临床免疫学和免疫检验

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,*,2021/1/12,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,2021/1/12,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,临床免疫学和免疫检验,临床免疫学和免疫检验临床免疫学和免疫检验第一节 概述22021/1/12,第一节 概述,2021/1/12,2,放射免疫测定,1960,酶免疫测定,1970,荧光免疫测定,1980,1990,化学发光免疫测定,1990,膜固相免疫测定,1990,标记免疫测定,2021/1/12,3,免疫浊度测定,+ +,标记免疫测定,+ * * + *,B F,免疫测定分类,2021/1/12,4,利用抗原抗体反响检测标本中微量物质,抗原+抗体 抗原抗体复合物,*,免疫测定原理,2021/1/12,5,* *,+ + *,固相免疫测定,B与F别离,2021/1/12,6,多孔性 毛细管作用,非共价键高度吸附抗体或抗原 高度敏感性,易于漂洗 操作简便,固相膜的特点,2021/1/12,7,玻璃纤维素()膜,尼龙()膜,聚偏氟乙稀( ，)膜,硝酸纤维素，膜,常用的固相膜,2021/1/12,8,固相膜的技术要求,孔径：,0.20.6 m,流速：以,2,表示,蛋白质结合力：吸附力很强，以,2,表示,均一性,2021/1/12,9,固相膜,2021/1/12,10,2021/1/12,11,2021/1/12,12,第二节免疫金标记技术,2021/1/12,13,免疫金标记技术( ) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因此用于定性或半定量的快速免疫检测。这一反响也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色 ，。,免疫金标记技术,2021/1/12,14,胶体金 的制备一般采用复原法，常用的复原剂有柠檬酸钠、鞣酸、抗坏血酸、白磷、硼氢化钠等。向一定浓度的金溶液内参加一定量的复原剂使金离子复原成金原子，形成金颗粒悬液，也称金溶胶 。,胶体金制备原理,2021/1/12,15,胶体金的制备及特性,胶体金粒径,1%,柠檬酸钠加入量,胶体金特性,（,),（,)*,呈色,(),16,2.00,橙色,518,24.5,1.50,橙红色,522,41,1.00,红色,525,71.5,0.70,紫色,535,*复原100 0.014 所需量,2021/1/12,16,胶 体 金 ,1560,优质,劣质,2021/1/12,17,胶体金结合物,2021/1/12,18,第三节膜载体免疫测定的种类与原理,2021/1/12,19,斑点金免疫渗滤试验( , ),免疫层析试验 , ,斑点 ( , ),酶联免疫斑点试验( , ),免疫印迹法( , ),放射免疫沉淀试验( , ),固相微孔膜测定种类,2021/1/12,20,免疫渗滤测定, ，,免疫层析测定, ，,和,2021/1/12,21,穿流 ,横流 ,2021/1/12,22,免疫渗滤测定,(),2021/1/12,23,A,B,双抗体夹心法测抗原,2021/1/12,24,2021/1/12,25,免疫层析测定,2021/1/12,26,样,品,垫,结,合,物,垫,膜,吸,水,垫,试剂条,2021/1/12,27,双抗体夹心法测抗原,2021/1/12,28,间接法测抗体,2021/1/12,29,阳性,阴性,无效,结果观察,2021/1/12,30,试剂形式,渗滤装置及附加试剂,试剂条,试剂保存,48 6,个月,室温一年,操作步骤,35,1,观察时间,3,320,阳性反应颜色浓度,操作结束颜色不变,颜色逐渐加深,与的比较,2021/1/12,31,优点,不足之处,简便，快速,敏感度略低，价格略高（与比）,单份测定,精密度较差，质控困难,保存期长（优质试剂）,稳定性较差（普通试剂）,可测定物范围广（主要为定性试验）,不易制备定量、半定量试剂,感染性疾病的诊断,妊娠、排卵的诊断,肿瘤标志,心肌标志,滥用药物,膜固相免疫测定的特点,2021/1/12,32,阳性,阴性,固相膜,固相抗原,待测抗体,金标记抗人抗体,人,固相抗人抗体,快速检测渗滤法原理图,技术的开展间接法测抗体,2021/1/12,33,第一代,1988,（）,单点，,510,分钟，,血清，,金标试剂瓶装冻干品,改进抗原,1+2,，提高敏感度和特异性，缩短反应时间，减少步骤，样品多样化 。,第八代,1+2,2,点（测试,+,控制）,金标试剂：单人份、液体,样品：,血清、血浆、全血、 尿液,第九,十二代,研制中,单一试剂,技术的开展,2021/1/12,34,1990,年 公司 胶体硒标记,公司 立明衣原体,彩色胶乳标记,定量,0.13,合成质控点,技术的开展,2021/1/12,35,肌红蛋白,双孔法,S,：测定孔,C,：定量质控,100,微量白蛋白,单孔法,T,：测定孔,C1,：定量质控,30,C2,：定量质控,200,结果判定：,（,-,）,200,甲胎蛋白（）,参考值：,30 ,肝癌诊断值：,400 ,结果判定：,（,-,）,400 ,S,C,测,定,线,对,照,线,T,C2 C1,半定量测定,2021/1/12,36,2021/1/12,37,细胞受到刺激后部分产生细胞因子，此细胞因子被特异单克隆抗体捕获。细胞分解后， 被捕获的细胞因子与生物素标记的二抗结合，其后再与碱性磷酸酶标记的亲和素结合。 底物孵育后， 孔板出现“紫色的斑点说明细胞产生了细胞因子，通过 公司消费的 酶联斑点分析系统对斑点的分析后得出结果。,检测原理,2021/1/12,38,2021/1/12,39,哪些斑点是抗原特异性 T 细胞产生的此斑点具有进一步分析价值，哪些是无关细胞产生的此斑点没有 T 细胞研究价值,斑点大小的意义,在对不同细胞因子计数和分析时，如何定义斑点最大和最小尺寸,如何从单个细胞根底上分析,实验准确度有多高？假如一个细胞产生相似的细胞因子，在多大程度上会干扰分析结果？,几次重复实验才能使结果更有意义？,分析仪解决以下问题,2021/1/12,40,2021/1/12,41,结果判断,2021/1/12,42,方法学评价,2021/1/12,43,原理,2021/1/12,44,抗原表位可能被破坏而漏检,缺点,2021/1/12,45,放射免疫沉淀试验原理,2021/1/12,46,抗原表位不会破坏,放射免疫沉淀试验,2021/1/12,47,人有了知识，就会具备各种分析才能，,明辨是非的才能。,所以我们要勤恳读书，广泛阅读，,古人说“书中自有黄金屋。,通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，,培养逻辑思维才能；,通过阅读文学作品，我们能进步文学鉴赏程度，,培养文学情趣；,通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。,有许多书籍还能培养我们的道德情操，,给我们宏大的精神力量，,鼓舞我们前进。,