艾滋病梅毒和乙肝实验室检测讲解课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,中国,iPMTCT,培训,第五章,幻灯片,*,梅毒的实验室检测,综合产前检查服务,+,检测,孕产妇参加产前检查服务,检测前信息,HBV,检测,梅毒检测,HIV,检测,全血细胞计数和其它检测,取血样,梅毒的实验室检测,梅毒筛查检测,筛查检测,用于诊断产检、临产及分娩的孕产妇是否感染梅毒：梅毒血清学检测,筛查检测应,具有较高的灵敏度和特异度,操作简单、容易获得、便宜,尽可能在“当日”获得结果,4,筛查检测何时使用何种检测？,梅毒,检测方法,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,（,RPR,或,TRUST,检测,）,梅毒螺旋体抗原血清学试验,（,TPPA,、,ELISA,或梅毒快速检测）,检测时间,第一次产检（孕早期）,或下一次产检时,如有必要，孕晚期再次检测,此前无检测结果，则在分娩时检测,梅毒血清学试验基本实验室设备,检方法,检测样本类型,必要设备,血清,血浆,全血,RPR/TRUST,水平旋转仪,TPPA,震荡仪,ELISA,酶标仪、洗板机,POCT,检测,无需特殊设备,血清学试验检测梅毒感染相关抗体,非梅毒螺旋体抗原血清学试验（检测非特异性抗体）,RPR,（,快速血浆反应素环状卡片试验,）,TRUST,（,甲苯胺红不加热血清试验,）,VDRL,（性病研究实验室试验）,梅毒螺旋体抗原血清学试验（检测特异性梅毒螺旋体抗体）,TPPA,（,梅毒螺旋体颗粒凝集试验,）,ELISA,（酶联免疫吸附试验）,POC,（快速检测,、一站式检测,）,梅毒诊断检测,梅毒,早期,诊断的依据之一是,病原学检测，即,在组织或分泌物中检测到苍白螺旋体：,暗视野显微镜,镀银染色镜检,梅毒诊断检测,8,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,梅毒螺旋体,感染,可产生非特异性抗体（非梅毒螺旋体抗体）,非梅毒螺旋体抗体,又称之为反应素，是抗心磷脂等抗原的抗体,随菌体和宿主细胞的类脂质抗原量升高,除梅毒外，其他医学情况会造成非梅毒螺旋体抗原血清学试验假阳性结果，包括结核、疟疾、妊娠和风湿关节炎、狼疮及硬皮病等自体免疫学疾病,非梅毒螺旋体抗原血清学试验的特点,非梅毒螺旋体抗原血清学试验：,快速、简便、便宜,敏感性和特异性较高,硬下疳后,1-2,周变为阳性,可用于,筛查样本,评估对治疗的反应,鉴别复燃还是再次感染,10,确保非梅毒螺旋体抗原血清学试验,质量的关键点,按照标准操作程序（,SOPs,）进行操作,推荐使用评价特性较好的试剂,*,按照统一的标准报告结果,开展实验室质控（,QC,）和参加室间能力验证（,PT,）,*,由中国疾病预防控制中心性病中心国家参比实验室提供,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,抗体滴度通常与疾病活动度有关。,治疗后（可能几个月）非梅毒螺旋体抗原血清学试验通常转变为,不反应,如果用同一种实验，相同试验滴度,4,倍变化（如从,1:16,下降到,1:4,或从,1:8,上升到,1:32,）为临床显著变化,有些病人，,抗体滴度,可始终,处于较低水平,，有时可持续终生（血清固定）,注意：,病人血清学监测应在同一个实验室使用同一种检测方法（,RPR,、,TRUST,）进行连续多次检测；,RPR,和,TRUST,方法均有效，但检测的滴度结果不能直接进行比较,12,治疗后非梅毒螺旋体抗原血清学试验,抗体滴度变化的临床意义,一期梅毒和二期梅毒：,成功治疗，抗体滴度应,3,个月后下降,2,倍,6,个月后下降,4,倍,一期梅毒：,1,年后抗体滴度转阴,二期梅毒：,2,年后抗体滴度转阴,晚期梅毒：,治疗后抗体滴度缓慢下降,50%,的病人,2,年后抗体滴度仍为阳性,梅毒螺旋体抗原血清学试验,梅毒螺旋体抗原血清学试验,检测梅毒螺旋体抗原特异性抗体,可用于,确认非梅毒螺旋体抗原血清学试验的阳性,结果,，排除其假阳性,阳性结果可持续存在，即使治疗后仍可为阳性。,*,梅毒螺旋体抗原血清学试验与疾病的活动度无关，不能用于鉴别现症感染还是既往感染，也不能用于,判断疗效,*,一期梅毒治疗病人中，,15%-25%,可在,2-3,年后转为血清学阴性,妊娠期梅毒检测,所有孕产妇应进行梅毒筛查检测：,孕期尽早（如果可能，在孕早期时）以及,如果,在分娩前,/,临产,时,没有筛查检测结果,，在分娩时检测,筛查,检测可应用以下任何一类方法：,非梅毒螺旋体抗原血清学试验（滴度）或,梅毒螺旋体抗原血清学试验,所有筛查检测结果阳性的孕产妇都应用另外一类检测方法进行复检确认是否为现症梅毒,所有产妇及所生婴儿出院前，产妇梅毒检测结果都应记录在病历中，以确保需要时给予治疗,孕产妇梅毒检测流程,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,梅毒螺旋体抗原血清学试验,孕产妇,治疗后，随访监测非梅毒螺旋体抗原血清学试验,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,梅毒螺旋体抗原血清学试验,每,3,个月进行非梅毒螺旋体抗原血清学试验,如果需要进行治疗,报告：,非梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性,报告：,两种检测均阳性,治疗病人,报告：,梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性,报告：,非梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性,梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性,报告：,梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性,非梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性,阳性反应,阴性反应,阴性反应,阳性反应,阳性反应,或,阴性反应,阳性反应,阴性反应,阳性反应,16,HIV,感染病人的梅毒血清学试验,一些,HIV,感染病人，其梅毒血清学试验结果不典型，包括,滴度超常高或超常低,滴度不断变动,如果临床表现提示早期梅毒，而血清学试验结果与此不一致，考虑,病灶活检,或,暗视野显微镜检查,注意：,对于大多数,HIV,感染病人而言，梅毒血清学试验是诊断梅毒感染、随访观察疗效准确、可靠的检测方法,梅毒血清学检测结果的解释,非梅毒螺旋体试验,梅毒螺旋体试验,临床参考意义,+,-,RPR,假阳性,考虑其他医学状况,*,+,+,现症梅毒,-,+,既往感染,或,极早期梅毒,-,-,排除梅毒感染,由于免疫缺陷，也可发生于艾滋病晚期,*,包括结核、疟疾、风湿性关节炎或妊娠。,暴露婴儿的梅毒检测,19,梅毒暴露婴儿先天梅毒检测,母体非梅毒螺旋体和梅毒螺旋体,IgG,抗体可通过胎盘，所以应谨慎地对婴儿梅毒血清学试验结果进行解释,婴儿需要接受预防性治疗还是规范的抗梅毒治疗应根据：,母亲确诊梅毒感染,母亲治疗情况,婴儿梅毒感染的临床表现、实验室或放射线检查结果,母亲及婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验滴度水平的比较,（尽可能在同一个实验室使用相同的试验方法）,20,先天梅毒的诊断,先天梅毒的诊断标准：,梅毒暴露婴儿具有以下条件之一：,任何先天梅毒临床表现,暗视野显微镜检梅毒螺旋体阳性（,+,）,梅毒螺旋体,IgM,抗体阳性,*,RPR/TRUST,检测阳性，滴度比母亲分娩前最近一次,滴度高,4,倍及以上,RPR/TRUST,监测随访中，任何一次滴度不下降或反,而上升,满,18,月龄后，,TPPA,检测阳性,* IgM,抗体反映近期感染，可帮助鉴别婴儿先天梅毒，但我国尚不能广泛开展,21,梅毒暴露婴儿的评估,梅毒暴露婴儿：,婴儿,RPR,检测,婴儿,RPR,检测不能使用脐带血，因其易被母体,血液 污染，从而出现假阳性结果,检查先天梅毒临床表现：,非免疫性水肿、黄疸、肝脾大、鼻炎、皮疹、,末端肢体假性麻痹,对可疑病灶或体液进行暗视野显微镜检查,22,先天梅毒检测流程,婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验定量检测,梅毒暴露婴儿,母亲、婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验定量检测,（,应同时进行梅毒螺旋体抗原血清学试验，用于随访诊断）,组织或分泌物暗视野显微镜检，有条件进行,IgM,抗体检测,报告母亲、婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测滴度水平,报告婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测滴度水平,报告暗视野显微镜检或,IgM,抗体检测结果,阳性,阴性,或,没有梅毒感染的症状,有梅毒感染的症状,梅毒,早期梅毒,诊断可根据在组织,或,分泌物样本中通过显微检测到苍白螺旋体而诊断,应用梅毒血清学试验进行梅毒筛查,非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测梅毒感染过程中产生的非特异抗体。滴度通常与疾病的活动度有关，因此可用于监测对治疗的反应,梅毒螺旋体抗原血清学试验检测对抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体，可用于确认临床诊断或非梅毒螺旋体抗原血清学试验的阳性结果，可反映任何阶段的梅毒暴露,先天梅毒的诊断复杂，应根据：,母亲梅毒感染状态,母亲梅毒治疗情况,婴儿梅毒感染的临床表现、实验室或,X,线检查结果,母亲、婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验滴度水平的比较,随访,HIV,和,HBV,的实验室检测,HIV,和,HBV,筛查检测,筛查检测,用于诊断产检、临产及分娩的孕产妇是否感染,HIV,和,HBV,HIV,抗体检测,乙肝表面抗原（,HBsAg,）检测,筛查检测应,具有较高的灵敏度和特异度,操作简单、容易获得、便宜,尽可能在“当日”获得结果,何时使用何种检测？,HIV,HBV,检测方法,HIV,快速检测,和,/,或,ELISA,HBsAg,检测,如果有条件，其他乙肝,标记物检测,检测时间,第一次产检（孕早期）,或下一次产检时,此前未检测，分娩时应检测,第一次产检（孕早期）,或下一次产检时,此前未检测，分娩时应检测,HIV,试验和检测,HIV,检测：抗体检测,一个人感染了,HIV,病毒后，体内将产生特异性抗体,对抗,HIV,病毒,*,。,HIV,抗体通常在感染后,4 6,周出现，但也,有时也会,在,感染后,3,个月才出现。,从,感染,HIV,病毒到,出现特异的,HIV,抗体,的一段时期,称为“窗口期”。,标准的,HIV,诊断检测是识别,HIV,抗体,* *,注意：,*,与其他大多数疾病不同，,HIV,抗体没有保护性作用。,HIV,抗体检测类型,快速检测,ELISA,免疫印迹（,WB,）,准确性,灵敏度,特异度,非常高,几乎,100%,99%,非常高,几乎,100%,99%,因为特异度极高，用于检测结果不确定样本的确认试验,成本,+,+,+,结果报告时间,1,小时,3,天,10,天,需要专门实验室设备,否,是,是,对检验人员技术要求高,否,是,是,HIV,检测：病毒核酸检测,这些检测,检测,HIV,感染者血液或血浆中的病毒,必须由经过专门培训的实验室人员操作,实验室需有资质，并配备专门设备,昂贵，不是针对所有人进行的常规检测方法,PCR,（多聚酶连反应法）检测,HIV DNA,定性检测血液中是否含有病毒，用于,诊断,18,月龄内婴儿是否感染,HIV,HIV RNA,定量检测,病毒载量,，即血,浆,中的病毒数量，,用于,监测对抗病毒治疗的反应,。,HIV,筛查检测结果的含义,HIV,筛查检测结果,“阴性,(-),”,：,受检者没有,感染,HIV,或者,受检者已经感染了,HIV,，但处于窗口期：,3,个月后,再次进行检测,HIV,筛查检测结果,“阳性,(+),”,：,病人,可能,已经感染,HIV,但应再次重复检测,HIV,确认试验结果的含义,如果筛查检测结果,阳性,，两次重复检测中,1,次,或,2,次检测结果为,阳性,，需要进行确认试验,免疫印迹法（,WB,）确认试验结果：,阳性,病人,确认,感染,HIV,阴性,受检者没有,感染,HIV,不确定,结果为,“不确定”,受检者,必须在,4,周后再次采血，重复前述所有步骤进行检测,中国预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播,HIV,检测流程,在产前检查服务中开展整合的检测咨询所采用的,HIV,检测流程,产时,HIV,抗体检测流程,中国预防艾滋病、梅毒和乙肝母婴传播,HIV,检测流程,儿童,HIV,检测,HIV,暴露婴儿和儿童的,HIV,抗体检测,不是所有,HIV,感染母亲所生儿童都会感染,HIV,，但是如果对,12-18,个月以内的婴儿进行,HIV,抗体检测,，所有,HIV,感染母亲所生婴儿都将是,HIV,检测结果阳性。,即使婴儿并没有感染,HIV,由于母体自身抗体可通过胎盘进入胎儿体内,母体传入的抗体可在婴儿体内持续,18,个月，所以,12-18,月龄以内的婴儿不能应用抗体检测方法进行诊断。,37,婴儿感染早期诊断（,EID,）,HIV,病毒检测（,DNA-PCR,）,HIV,病毒检测（,DNA-PCR,）,检测细胞内的,HIV,病毒，,能够检测低至,1 10,拷贝前病毒,DNA,，以及,可在,HIV,暴露婴儿出生后,6,周内诊断,HIV,感染,用于,HIV,暴露婴儿,HIV,感染早期诊断（,EID,）,应用,DNA-PCR,方法进行,婴儿感染早期诊断（,EID,）（,1,）,如果可以开展,HIV DNA-PCR,检测，应用干血斑（,DBS,）在婴儿,6,周龄,时进行,PCR,检测。,如果,PCR,检测结果,阳性,尽快再次采血再次进行,DNA-PCR,检测,如果第二次,PCR,检测结果,阳性,，婴儿确定感染,HIV,如果,PCR,检测结果,阴性,婴儿出生后,3,个月再次进行,PCR,检测,应用,DNA-PCR,方法进行,婴儿感染早期诊断（,EID,）（,2,）,出生后,3,个月,再次进行,HIV DNA-PCR,检测,如果,PCR,检测结果,阳性,尽快再次采血再次进行,DNA-PCR,检测,如果第二次,PCR,检测结果,阳性,，婴儿确定感染,HIV,如果,PCR,检测结果,阴性,婴儿视为未感染,HIV,考虑在婴儿满,12,月龄时进行,HIV,抗体检测（如有必要，在,18,月龄时再次进行检测）,检测结果阴性的,婴儿,接受,母乳喂养,，,必须在停止母乳喂养后,6,周再次进行,PCR,检测，以确保婴儿没有在母乳喂养期间感染,HIV,。,婴儿,HIV,感染早期诊断流程,HIV,暴露婴儿,/,儿童的,HIV,抗体检测,所有,HIV,感染母亲所生儿童，在出生后,6,周或,3,个月未接受早期感染检测者，应进行,HIV,抗体检测。检测时间：,满,12,月龄 和,满,18,月龄（必要时，见,HIV,抗体检测流程）,出生后,3,个月（接受早期感染检测者）检测结果为阴性的儿童也应接受,HIV,抗体检测,满,18,月龄,HIV,抗体检测阳性，可确认儿童,HIV,感染。,HIV,暴露儿童,HIV,抗体检测流程,HIV,感染的实验室监测,HIV,感染的实验室监测,实验室监测主要用于：,决定开始抗病毒治疗还是预防性应用抗病毒药物,是否有抗病毒治疗指征？,效果监测,抗病毒治疗有效吗？,毒性监测,抗病毒药物是否引起了其他问题？,45,CD4+ T,淋巴细胞是,HIV,病毒攻击的靶细胞,CD4+ T,淋巴细胞检测用于：,决定开始抗病毒治疗还是预防性应用抗病毒药物,为判断抗病毒治疗成功或失败提供定量依据,对调整抗病毒治疗方案提供指导,孕期每,3,个月及产后,4 6,周应进行,CD4+ T,淋巴细胞检测,急性感染时可适当推迟检测，,(,因为在急性感染期，,CD4+ T,淋巴,细胞通常会下降）,CD4+ T,淋巴细胞检测,病毒载量测量血浆中的病毒数量,病毒载量检测可用于：,是抗病毒治疗失败早期、最可靠的标记物,监测对抗病毒治疗的反应,诊断,HIV,感染后和孕晚期各进行一次病毒载量检测,病毒载量（,RNA-PCR,）检测,检测,检测,对象,原因,临床指导,CD4+ T,淋巴细胞计数,所有,HIV,感染孕产妇,基线,评估是否需要抗病毒治疗,抗病毒治疗：,CD4,350,个细胞,/mm3,预防应用抗病毒药物：,CD4, 350,个细胞,/mm3,全血细胞计数（,CBC,）,所有,HIV,感染孕产妇,AZT(,叠氮胸苷）可引起贫血或白细胞计数降低,如果,Hb,1000,万,IU/ml,），婴,儿有免疫保护,如果,HBsAg,阴性和,抗,HBs,抗体, 1000,万,IU/ml,， 婴儿应再次接受,3,剂,乙肝疫苗接种,53,要点,-,HIV,使用快速筛查试验诊断,HIV,感染。筛查检测结果阳性,进行确认试验以保证结果的准确性。,HIV,感染抗病毒治疗应根据：,CD,4,+ T,淋巴细胞计数检测结果，反映,HIV,对免疫系统,的影响,HIV,病毒载量检测结果，反映血液中,HIV,病毒的数量,如果有条件，,应,用,PCR,方法,检测,HIV-DNA,诊断,婴,儿,是否,HIV,感染,儿童满,12-18,月龄，,HIV,抗体检测方可确认儿童是否感染,54,要点,-,HBV,通过筛查,HBsAg,诊断,HBV,感染,如有条件，筛查,HBsAg,结果阳性，可进一步检测,其他,HBV,标记物,HBsAg,阳性母亲所生婴儿，出生时接受乙肝疫苗,接种，应在出生后,12,个月接受,HBsAg,和抗,HBs,抗体,检测,谢 谢！,56,