人教版高中生物选修1全套课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,人教版高中生物选修1生物技术实践,果酒和果醋的制作,一、制作果酒果醋的微生物：,酵母菌真菌,醋酸菌细菌,二、两种微生物的分类地位,1.制作果酒酵母菌,2.制作果醋醋酸菌,菌种,名称,生物学分类,代谢,类型,适宜,温度,繁殖方式,对氧的需求,酵母菌,真核生物,异养,兼性厌氧,最适20,出芽生殖,前期需氧，,后期不需氧,醋酸菌,原核生物,异养,需氧,3035,二分裂,一直需氧,控制空气的一些措施,三、繁殖方式和代谢类型,出芽生殖,二分裂生殖,比较,果酒制作,果醋制作,制作原理,酵母菌先在有氧条件下大量繁殖，再在无氧条件下进行酒精发酵,醋酸菌在氧气、糖源充足时,将糖分解成醋酸；,当缺少糖源时，将乙醇变为乙醛，再,将乙醛变为醋酸,四、制作原理和发酵条件的比较,制作果酒,制作果醋,最适发,酵温度,18,25,30,35,对氧,的需求,前期：需氧,后期：不需氧,需充足氧,pH,酸性环境,（3.33.5）,酸性环境,（5.46.3）,发酵时间,10,12 d,7,8 d,C,6,H,12,O,6,+6O,2,+6H,2,O 6CO,2,+12H,2,O+能量,酶,1、有氧呼吸：,C,6,H,12,O,6,2C,2,H,5,OH+2 CO,2,+,能量,酶,2、无氧呼吸：,酵母菌,制酒,制作果酒前期需氧，后期厌氧,出芽生殖，,增加酵母菌数量,产生酒精,1、假设氧气、糖源充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸，其反响式：,酶,C,6,H,12,O,6,3CH,3,COOH（醋酸）,2、,若缺少糖源，氧气不足时，,醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，其反应式：,酶,2C,2,H,5,OH+O,2,2CH,3,CHO（乙醛）+2H,2,O,酶,2CH,3,CHO+O,2,2CH,3,COOH（醋酸）,醋酸菌,制醋,制作果醋一直需要氧,五、实验流程示意图,1、材料的选择与处理,选择新鲜的葡萄，榨汁前先将葡萄进展冲洗，除去枝梗。,、取葡萄500g，去除枝梗和腐烂的叶子。,、用清水冲洗葡萄12次除去污物。,讨论：你认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗？为什么？,应该先冲洗，然后再除去枝梗，以防止除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的时机,六、实验操作,2、清洗WHY？,3、,榨汁,将冲洗除枝梗的葡萄放入榨汁机榨取葡萄汁。,4、发酵：发酵装置如下,5、本卷须知,将葡萄汁装人发酵瓶，,要留大约13的空间,(如图右图所示)，并封,闭充气口。为什么？,塑料瓶中不能装满葡萄液汁，应留一定空间，有利于酵母菌有氧呼吸大量繁殖形成种群优势。,防止榨汁机、发酵瓶带菌引起发酵液污染,70%酒精消毒,制葡萄醋,的过程中，要适时,通过充气口充气,。,将温度严格控制在,30,35,，,时间控制在前,7,8d,左右。,制葡萄酒的过程中，要严格密闭，,将温度严格控制在1825，,时间控制在1012d左右，可通过出料口对发酵的情况进展。及时的监测。,课题2,腐乳的制作,专题1 传统发酵技术的应用,以制作腐乳为例了解传统发酵技术的应用，说明腐乳制作过程的科学原理，设计并完成腐乳的制作，分析影响腐乳品质的条件。,教学目标,课题重点：说明腐乳制作过程的科学原理，设计并完成腐乳的制作。,课题难点：在实践中摸索影响腐乳品质的条件。,重点与难点,一、 根底知识,据史料记载，早在公元5世纪魏代古籍中，就有腐乳生产工艺的记载，到了明代我国就大量加工腐乳，而今腐乳已成长为具现代化工艺的发酵食品。,小资料,1. 你能利用所学的知识，解释豆腐长白毛是怎么一回事吗？,想一想,2. 王致和为什么要撒许多盐，将长毛的豆腐腌起来？,答：豆腐上生长的白毛是毛霉的白色菌丝。严格地说是直立菌丝，在豆腐中还有匍匐菌丝。,答：盐能防止杂菌污染，防止豆腐腐败。,腐乳制作的原理,1、参与腐乳制作的主要微生物,主要作用,青霉,曲霉,酵母,毛霉,1、关于毛霉：,1毛霉是一种丝状真菌。,繁殖方式为孢子生殖，,新陈代谢类型为异养需氧型。,2毛霉在腐乳制作中的作用：,在豆腐的发酵过程中，毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸在多种微生物的协同作用下，普通的豆腐转变成我们爱吃的腐乳发酵的温度为1518 。,毛霉菌落形态,总状毛霉菌落形态,思考题,1. 我们平常吃的豆腐，哪种适合用来做腐乳？,答：含水量为70%左右的豆腐适于作腐乳。用含水量过高的豆腐制腐乳，不易成形。,2. 吃腐乳时，你会发现腐乳外部有一层致密的“皮。这层“皮是怎样形成的呢？它对人体有害吗？它的作用是什么？,答：“皮是前期发酵时在豆腐外表上生长的菌丝匍匐菌丝，它能形成腐乳的“体，使腐乳成形。“皮对人体无害。,2、微生物的作用机理,酿造腐乳的主要工序是将豆腐进展前期发酵和后期发酵。,前期发酵过程中，毛霉在豆腐毛坯上生长。毛霉生长大约5天后使白坯变成毛坯。豆腐外表被一层菌膜包住，形成腐乳的“体。同时毛霉分解以蛋白质为主的蛋白酶，将豆腐所含有的蛋白质分解为各种氨基酸。,在后期发酵过程中，酶与微生物协同作用，通过研制并配入各种辅料红曲、面曲、酒酿，是蛋白酶作用缓慢，促进其他生化作用，生成腐乳的香气。,二 、 实验设计,让豆腐上长出毛霉,加盐腌制,加卤汤装瓶,密封腌制,温度保持在15-18；豆腐水分控制在70%左右。,逐层加盐，随层数的加高而增加盐量，腌制大约8天左右。,卤汤由酒及各种香辛料配制而成。,封瓶时瓶口通过酒精灯火焰防止瓶口污染。,腐乳制作的具体操作步骤：,将豆腐切成3cm3cm1cm的假设干块；,将豆腐块平放在铺有干粽叶的盘内，粽叶可以提供菌种，并能起到保温的作用，每块豆腐等距离排放，周围留有一定距离，豆腐上面再铺上干净的粽叶；,将平盘放入温度保持在15-18的地方；,4. 当毛霉生长旺盛，并呈淡黄色时，去除包裹平盘的保鲜膜以及扑在上面的粽叶，使豆腐块的热量和水分能够迅速散失，同时散去霉味；,5. 当豆腐凉透后，将豆腐块间连接在一起的菌丝拉断，并整齐排列在容器内，准备腌制；,6. 长满毛霉的毛坯与盐的质量分数比为5： 1，分层加盐，在瓶口外表盐要铺厚些，大约腌制8天；,7. 将黄酒、米酒和糖，按口味不同而配以各种香辛料如胡椒、花椒、八角茴香、桂皮、姜、辣椒等混合制成卤汤；,8. 将广口玻璃瓶洗净，用高压锅在100蒸气灭菌，将腐乳咸坯摆入瓶中，参加卤汤和辅料，密封放置，常温六个月可以成熟。,三 、 操作提示,1、控制好材料的用量,腌制时注意控制盐的用量,盐的浓度过低缺乏以抑制微生物生长，可能导致豆腐腐败变质；浓度过高会影响腐乳的口味。,卤汤中酒的含量应控制在,12%,左右,酒精含量过高将会延长腐乳成熟的时间；含量过低缺乏以抑制微生物生长，可能导致豆腐腐败。,2、防止杂菌污染,用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用沸水消毒。,装瓶时，操作要迅速小心。,封瓶时，最好将瓶口通过酒精灯的火焰，防止瓶口被污染。,四、 结果分析与评价,A 是否完成腐乳的制作,能够合理的选择实验材料与用具；,前期发酵后豆腐的外表长有菌丝，后期发酵制,作根本没有杂菌的污染。,B 腐乳质量的评价,成功的腐乳应具有以下特点：,色泽根本一致、味道鲜美、咸淡适口、无异味、块形整齐、厚薄均匀、质地细腻、无杂质。,C 能否总结不同条件对腐乳风味和质量的影响,从盐、酒的用量、发酵的温度、发酵时间的长短、以及香辛料等因素中的某一因素说明其对腐乳风味或质量的影响。,制作原理,实验设计,主要微生物,根霉,酵母,结果分析与评价,毛霉,蛋白酶,蛋白质,小分子肽和氨基酸,腐乳的制作,曲霉,机理,脂肪酶,脂肪,甘油和脂肪酸,让豆腐上长出毛霉,加盐腌制,加卤汤装瓶,密封腌制,操作提示,控制盐酒的用量,防止杂菌污染,课堂小结,课题3:制作泡菜并检测亚硝酸盐含量,专题1:传统发酵技术的应用,一、乳酸菌,乳酸菌,是,发酵糖类,主要产物为,乳酸,的一类细菌的总称。,属于,原核生物,乳酸菌种类多，分布广，常见乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌用于制酸奶。,乳酸链球菌（球状）,乳酸杆菌（杆状）,分布：,在自然界分布,广泛,，空气、土壤、植物体表、人或动物肠道内部都有,繁殖：,以二分裂方式进展繁殖无性生殖,代谢类型：,异养,厌氧型,C,6,H,12,O,6,2C,3,H,6,O,3,+能量,酶,乳酸菌耐盐，最适pH=5，为发酵中的先锋队,为什么含有抗生素的牛奶不能发酵为酸奶？,牛奶发酵为酸奶主要依靠乳酸菌的发酵作用，而,抗生素能够杀死或抑制乳酸菌,。,二、亚硝酸盐,自然界中，亚硝酸盐,分布广泛,，蔬菜、咸菜、豆粉中均含有。,亚硝酸盐为,白色粉末,，外观与食盐相似，有咸味，易溶于水，可作,食品添加剂,。,亚硝酸盐为强氧化剂，能够把血液中携带氧的低铁血红蛋白转变为高铁血红蛋白，从而导致缺氧性中毒病症。,膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体安康，但是，当人体摄入的亚硝酸盐总量到达0.30.5g时，会引起中毒，当摄入总量到达3g时，会引起死亡。,膳食中的绝大局部亚硝酸盐随尿排出，只有在特定的条件下才会转变成致癌物亚硝胺，亚硝胺对动物还具有致畸和致突变作用亚硝酸盐本身不是致癌物质。,亚硝酸盐在pH=3，温度适宜和一定微生物的作用下转变成致癌物质亚硝胺，因此，霉变的食品亚硝胺可增至数十倍至数百倍。,我国卫生标准规定：亚硝酸盐的残留量,在,肉制品,中不得超过,30mg/kg,，,酱菜,中不超过,20mg/kg,，,而,婴儿奶粉,中不得超过,2mg/kg,。,三、泡菜的制作,选泡菜坛,预处理新鲜蔬菜,配置盐水,装坛发酵,成品泡菜,测定亚硝酸盐含量,检查方法：坛口向上，压入水中，看坛内壁有无渗水现象。,无裂纹、无砂眼,坛沿深、盖子,吻合好,火,候,好,蔬菜处理,将鲜菜,修整、洗涤、阳光下晾晒,，到菜表皮萎焉时收下，切分成条状或片状。,配制盐水,清水与盐按,4:1,的比例配制好后,煮沸冷却,。,盐的作用：调味，抑制微生物生长，所以盐含量过低会造成细菌污染。,煮沸的目的：杀菌,冷却是为了不影响乳酸菌的生命活动,。,装坛发酵,将,泡菜坛洗净,，并用热水洗坛内壁两次。,将经过处理的蔬菜,混合,均匀，装入泡菜坛内，装至,半坛时,放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，继续装至,八成满,，再徐徐注入配好的盐水，使盐水没过,全部菜料,，盖好坛盖。向坛盖边缘的水槽中,注满水,。并注意发酵过程中补充水。,坛沿注满水是为了保证坛内乳酸菌的发酵所需的无氧环境。,腌制条件,温度不能过高,食盐含量不能过低,腌制时间不能过短,细菌污染大量繁殖后，,亚硝酸盐含量增加,腌制过程中，亚硝酸盐含量先增多，后减少。,泡菜发酵的阶段,泡菜在发酵期间，由于乳酸菌的发酵作用，发酵产物乳酸不断累积，因此可以根据微生物的活动情况和乳酸积累量，将泡菜发酵过程分为三个阶段。,蔬菜刚入坛时，蔬菜外表带入的微生物，主要是以不抗酸的大肠杆菌和酵母菌等较为活泼，它们产生较多的乳酸、酒精、醋酸和二氧化碳等，二氧化碳以气泡从水槽内放出，逐渐使坛内形成嫌气状态。,发酵产物,中除,乳酸,外，还有其他，如,乙醇,、,CO,2,等称异型乳酸发酵,发酵前期：,特点：还有一点点氧气，微生物大肠杆菌，酵母菌发酵，产生代谢产物，二氧化碳排出，形成无氧环境，为后面乳酸菌发酵提供条件，乳酸含量逐渐增加，抑制微生物生长繁殖。,由于前期乳酸的积累，pH下降，嫌气状态的形成，乳酸杆菌进展活泼的同型乳酸发酵，乳酸的积累量可到达0.6%0.8%；乳酸积累pH达3.53.8.大肠杆菌、酵母菌、霉菌等的活动受到抑制。这一期为完全成熟阶段，泡菜有酸味且清香品质最好。,发酵产物,中,只有乳酸,，称为同型乳酸发酵,发酵中期：,特点:乳酸菌逐渐占据优势，其他发酵微生物受到抑制，乳酸积累增多,在此期间继续进展的是同型乳酸发酵，乳酸含量继续增加，可达1.0%以上。当乳酸积累达1.2以上时，乳酸杆菌的活性受到抑制，发酵速度逐渐变缓甚至停顿。,发酵后期：,此阶段泡菜酸度过高、风味不协调。,特点：乳酸含量过高，抑制乳酸菌活动，乳酸菌减少。,1、为什么泡菜坛内有时会长一层白膜，这层白膜是怎么形成的？,形成白膜是由于产膜酵母的繁殖。酵母菌是兼性厌氧微生物，泡菜发酵液营养丰富，其外表氧气含量也很丰富，适合酵母菌的繁殖。,2、为什么日常生活中要多吃新鲜蔬菜，不吃存放时间过长、变质的蔬菜？,有些蔬菜，如小白菜和萝卜等含有丰富的硝酸盐。当这些蔬菜放置过久时发生变质发黄、腐烂或者煮熟后存放太久时，蔬菜中的硝酸盐会被微生物复原成亚硝酸盐，危害人体安康。,四、亚硝酸盐含量的测定,1、测定亚硝酸盐含量的原理 比色法,在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反响后，再与N-1萘基乙二胺盐酸盐结合生成玫瑰红溶液。,将经过反响显色后的泡菜待测样品与标准液比色，即可估算出样品中的亚硝酸盐含量。,3、步骤,1配置溶液,2 配制标准液,3 制备泡菜样品处理液,4比色,2、材料与器具,泡菜、,对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐、盐酸,亚硝酸钠、,氯化镉、氯化钡、,氢氧化钠、氢氧化铝、,蒸馏水、,榨汁机、移液管、容量瓶、比色管等,1配置溶液,对氨基苯磺酸溶液(4mg/mL)溶于,盐酸，避光保存,N-1萘基乙二胺盐酸盐溶液(2mg/mL),避光保存,亚硝酸钠溶液(5ug/mL),提取剂：,氯化镉、氯化钡,氢氧化铝乳液,氢氧化钠溶液,2 配制标准显色液,用移液管吸取0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL亚硝酸钠溶液(相当于1ug，2ug，3ug，4ug，5ug和7.5ug亚硝酸钠)，分别置于50mL比色管中，再取1支比色管作为空白对照。,并分别参加2.0mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置35分钟后；,再分别参加1.0mL N-1萘基乙二胺盐酸盐溶液，加蒸馏水至50mL，混匀；,观察亚硝酸钠溶液颜色的梯度变化玫瑰红色逐渐加深。,制备样品,样品处理液的制备,增加亚硝酸盐的溶解度,中和乳酸,吸附杂质，脱色，净化作用,比色,样品即滤液参加比色管,显色反响：先加对氨基苯磺酸 ，后加 N-1萘基乙二胺盐酸盐,比色：显色后与标准显色液比照，找出颜色最相近的记录对应亚硝酸盐含量,测定反响原理总结,酸化,：,对氨基苯磺酸溶于,盐酸中,重氮化,：,亚硝酸盐+对氨基苯磺酸,重氮盐,酸,显色,：重氮盐+,N-1萘基乙二胺盐酸盐,比色：样品和标准比色液比照，估算亚硝酸盐含量,玫瑰红色,根本知识,实验设计,乳酸菌发酵,定义,分类,分布,亚硝酸盐,操作提示,泡菜坛选择,腌制条件,泡菜的制作及亚硝盐检测,发酵原理,乳酸杆菌 乳酸链球菌,葡萄糖,乳酸,国家标准,危害,泡菜制作,亚硝酸盐含量测定,时间、温度、食盐用量、微生物,测定亚硝酸盐含量的操作,结果分析与评价,课堂小结,果酒,果醋,腐乳,泡菜,微生物类型,原理,反应条件,检测方法,酵母菌，真菌，兼性厌氧,醋酸菌，细菌，好氧菌,毛霉，真菌，好氧,乳酸菌，细菌，厌氧菌,酵母菌的无氧呼吸产生酒精,1825 ，无氧,重铬酸钾与其反响呈灰绿色,醋酸菌的有氧呼吸产生醋酸,3035，通入氧气,品尝、pH试纸检测,毛霉产生蛋白酶和脂肪酶,1518接种，酒精含量控制在12左右,乳酸菌无氧呼吸产生乳酸,常温，无氧条件,pH检测，亚硝酸盐的检测方法,某学生把甘蓝切丝后制作泡菜，为了探究甘蓝在不同的温度下经过,3,天发酵后所生成的乳酸量，在第,4,天检测的实验结果如表：,(1),分析资料，你可以得出什么结论,?,(2),在泡菜制作时，乳酸含量大致在,0,.,8,左右时风味最好，此时维生素,C,的保存率也较高，结合以上材料，你在制作泡菜时应该注意什么,?,练习题,(1)分析资料，你可以得出什么结论?,从表中数据分析可得知，甘蓝在31时所生成的乳酸含量最多，低于或者高于这个温度所生成的乳酸量都比较少一些。,(2)在泡菜制作时，乳酸含量大致在0.8左右时风味最好，此时维生素C的保存率也较高，结合以上材料，你在制作泡菜时应该注意什么?,注意把温度控制在16左右为宜,2001年1月4日,（封坛前）,2001年1月8日,2001年1月12日,2001年1月15日,2001年1月19日,0.15,0.60,0.20,0.10,0.10,1号坛,2号坛,0.15,0.20,0.10,0.05,0.05,3号坛,0.15,0.80,0.60,0.20,0.20,泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量的变化,4、实验结果分析和讨论选录,三只泡菜坛中的亚硝酸盐含量变化的绝对数量虽然不同，但整体的变化趋势却根本一样。在腌制后的第五天，三只泡菜坛中亚硝酸盐的含量都到达最顶峰1、2、3号坛中的亚硝酸盐分别到达 0.6mg/kg、0.2mg/kg、0.8mg/kg,在腌制后的前6天内，泡菜中的亚硝酸盐含量就可以到达最顶峰。而第9天后泡菜中的亚硝酸盐含量开场有明显下降。,这可能是由于泡菜在开场腌制时，坛内环境有利于某些细菌的繁殖包括一些硝酸盐复原菌，这些细菌可以促进硝酸盐复原为亚硝酸盐。,但随着腌制时间的延长，乳酸菌也大量繁殖，对硝酸盐复原菌产生一定的抑制作用，使其生长繁殖受到影响，造成泡菜中亚硝酸盐的含量又有所下降。,专题2,微生物的培养与应用,课题1,微生物的实验室培养,.微生物的类群,微生物,原核类:,真核类,非细胞类：,细菌、支原体、放线菌、蓝藻,个体微小、构造简单,酵母菌、霉菌、食用菌,真菌：,原生生物：,显微藻类、原生生物如：草履虫、变形虫等,病毒、类病毒、朊病毒,微生物的共同特点：,细菌主要是以二分裂的方式进展增殖如右图,.定义：,单个或者少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，会形成一个肉眼可见的、具有一定形态构造的子细胞群体，叫做菌落。,.特征：,大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。,.功能：,每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以,作为菌种鉴定的重要依据,。,几种菌落及其形态,几种菌落及其形态,:由核酸和蛋白质构成。,病毒的构造,吸附,注入,合成,释放,组装,病毒的增殖一般可分五个阶段，即：,吸附,注入核酸,合成核酸和蛋白质,组装,释放,：寄生,微生物需要的五大类营养要素物质是：,.微生物需要的营养物质及功能,：但凡能为微生物提供所需碳元素的营养物质。,无机碳源：,CO,2,；NaHCO,3,等,有机碳源：,糖类,、脂肪酸、花生粉饼、石油等,构成细胞物质和一些代谢产物,异养微生物的能源,.概念,.来源：,.作用：,无机氮源：,N,2,、NH,4,+,、NO,3,-,、NH,3,等。,有机氮源：,尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等,但凡能够为微生物提供N元素的营养物质。,主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物。,.概念：,.来源：,.作用：,.常见的生长因子：,.概念：,.作用：,微生物生长不可缺少的微量有机物。,酶和核酸的组成成分。,维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。,.培养基,培养基培养液是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的营养基质。,2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方(参考教材附录内容),3.不管哪种培养基，一般都含有,水,、,碳源,、,氮源,、,无机盐,、,等,营养物质，另外还需要满足微生物生长对,pH,、,特殊营养物质,例如:,生长因子(,即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶,),以及,氧气,、,二氧化碳,、,渗透压,等,的要求。,划分标准,培养基种类,特点,用途,物理性质,化学成分,天然培养基,合成培养基,用途,鉴别培养基,培养基的种类,不加凝固剂,加凝固剂，如琼脂,工业生产,观察微生物的运动、分类鉴定,微生物别离、鉴定、活菌计数、保藏菌种,含化学成分不明确的天然物质,工业生产,培养基成清楚确,分类、鉴定,在培养基中参加某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长,培养、别离出特定微生物,在培养基中参加某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物,鉴别不同种类微生物,选择培养基,液体培养基,半固体培养基,固体培养基,液体培养基：,外表生长,均匀混浊生长,沉淀生长,back,半固体培养基：,(是否运动),无动力,有动力(弥散),固体培养基：菌落,别离导入了目的基因的受体细胞,几种选择培养基,参加青霉素的培养基,别离酵母菌、霉菌等真菌,不加氮源的无氮培养基,别离固氮菌,不加含碳有机物的无碳培养基,别离自养型微生物,参加青霉素等抗生素的培养基,back,血清中含有：,多种蛋白质白蛋白、球蛋白、铁蛋白等,多种金属离子；,激素；,促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。,各种生长因子,转移蛋白,不明成分,人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基如血清。,.无菌技术,1.无菌技术的概念,无菌操作泛指,在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。,消毒定义：,利用化学或物理方法，杀死,部份,微生物的过程。,2.消毒与灭菌的概念及两者的区别,灭菌的定义：,以化学试剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而到达完全无菌之过程。,灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。,煮沸消毒法：100煮沸5-6min。,巴氏消毒法：70-75下煮30min或 80下煮15min。,化学药剂消毒法：用75%酒精、新洁尔灭等进展皮肤消毒；氯气消毒水源。,紫外线消毒。,.消毒的方法：,灼烧灭菌,干热灭菌：160-170 下加热1-2h。,高压蒸气灭菌：100kPa、121 下维持15-30min.,.灭菌的方法：,最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以根本保持培养基的营养成分不被破坏。,有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。,而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。,二.实验操作(以培养大肠杆菌为例),.制备牛肉膏蛋白胨培养基,2.,称量,4.灭菌:,将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121，灭菌1530min。,5,.倒平板:,待培养基冷却到50 左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种,。,倒平板操作,.纯化大肠杆菌,平板划线法,和,稀释涂布平板法,。,微生物的接种的,常用接种方法有,：,平板划线的操作,一旦划破，会造成划线不均匀，难以到达别离单菌落的目的；,二是存留在划破处的单个细胞无法形成规那么的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。,的操作方法,接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。,.长期保存：,甘油冷冻管藏法,.临时保藏：,三.结果分析与评价,.培养基的制作是否合格,如果未接种的培养基在恒温箱中保温12d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否那么需要重新制备。,.接种操作是否符合无菌要求,如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小根本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，那么说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，那么说明接种过程中，无菌操作还未到达要求，需要分析原因，再次练习。,.是否进展了及时细致的观察与记录,培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。,营养类型,能源,氢的供体,基本碳源,微生物举例,代谢类型,光能无机营养(光能自养型),光能有机营养(光能异养型),化能无机营养(化能自养型),化能有机营养(化能异养型),光,光,无机物,有机物,无机物,有机物,无机物,有机物,二氧化碳,二氧化碳及简单有机物,二氧化碳,有机物,大多数细菌和全部真核微生物,硝化细菌,氢细菌,紫色非硫细菌,蓝细菌,绿色硫细菌,藻类,本课题知识小结:,课题2,土壤中分解尿素的细菌的别离与计数,一、课题背景,1、尿素的利用,尿素,是一种重要的,农业氮肥。,尿素,不能直接,被农作物,吸收。,土壤中的细菌将尿素,分解成氨,之后才能被植物利用。,2、细菌能利用尿素的原因,土壤中的细菌分解尿素是因为它们,能合成脲酶,CO(NH,2,),2,脲酶,+ H,2,O,+ CO,2,2NH,3,3、常见的分解尿素的微生物,芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。,4、课题目的,从土壤中别离出能够分解尿素的细菌,统计每克土壤样品中终究含有多少这样的细菌,.筛选菌株,.统计菌落数目,.设置对照,1、实例：,PCR技术,启示：寻找,目的菌种,时要根据它对生存环境的要求，到,相应的环境,中去寻找。,原因：,因为热泉温度7080,0,C，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。,DNA多聚酶链式反响是一种在体外将少量DNA大量复制(PCR)的技术，此项技术要求使用耐高温930C的DNA聚合酶。,.筛选菌株,要别离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；,方法：,抑制大多数微生物的生长,促进目的菌株的生长,结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进展纯化培养别离。,2、实验室中微生物的筛选原理：,人为提供有利于,目的菌株,生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。,15.0g,琼脂,1.0g,尿素,10.0g,葡萄糖,0.2g,MgSO,4,7H,2,O,2.1g,NaH,2,PO,4,1.4g,KH,2,PO,4,3、土壤中分解尿素的细菌的别离与计数所需培养基：,从物理性质看此培养基属于哪类？,固体培养基,在此培养基中哪些作为碳源、氮源？,碳源：,葡萄糖,氮源：,尿素,培养基的,氮源为尿素,，只有能合成,脲酶,的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。,缺乏,脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。,5、培养基选择分解尿素的微生物的原理,允许,特定种类,的微生物生长，同时,抑制或阻止其他种类,微生物生长的培养基，叫做,选择培养基,尿素,尿素,6、怎样证明此培养基具有选择性呢？,以尿素为,唯一氮源,的培养基,牛肉膏,蛋白胨,培养基,是,别离,尿素,细菌,判断该,培养基,有无选,择性,实验组,对照组,培养基类型,是否,接种,目的,结果,只生长尿素细菌,生长多种微生物,是,1、显微镜直接计数：,利用血球计数板(血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。,.统计菌落数目：,不能区分死菌与活菌；,不适于对运动细菌的计数；,需要相对高的细菌浓度；,个体小的细菌在显微镜下难以观察；,缺点：,2.间接计数法活菌计数法,原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。,常用方法：稀释涂布平板法。,每克样品中的菌落数(CV)M,其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。,？,说明设置重复组的重要性。,在设计实验时，一定要涂布至少3个平板，作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性,。在分析实验结果时，,一定要考虑所设置的重复组的结果是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重新实验,。,本卷须知,为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板上进展计数。,为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中，经涂布，培养计算出菌落平均数。,统计的菌落往往比活菌的实际数目低。,计算公式：,每克样品中的菌株数 =CVM,某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得,平板上菌落数的平均数为234，那么每克样,品中的菌落数是涂布平板时所用稀释液,的体积为0.1ml ( ),A. 2.34108,B. 2.34109,C. 234,D. 23.4,B,三设置对照,判断培养基中是否有杂菌污染：,将未接种的培养基同时进展培养。,判断选择培养基是否具有筛选作用：,完全培养基营养成分齐全接种后培养,观察菌落数目。,主要目的是排除实验组中非测试因素对实验,结果的影响，提高实验结果的可信度。,实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的10,6,倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。,原因：,土样不同,培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质),小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。,方案一：由其他同学用与A同学一样土样进展实验,方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进展培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。,结果预测：如果结果与A同学一致，那么证明A无误；如果结果不同，那么证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。,从肥沃、酸碱度接近中性的湿润土壤中取样。先铲去表层土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。,“微生物的天然培养基,一土壤取样,数量最大、种类最多,大约70%90%是细菌,取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。,二制备培养基,由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因此选择了一个较为广泛的范围：稀释倍数为103107。,准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。每个稀释度下需要3个选择培养基，1个牛肉膏蛋白胨培养基。还需要8个灭菌试管和1个灭菌移液管 。,将稀释一样倍数的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。,应在火焰旁称取土壤10g。,在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进展,别离不同的微生物采用不同的稀释度,原因：不同微生物在土壤中含量不同,目的：保证获得菌落数在30300之间、适于计数的平板,三样品的稀释,问题：为什么别离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围一样吗？,原因：土壤中各类微生物的数量单位：株/kg是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。,结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进展别离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。,.,取样涂布,实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。,如果得到了2个或2个以上菌落数目在30300的平板，那么说明稀释操作比较成功，并能够进展菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，说明试验不准确，需要重新实验。,.微生物的培养与观察,在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。,选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间缺乏而导致遗漏菌落的数目。,培养不同微生物往往需要不同培养温度。,细菌：3037培养12d,放线菌：2528培养57d,霉菌：2528的温度下培养34d。,微生物的培养与观察,操作提示,一无菌操作,1、取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都需要灭菌。,2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。,3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。,二做好标记,注明培养基种类、培养日期、平板培养样品,的稀释度等。,三规划时间,三、,1.通过对照实验，假设培养物有杂菌污染，菌落数偏高；假设培养物混入其他氮源，那么菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。,2.提示：选择每个平板上长有30300个菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最适宜。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不准确。,1.在以尿素为唯一氮源的培养基中参加酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。,2.测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到,伊红-美蓝,培养基上培养，大肠杆菌,菌落呈现黑色,，通过记算得出水样中大肠杆菌的数量。,CONH22+H2O CO2+2NH3,脲酶,pH升高,指示剂酚红将变红,大肠杆菌呈深紫色,中心有或无金属光泽,大肠杆菌在伊,红美蓝琼脂,(EMB)上典型特征,本课题知识小结:,纤维素：,棉花,是自然界中纤维素含量最高的天然产物；,纤维素是地球上含量最丰富的,多糖类,物质，植物每年产生的纤维素超过70亿吨；分布植物的根、茎、叶中；,1、在草食性动物等的消化道内，也共生有分解纤维素的微生物，其原理也是产生纤维素酶而分解纤维素，而人没有分解纤维素的能力。,2、农作物秸秆：米秸、麦秸、稻草、草、木屑 等富含大量的纤维素，被利用的时机很少、效率低；,纤维素生物燃料：,最有希望替代石油能源,科学家正致力于研究，怎样将农业废弃物、木材及生长更为迅速的草本植物，转化为种类繁多的生物燃料甚至是航空燃油。,课题3 分解纤维素的微生物的分离,一、根底知识,纤维素是一种由,葡萄糖,首尾相连而成的,高分子,化合物，是含量最丰富的,多糖,类物质。,土壤中某些微生物能够产生,纤维素酶,把纤维素分解为葡萄糖，后再利用,。,纤维素酶是一种,复合酶,，一般认为它,至少包括三种组分,，即,C,1,酶(外切酶)、C,X,酶(内切酶)和葡萄糖苷酶,，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。,纤维二糖,C,1,酶、Cx酶,葡萄糖苷酶,葡萄糖,纤维素,一、根底知识,在2支20mL的试管中，分别放入16cm的滤纸条，再分别参加pH为4.8、物质的量浓度为0.1mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲液10mL、11mL。在参加10mL缓冲液的试管中参加1mL纤维素酶7080U/mL。将二支试管固定在50mL的锥形瓶中，在摇床上以140r/min的转速振荡反响1h，观察结果。,1U表示1个酶活力单位，是指在温度为25，其他反响条件，如pH等，均为最适的情况下，在1min内转化1mmol的底物所需的酶量。,底物：酶所作用和催化的化合物。,在一支试管中添加纤维素酶，,另一支试管不添加纤维素酶；,思考1,实验分析：P27的小实验是如何构成对照的？,滤纸崩溃法,2纤维素分解菌的筛选,1、筛选纤维素分解菌的方法_。该方法可以通过_反响直接筛选。,刚果红染色法,颜色,2、其原理是：刚果红可以与纤维素形成_，当纤维素被_分解后，,红色复合物无法形成，出现以_,为中心的_，可以通过,_,来筛选纤维素分解菌。,红色复合物,纤维素酶,纤维素分解菌,透明圈,是否产生透明圈,可根据是否产生,透明圈,来筛选纤维素分解菌,练一练：,1.以下关于纤维素酶的说法，错误的选项是,A. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种,B. 纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖,C. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁,D. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖,2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，以下说法错误的选项是,A. 刚果红能与纤维素形成红色复合物,B. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物,C. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物,D. 假设培养基上产生了透明圈，那么说明已筛选出了纤维素分解菌,(三)、实验设计,土壤取样,选择培养,梯度稀释,将样品涂布到,鉴别培养基,挑选菌落,什么样的环境取样?,培养的目的? 选择培养基的特点?,挑选什么样的菌落?,鉴别培养基的特点?,如何鉴别?,根据,：微生物对生存环境的要求，到相应环境中去找；,目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中别离到所需要的微生物；,刚果红染色法,1、纤维素分解菌选择培养基属于_固体、液体培养基，原因是_,【资料二】选择培养,阅读资料二“选择培养基，答复以下几问题：,液体,没有添加琼脂,2、该培养基对微生物_具有，不具有选择作用。如果具有，其选择机制是,_,具有,以纤维素粉为唯一,碳源，能分解纤维素的微生物可以大量繁殖；,假设设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的变量是将_改为_。,3、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？,葡萄糖,纤维素粉,【资料三】刚果红染色法,方法一：先培养微生物，再参加刚果红进展颜色反响,方法二：在倒平板时就参加刚果红,培养基组成,提供的主要营养物质,CMC-Na 510g,碳源,酵母膏 1g,碳源、氮源、生长因子,KH,2,PO,4,0.25g,无机盐,土豆汁 100mL,碳源、生长因子,琼脂 15g,凝固剂,上述物质溶解后，加蒸馏水定容至1000mL,氢元素、氧元素,鉴别,纤维素分解菌的培养基,(水溶性羧甲基纤维素钠),染色法,优点,缺点,方法一,方法二,颜色反响根本上是纤维素分解菌的作用,操作繁琐，刚果红会使菌落之间发生混杂,操作简便，不存在菌落混杂问题,产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。,思考：这两种方法各有哪些优点与缺乏,挑选产生透明圈的菌落,挑取产生,明显的透明圈的菌落，,一般即为分解纤维素的菌落。,接种到,纤维素分解菌的,选择,培养基上，在30,0,C 37,0,C培养，可获得纯培养。,四、结果分析与评价,对照的培养基在培养过程中没有菌落生长那么说明培养基制作合格。,如果观察到产生透明圈的菌落，那么说明可能获得了分解纤维素的微生物。,分解纤维素的微生物的别离,纤维素酶,种类、作用、催化,刚果红染色,筛选原理,实验设计,土壤取样,选择培养,涂布培养,纯化培养,前置染色法,后置染色法,富含纤维素土壤,增大分解菌含量,染色鉴别,别离出分解菌,课堂总结,专题3,植物组织培养技术,一、课题目标,说明植物组织培养的根本原理，学习植物组织培养的根本技术，进展菊花或其他植物的组织培养。,二、课题重点与难点,课题重点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。,课题难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。,教法：谈话法、多媒体辅助教学,课时安排：2课时,教学时间：3月12日,一、根底知识,课题1：,菊花的组织培养,1细胞的分化,概念：,在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态、构造、生理功能上发生稳定性差异的过程,过程：,1、植物的组织培养的根本过程,特点：,2稳定性：,1持久性：,一般来说，分化了的细胞将一直保持分化后的状态，直到死亡,3普遍性：,原因：,基因在特定的时间和空间条件下的选择性表达的结果,结果：,形成不同的细胞和组织,2细胞的全能性,定义：,已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能,原理：,生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的,全套遗传物质,，都有发育成为完整个体所必需的,全部基因,高度特化的动物细胞，从整个细胞来说，全能性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，这是因为细胞核内含有该物种遗传性所需要的遗传物质,已分化的植物细胞，仍具有全能性,实例,受精卵生殖细胞体细胞,全能性的比较:,3植物组织培养,细胞离体,必要条件：,一定的营养物质、激素和其他外界条件,原理:,细胞的全能性,外植体：离体的器官、组织、细胞,相关概念:,脱分化：,再分化：,细胞排列疏松而无规那么,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞,由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。也叫去分化,脱分化产生的愈伤组织继续进展培养，又可以重新分化成根或芽等器官的过程,愈伤组织:,人参的愈伤组织,菠萝的愈伤组织,2、影响植物组织培养的因素,1植物材料的选择,烟草和胡萝卜的组织培养较为容易,枸杞愈伤组织的芽诱导比较难,B、同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果,菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝,A、植物材料的选择直接关系到实验的成败,2不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对特殊，需配置适宜的培养基,MS培养基主要成分包括：,A、大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等,B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、,Co等,C、有机物、植物激素,常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素,生长素类：,2，4二氯苯氧乙酸2，4D、吲哚乙酸IAA、萘乙酸NAA、吲哚丁酸IBA,细胞分裂素类：,冲动素KT、6苄基嘌呤 6BA、玉米素ZT,赤霉素类：,赤霉酸GA3,3植物激素的影响,生长素和细胞分裂素作用,植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势,使用顺序,实验结果,先使用生长素，后使用细胞分裂素,有利于细胞分裂，但不利分化,先使用细胞分裂素后使用生长素,细胞既分裂也分化,同时使用,分化频率高,生长素,细胞分裂素：,有利于根的分化,生长素,细胞分裂素：,生长素,细胞分裂素生长素,再分化,植物细胞培养,不需要光,需要光,1、培育无病毒植株,2、 培养紫草愈伤组织,提取紫草素治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化装品的原料,4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法,4、,植物组织培养的应用：,3、诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状构造，包裹上人造种皮，制成人工种子，可以解决有些作物品种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题,二、实验操作,一制备MS固体培养基,MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4,。,C保存配制好的培养基母液来制备,1、配置各种母液,无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存,激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液,用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量,2、配置培养基,分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml, 配制培养液, 调PH,培养基的分装,由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素,3、灭菌,分装好的培养基连同其他器械一起进展高压蒸汽灭菌,1、选材：,菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝,二外植体消毒,2、消毒,流水冲洗,菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右, 酒精处理,用无菌吸水纸吸干外植体外表的水分，放入体积分数为70的酒精中摇动23次，持续67s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗,消毒液处理,取出后用无菌吸水纸吸干外植体外表的水分，放入质量分数为0.1的氯化汞溶液中12min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液,三接种,污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70的酒精喷雾使空气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟,1、接种室消毒,2、无菌操作要求,操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。,3、材料的切取和接种,4、接种本卷须知,每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为70的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种,外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜34块，菊的茎或叶68块，也不要太少，以充分利用培养基中的营养成分和光照条件,插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分,思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？,答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。,四培养,接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养。培养期间应定期消毒。培养温度1822，每日用日光灯光照12h,五移栽,移栽生根的菊花试管苗之前，应先翻开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日,1、翻开封口膜,2、清洗转移,用流水清洗根部的培养基，,将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下,生活一段时间,六栽培,3、移栽,珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培,幼苗长壮后，移栽到土壤中,幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花,植物的花药培养在育种上有什么意义？,花粉粒（1N）,单倍体植株（1N）,二倍体纯合子植株（2N）,缩短了育种周期，为新品种的培育开辟了新途径。,花的构造,花丝,花药：囊状构造，内有很多花粉,花粉是由花粉母细胞即小孢子母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞。,花粉的发育要经历：四分体时期、单核期、双核期等阶段。,一被子植物的花粉发育,雄蕊,基础知识,一被子植物的花粉发育,1花粉母细胞2n,4个小孢子(小孢子,四分体)n,减分,有分,1个花粉管细胞核n,1个生殖细胞核n,有分,2个精子,单核居中期n,单核靠边期n,花粉发育过程：,注意：,