化，使细胞破碎,温和,昂贵,化学法,有机溶剂法,有机溶剂溶解细胞壁并使之失稳,适中,便宜,甲苯破碎酵母细胞,表面活性剂法,表面活性剂溶解细胞壁,温和,适中,胆盐作用于大肠杆菌,方法,技术,原理,效果,成本,举例,物,理,法,渗透冲击,渗透压破坏细胞,温和,便宜,血红细胞的破坏,反复冻融法,-15至-20冷冻，再室温下融化，膜的疏水键被破碎,温和,撞击破碎,干燥法,体细胞失水,剧烈,