耐有机溶剂菌的筛选及芒果苷衍生物的初步探索

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,耐有机溶剂菌株的筛选及芒果苷衍生物生物合成的初步探索,1,研究背景：,芒果苷,具有,广泛的药理活性，如,抗氧化，抗炎,等，芒果苷对治疗糖尿病，降血脂，免疫调节以及,抗肿瘤治疗,有很好的应用前景。但由于其,溶解性和跨膜通透性均很弱,生物利用度低, 制约了芒果苷药理作用的发挥，为了改善其不足，提高生物利用度，通常在其结构基础上添加,基团,或者是制备成其,单钠盐,的形式，即芒果苷衍生物。,芒果苷化学结构式,2,芒果苷生物转化,芒果苷的生,物转化,羟基化,反应,糖基化,反应,提高水溶性,抗氧化活性等,提高水溶性,生物利用度等,3,芒果苷衍生物合成方法,微生物转化法,步骤多，副产物多，污染严重，条件苛刻。,条件温和、反应类型多样、无污染、成本低、副产物少 ，能定位反应。,化学合成法,4,有机溶剂耐受菌:,一类新的,能与有害影响因素竞争,并能在,有机溶剂,中茁壮生长的微生物,5,有机介质中酶,催化反应优点,增加底物溶解性度,提高酶热稳定性,提高反应温度,加速反应,改变反应平,衡移动的方向,可控制底物专一性,产物分离,通过,溶剂体系,调节中药有效成分进行,定向的转化或修饰,等,6,实验研究步骤,采集土样,耐有机溶剂菌的筛选,建立耐有机溶剂菌库,底物复筛,分析,7,采集土样,初筛,以15%的叔丁醇为筛选压力。,8,转接，稀释涂布，划线单离：,9,富集与冻存：,10,筛得耐有机溶剂菌落以及菌株形态（部分）：,编号,菌落形态,菌体形态,NJ-2-1,菌落小，乳白色，圆形。,长杆，革兰氏阳性。,NJ-3-2,菌落小，淡黄色，圆形。,长杆，革兰氏阴性。,NJ-4-2,菌落大，白色，假根状。,长杆，革兰氏阴性。,NJ-5-2,菌落中等，白色，不规则。,粗短杆，革兰氏阴性。,NJ-6-1,菌落极小，红色，圆形。,细短杆，革兰氏阳性。,NJ-7-1,菌落大，白色圆形，有褶皱。,短杆，革兰氏阴性。,NJ-8-2,菌落小，乳白色，圆形。,短杆，革兰氏阳性。,共筛得59株耐有机溶剂菌，分别有20株G,+，,39株G,-,。菌株以杆状为主，有6株球状。,11,底物复筛,：,菌种的活化,发酵产酶,TLC 及HPLC分析,转化,12,薄层检测：,展层剂：,正丁醇：水：乙酸,5： 4 ： 1,对照,NJ-8-2,NJ-3-2,转化产物,13,高效液相色谱分析：,对照,菌株NJ-8-2,芒果苷衍生物10%,芒果苷,芒果苷,对照：,条件：30%甲醇、流速1.0ml/min、波长316nm。,14,实验小结：,成功筛选出59株耐叔丁醇的菌株。,对这些菌株进行了转化实验，筛选出2株有可能催化芒果苷生物合成芒果苷衍生物的菌株。,15,展望,在本实验的基础上还可以展开以下研究：,进一步验证所得的菌株能够催化芒果苷合成芒果苷衍生物；,确认该芒果苷衍生物的结构及生理活性；,(3) 通过发酵条件的优化提高芒果苷衍生物的产率。,16,谢谢！,17,