LightCycler480系统特点及应用方向

*,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,LightCycler,480,实时荧光定量,PCR,系统及其应用,精准源于设计，极速出自创新,罗氏应用科学部,www.roche-applied-,实时定量,PCR,仪发展简史,198,5,Kary,Mullis,发明了,PCR,技术,1991,Hoffmann-La Roche,公司获得全球,PCR,专利权,1993,罗氏分子系统公司,Russell Higuchi,发明实时定量,PCR,仪,1993,Kary,Mullis,因发明,PCR,技术而获得诺贝尔化学奖,199,5,罗氏诊断公司推出后来成为,PCR,诊断行业金标准的,COBAS,Amplicor,分,析仪,1999,罗氏诊断,公司应用科学部推出,LightCycler,全自动实时定量,PCR,系统,2005,LightCycler,全自动实时定量,PCR,系统全球销量突破,5000,台，成为全球,销量最大的单型号实时定量,PCR,系统,2005,LightCycler,480,实时定量,PCR,仪器上市,2007,目前至今，罗氏诊断公司拥有,PCR,相关专利上千项，占全球,PCR,专利的,90%,以上。,LightCycler,1.0Instrument,32,3,20,Sample number,Detection channels,Sample volume l,LightCycler,1.5,Instrument,32,3,20,LightCycler,480 Instruments (I, II),96 / 384,5 / 6,10 - 100 / 5 - 20,1998,2003,2005 / 2008,2004,LightCycler,2.0 Instruments,32,6,20 / 100,Breakthrough to higher Throughput,LightCycler,系统发展回顾,A Decade of Real-Time,PCR,Speed and Performance,仪,器,试,剂盒,预,制探针,可,更换温控模块,多,孔板,模,块化软件,LightCycler,480,荧光定量,PCR,系统：,系,统构成,LightCycler,480,荧光定量,PCR,系统,独有的,Therma-Base,TM,技术,提升导热效率，提高,孔间温度均一性,银质散热块,加快降温速度,加长光路系统,改进光学检测的边缘效应,快速，高效，均一，无需内参,创新的技术改良以获得业内最好的性能,微孔板模块（银制）,Peltier,半导体加热单位,冷却装置（银制）,热盖,温度高度均一性，孔间温度的精确度,0.1,快速冷却和加热速度,(,H,eating:,(4.8) ,C/s,- Cooling:,(2.5)C/s,),整个板的精确,PCR,结果,96孔模,式, 1 hour,384孔,模式, 40 min,Therma-Base,TM,温控系统构成,多,孔板座,Therma,-Base,层,散,热鳍,封闭的真空夹层，内壁为灯芯式结构，,存贮工作液,通,过蒸发和凝结过程快速传热, 使,得,PCR,循环快速而精确,!,Peltier元,件,LightCycler,480,荧光定量,PCR,仪,散,热元件：,Therma,-Base,LightCycler,480,普通实时定量,PCR,仪,热均一性,不同仪器比较,LightCycler,480,荧光定量,PCR,仪温控系统,无,Therma,-Base,有,Therma,-Base,mdr1,-e26*,cyp2C9,-e3*,cyp2C9,-e7*,热均一性对实验结果的影响,温控的均一性保证了各个反应样品扩增的均一性，极大降低了检测误差率！,快速循环模式,更快地升降温，,提高反应速度，,缩短反应进行的时间,单位时间内检测的工作量增大，实现更加快速的结果检测！,快速循环模式,更快地升降温，缩短了可能的非特异性结合，提高,PCR,的特异性,Amplification of a 536,bp,-,globin,fragment,from genomic DNA,Time (hr),Sample Temperature (C),Gel,Analysis,Time for 30,Cycles (hr),Temperature Profiles,536,bp,利于,PCR,体系的优化！,典型的,96,孔板式的顶部光路系统,CCD,相机,光源,由于光程差,激发光从顶部发出到达每孔的强度不一样，中心强度高于边缘，需要加入内参照来校正,光密度不一样,光学系统,顶部照射产生的边缘效应,滤,镜轮,CCD,相,机,多,孔板,物,镜,利用优化的光学检测元件,（,液态光导元件，光通路元件,滤光片和,冷,CCD,光通路元件）将激发光源通过液态光导元件后变成均一的适合微孔板形状的光线,均一的激发和检测，无光程差,无需内参照,荧光校正（,ROX,）,采用折叠光路增加光程，降低激发高度,LightCycler,480,光路系统,氙,灯,CCD相,机,5,个激发通道,6,个检测通道,优化光学组件排列设计,均,一的激发及检测过程,LightCycler,480,一大特色就是：,从来无需内参染料,数,据生成,(热,循环模块,),数,据检测,(光,学系统,),数,据分析,(软,件系统,),每一个步骤都足够准确,！,内参染料,UPL,probes,10,10, 10,0,copies,LightCycler,480,与临床检测,定量：动态范围,无论是强阳性样品还是弱阳性样品均能轻松同时检测！,LightCycler,480,与基因表达调控,微量样品的区分,精确区分,1000,拷贝与,2000,拷贝,置信度达到,99.8%,是同类仪器的,5,倍以上,（其他,5000,拷贝和,10000,拷贝）,高分辨率有助于对于样品的精细分析！,LightCycler,480,与基因表达调控,微量样品的定量检测性能,微量样品基因表达调控分析,干细胞研究、激光显微切割,以,micro RNA,的,qPCR,检测性能为例：,在,LightCycler,480,上检测,1,、,5,、,10,、,50,个细胞的,microRNA,表达差异，实验结果与预期结果很好地吻合,即使是微量样品的检测分析也是轻松自如！,96 Samples,R/R,: wild type,CGG/CGG,R/W,: wt/,mut2,(,CGG)/(,T,GG,),R/Q,: wt/,mut1,(,CGG)/(C,A,G,),Q/Q,: mutant 1,(,C,A,G)/(C,A,G,),W/W,: mutant 2,(,T,GG)/(,T,GG,),LightCycler,480 性,能,两,个邻近,SNP,的,区分,可互换的热循环模块,自己动手,DIY,，快速方便,随机附送装载箱，便于更换模块,无需厂家工程师在场,无需重新校准,更换完毕后仪器自动检测并确认模块型号,LightCycler,480,荧光定量,PCR,仪,96,孔,模块与,384,孔,模块互换,结合,MagNA,Pure 2.0,全自动核酸提取系统，实现更短的实验转换时间,优化的实验和数据处理流程,2,小时内完成从核酸纯化到,PCR,鉴定的所有工作，而传统流程需要,6,小时甚至一个工作日,LightCycler,480,荧光定量,PCR,系统,和全自动核酸提取系统联用,LightCycler,480,荧光定量,PCR,系统,结合自动机械臂实现,自动装板,E.g., Twister II Plate Handler (Caliper Life Science),可配机械臂，自动化分液装置,可配备读码器,可配备,LIMS,可配备全自动的,PCR,workflow,系统,试剂选择范围广,LightCycler,480,荧光定量,PCR,仪：,与自动化流程整合,LightCycler,480,荧光定量,PCR,系统,全,能,可,更换热循环模块：,96 384,可,采用多种样品数及体积：,96,（,10-100,l,）；,384,（,5-20 l,）,用,不同光学滤镜组合可检测多种荧光染料：,6,个检测通道,可,选多种检测模式：,适用目前所有的检测模式,方,便强大的软件工具,模,块化软件,高,速,快,速热循环：,H,eating:,(4.8) ,C/s,- Cooling:,(2.5)C/s,高,性能试剂,定,制耗材,LightCycler,480,荧光定量,PCR,系统,准确,数据生成,:,全新的均一温控循环系统,数据捕获,:,优化的均一检测光学系统,数据分析,:,智能、可靠的算法,与仪器完美配合的耗材,自,动化,预,装软硬件随时整合自动化设备,LIMS/,条,码模块,带,条码的多孔板,We Innovate Healthcare,