真菌培育技术

,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,第六章药用真菌培育技术,1,一、概述,自然界中的真菌种类繁多，按,经典分类,属,植物界,；,通常所说的药用真菌，多限于生长发育到一定阶段能够,形成个体较大的子实体或菌核,的高等真菌；,已知的药用真菌分布于,40,多个科中，它们在生长发育代谢活动中，能够产生,氨基酸,、多糖、生物碱、甾醇、萜类、苷类以及维生素,等对人体疾病有抑制或治疗作用的物质。,第一节药用真菌培育研究概况,2,药用真菌，如：僵蚕、麦角、马勃、冬虫夏草（,寄生在幼虫蛾科昆虫幼虫上的子座及幼虫尸体的复合体,）,、猪苓、雷丸等；,食药兼用菌，如：黑木耳、银耳、香菇、松江蘑（松茸）、亮菌（假蜜环菌的菌丝体）等,.,3,4,5,冬虫夏草,6,猪苓,7,8,9,10,松茸,11,直接利用子实体、菌丝体或菌核入药,茯苓（菌核，,多寄生于马尾松或赤松的根部,）,麦角,（为麦角科真菌麦角菌寄生在禾本科植物黑麦等子房中所形成的菌核）,；,利用所产生的菌素物质入药，如猴头菌素、亮菌素等 。,12,主要入药部位：菌索、菌核和子实体,菌索：菌丝平行结合成绳索状；,菌核：菌丝组成坚硬的休眠体,子实体：高等真菌在生殖时期形成的有一定形状和结构,能产生孢子的菌丝体。,13,茯苓,14,15,16,17,随着从平菇、草菇、金针菇中发现抗癌成分，从真菌中寻找,抗癌药,为业界所瞩目。,从银耳、茯苓、猪苓、云芝和香菇等担子菌中所提取的,真菌多糖,，具有对肿瘤有较强的抑制作用且毒性极小，不同于其他毒性类药物直接杀伤细胞，从而为抗癌药物的研究与应用开辟了新途径，引起国内外高度重视。,18,二、药用真菌培育发展概况,东汉 紫芝的栽培方法,唐代 木耳的栽培方法,宋代和元代 香菇的栽培方法,我国银耳栽培始于近代的光绪,20,年（,1894,年），,100,多年来除我国能大规模生产外，世界上只有少数国家和地区能小批量栽培。,19,新中国成立后，对,灵芝、蜜环菌、亮菌、猴头、猪苓、茯苓,等进行了发酵、药化、药理及临床等方面的综合研究，新工艺的形成使,麦角新碱、密环菌片、亮菌片,等的生产周期大大缩短。,现在药用真菌的来源已有野生采集、人工栽培和工业化生产,3,个途径。,随着现代生物技术的广泛应用，药用真菌的开发与利用将显现出广阔的前景。,20,第二节药用真菌的生活习性,一、,药用真菌的生活方式 异养,共生,从活的有机体吸取养分，同时又提供该活体有利的生活条件。,猪苓与密环菌,菌根真菌,21,伴生,松散联合，可以是一方得利，也可双方互利。,银耳与香灰菌,银耳分解纤维素和半纤维素的能力弱，也不能充分利用淀粉，只有与香灰菌丝混合接种在一起时，才能较好地利用香灰菌丝分解木屑的产物繁殖结耳。,22,腐生,从死亡的动植物体或其他无生命的有机物中吸取养分,1,专性腐生菌,木腐生菌：香菇、银耳,草腐生菌：草菇、双孢蘑菇,2,兼性腐生菌,以寄生为主但也具有一定腐生能力的真菌，如安络小皮伞类。,23,寄生,从,活的动植物体上吸收养分,1,专性寄生菌,冬虫夏草、麦角菌,2,兼性寄生菌,兼有腐生菌和共生菌的特征,密环菌类,在枯木上腐生，也和兰科植物天麻共生,黑木耳,24,二、药用真菌生长发育的环境条件,（一）药用真菌的生长,1,菌丝体的生长,菌丝体以顶端为生长点，不断向四周呈辐射状伸展，形成菌落。,2,子实体的分化发育,菌丝聚集、子实体分化、发育及成熟,25,26,人工虫草菌丝体,27,28,29,30,31,灵芝孢子粉,32,（二）药用真菌生长发育的环境条件,1,温度,一般菌丝体较耐低温，在,0,左右只停止生长，并不死亡，最适生长温度为,18,28,；,子实体发育温度较一般植物为高，且因菌种类而异,低温型,：适温在,20,以下,如香菇。,中温型,：适温在,20,24,之间,如银耳。,高温型,：适温超过,24,如灵芝。,33,2,水分和空气相对湿度,菌丝体和新鲜子实体中约有,90%,的水分,，它们绝大部分来自培养基，所以培养基最适含水量一般在,60,左右,；,大多数菌丝体生长要求空气相对湿度为,65%,75%,；,子实体发育阶段为,80%,95,。,34,3,空气,大多是,好气性菌,类,CO,2,浓度,子实体形成前期 （,0.034%,0.1,）,是必要的，,后期,0.1,以上,对子实体有毒害,大于,0.1,时，,双孢菇往往出现菌柄长、开伞早；,超过,0.6,时，,菌盖出现畸形；,灵芝在,CO,2,浓度为,0.1,时，一般不形成菌盖，菌柄分枝呈鹿角状。,35,4,光照,菌丝生长时一般不需要光，但子实体分化发育时大部分需要一定的散射光，而直射光不利于生长。,喜光型真菌,香菇、草菇、灵芝、金针菇,厌光型真菌,双孢蘑菇、茯苓等,中间型药用菌,黄伞,36,5,酸碱度,大多数药用菌喜,pH,值,3,6.5,的偏酸性环境，最适为,5.0,5.5,；,大于,7.0,时生长受阻，大于,8.0,时生长停止。,草菇喜中性偏碱,的环境。,在配制培养基时应将,pH,值适当调高，或添加,0.2,磷酸二氢钾作为缓冲剂。,37,第三节 药用真菌菌种分离与培养,一、 药用真菌的营养与培养基的制备,（一）药用真菌的营养,1,碳源,纤维素、木质素、单糖、有机酸等,2,氮源,马铃薯汁、麦麸、马粪等,在子实体形成期培养料中氮素的含量须低于菌丝生长期，一般菌丝生长期碳氮比为,15,201,，出菇期为,30,401,。不同的菌类对碳氮比的要求会有一定差异。,38,3,水分,在真菌有机体中含量最大。,4,无机盐类,钾、钠、钙等。,磷、硫、钾等元素在培养基中的适宜浓度为,100,500g/L,，而铁、钴、锰等需要量甚微（千分之几毫克）。,5,生长因素,是真菌生命活动中不可缺少而需要量又极少的有机营养物质，如维生素等。,维生素在,120,以上时易被破坏,39,（二）培养基制备,天然培养基,:,利用含有丰富营养的天然有机物质制成的培养基,合成培养基,:,利用已知成分的化学药品配制成的培养基,半合成培养基,:,采用部分天然物质为碳源及生长因素的来源，再添加些无机盐类。,固体培养基和液体培养基,40,二、消毒与灭菌,干热灭菌,湿热灭菌,过滤除菌法,紫外线灭菌法,药物灭菌法,0.1%,升汞液可作非金属器皿和材料的表面灭菌,2%,5%,漂白粉液可用于恒温室、接种室墙壁消毒。,70%,75%,乙醇可作非金属器皿和材料的表面灭菌。,7.5ml/ m,3,的甲醛,-,高锰酸钾熏蒸接种箱、无菌室,41,三、菌种的分离培养与保存复壮,（一）菌种分离培养,组织分离法,是指通过药用真菌菌体组织或其生长基质分离提纯菌丝的方法。,孢子分离法,是利用真菌的孢子，在适宜的培养基上萌发长成菌丝体以获得纯菌种的一种方法。它可分为多孢子分离法和单孢子分离法。,寄主分离法,对于茯苓、木耳、银耳、香菇等木质腐生菌，可以从其寄主板木上分离出菌丝做菌种，或直接做原种和栽培种。,42,（二）、菌种保藏,43,斜面低温法,斜面培养基上培养到菌丝旺盛生长,移放到,4,左右的冰箱,中,经,3,6,个月转接一次,使用前一两日置常温下活化转管,44,麸曲法,用麸皮加水拌匀,分装于小试管,厚约,1.5cm,；,常规灭菌,冷却后接入菌种培养至长好,室温下放入装有,CaCl2,的干燥器中干燥几日, 20,以下可保藏,1,2,年。,45,石蜡油封藏法,在菌种的表面灌注无菌的液体石蜡,；,直立放在低温干燥处保存,1,2,年。,保藏孢子，可将砂土装入小试管并经过严格灭菌后，再将无菌孢子拌入其中，用石蜡封口,。,46,（三）、菌种的衰退与复壮,菌种的衰退,多次无性繁殖、培养条件影响,菌种的复壮,采用,低温保藏,，,培养温度不宜超过,28,。,减少传代,控制突变型在数量上取得优势的机会。,单菌落分离,选育生产性能良好的菌株,，并有计划地把,无性和有性繁殖的方法交替使用,，组织分离最好每年进行一次，有性繁殖,3,年一次。,淘汰已衰退的个体,，选择有利于高产菌株的培养条件。,47,四、接种培养,（一）一级菌种（母种）的培养,制斜面培养基,选优良健壮成熟的种菇,在无菌条件下取一小块接于培养基上；,置,25,30,下培养出菌丝,即得纯菌种。,48,（二）二级菌种（原种）培养,选适当配方，营养成分高于母种培养基，灭菌。,从母种内挑取,4,5mm3,的小块放入培养基中央,；,置适温培养至菌丝长满瓶。,49,（三）三级菌种（栽培种）的扩大培养,选择适当的配方，营养再高于原种,；,取原种长满菌丝的小块（或木块,1,2,片与混合物少许），接入瓶内；,培养至菌丝长满瓶 。,制种后可接种在不同的培养基（如段木、袋用料等）上大规模培养,50,原种、栽培种生产,培养基的配制,木屑,-,米糠培养基棉籽壳培养基 种木培养基 米粉培养基,灭菌,高压蒸汽与常压蒸汽灭菌,51,原种、栽培种生产,接种,每支试管可接,4,5,瓶原种，每瓶原种可接,50,80,袋栽培种。,培养,一般培养温度为,20,28,，在接种,12 h,后，菌种即可恢复生长；,2,3 d,后，种块上菌丝逐渐伸入培养基内；,1,周后有的菌种有红褐色、褐色或黄色分泌物出现，有的有原基出现，可用于生产,。,52,第四节 药用真菌的人工栽培,53,段木栽培,段木的准备,加强管理,场地的选择,接种,病虫害防治,54,（一）选择场地,与真菌种类有关,茯苓喜酸性砂壤并排水良好的南坡,灵芝、银耳选水源方便、遮阴潮湿、避风向南的场地。,55,（二）段木准备,野生 壳斗科植物,营养丰富、水分适中时期砍伐,常以晚秋落叶后到第,2,年春树木萌发前为好,剃枝、锯段、干燥、打孔等项处理。,56,（三）接种,栽培的关键,接种前应严格检查段木组织是否枯死,水分状况是否适中,选择阴天进行为宜。,57,（四）,管理,栽培的关键,保持栽培场地清洁；,搭棚、遮阴、加温、喷水等调节,菌对光照、温湿度、空气的要求,。,58,（五）杂菌污染与病虫害防治,霉菌、线虫及白蚁,霉菌,青霉、曲霉、毛霉等,培养基灭菌要彻底；,严格检查菌种质量，适当加大接种量；,立即销毁污染菌种。,59,60,61,62,63,64,65,线虫,由土壤或水进入段木,蛀食菌基部。,段木靠地面不宜太近,保持水源清洁；,覆土材料最好进行巴氏消毒，并在地面上撒施石灰；,隔离病区，停水使其干燥，并用,1%,的冰醋酸清洁处理烂穴,防止蔓延。,66,67,黑翅大白蚁,68,（六）采收,因菌类不同从接种到采收所需时间及采收次数各异。,银耳接种后,40,日即可陆续采收多次；,灵芝,4,个月收获，每年可收,2,3,次。,69,代料栽培,工艺流程,菌种准备（母种原种栽培种）备料配料装袋灭菌接种菌丝培养出菇管理采收加工,70,袋料栽培工艺流程,菌种准备,备料,配料,装袋,灭菌,加工,采收,出菇管理,菌丝培养,接种,71,技术要点,（,1,）栽培材料,阔叶树的木屑和农业废料，,（,2,）栽培方式,瓶栽、袋栽、箱栽、菌柱栽培、床栽、阳畦床栽、室内层架式床栽等。,（,3,）栽培场所,专业菇房，也可利用清洁、通风、明亮的房子改作栽培场所。使用前必须消毒。,（,4,）栽培与管理,按生产季节安排,培养基按常规配制与灭菌，发菌阶段一般在,20,24,培养，培养室的温度超过,30,时菌丝生长会受到影响。,（,5,）采收与加工,去除残留的泥土和培养基，按质量标准进行加工,72,73,