各类成分分析-生物碱课件

Reading Fun,Sub topics go here,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,生物碱,*,皂苷,*,黄酮,*,蒽醌,挥发油,第五章 各类成分分析,一、概述,二、理化性质,*,三、供试品溶液制备（提取、净化）,*,四、鉴别：理化鉴别、,TLC,*,五、含量测定：总成分、单体成分,第五章 各类成分分析,春花秋月何时了，,往事知多少！,小楼昨夜又东风，,故国不堪回首月明中。,雕栏玉砌应犹在，,只是朱颜改。,问君能有几多愁？,恰似一江春水向东流！,虞 美 人,李煜,马钱子,腰直不起，头足相就，状如牵机而死,强直性惊厥,1988,年奥运会 ，,卡尔,刘易斯 ，,麻黄碱,1992,年奥运会，,巫丹，,士的宁,1992,年奥运会 ，,玛丽,乔,费尔南德斯,，,伪麻黄碱,1994,年世界杯，,马拉多纳，,麻黄碱,2000,年奥运会 ，,拉杜坎，,麻黄碱,生物碱与兴奋剂,生物碱与毒品,伪麻黄碱,麻黄碱,冰毒,一、概 述,黄连：,小檗碱、巴马汀、药根碱、表小檗碱,苦参,：,苦参碱、氧化苦化碱,益母草、,延胡索、黄柏、贝母,麻黄：,麻黄碱、伪麻黄碱,马钱子：,马钱子碱、士的宁,第一节 生物碱,麻黄碱,小檗碱,1,、结构：,C,、,H,、,O,、,N,，,碱,性,二、理化性质,2,、溶解性,亲脂性：大多数，氯仿中溶解度最大,亲水性：少，季铵型,二、理化性质,一般都易溶于酸水,3,、沉淀反应：,1,）碘化铋钾,（,BiI,3,KI,）,2,）雷氏盐,NH,4,Cr(NH,3,),2,(SCN),4,3,）苦味酸,干扰：,蛋白质、多肽、鞣质,沉淀特点：,酸性水溶液,（苦味酸在中性）中,沉淀常易溶于,有机溶剂,沉淀,有颜色,二、理化性质,4,、光谱特征,小檗碱：,225,、,270,、,331nm,366nm,下 有荧光,麻黄碱：,210,nm,二、理化性质,1,、有机溶剂提取法：,碱化,+ CHCl,3,士的宁的含量测定：,P,127,碱化,+ CHCl,3,提取酸水,提碱化,CHCl,3,萃取,三、供试品溶液的制备,2,、氧化铝柱色谱法：,益母草（药典,P,203,）,水苏碱的薄层鉴别：,取本品,3g ,乙醇回流提取 上活性炭,-,氧化铝柱,乙醇洗脱收集,三、供试品溶液的制备,3,、离子交换树脂法：,益母草流浸膏（药典,P,280,）,水苏碱的含量测定：,取本品,5g ,盐酸调,pH12 ,加置强酸型阳离子树脂柱 水洗脱（弃去） 氨水洗脱 收集,三、供试品溶液的制备,（一）理化鉴别,马钱子散：马钱子、地龙,取马钱子散加,浓氨,试液三氯甲烷浸泡滤过滤液蒸干加,稀盐酸,加碘化铋钾试液,黄棕色沉淀,四、定性鉴别,（二）薄层鉴别,1,、展开系统：,乙二胺、氨水,P122,正丁醇,-,盐酸,-,水（,4:1:0.5,）生物碱盐,四、定性鉴别,2,、对薄层板改性：,12%NaOH,溶液,例：黄连中生物碱,苯,-,EtOAc-MeOH,-,异丙醇,-,水,（,6:3:1.5:1.5:0.3,）,置氨水饱和的展开槽,2,）显色剂：,例：苦参：氧化苦参碱（药典,P141,）,3,、检视：,1,）,365nm,下看荧光,例：黄连：小檗碱,改良碘化铋钾,稀碘化铋钾,+,亚硝酸钠乙醇液,四、定性鉴别,（一）总生物碱,1,、酸碱滴定法：,返滴法,2,、分光光度法,直接测定法：,小檗碱,比色法：,苦味酸、雷氏盐,P,125,排除干扰：,化学分离、柱色谱,五、含量测定,例：雷氏盐比色法,B + NH,4,Cr(NH,3,),2,(SCN),4, = BHCr(NH,3,),2,(SCN),4,1,、在酸性介质中定量反应,2,、反应物有颜色，其吸光度取决于硫氰酸铬铵部分,3,、反应物不溶于水，易溶于丙酮,例：雷氏盐比色法,P71,益母草口服液中生物碱的含量测定,测定方法：,1,、沉淀过滤，溶于丙酮，直接测定,A,2,、滤除沉淀后，测定残存的过量雷氏盐，间接计算,又如：产妇康颗粒,1,、,HPLC,：,离子抑制色谱：二乙胺、三乙胺,例：浙贝母 药典,P,205,离子对色谱：,SDS,、辛烷基磺酸钠,常加入缓冲盐,例：,HPLC,测小檗碱,（二）单体成分,五、含量测定,乙腈,-,水（,50,：,50,）,每,100ml,含,0.34g KH,2,PO,4,和,0.17g SDS,牛黄千金散中盐酸小檗碱,乙腈,-,水,-,二乙胺（,70,：,30,：,0.03,）,浙贝母中贝母甲素和贝母乙素,小儿清热止咳口服液中盐酸麻黄碱,乙腈,-0.1%,磷酸溶液（含,0.1%,三乙胺）（,3:97,）,流动相缓冲盐的,pH,值对药物的保留行为有影响，甚至会显著改变某些碱性药物的保留行为如图所示。,流动相,pH,值对保留时间的影响,色谱柱：,Nucleodur,C,18,15cm,4mm,流动相：乙腈,-10mM,碳酸氢铵,50,：,50,A,：,pH=3.0,B,：,pH=10.0,检测波长：,240nm,pH=3.0,pH=10.0,流动相,pH,值对保留时间的影响,色谱柱：,Nucleodur,C,18,15cm,4mm,流动相：梯度洗脱程序,A,乙腈,-20mM,磷酸氢二铵, pH=2.5,B,乙腈,-20mM,磷酸氢二铵, pH=10.0,检测波长：,254nm,pH=2.5,pH=10.0,流动相组成对药物保留行为的影响,组成：生物碱,1,、,2,、,3,、,4,检测波长：,280nm,色谱柱：,Kromasil,15cm,4.6mm,流动相：,A,PiCB6,流动相,-PICB7,流动相,1,：,1,B PiCB6,流动相,-PICB7,流动相,4,：,6,PICB6,流动相：己烷磺酸钠,1.88g,甲醇,260ml,置,1000ml,量瓶中，用水稀释至刻度,PICB7,流动相：庚烷磺酸钠,0.28g,甲醇,260ml,置,1000ml,量瓶中，用水稀释至刻度,流动相组成对药物保留行为的影响,色谱柱：,Kromasil,15cm,4.6mm,检测波长：,280nm,PICB6,：,己烷磺酸钠,1.88g,甲醇,260ml,置,1000ml,量瓶中，用,1%,的醋酸稀释至刻度。,PICB7,：,庚烷磺酸钠,0.28g,甲醇,260ml,置,1000ml,量瓶中，用,1%,的醋酸稀释至刻度。,C PiCB6,流动相,-PICB7,流动相,1,：,1,D PiCB6,流动相,-PICB7,流动相,9,：,1,封尾技术：消除或屏蔽残留,Si,-OH,技术,1,：小分子键合,技术,2,：,较大空间位阻的异丙基或异丁基（,R,基团）,2,、,TLCS,：,五、含量测定,益母草：,药典,P204,黄连：,药典,P213,荧光扫描,激发波长,=366nm,显色，,=510nm,测吸光度,士的宁：,药典,P319,荧光淬灭扫描,s=254nm,黄 连,3,、高效毛细管电泳法（,HPCE,）,原理：电场下溶液中不同荷电物质迁移速度不同,五、含量测定,原因：管内壁硅羟基解离释放,H,+,使溶液带正电,五、含量测定,迁移速度：,阳离子,中性分子,阴离子,五、含量测定,电泳,：,带电离子在电场作用下的定向运动,电渗：,溶液在电场作用下整体向负极移动,