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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,DNA,粗提取与鉴定,学习目标,知识目标,1,、通过尝试对植物或动物组织中的,DNA,进行粗提取，了解,DNA,的物理化学性质。,2,、理解,DNA,粗提取与鉴定的原理。,能力目标,掌握,DNA,粗提取及鉴定方法，能利用,DNA,的性质进行实验设计和操作。,态度观念目标,通过对,DNA,的粗提取的实验过程的设计及操作，锻炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。,1,、鸡血细胞做实验材料，一是因为鸡血细胞核的,DNA,含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破。,2,、,DNA,在不同浓度的,NaCl,溶液中溶解度不同，,3,、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶，其作用是分解蛋白质，使提取出的,DNA,纯度较高,4,、预冷的乙醇溶液具有以下优点：一是抑制核酸水解酶活性，防止,DNA,降解，二是降低分子运动，易于形成沉淀析出，三是低温有利于增加,DNA,分子柔韧性，减少断裂；,5,、洗涤剂等去污剂可以溶解细胞的细胞壁，破坏细胞膜，同时也能使蛋白质变性；,6,、在,6075,度条件下加温处理，蛋白质变性，而,DNA,结构不会受到破坏，提取纯度较高的,DNA,7,、甲基绿能使,DNA,染成绿色,根据以上原理可设计提取和纯化,DNA,的方案：,方案一：,30mL,含,DNA,的滤液,2mol/L,NaCl,同方向搅拌，,DNA,溶解加入蒸馏水,DNA,析出过滤得到过滤物放到,2mol/LNaCl,溶液中溶解,DNA-,NaCl,溶解液,方案二：,30mL,滤液嫩肉粉（木瓜蛋白酶）静置,10,15,分钟,DNA,滤液,方案三：,30mL,滤液,60,75,恒温保温,1015,分钟过滤获得,DNA,滤液,两种材料的,DNA,粗提取与鉴定过程,以鸡血为材料,以花菜为材料,释放组织细胞中的,DNA,，,粗提取,DNA,，,将粗提取的,DNA,进一步纯化，,鉴定提取物是,DNA,鸡血细胞,植物组织,. 0.1g/ml,的柠檬酸钠溶液,按,1:2,的比例与新鲜鸡血混合搅拌均匀。,.,将血液置于冰箱中,24,小时,弃上部澄清液,.,取烧杯中的血细胞液约,510ml,加入到,100ml,烧杯中，向烧杯中加入,20ml,蒸馏水，用玻棒沿一个方向,快速,搅拌,5,分钟，加速血细胞在低渗溶液中的破裂,.,将,2mol/L,的氯化钠溶液,50ml,缓缓倒入烧杯中，用玻棒沿一个方向搅拌，使,DNA,溶解于氯化钠溶液中，滤除杂质，获得粘稠状的鸡血细胞,DNA,提取液,.,将鸡血细胞,DNA,提取液置于较大的烧杯中，沿烧杯内壁缓缓倒入蒸馏水，并不断搅拌，直到粘稠状,DNA,不再析出为止。用玻棒搅拌，使析出的,DNA,缠绕于玻棒末端。,.,将析出的,DNA,再溶解于,2mol/L,的氯化钠溶液中。,.,在,DNA,的氯化钠溶液中倒入,95%,的酒精,50 ml,（冷却过的酒精效果较好），使,DNA,再次析出，用玻棒搅拌，使,DNA,再次缠绕于玻棒末端。,.DNA,的鉴定：取两支试管，各加入,2ml0.015,氯化钠溶液，将,DNA,溶解于其中一支试管中，另一支做为对照组。然后，在两支试管内加等量的二苯胺试剂，水浴加热,10min,左右，冷却，观察实验现象。,.,取新鲜植物组织（菜花）放置于冰箱中冷却,12,天,.,取,30,克植物组织,切碎,置于研体中,倒入适量洗洁精,加入适量的,NaCl,充分研磨,10,分钟,.,过滤研磨液，取上清夜置于冰箱中冷却几分钟,.,取,1,倍体积的上清液，加入,2,倍体积的,95%,的冷酒精当中，用玻棒轻轻搅拌，沉淀,35,分钟后可见白色絮状,DNA,缠绕于玻棒末端。,.DNA,的提纯同鸡血细胞为实验材料的实验操作步骤,6,、,7,，具体数据有一定的差异。,.,鉴定,鸡血细胞液中,DNA,的粗提取实验流程图,2mol/L,鸡血细胞液中,DNA,的粗提取实验流程图,5,、过滤取纱布上的滤物,纱布过滤,6,、再次溶解,DNA,2mol/LNaCl,溶液,取滤物,鸡血细胞液中,DNA,的粗提取实验流程图,7,、加冷酒精使,DNA,析出（纯化）,冷酒精,鸡血细胞液中,DNA,的粗提取实验流程图,DNA,的鉴定,DNA,的粗提取与鉴定,实验原理,DNA,在不同浓度,NaCl,溶液中溶解度不同,DNA,与其他细胞成分在酒精中溶解度不同,DNA,和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同,DNA,与二苯胺呈现蓝色反应,DNA,粗提取,选择适宜材料,破碎细胞,DNA,的溶解和析出,DNA,的纯化,鉴定,DNA,与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应,总结：,1.,下列关于,DNA,粗提取与鉴定的说法正确的是,A,氯化钠的浓度越低，对,DNA,的溶解度越大,B,人血也可代替鸡血进行实验,C,柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂,D,DNA,不能溶于酒精,2.,在破碎鸡血细胞时，要先加入,20ml,的蒸馏水，其作用是,A. DNA,溶解于水,B, 血细胞破裂，,DNA,释放,C,稀释血液，防止凝固,D, 有利于搅拌,3.,若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗涤剂和食盐，加入食盐的目的是,A.,利于,DNA,的溶解,B.,分离,DNA,和蛋白质,C.,溶解细胞膜,D.,溶解蛋白质,4.,在,DNA,粗提取实验中，向在溶解,DNA,的,NaCl,溶液中，不断加入蒸馏水的目的是,A,有利于溶解,DNA,B,有利于溶解杂质,C,减少,DNA,的溶解度,D,减少杂质的溶解度,
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