食源性疾实验室检测技术要点

,SLIDE TITLE,Body Text,Second Level,Third Level,Fourth Level,Fifth Level,2004-11-21,食源性疾病实验室检测技术要点,CDC,概述,食物中毒应急处理与现场调查,食源性疾病/食源性致病菌监测预警,现场调查中的实验室支持,概述,食源性疾病,指由摄取食物而进入人体内各种致病因素引起的通常为感染或中毒的一类疾病,（,WHO）,食物中毒,摄入了含有生物性、化学性有毒有害物质的食品或者把有毒有害物质当作食品摄入后出现非传染性(,不属于传染性,)的急性、亚急性疾病.,GB14938-94,食源性疾病有暴发和散发两种形式，食物中毒是食源性疾病的暴发形式,突发公共卫生事件,是指突然发生,或者,可能发生，直接影响到公众健康和社会安全,需要紧急应对的公共卫生事件,突发公共卫生事件应急条例,1、生物病原体所致疾病,2、食物中毒,3、不明原因群体性疾病,4、有毒有害因素污染造成的群体中毒,5、职业中毒,6、自然灾害、事故灾难、突发社会安全事件引发的健康问题,7、三恐事件,8、,其它严重影响公众健康事件,“,食物恐怖,”,的定义为：,以化学性、生物性、放射性等有害物质，蓄意污染食品，导致人群伤害或死亡，破坏社会经济或政局稳定的行动或危险。,2002年，世界卫生组织召开专家会议，制定了,“,建立与强化预防和应急反应体系的导则,”,。,世卫组织警告，人畜共患疾病、食品恐怖主义、食品污染和食源性疾病等正在威胁全球的食品安全。,食物恐怖,食源性疾病的特点,分布广泛，对发展中国家和发达国家都存在严重威胁,WHO,资料显示：,工业化国家，每年患病率达30。,发展中国家的流行状况难以估计,2000,年,210,万人死于,腹泻,病,腹泻还是造成婴幼儿和儿童营养不良的,主要原因,食源性疾病的特点,对经济发展存在重大威胁,医疗护理、爆发调查、生意破产、不合格产品的回收、劳动力损失、法律索赔等等的形式造成实际的经济损失。,最主要的危害来自于生物性污染,目前在所有国家中食源性疾病的发病率都有上升趋势,1.经济全球化趋势，人员交往频繁，物资交流大幅度增长，交通发达，旅游业发展，使世界变小了，传播更为迅速。,如全球国际航线旅客从1950年100万人次/年，至2000年达到1300万人次/年。同期农产品货物贸易也增长了五倍。,食源性疾病增长的原因,每 个人都面临患食源性疾病的危险,食源性疾病大多数是可以预防的。,食源性疾病增长的原因,2.经济发展都市化进程加快，大量农村人口拥向城市，尤其是在城市城乡结合部和小城镇由于供水、排污、住房及有关公共卫生设施严重超负荷，环境污染严重，自净作用缺失，犹如人体,“,肠梗阻,”,，容易造成各种疾病的传播与暴发。,食源性疾病增长的原因,3.,农副产品生产和食品加工的规模化和销售供应的商品化，如果其中某种食品被污染,其涉及面和受感染人群的范围，可远远超出过去一家一户或某一局部地区的食源性疾病的传播扩散的范围。,食源性疾病增长的原因,4.,人口老龄化，因器官移殖，免疫抑制剂使用和侵袭性操作大量应用及抗生素滥用，免疫受损人群和医院内感染也不断增加。,5.,人们生活方式、行为方式的变化。如冰箱的普及，使单抗细胞增生李斯特菌等嗜冷菌的感染容易发生。,食源性疾病增长的原因,我省是自然灾害较多的省份，经济发展和工业化、都市化及人口老龄化是国内各省市中最快的省份之一。所以上述因素对浙江的影响，必须有充分的估计和防范,尤其是突发重大疫情的防范应有充分的准备。,食源性疾病的分类,食物中毒（急性）,食源性肠道传染病,食源性寄生虫病,变态反应性疾病（食物过敏）,暴饮暴食引起的急性胃肠炎等,一次大量或长期低剂量摄入某些有毒、有害物质引起的以慢性毒害为主要特征的疾病，,食物营养不平衡所造成的某些慢性疾病等,食物中毒应急处理与现场调查,为了及时准确掌握食物中毒发生原因，积极采取有效防范措施，在食物 中毒调查时，要按照一定程序开展工作。,食物中毒事故处理办法 卫生部1999,食品卫生监督程序 卫生部1997年,突发公共卫生事件应急条例 国务院2003年5月7日,相关法律法规,食物中毒应急处理组织与职责,食物中毒应急处理涉及,卫生行政部门,卫生监督机构,疾病预防控制机构,医疗救治机构,其他有关部门,食物中毒报告、信息管理制度,1.食物中毒一般报告制度,2.食物中毒紧急报告制度,食物中毒应急处理准备,一、应急处理准备原则要求,“,预防为主、常备不懈,”,二、重大食物中毒应急处理准备与支援,（一）食物中毒监测与预警（二）资金储备（三）食物中毒物资准备,三、食物中毒应急处理演练,四、预防和控制食物中毒的宣传和公众教育,食物中毒应急,物资准备,1.食物中毒事故应急处理专用车辆,2.采样用物品,3.音像取证工具,4.现场快速检验、测量设备,5.法律文书：,6.参考资料,7.其它有关物品：,病因初步判断,症状体征,微生物食物中毒大多为急性弧菌中毒表现为呕吐、泻水、脱水、体温下降等；沙门菌胃肠炎症状。如霍乱、志贺菌中毒表现为腹痛、腹泻、发热等；变形杆菌中毒以上腹部刀绞样疼痛及急性胃肠炎症状为主；葡萄球菌肠毒素引起胃肠炎，,神经系统症状（肉毒毒素、真菌毒素、化学毒物）,；,呼吸道症状（链球菌等）,.,初步病,因,判断,潜伏期,平均潜伏期意义：是确诊标准之一；用于估计事故发生发展态势；决定调查起点餐次；确定采取防治措施的时间范围，并考核防治措施效果。,病因初步判断,4类食物中毒的潜伏期一般是： 5,L,液体食品 致病菌或毒物分析 可疑食物200,ml,固体食品 致病菌或毒物分析 可疑食物200,g,呕吐物 致病菌或毒物分析 50,g(ml),洗胃液 致病菌或毒物分析 200,ml,腹泻物 致病菌或毒物分析 50,g(ml),血液 病原分离、抗体分析 5,ml,脑脊液 病原分离 2,ml,皮损分泌物 病原分析 灭菌生理盐水浸泡棉签涂取,采多少,所有标本在采集时立即分装，一式,N,份(不同检验项目、,重复实验、其它实验室复核、留样,),采什么样,对 照,内对照,外对照,暴发性食源性疾病,多途径传播疾病（大肠杆菌,O157:H7 ）,潜伏期长的疾病（伤寒、李斯特菌等）,非消化道症状的疾病,水源性传播疾病,需注意,什么时间采,采样时间,血清：如怀疑是沙门菌、变形杆菌、致泻大肠艾希菌食物中毒时，应分别在患者急性期（,3,天以内）和恢复期（,2,周左右）各采取血液,23,毫升，待凝固时分离血清，做抗体滴度测定。如做血液细菌培养时，应将采取的血液直接注入含有玻璃株的无菌小烧瓶中进行振摇，然后加入相应培养基或直接将血液注入培养基中。如怀疑副溶血性弧菌食物中毒时，应分别在患者中毒,12,天和,1,周时采取血液做抗体滴度测定。 （因,1,周后抗体就降低或消失）。,病毒分离标本最好在发病初期（1-2天）采,样 品 采 集,怎么采,不同检验目的的样品,细菌分离,病毒分离,抗原-抗体检测,化学毒物检测,无菌部位,基因检测,木制的棉拭子,？,食物中毒事件怎么采, 粪便可直接采取或采便管插入直肠采集；呕吐物可注入灭菌试管内，由于胃酸能使样品为酸性，不利于细菌的存活，所以应在采集的呕吐物内加入10苏打予以中和，以保持细菌的活性。咽喉涂抹样可用棉签涂擦咽喉部采取,洗胃液直接抽取注入灭菌容器内。,血液血样的采集应尽早抽取患者的血液，在中毒患者急性期必要时可作血样培养，但主要是用来检测患者血液中的抗体。一般需采血二次以上，第一次在发病初期(3天以内)，第二次是在恢复期(2周左右)，若患者血中抗体呈明显上升趋势，即可证实其受到过相应致病菌的感染。方法是从肘静脉采取血液2,3,ml，,注入干热灭菌试管内，使成斜面，待凝固后，分出血清送检。如做血液细菌培养，可直接注入灭菌并带有玻璃珠的三角瓶中，立即振摇数分钟，以防凝固，然后送检。,食物中毒事件怎么采,(3),对可疑中毒患者在解剖前不要将尸体用福尔马林、酒精等化学物处理，解剖台要冲洗干净，所用的解剖器具、手套要预先冲洗干净、晾干备用，不要沾染消毒药液（如来苏、酒精、升汞溶液等）以免污染了检材。例如在解剖时使用了升汞溶液浸泡过的手套，手套上的升汞就可能对样本污染，会干扰了病因的判定。在尸体周围不要喷洒农药灭蚊蝇，以免污染可能用于毒物分析的检材。,尸体解剖检样可采取胃肠内容物、脏器、肠系膜淋巴结及血液等。内容物用灭菌注射器或灭菌器械采取，置入灭菌瓶内；脏器应先用烙铁烧灼消毒表面，再用解剖刀剪和镊子取内部检样10,20克，置于灭菌容器内送检。血液及体液用灭菌注射器直接抽取或用灭菌棉签蘸取。,对死亡患者一般从心腔内采集血液，也可采集腋下静脉、颈静脉、股静脉血液，心腔内血液和周围血中毒物浓度不同。,怎么采,样品采集程序,采样用物品准备,采样程序方法,采样纪录,样品编号,样品保存,使用卫生部统一制定的采样记录文书,，经有关责任人员签字后送检；,注意,样 品 采 集,影响采样的主要因素,缺乏及时性：,由于一些消费者对食品卫生法观念淡薄，缺乏自我保护意识，,食源性疾病,发生后他们不是首先及时向卫生监督部门报告疫情，而是自己先与经营者交涉，在不能如愿的情况下才向卫生监督部门举报，因此造成一是经营者在得知发生,食源性疾病,的情况后，首先处理掉一切可疑剩余食品，对加工经营现场、工具、容器作了相应的处理；二是延误了报告的时间，从而影响了对可疑食品和病人排泄物的采集。,采样缺乏代表性：,由于,食源性疾病多,是突发性,的,，如细菌性食物中毒都有特定的潜伏期，最短1,h,3,h，,一般5,h,10h ，,但当卫生监督部门接到疫情到达现场后，往往时间周期间隔较长，可疑食物已清理，即使采到几份剩余食物，也可能不是当日餐桌上剩余菜肴，因此，常常出现食品中检出的细菌与病人排泄物中检出的细菌不相符，影响了结果的分析。,影响采样的主要因素,食品加工制作现场各环节的采样往往能提供一些线索，但常常见到现场已被清扫，食具和用具已清洗干净，同样也影响了食品加工工具、容器、场所的采样和检验。,采样缺乏典型性：,中毒病人发病后，患者一般开始时白行用抗菌毒，严重时才去当地医院治疗，由于一些医务人员对,食源性疾病,报告制度意识不强，导致了只管用药治疗，忽视了对病人呕吐物和排泄物的留取，大量的抗菌素抑制了致病菌繁殖，从而影响了致病菌的检出率。,采样缺乏完整性,：,一般中毒病人发病期的血液能采集到，但是采集恢复期的血液，由于病人的不配合或外出经常采不全也影响了检验结果的全面分析。,样品的处理,(1)固体食物如系大块鱼肉、组织脏器等，先用烙铁烧灼表面，或在沸水中烫3,5秒钟，然后再取内部检样5,10克，按无菌要求，剪碎后置无菌乳钵内，加人适量灭菌海沙研细，再加人无菌生理盐水作1：5稀释，混匀沉淀后，取上清液进行接种和涂片染色镜检。,(2)液体食物可将液体食物直接接种培养基，或离心(每分钟3000转以上)半小时后，采取沉淀物进行细菌培养。,(3)罐头食品如罐头尚未打开，先用温水洗净表面，并以95酒精燃烧消毒，然后用灭菌开口刀将罐头打开，以无菌操作将检样取出进行细菌检验。如罐头为空盒，可用肉汤培养基冲洗盒内壁，以洗液做细菌培养。,样品的处理,(4)粪便和呕吐物以无菌生理盐水，充分搅拌混匀、静置，待其中粗块下沉后，取上清液进行接种及涂片染色镜检。,(5)洗胃液用无菌试管低速离心后，取沉淀物进行检验。,(6)血液检样用做细菌培养的抗凝血，以灭菌吸管吸取，注人肉汤或其他培养基内增菌。用于测定患者血清效价的血样，可用离心沉淀法或自然析出法将血清分出，与可疑中毒菌株作试管凝集试验。,(7)炊事用具擦洗水等可直接接种培养基。,样本标签内容,样本编号,唯一性,样本来源,从什么物质、材料中采集的，如病理采集的肝脏就可标,注为某某患者肝脏；,样本数量,包装中样本的数量，如此包装中同时采集了2块肝脏样本,就要标注为2,采样时间：,采样地点：,采样人：,样本处理情况：,抗凝剂 、运送培养基、标本状况（开封食品）,样本标签内容,最小包装（每个标本）,每个包装箱,每批样本后要附上一个样本清单，详细列出此批样本的名称、状态和注意事项。,样品的包装,感染性样本,放射性样本,易腐性样本,挥发性样本,样品的运送,标本应由专业人员专人运送，最好使用专车。,邮寄样品,除患者检测血浆外，其他样本不宜通过邮寄方式转运。,检测血浆用带盖的小塑料管盛装，外衬缓冲包装和吸附材料，通过,EMS,邮寄。,在送邮件时要明确向邮局说明邮寄物品的成分及安全性。,在运送过程中，要保证条件能够持续保障。,样品的保存,容器、,介质、温度,检测目的,细菌,病毒,寄生虫,抗原抗体,核酸,化学毒物,预期保存时间,样品的保存运送,安全性,样品的安全,环境的安全（不泄漏、不污染）,交接手续,样品送检注意事项,1）采集的样品一般应在4小时内接种完毕，故必须及时送检。,2）夏季送检样品时，应注意冷藏。不得加入任何防腐剂。,3）应附详细送检单，应填明样品名称、份数、重量、来源、中毒表现、送检时间、有范围的检验项目、采样条件（容器是否灭菌、有无封条）、送样人。,4）样品必须有牢固的标签，包装严密封闭。,5）注意无菌操作，防止污染，以免影响结果。,6）采样过程中履行必要的采样手术。（发生中毒单位负责人签封与开具收据等）,检 验,检什么,实验项目要结合现场流行病学调查.临床.血检.电生理.影像学检查等结果。,确定实验项目应同时考虑以下几点:,早期,IgM,和双份,IgG,血清学检验；,排泄物.分泌物.血液中的病原体的形态学.血清学和核酸分型鉴定。,人体外环境病原鉴定结果与人体内抗原、抗体的吻合、匹配；,毒力分析和动物实验模型佐证；,病原侵入与发病的时间顺序；,主导病原与併发病原的甄别;,安排检验项目要有几套预备方案,实验的无果和失败,。,检什么,病原分离,细菌,需氧菌、厌氧菌、兼性厌氧菌、,L,型菌,病毒,寄生虫,血清学检查：,抗原,抗体 急性期,IgM,抗体,急性期和恢复期双份静脉血测定特异性,IgG,抗体。,核酸检测,特征基因、毒力基因、溯源比较,定性/定量,细菌性食物中毒的实验室诊断,致病菌的定量检验,对细菌性食物中毒的调查,需要做定量检验的细菌（食物中毒与摄入量有关）,产气荚膜梭菌、蜡样芽胞杆菌、变形杆菌,样品：中毒相关食品、粪便、呕吐物,收集致病菌对人的最低感染剂量的资料,危险性分析中对暴露量的评估,摄入的菌量与产生有害健康作用的概率和程度成正相关，但通常不是呈线性关系。摄入菌量的增加通常降低肠道疾病的潜伏期。,怎么检,灵敏度、准确度、重现性、不同方法结果的可比较性,用什么标本,用什么方法,用什么试剂,对重大事件的毒物鉴定或样本检测要同时送数家具有鉴定检验资质的实验室同步开展工作，避免因实验室管理和技术因素对结果的影响。,检测项目和方法的确定,分析方法的选用要考虑待测样品（原形、代谢物）、分析要求（定性、定量）、样品类型、实验室条件，分析目的等因素，还要考虑时效性、准确性、经济性等要求。有时毒物有定性结果即可说明问题，而对于那些有环境或内源性本底的毒物，或需用于现场评价、应急处理方法选择或用于患者治疗效果评价的要用定量分析。临床治疗药物监测必须进行定量分析。,怎么检,快速灵敏方法的应用,仪器自动化方法,分离培养方法的改进,快速灵敏方法的应用,1.,细菌培养的前、后处理方法的自动化,培养法的前处理包括采样、称量、分样、匀浆、制作琼脂培养基、样品与培养基混释等。这些操作自动化仪器有：自动称量分注装置、均化器、培养基制作装置、菌液自动涂抹装置等。培养后，进行菌落计数的自动化装置有：笔型手动式计数器、用图像将平板内菌落摄录下来的自动计数仪、彩色图像菌种鉴定仪。,快速灵敏方法的应用,各种简易培养基：,简易培养基是食品微生物检验中应用较为普遍的一种快速简便的方法。培养基有印花型、平板型、滤膜型等多种类型。例如，日本几家公司生产的含有酶显色底物的印花型培养基，由于有酶显色底物，因而有快速易判断等特点。液体样品检测用培养基有多种形式，有的在孔板上固定有无菌液体培养基，检测时只要注入液体样品即可判断结果；颗粒状培养基加入液体样品培养即可判断结果；而干燥型培养基是将培养基成分和胶体化物质涂布在培养基垫上，它便于携带，操作简便。,快速灵敏方法的应用,快速灵敏方法的应用,检测活菌数方法与器材,不需进行培养即可直接检测活菌数的方法有：观察细菌引起电流阻抗值变化的阻抗测定法；以细胞内,ATP,为指标的生物发光法；用荧光剂标记微生物细胞测定发光量的荧光染色法；用滤膜集菌，用,ATP,发光试剂标记，然后进行测定的滤膜光子检测法等。这些方法是直接检测活菌数，因而适于观察细菌随时问发生的变化，可用于发酵食品的质量管理、饮料生产工艺的监测等。,快速灵敏方法的应用,高选择性显色培养基,食物中毒致病菌简易快速的检测方法与器材,沙门氏菌、,O157,大肠菌、李斯特菌等食物中毒致病菌如用培养法检测，由于菌量少，需进行前培养和增菌培养，故费时较多，且需熟练的检测技术。因此，近年来国外对食物中毒致病菌简易快速的检测方法与器材的研究十分重视，许多公司纷纷研制出省时、容易判断结果的简易细菌检测方法与器材。目前，已达到实用化程度的快速、简易的细菌检测方法有：应用抗原体反应原理的免疫凝集法、免疫沉降法、免疫荧光法、,EIA,法，免疫色谱法、以及磁珠法等，,DNA,探针法，,PCR,法。,分子生物学技术在检测食源性病原微生物中的应用,DNA,探针技术,DNA,探针技术是最新发展起来的一项特异、灵敏、快速的检测方法，但因有一定比例的假阳性反应，故所有阳性结果必须用标准的培养方法加以确证。,聚合酶链反应,(PCR),技术,PCR,技术原理为提高,DNA,探针的敏感性，可先将靶,DNA,序列扩增，增加,DNA,数量，使其达到足够的检测量，若反应以动力学为基础，则能定量分析。在,PCR,反应中引人,Taq,聚合酶使反应得以半自动化和简便反应程序。用扩增,DNA,进行的,PCR,反应具有无与伦比的优越性。,快速检出细菌的毒素,自临床标本中直接检出细菌的毒素，常比细菌培养更可靠。如难辨梭菌在正常肠道中也可出现，故对抗生素相关性肠炎的诊断，检出其毒素比细菌培养更有意义。已应用此类毒素的单抗以快速凝集或,EIA,法自粪便标本中直接检出毒素,A,或,B,进行诊断。产毒素埃希氏菌（,ETEC,）感染的诊断主要依靠检查细菌的,LT,（热敏毒素）与,ST,（耐热毒素）可应用其单抗以多种免疫学手段检出。肠出血性大肠埃希氏菌（,EHEC,）的重要特征是产生,Vero,细胞毒素（,VT,）或称志贺样毒素（,SLT,）。由于,EHEC,的血清型繁多，生化反应也可不典型，故检查该菌的毒素极具诊断价值。,快速检出细菌的毒素,英国,Unipaih,公司已研制出,VTEC,的,PRLA,乳胶凝集试剂分别检查,VT-1,与,VT-2,，试验时以多粘菌素裂解菌体，释出,VT,，与乳胶试剂在,U,形板中温育,24,小时，肉眼判定有无凝集。日本生研公司的,VIEC -RPLA,也为快速凝集试剂。,Bentin,等注意到,90%,的,VTEC,在洗过的羊血肉汤平板上经,37,温育过夜可表现出溶血；而非溶血菌落均无,VT,或,SLT,基因。这一发现为,VTEC,的检测提供一迅速的筛查方法。 金黄色葡萄球菌产生的多种肠毒素也用单抗的协同凝集试验迅速检出，是诊断该菌致成的事物中毒的可靠手段。应用反向被动乳胶凝集法（,Oxoid,公司试剂）快速检测葡萄球菌的,TSST1,，可及时诊断出由葡萄球菌致成的中毒性休克综合征。,快速的细菌对抗菌药物的敏感性试验,新的检测手段，如分子生物学手段检测细菌的耐药基因，自动化的药敏试验仪器，,E test,法等可提高准确性与效率 。 快速纸片法（,Nitrocefin,）检查,内酰胺酶，对革兰阳性球菌，淋病奈瑟菌，流感嗜血杆菌，卡他莫拉菌有重要意义。 快速乳胶凝集试验（日本生研公司）可检出变异的青霉素结合蛋白（,PBP2a,）经与,mecA,基因检测比较，其敏感性,98.5%,，特异性达,100%,。,细菌性食物中毒样品检验程序,1 ,样品采集,以无菌容器采集可疑样品及病人的排泄物。,2,分离培养,在病原菌不明确的情况下，多准备一些各类菌的选择性培养基，如,ss,平板，伊红美兰平板作沙门菌、志贺菌；血平板、,P-K,琼脂平板作金黄色葡萄球菌分离用；氯化钠蔗糖琼脂或,TCBS,琼脂作副溶血性弧菌及溶藻性弧菌用；甘露醇卵黄多粘菌素琼脂作蜡样芽孢杆菌分离用等等。,接种：,取适量可疑样品放置无菌平皿中，加入与样品等量的无菌生理盐水，将样品与生理盐水充分混匀，用取菌环分别接种于各种平板培养基上，置37 培养20,h,左右，观察各平皿菌落特征，进一步鉴定。,细菌性食物中毒样品检验程序,3. 取优势菌株进行系统鉴定,对优势菌株进行涂片镜检，革兰染色，以形态特征、菌落特点做出意向性判断进行下步鉴定，接种克氏双糖含铁琼脂培养，然后做血清凝集，生化实验，毒性实验等，报结果,4.,活菌数的测定,某些细菌在食品中须达到一定量时才可引起中毒症状(如金黄色 葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、产气荚膜梭菌等)。方法是,取样品的各个稀释液（包括,1:10,）,0.1mL,接种,2,只相应的平板，用灭菌玻璃棒在每只平板表面涂布均匀。将平板置,30,培养,24,小时，,数出可疑菌落数，然后,挑取典型菌落,5,个或更多,的可疑菌落，经过,证实试验,后，计算出菌落数。,细菌性食物中毒样品检验程序,5.,毒素测定,有些细菌性食物中毒并不是细菌本身所引起，而是由其所产生的毒素引起的，如金黄色葡萄球菌肠毒素、肉毒梭菌毒素，故须做其毒素的测定。,动物试验将可疑食物制备浸出液，或分离所得的上清液，皮下或腹腔注射动物(小白鼠 )体内，观察数日，看有无中毒 。,细菌性食物中毒样品检验程序,6,.,血清凝集试验,将中毒患者急性期和恢复期的血清，与自中毒检样中分离的致病菌所制成的菌体抗原(将分离菌接种培养基，,37,培养24小时，待其生长旺盛后，刮取菌苔至灭菌盐水中，混散均匀，用生理盐水稀释成6亿，毫升即成)做试管凝集试验，观察凝集价有无上升趋势，,如恢复期的血清效价比发病初期有明显增高（增高,4,倍或以上）,即有诊断价值。,经验,1.对所有样品进行致病菌分离和鉴定时应按照国家标准检验方法和已公认的微生物检验程序，应用直接分离及增菌双重培养，直接分离可检出样品中的优势菌(包括一些条件致病菌)增菌可将样品中污染的但又菌量较少的病原菌捡出，同时对服药患者肛试样品中被抗菌素抑制的细菌达到复苏和增加菌量的作用。,2.由于多种病原菌引起的食物中毒，有相类似的临床症状，因此对致病菌的检测范围应扩大，在分离培养时应多准备一些各类菌的选择性培养基，采取多思路、多方法同时检测各种致病菌的原则，从而获得满意的检验结果。,经验,金黄色葡萄球菌,按,GB4789,2010(,以下简称,GB),的方法有时不能检出。有一次食物中毒检验中我们同时用,GB,的方法和法国梅里埃公司生产的血浆凝固酶平板的方法，结果,GB,的方法没有检出，而血浆凝固酶平板的方法却检出了金黄色葡萄球菌，看来多种检验方法并用能提高致病菌的检出率。,2 副溶血性弧菌,食物中毒中最多见的一种致病菌。按,GB,方法样品经增菌后划,TCBS,平板，经1824,h,培养后菌落有时为不典型的黄色或黄绿色，继续培养24,h,后菌落才成典型的蓝绿色，经生化鉴定符合副溶血性弧菌。这是因为溶藻性弧菌呈优势菌时，会影响副溶血性弧菌的菌落颜色。所以经24,h,培养，菌落不典型时不要轻易放弃，应继续培养24,h,后再作鉴定。我们在培养副溶血性弧菌时已多次出现这种情况。,经验,3 沙门菌,也是较常见的一种致病菌。,经验,对于细菌性食物中毒标本的检测流程，由于国家没有系统标准，一般都根据病人临床症状、流行病学特征等具体情况，而选择检测项目，实际上由于多种细菌混合污染、病人个体差异、病原菌株的不同等原因，缺乏典型症状，很容易造成漏检，导致食物中毒原因不明。该流程由于多种培养基同时应用，避免了上述不足，提高了检出率。由于在直接分离平板的同时进行了选择性增菌培养，对用药后采集的样本和细菌数量较少的样本中的病原菌起到了复苏、增菌的作用，有效地降低了漏检率。,经验,用该流程检测食物中毒标本，由于采用优势菌(可疑菌落)直接鉴定法，简化了实验步骤，加快了检测速度。在多数情况下有效的缩短了检测时间，为病人的临床治疗及疫情的控制提供了可靠的依据，减少了经济损失。优势茵的选择,经验,优势菌的选择,应注重观察各样本在相同选择性平板上普遍生长的相似菌落。,食物中毒标本采集的质量直接影响到检出率。未能检出病原优势菌的选择的原因很可能是现场被破坏、无剩余食物、病人用药治疗、未能采集到理想样本等因素有关。,培养基的选择可根据各自实验室具体情况确定，在上述选定的培养基不能满足少数致食物中毒的病原菌检测时，可根据具体情况选择相应培养基进行分离鉴定。,优势菌(可疑菌落)的鉴定主要参照中华人民共和国国家标准一微生物学部分、卫生防疫检验、出口食品中嗜水气单胞菌检验方法,细菌性食物中毒样品处理一些新观点,1,.病原菌量的概述在很多资料谈到这个问题，引起食物中毒病原菌一定要在食品中大量繁殖后才能造成中毒，如金黄色葡萄球菌、变形杆菌、蜡样芽孢杆菌等，食品中含量要在10,6,- 10,8,个,g,以上，才达到中毒量。,2.可疑食品检验有无增菌的必要性 一般中毒样品可能受到某病原菌的污染，其菌量少，不一定造成食物中毒的概念，如作增菌实验，这少量的病原菌可能检出，而食品中的大量条件致病菌被忽视，病因可能就是这些条件致病菌，造成症状与检验结果不符，就是说无增菌的必要。,根据以上两个论点，细菌性食物中毒病原菌，应在食品中大量繁殖，形成优势菌群，不需要增菌，直接分离培养即可获得样品中的优势菌株。,结果的报告、解释、分析,结果的报告、解释、分析,实验室检测结果是确定病因的重要依据，但实验室结果要和现场调查情况、患者的临床表现一起分析，才能确定病因。,检验结果的正确性不仅取决于实验室的条件和技术水平，同时还与检验样品的采集、保存、送样方法等方面有关。因此在分析检验结果时，除了应考虑结果是否符合有关实验室判定标准外，还应综合考虑各种困难影响检验结果的因素。,阳性结果不一定能说明病原因子在爆发事件中的致病作用；反之阴性结果也不一定能完全否定某种病原因子的病因假设,结果的报告、解释、分析,无菌部位病原分离阳性,食品、环境标本检出变形杆菌、产气荚膜梭菌,细菌性食物中毒的实验室诊断,要点：,从相关食品及发病者中分离到相同的致病菌,从同批发病者中分离到相同的致病菌,从食品中分离到致病菌的致病特点与发病者的临床症状相符,检出限值和检验结果的表达,每个实验室对已经建立的检测方法都要进行准确性和灵敏性评价，还要争取开展与其它检测方法之间进行比较的工作。每批样本都要对方法进行检出限值（最低检出浓度）测算，并将最低检出限值在发出的检测报告中注明。,对定量检测，如样本中毒物浓度超过检出限值，应标注出实际测出的数值；如在样本中检测出所检测的毒物，但毒物的量（或浓度）低于检出限值，应在检测报告中报告“检出”；对在样本中未发现目标毒物，应该检测报告上注明“未检出”。,对定性检测，样本中检出目标毒物时在检验报告上注明“阳性”；对未检出目标毒物者在检验报告上注明“阴性”。,结合流调资料分析检测结果,冲突结果的处理,每个重大中毒事件病因确定或中毒患者诊断的过程中都会有一次或多次毒物鉴定检测，各次检测结果应该有一致性，这些结果共同指向某一种（或多种）毒物。,冲突的原因分析,a.,检测方法、所用的仪器不同，其灵敏度、精确度不同，每种方法都有其局限性。一种方法能够检出的另外一种方法可能检不出。,b.,每个实验室采用的实验方法不同，包括样本前处理、实验条件等对结果也有影响。,c.,用于分析的样本是来自不同的个体、材料、位置及同一不均匀样本的不同部位，这些都带来不同的分析结果。,d.,样本采集、运输、实验室操作过程中的污染。,分离不到病原性微生物可能的原因有,检测项目（如农药和病原体品种、厌氧菌）,L,型细菌,病原性微生物的数量很少，培养不出来,细菌处于非可培养的状态,现有的培养基和培养技术不适合这种微生物的生长,技术、设备、试剂的原因,新的病原微生物？未知毒物？,流行病学实验室,样本采集方案与检测人员沟通，便于以后实验室分析处理。,共同商定分析方案：现场工作人员或临床医务工作者要和毒物分析人员多沟通，对现场情况、所收集样本的情况、现场工作的方向等进行讨论，确定应该检验的毒物种类以及是否需要定量，据此制定分析工作方案,共同讨论对结果进行分析解释,提高实验室诊断率,采样（流行病-实验室）,检验（实验室）,报告（流行病-实验室）,实验室检测能力的提高,仪器,方法,技术,管理,培训,质量控制,人,常规分离鉴定,染色液,培养基,检测试剂条、试剂盒,阴性、阳性、试剂对照,实验室管理和质量控制,分子生物学实验室,实验室分区要求,环境、试剂、标本防污染,实验室管理和质量控制,实验室管理和质量控制,实验室清洁,清洁方向,应按检测工作流程方向进行：,试剂贮存和准备区,样品粉碎区,核酸制备区,扩增区,产物分析区,清洁用具,不同实验区域的清洁用具应固定，不能交叉使用。工作结束后应立即对工作区域进行清洁。,中国食源性致病菌,主动监测,国家食源性致病菌监测网络,一、,背景,2000年在科技部、卫生部支持下建立中国食品污染物监测网。,二、目标,建立与国际接轨的我国食品污染监测体系，对我国食品化学、生物污染进行连续主动监测，获得我国污染状况动态规律（包括本底水平和我国食品污染的区域分布、时间动态和污染水平），摸清,“,家底,”,和掌握变化趋势，验证食品安全标准的可行性，以评价我国食品安全性，预防食品污染，控制食源性疾病,。,小 结,建立了在严格的分析质量控制体系下的与,WHO GSS,接轨的中国食源性致病菌监测网络,初步建立了三种食源性致病菌污染状况及耐药水平的基线值,监测数据为卫生行政部门制定卫生政策提供了依据，得到各级政府部门的支持。,2002年卫生部颁布卫生部关于建立和完善全国 食品污染物监测网的通知， 2003年卫生部颁布食品安全行动计划，2003年国务院办公厅食品药品放心工程等政府文件都将食品污染物监测网络建设列为重要内容,小 结,促进了中国食源性致病菌实验室监测能力的提高，锻炼了专业技术队伍，提高了检测技术水平。,促进了省级疾病预防控制系统对食源性致病菌的监测，建立省级的数据库，为应对突发性食源性疾病及食源性疾病的预防和控制提供了技术支持。,总目标：,控制食品污染,减少食源性疾病,保障消费者健康,促进经济发展,食品安全行动计划,谢谢！,