药物的杂质检查-全面

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第三章 药物的杂质检查,第一节 药物的杂质与限量,第二节 杂质的检查方法,第三节 药物中一般杂质的检查,第四节 特殊杂质的鉴定方法,一、药物的纯度,指药物纯净程度，反映了药物质量的优劣，含有杂质是影响药物纯度的主要因素。,3-1,药物的杂质与限量,是指药物中存在的,无治疗作用,或,影响药物的稳定性和疗效,甚至,对人体健康有害,的微量物质,.,2.,药物的杂质,为保证药品质量,确保用药安全、,有效,必须检查杂质,控制药物纯度,.,1.,有毒副作用的物质,2.,本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质,3.,本身无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但影响药物的科学管理的物质,纯度：,药物的纯净程度。,杂质：,ChP,规定任何影响药品纯度的物质，是影响药物纯度的主要因素 。,药物的纯度检查也可称为杂质检查。,需要从药物的外观性状、理化常数、杂质检查和含,量测定等方面进行综合评定。,药物纯度与化学试剂纯度：,药物纯度：从杂质对用药安全、有效和对药物稳定性的影响等方面来限定。只有合格品和不合格品两个等级。,化学试剂纯度：从杂质可能引起的化学变化对使用的影响方面来限定，不考虑杂质对生物体的生理作用及毒副作用。纯度等级包括色谱纯、光谱纯、优级纯、分析纯、化学纯等。,（一）生产过程中引入,二、药物杂质的来源,（,1,）所用原料不纯；,（,2,）合成工艺中未反应完全的原料、反应中间体、,副产物等；,（,3,）药物在制成制剂的过程中产生的新杂质；,（,4,）合成工艺中使用的试剂、溶剂等；,（,5,）合成工艺中使用的设备、器皿可能引入重金属。,例：阿斯匹林由水杨酸乙酰化制得,乙酰化不完全 水杨酸,(,杂质,),+,+,H,2,SO,4,70,75,o,C,+,+,例：盐酸普鲁卡因注射液的制备,制备过程中加热灭菌,盐酸普鲁卡因注射液,进一步脱羧转化,对氨基苯甲酸,苯胺,引起毒性反应,（二）贮藏过程中引入,（,1,）保管不善或贮存时间过长,（,2,）包装不当,产生杂质,型转化、潮解、发霉,聚合、异构化、晶,水解、氧化、分解、,在外界条件,药品,气、微生物,温度、湿度、日光、空,例：麻醉乙醚在日光、空气及湿气作用下，易氧化分解为,醛,及有毒的,过氧化物,。,CH,3,CH,2,OCH,2,CH,3,CH,3,CHO + CH,3,CH(OH)-O-O-CH(OH)CH,3,（,二羟乙基过氧化物,）,药典规定：启封后,24,小时内,使用,96,：,131,在药物生产过程中引入杂质的途径为,A.,原料不纯或部分未反应完全的原料造成,B.,合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成,C.,需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成,D.,所用金属器皿及装置等引入杂质,E.,由于操作不妥，日光曝晒而使产品发生分解引入的杂质,三、药物杂质的分类,按来源分为：,检查方法收载在,ChP,正文各品种的质量标准中。,检查方法收载在,ChP,的附录中。,特殊杂质：,一般杂质：,在多种药物的生产和贮藏中容易引入的杂质。,在特定药物的生产和贮藏中引入的杂质。,按毒性分为：,本身一般无害，但其含量多少可反映药物纯度水平，指示生产工艺是否合理。,如：氯化物、硫酸盐等。,对人体有毒害的杂质。在质量标准中严加控制，以保证用药安全。,如：重金属、砷盐、氰化物、氟化物等。,信号杂质：,毒性杂质：,按化学类别和特性分为：,无机杂质,Cl,-,、,S,2-,、,CN,-,、重金属等,有机杂质,中间体、副产物、降解物、异构体等,残留溶剂,（,1,）具有光学异构体的药物，生物活性有很大差异；,如：肾上腺素为左旋体，其升压作用是右旋体的,12,倍。,（,2,）顺式体与反式体药物，生物活性也不相同；,如：,V,A,以全反式的生物活性为最高。,（,3,）多晶型药物，晶型不同生物活性也有差异；,如：驱虫药甲苯咪唑，有,A,、,B,、,C,三种晶型。,其中,C,晶型的驱虫率为,90%,，,B,晶型的驱虫率为,4060%,，,A,晶型的驱虫率小于,20%,。,无效或低效杂质,按结构可分为,2,类,无机杂质,Cl,-,、,S,2-,、,CN,-,、,As,、重金属,.,有机杂质,中间体、副产物、分解物、异构体、残留溶剂,.,按性质可分为,3,类,信号杂质,指本身一般无害,但其含量多少可反映药物纯度水平,指示生产工艺是否合理,.,如：氯化物、硫酸盐等,.,有害杂质,对人体有毒害的杂质,.,在质量标准中严加控制,以保证用药安全,.,如：重金属、砷盐、氰化物、氟化物等,.,无效或低效杂质,a,具有立体异构体的药物,其生物活性有很大差异,;,如：肾上腺素为左旋体,其升压作用是右旋体的,12,倍,.,b,异构体中,其顺式体与反式体的生物活性也不相同,;,如：,V,A,以全反式的生物活性为最高,.,c,药物的晶型不同,其理化常数,溶解性稳定性、体内的吸收和疗效也有差异,.,如：驱虫药甲苯咪唑,有,A,、,B,、,C,三种晶型,.,其中,C,晶型的驱虫率,90%,B,晶型的驱虫率,40,60%,A,晶型的驱虫 率小于,20%,.,必须重视异构体和多晶型对药物有效性和安全性的影响,.,控制药物中低效、无效以及具有毒性的异构体和多晶型,在药物纯度研究中日益受到重视,四、药物的纯度与化学试剂的纯度,药物的纯度考虑杂质的生理作用，药品只有两个等级：合格或不合格。化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（,GR,）、分析纯（,AR,）、化学纯（,CP,）、色谱纯、光谱纯。,99x,：,85,中国药典中规定的一般杂质检查中不包括的项目是,A.,硫酸盐检查,B.,氯化物检查,C.,溶出度检查,D.,重金属检查,E.,砷盐检查,限量表示方法：百分之几（,%,）,百万分之几（,ppm,）,对照法,灵敏度法,比较法,四、杂质的限量,杂质限量：,药物中所含杂质的最大允许量。,杂质定量测定法,杂质限量,控制方法,限量检查法,（,ChP,）,例,:,平行试验,比较两比色管的,颜色,或,浊度,，判断杂质含量是否符合规定。,对照管,样品管,对照法：,取,限度量,的待检杂质对照品配成的对照溶液，与一定量供试品配成的供试品溶液，在相同条件下处理，比较反应结果，以确定杂质含量是否超过限量。,灵敏度法：,在供试品溶液中加入一定量的试剂，在规定条件下反应，不得出现正反应。即以,检测条件下的反应灵敏度来控制杂质限量,。,例：乳酸中枸橼酸的检查,水,供试品,(0.5g),5mL,溶液,氨试液调微碱性,1ml,氯化钙试液,水浴,5min,不得产生浑浊,比较法：,取一定量供试品，在规定条件下测定待检杂质的特定参数（如：吸光度等），与规定限量比较，不得更大。,例：肾上腺素中肾上腺酮的检查,供试品溶液,(2.0mg/ml),盐酸溶液,供试品,(0.05mol/L),A,310nm,规定：,A,310nm,0.05,限量计算公式,注意,: ,单位是否统一,供试品是否有稀释,表示方法,%,或,ppm,写成：,或,例,1.,对乙酰氨基酚中氯化钠的检查,对照溶液：标准,NaCl,溶液（,10,gCl,-,/ml,），,取,5.0ml,同法操作比较，浊度不得更大。,计算：氯化物限量是多少（,%,）？,供试品溶液：,例,2.,肾上腺素中酮体的检查,取本品,0.20g,，置,100ml,量瓶中，加盐酸溶液,(9,2000),溶解并稀释至刻度，摇匀，在,310nm,处测定吸光度不得超过,0.05,，已知酮体的百分吸收系数为,435,，求酮体的限量。,一、杂质的研究规范,（一）有机杂质在药品质量标准中的项目名称,1.,以杂质的化学名称作为项目名称,如：阿司匹林中的,游离水杨酸,2.,以某类杂质的总称作为项目名称,如：,硝酸毛果芸香碱中的,其它生物碱,黄体酮中的,有关物质,3.,以检测方法作为项目名称,如：,杂质吸光度、溶液透光率,3-2,杂质的检查方法,（二）杂质检查项目的确定,（三）杂质限量的确定,在确保用药安全有效的前提下，应考虑到生产的可行,性、批与批之间的正常波动、药品本身的稳定性。,根据起始原料、生产工艺及稳定性情况确定。,药物在质量研究中和稳定性考察中检出的，并在批量生产中出现的,杂质,和,降解产物,单一对映体药物：,检查其它对映体,消旋体药物：,旋光度检查,杂质检查方法包括化学法、光谱法、色谱法等。,有机杂质多采用色谱法，特别是,HPLC,。,检查方法要求专属、灵敏，应验证方法的专属性。,分析方法的检测限应符合质量标准中对杂质限度的要求。,（四）杂质检查方法的选择与验证,二、杂质的常用检查方法,显色反应检查法,沉淀反应检查法,生成气体的检查法,滴定法,（一）化学方法,N,H,C,H,2,C,H,2,N,H,2,+,显色（比色法检查）,如：氯硝柳胺中,2-,氯,-4-,硝基苯胺的检查,显色反应检查法,2,杂质：,2-,氯,-4-,硝基苯胺,O,2,N,N,H,C,l,C,l,O,H,C,O,N,O,2,N,H,C,l,O,+,N,a,N,O,2,+,2,H,C,l,2,N,N,2,C,l,+,+,N,a,C,l,2,H,2,O,+,-,C,l,O,2,N,N,N,N,H,C,H,2,C,H,2,N,H,2,C,l,如：盐酸肼屈嗪中游离肼的检查,沉淀反应检查法,盐酸肼屈嗪,杂质：游离肼,比浊法或重量法检查,如：硫酸亚铁片剂中高铁盐的检查,滴定法,2,F,e,3,+,2,K,I,2,F,e,2,+,I,2,2,K,+,+,+,+,+,+,I,2,2,N,a,2,S,2,O,3,2,N,a,I,N,a,2,S,4,O,6,与药典规定限量进行比较,（二）色谱方法,薄层色谱法,高效液相色谱法,气相色谱法,毛细管电泳法,难以采用化学法、光谱法对杂质进行检查时，多,采用色谱法。,色谱法是检查药物中有关物质的首选方法。,1.,薄层色谱法,（,1,）,杂质对照品法：,适用于杂质已知并有杂质对照品的情况。,方法：根据杂质限量，取供试品溶液和一定浓度的杂质对照品溶液，分别点于同一薄层板上展开，定位后进行检查。,供 对,供试品溶液除主斑点外的其它斑点与,相应杂质对照品溶液的主斑点比较。,示例,3-8,（,2,）,供试品溶液自身稀释对照法：,适用于杂质的结构未知或无杂质对照品的情况，且杂质斑点颜色与主成分斑点颜色应相同或相近。,方法：先配制一定浓度的供试品溶液，然后按限量要求将其稀释至一定浓度作为对照溶液，将两溶液分别点于同一薄层板上展开，定位后进行检查。,供试品溶液的杂质斑点与自身稀释对照溶液的主斑点比较。,示例,3-11,供 对,（,3,）,杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法：,适用于药物中存在多个杂质的情况。,有对照品的杂质,：杂质对照品法检查；,未知杂质,或,没有对照品的杂质,：供试品溶液自身,稀释对照法检查。,供 对 对,（,4,）,对照药物法：,适用于,无合适的杂质对照品，或杂质斑点颜色与主成分斑点颜色有差异而难以判断限量的情况。,方法： 选用与供试品相同的药物作为对照。,对照药物中所含待检杂质应符合限量要求，稳定性好。,供 对,2.,高效液相色谱法,使用高效液相色谱法测定含量的药物，可采用,同一色谱条件,进行杂质检查。,采用此法检查杂质时，,ChP,规定应进行色谱系统适用性试验，以保证仪器系统达到杂质检查要求,。,（,1,）,外标法（杂质对照品法）：,适用于有杂质对照品，而且进样量能够精确控制的情况。,杂质对照品溶液,供试品溶液,（杂）,（对）,（,2,）,加校正因子的主成分自身对照,法：,适用于已知杂质的控制。杂质的校正因子（,f,）和相对保留时间收载在,ChP,各品种的质量标准中。,杂质对照品,+,药物主成分对照品溶液,自身稀释对照溶液,（主）,（杂）,（主）,（杂）,供试品溶液,（,3,）,不加校正因子的主成分自身对照,法：,适用于没有杂质对照品，且杂质结构与主成分相似的情况。,自身稀释对照溶液,（主）,供试品溶液,（杂）,（,4,）,面积归一化,法：,适用于供试品中结构相似、相对含量较高，且限度范围较宽的杂质含量的粗略考察。,杂质限量（,%,）,=A,杂,/,A,总,100%,A,总,=,A,杂1,A,杂2,A,主,供试品溶液,（杂,1,）,（杂,2,）,（主）,检查方法,：同高效液相色谱法,用于药物中挥发性杂质的检查，如药物中残留溶剂、农药残留量等。,3.,气相色谱法,4.,毛细管电泳法,用于酶类药物中酶类杂质的检查,。,检查方法,：同高效液相色谱法,利用药物与杂质对光选择吸收性质的差异进行,检查。,（三）光谱方法,1.,紫外,-,可见分光光度法,例：肾上腺素中肾上腺酮的检查,方法：规定杂质最大吸收波长（药物在此无吸收）处的吸光度；利用杂质的呈色反应对其进行定量测定。,2.,红外分光光度法,主要用于药物中,无效,或,低效晶型,的检查。,例,：,甲苯,达,唑中,A,晶型的检查,晶型 640,cm,-1,662cm,-1,A,型（无效）,强,弱,C,型,弱,强,方法：比较供试品溶液与含一定量,A,晶型的对照品溶液在两波数处的吸光度比值。,3.,原子吸收分光光度法,主要用于药物中,金属杂质,的检查。,方法：标准加入法,供试品溶液： 吸光度为,b,对照溶液： 吸光度为,a,（供试品,+,限度量的待测元素）,要求：,b,1000,；毛细,管色谱柱的,N5000,。,2.,待测物色谱峰与相邻色谱峰,R1.5,。,3.,以,内标法测定时，对照品溶液连续进样,5,次，待测,物与内标物峰面积之比的,RSD5%,；,以外标法测,定时，待测物峰面积的,RSD,10%,。,（三）系统适用性试验,十一、溶液颜色检查法,检查药物中的有色杂质。,ChP,附录收载了三种检查方法：,第一法：目视比色法，即与标准比色液比较的方法。,第二法：分光光度法，即控制药物溶液在某波长处的吸光度。,第三法：色差计法，即用色差计对药物溶液的颜色进行定量表述和分析。,十二、溶液澄清度检查法,检查药物中的,微量不溶性杂质,，用作注射剂的原料药,一般应作此项检查。,检查方法：比浊法,从水平方向观察、比较,供试品溶液,浊度标准液,暗室内垂直同,置伞棚灯下,（照度,1000lx,）,置配对的比浊管中,(CH,2,),6,N,4,+ 6H,2,O 6HCHO + 4NH,3,HCHO + H,2,N-NH,2,H,2,C=N-NH,2,+ H,2,O,甲醛腙白色混浊,浊度标准液制备原理：,1.00,硫酸肼溶液与,10,乌洛托品溶液等量混合配制浊度标准贮备液,浊度标准原液 浊度标准液,(,5,个级号，,0.5,、,1,、,2,、,3,、,4,）,稀释,稀释,浊度标准液配制方法：,ChP,规定的“澄清”，指供试品溶液的澄清度相同于所用溶剂或未超过,0.5,号浊度标准液。,判断：,多数药物的澄清度检查以水为溶剂，如水溶性不好，也可采用酸、碱或有机溶剂为溶剂。,有机酸的碱金属盐类药物强调用,“,新沸过的冷水,”,。,注意事项：,3-4,特殊,杂质的鉴定方法,一、特殊杂质的研究规范,1.,新原料药和新制剂中的杂质,表观含量0.1%和表观含量,0.1%具强烈生物作用,或毒性的杂质，要求定性或确证其结构。,包括：,药物合成中的,有机杂质,；,稳定性试验中的,降解产物,。,2.,非新药中发现的新杂质和新降解产物,3.,手性药物的,光学异构体,（一）合成杂质对照品法,适用于量少，分离纯化困难的杂质。,方法：比较杂质与对照品的色谱性质、,UV,曲线特征和,MS,信息，判断杂质与对照品是否是同一种化合物，从而确定杂质的结构。,（二）色谱制备杂质对照品法,适用于量较大的杂质。,方法：通过色谱分离得到特定杂质，再通过元素分析、,UV,、,IR,、,NMR,和,MS,确定杂质及有关物质的结构。,二、特殊杂质的鉴定,（一）最佳选择题,1.,下列属于信号杂质的是（ ）,A.,砷盐,B.,硫酸盐,C.,铅,D.,氰化物,E.,汞,2.,药物中无效或低效晶型的检查可以采用的方法是（ ）,A.,高效液相色谱法,B.,红外分光光度法,C.,紫外,-,可见分光光度法,D.,原子吸收分光光度法,E.,气相色谱法,3.,原子吸收分光光度法检查药物中金属杂质时，通,常采用的方法是（ ）,A.,内标法,B.,外标法,C.,加校正因子的主成分,自身对照法,D.,标准加入法,E.,不加校正因子的主成分自身对照法,4.,药物中氯化物杂质检查，是使该杂质在酸性溶液,中与硝酸银作用生成氯化物浑浊，所用的稀酸是,( ),A.,硫酸,B.,硝酸,C.,盐酸,D.,醋酸,E.,磷酸,5.,氯化物检查法中，用以解决供试品溶液带颜色对,测定干扰的方法是（ ）,A.,活性炭脱色法,B.,有机溶剂提取后检查法,C.,内消色法,D.,标准液比色法,E.,改用他法,6.,中国药典收载的铁盐检查，主要是检查（ ）,A. Fe B. Fe,2+,C. Fe,3,+,D.,Fe,2+,和,Fe,3+,E.,以上都不对,8.,下列试液中，用作,ChP,重金属检查法中的显色剂,的是（ ）,A.,硫酸铁铵试液,B.,硫化钠试液,C.,氰化钾试液,D.,重铬酸钾试液,E.,硫酸铜试液,7.,采用硫氰酸盐法检查铁盐时，若供试液管与对照,液管所呈硫氰酸铁的颜色深浅不便比较时，可采,取的措施是（ ）,A.,内消色法,B.,外消色法,C.,标准液比色法,D.,正丁醇提取后比色法,E.,改用他法,10.,采用炽灼后硫代以酰胺法检查重金属时，应控制,的炽灼温度范围是（ ）,A. 500,600,o,C,B. 600700,o,C,C. 700800,o,C D. 800900,o,C,E. 9001000,o,C,9.,硫代乙酰胺法检查重金属时，受溶液,pH,影响较,大，适合的,pH,是（ ）,A. 11.5 B. 9.5 C. 7.5 D. 3.5 E. 1.5,12.,费休氏法测定水分时，水与费休氏试液作用的摩,尔比是（ ）,A.,水,-,碘,-,二氧化硫,-,甲醇,-,吡啶（,1,：,1,：,1,：,1,：,3,）,B.,水,-,碘,-,二氧化硫,-,甲醇,-,吡啶（,1,：,1,：,1,：,1,：,5,）,C.,水,-,碘,-,三氧化硫,-,甲醇,-,吡啶（,1,：,1,：,1,：,1,：,3,）,D.,水,-,碘,-,三氧化硫,-,甲醇,-,吡啶（,1,：,1,：,1,：,1,：,5,）,E.,水,-,碘,-,三氧化硫,-,甲醇,-,丙酮（,1,：,1,：,1,：,1,：,3,）,11.,在古蔡氏检砷法中，加入醋酸铅棉花的目的是,（ ）,A.,除去硫化氢的影响,B.,防止瓶内飞沫溅出,C.,使砷化氢气体上升速度稳定,D.,使溴化汞试,纸呈色均匀,E.,将五价砷还原为砷化氢,14.,浊度标准液的配制是利用乌洛托品在酸性条件,下水解，水解产物与肼缩合，产生不溶于水的,白色沉淀，该白色沉淀是,（ ）,A.,硫酸肼,B.,甲醛腙,C.,甲酰胺,D.,乙醛腙,E.,乙酰胺,13. ChP,中收载的残留溶剂检查法是（ ）,A. HPLC,法,B. TLC,法,C. GC,法,D. TGA,法,E. DSC,法,（二）配伍选择题,A.,硝酸银试液,B.,硫代乙酰胺试液,C.,氯化钡试液,D.,盐酸、锌粒,E.,硫氰酸铵试液,1-4,下列杂质的检查所用到的试剂是,1.,铁盐,2.,硫酸盐,3.,氯化物,4.,砷盐,A.,遇硫酸易炭化或易氧化呈色的微量有机杂质,B.,有色杂质,C.,易氧化呈色的无机杂质,D.,水分及其他挥发性杂质,E.,有机药物或挥发性无机药物中非挥发性无机杂质,下列项目检查的杂质是：,5.,易炭化物,6.,炽灼残渣,5-6,（三）多项选择题,1.,采用硫氰酸盐法检查铁盐时，加入过硫酸铵的作用有（ ）,A.,将供试品中,Fe,2+,氧化成,Fe,3+,B.,防止光线使硫氰酸铁还原,C.,防止,Fe,3+,水解,D.,防止硫氰酸铁分解褪色,E.,使溶液色泽梯度明显，易于区别,2. ChP,采用费休氏法测定药物中的水分，指示终点的,方法有,（ ）,A.,溶液自身颜色变化,B.,加入淀粉指示液,C.,加入酚酞指示液,D.,永停法,E.,加入结晶紫指示液,3. ChP,中采用,GC,法测定残留溶剂，可以采用的测,定方法有（ ）,A.,毛细管柱顶空进样等温法,B.,毛细管柱顶空进样程序升温法,C.,溶液直接进样法,D.,填充柱顶空进样等温法,E.,填充柱顶空进样程序升温法,（四）填空题,1,.,药典中的杂质检查按照操作方法不同可分为下列,三种类型,、,、,。,2,.药物中存在的杂质，主要来源于两个方面，即,和,。,（五）简答题,简述高效液相色谱法用于杂质检测的几种方法,及其使用条件。,2.,检查重金属时其限度以何种金属的限度表示？原因是什么？,ChP,收载了几种检查方法？分别适用于哪些药物中的重金属检查？,1.,苯巴比妥钠中重金属的检查,取本品,2.0g,，加水,32ml,，溶解后缓缓加入,1mol/L,盐酸溶液,8ml,，充分振摇，静置数分钟，滤过，取滤液,20ml,，加酚酞指示液,1,滴与氨试液恰显粉红色，加醋酸盐缓冲液,(pH3.5)2ml,与水适量成,25ml,，依法检查，含重金属不得超过,10ppm,。试计算应取得标准铅溶液,(,每,1ml,相当于,10,g Pb,),的体积。,（六）计算题,