医学15遗传性疾病的分子诊断课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,南方医科大学,#,分子诊断学,南方医科大学,教学目的与要求,了解,遗传性疾病分子诊断的方法学评价及产前（包括胚胎植入前）遗传缺陷分子诊断的适应症。,熟悉,遗传性疾病的分子机制及分子诊断的标准化。,掌握,遗传性疾病及产前（包括胚胎植入前）遗传缺陷的经典检测方法及临床意义。,重点,遗传性疾病及产前（包括胚胎植入前）遗传缺陷的经典检测方法及临床意义。,难点,遗传性疾病的分子机制。,南方医科大学教学目的与要求 了解遗传性疾病分子诊断的方法学评,1,南方医科大学,本章目录,第一节 遗传性疾病分子诊断的策略,*,第二节 遗传病的分子诊断,第三节 产前（包括胚胎植入前）遗传缺陷的分子诊断,*,南方医科大学本章目录第一节 遗传性疾病分子诊断的策略*,2,南方医科大学,第一节,遗传性疾病分子诊断的策略*,一、直接诊断策略,二、基因多态性连锁分析,三、基因突变的定量（,dosage,）诊断,南方医科大学第一节 遗传性疾病分子诊断的策略*一、直接诊断策,3,南方医科大学,一、直接诊断策略,定义：直接检测导致遗传性疾病的各种基因突变,类型：点突变,缺失,插入,倍增,前提：基因已经克隆，序列和结构清楚,南方医科大学一、直接诊断策略定义：直接检测导致遗传性疾病的各,4,南方医科大学,(,一,),点突变的诊断,1,、 基因背景清楚的点突变,等位基因特异性寡核苷酸杂交,(allele specific oligonucleotide, ASO),PCR-ELISA,等位基因特异性扩增,(allele specific amplification, ASA,PCR-RFLP,测序,基因芯片技术等进行诊断,南方医科大学(一)点突变的诊断1、 基因背景清楚的点突变,5,南方医科大学,2,、基因背景未知的点突变,单链构象多态性,(single-strand conformational polymorphism, SSCP),变性梯度凝胶电泳,(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE),异源双链分析,(heteroduplex analysis, HA),DNA,序列测定,蛋白截短测试（,protein truncation test, PTT,）,南方医科大学2、基因背景未知的点突变单链构象多态性(sing,6,南方医科大学,(,二,),片段性突变的检测,（,1,）少数核苷酸缺失或插入,检测点突变的方法,（,2,）大的片段突变,Southern,印迹技术、多重,PCR,技术。,片段性突变是指,DNA,分子较大范围发生突变，,碱基的缺失、插入、扩增和重组。,南方医科大学(二)片段性突变的检测 （1）少数核苷酸缺失或插,7,南方医科大学,二、基因多态性连锁分析,检测原理,：多态性连锁分析、关联分析,检测前提,：致病基因尚未被定位和阐明,基因太大,突变种类太多,检测方法,：,RFLP,，,VNTR,，,STR,，,SNP,南方医科大学二、基因多态性连锁分析检测原理：多态性连锁分析、,8,南方医科大学,三、基因突变的定量诊断,检测方法,：细胞分裂中期染色体检测,固相杂交,PCR,扩增,检测内容,：大范围的重复、缺失,南方医科大学三、基因突变的定量诊断检测方法：细胞分裂中期染色,9,南方医科大学,方法,分辨率,(,碱基数,),说明,细胞分裂中期染色体检测,染色体,常规细胞培养至细胞分裂期染色；,CGH,5 x 10,6,细胞分裂中期染色体作为探针来检测和控制不同的杂交；,FISH,5 x 10,4,用修饰（如纤维探针）来增强分辨率；,阵列,CGH,5 x 10,4,使用阵列化的细菌人工染色体载体（,Bacterial artificial chromosomes,，,BACs,）而非细胞分裂中期染色体作为探针；,MAPH,不确定,将探针与基因组,DNA,杂交，然后再扩增探针；,微卫星,PCR,1 x 10,2,取决于缺失区已知的微卫星；,差异,PCR,1 x 10,2,要求精心控制起始,DNA,的质和量，结果为相对量，是一种半定量方法；,竞争,PCR,1 x 10,2,准确，结果为摩尔数，是一种绝对定量方法；,Real-time PCR,1 x 10,2,成本较高，可有多种方法如,Taqman,法或分子信标法的,SYBR Green,染料或探针，应用越来越广泛；,长片段,PCR,1 x 10,2,检测基因内缺失比重复更有效，可以确定突变的性质。,南方医科大学方法分辨率(碱基数)说明细胞分裂中期染色体检测染,10,南方医科大学,第二节 遗传病的分子诊断,一、血红蛋白病,二、血友病,三、肌营养不良症,四、苯丙酮尿症,五、囊性纤维化,六、亨廷顿病,七、脆性,X,综合征,南方医科大学第二节 遗传病的分子诊断一、血红蛋白病,11,南方医科大学,一、血红蛋白病,血红蛋白具有,4,个亚基组成的四级结构，,每个亚基可结合,1,个血红素并携带,1,分子氧,。,Hb,亚基之间通过,8,对盐键，使,4,个亚基紧密结合而形成亲水的球状蛋白。,南方医科大学一、血红蛋白病血红蛋白具有4个亚基组成的四级结构,12,南方医科大学,珠蛋白基因簇,16,p13.33-p13.11,南方医科大学珠蛋白基因簇16p13.33-p13.11,13,南方医科大学,1115.5,珠蛋白基因簇,:,南方医科大学1115.5珠蛋白基因簇:,14,南方医科大学,血红蛋白的类型,成人,Hb,：,Hb,A,2,2,97,98%,Hb,A,2,2,2,2,3,%,胎儿,Hb,：,Hb F,2,2,2,G,2,2,A,2,胚胎,Hb,：,Hb Gower,2,2,2,G,2,2,A,2,(,妊娠,12,周内,),Hb Gower ,2,2,Hb Portland,2,2,南方医科大学血红蛋白的类型成人Hb ：Hb A 22,15,南方医科大学,血 红 蛋 白 类 型,南方医科大学血 红 蛋 白 类 型,16,南方医科大学,血红蛋白病,hemoglobinopathy,结构异常血红蛋白病,镰刀状细胞贫血；,不稳定血红蛋白病,血红蛋白,M,病,氧亲和力改变,地中海贫血，,珠蛋白的合成降低或消失,南方医科大学血红蛋白病,17,南方医科大学,1,、镰刀形红细胞贫血,正常细胞,镰刀形细胞,镰刀状贫血病,血液中大量出现镰刀红细胞，其携带氧的功能只有正常红细胞的一半，患者常因此缺氧窒息。,南方医科大学1、镰刀形红细胞贫血正常细胞镰刀形细胞镰刀状贫血,18,南方医科大学,N-val his leu thr pro ,glu, glu C(146),HbS,肽链,HbA,肽 链,N-val his leu thr pro ,val, glu C(146),镰刀状细胞贫血分子机制,GTG CAT CTG ACT CCT G,A,G GAG,GTG CAT CTG ACT CCT G,T,G GAG,南方医科大学N-val his leu thr,19,南方医科大学,分子诊断方法,限制性内切酶法（,RE,）,ASO,ARMS,、,跨越断裂点的,PCR (,裂口,PCR,、,gap-PCR),南方医科大学分子诊断方法限制性内切酶法（RE）,20,南方医科大学,S,肽链,A,肽链,ACT CCT G,A,G GAG,ACT CCT G,T,G GAG,RE,法,(Southern Blot),MstII,CC TNA GG,GG ANT CC,1.15 kb,0.2 kb,1.35 kb,AS,S,A,南方医科大学S 肽链A肽链 ACT CC,21,南方医科大学,S,肽链,A,肽链,ACT CCT G,A,G GAG,ACT CCT G,T,G GAG,RE,法,(PCR-RFLP),DdeI,C TNA G,G ANT C,268 bp,AS,S,A,175 bp,175,268,443,南方医科大学S 肽链A肽链 ACT CC,22,南方医科大学,思考题（作业）,书中,239,页中关于,HbE,检测请回答下列问题,（,1,）,HbE,的突变碱基改变情况,(2),该突变位于蛋白质的第几个氨基酸,（,3,）突变位点位于氨基酸哪一个外显子上,（,4,）写出基因组参考序列中此外显子后的内含子序列（,5,和,3,端各,5,个碱基）,(5),用,MnlI,酶切后，请列出各种可能的情况,（,6,）结合所学习的知识，请再写出几种可能用于诊断的方法。,南方医科大学思考题（作业）书中239页中关于HbE检测请回答,23,南方医科大学,2.,地中海贫血,由于珠蛋白链的合成不平衡所造成的一类常见的单基因遗传性、溶血性疾病。,类型：,地中海贫血，,地中海贫血，,地中海贫血，,地中海贫血，以此类推。,南方医科大学 2.地中海贫血 由于珠蛋白链的合成不平衡所造成,24,南方医科大学,地 中 海 贫 血,南方医科大学地 中 海 贫 血,25,南方医科大学,地中海贫血,每条,16,号染色体上有两个,Gene,缺失程度不同，,链合成部分或完全受到抑制，导致不同类型的地贫。,若一条染色体上缺失一个,基因,（,）,为,+,地贫,，,链合成减少。,若一条染色体上两个,基因均缺失,（ ）,为,0,地贫,，,链不能合成。,南方医科大学地中海贫血,26,南方医科大学,临床类型,类 型,症 状,正常人,静止型,+,地贫杂合子,无症状,轻 型,（标准型）,0,地贫杂合子,轻度贫血,+,地贫纯合子,血红蛋白,H,病,0,地贫和,+,地贫双重杂合子,溶血性贫血,Hb Bart,s,胎儿水肿综合征,0,地贫纯合子,胎儿水肿,南方医科大学临床类型类 型症 状正常人静止型+地贫,27,南方医科大学,胎 儿 水 肿,南方医科大学胎 儿 水 肿,28,南方医科大学,地贫的分子基础,依,基因缺陷程度分为：,Gene,缺失型（缺失,1,个,基因）,非,Gene,缺失型（点突变）：无义突变、移码突变、终止密码突变、剪接突变等,结果,1,生成无功能或稳定性降低的,mRNA,无义突变,移码突变,终止密码突变,起始密码突变,2,RNA,加工突变,3,产生不稳定,Hb,南方医科大学地贫的分子基础 依基因缺陷程度分为：,29,南方医科大学,地中海贫血的分子机制,南方医科大学地中海贫血的分子机制,30,南方医科大学,分子诊断方法,(1) PCR,法,PCR,法已经成为鉴别缺失型,地中海贫血的首选方法。,(2) ARMS,法 该法能快速鉴别诊断,HbC S,和,HbQ S,(3) ASA,法 与,ARMS,法相类似,(4) SSCP,法 非缺失型,2,地中海贫血突变,(5),等位基因特异性扩增技术,(ASPCR,）法,南方医科大学分子诊断方法,31,南方医科大学,地中海贫血,珠蛋白,Gene,突变或缺失,珠蛋白链合成速,率下 降溶血性贫血,0,地贫,：,链完全不能合成,+,地贫,：,链可部分合成,南方医科大学地中海贫血,32,南方医科大学,-,地中海贫血临床分类,临 床 类 型,基 因 型,基 因 产 物,临 床 表 现,重型,地贫,+,/,+,、,0,/,0,0,/,0,、,+,/,0,链几乎不能合成,链合成相对增加,Hb F,和,Hb A,2,增高,地中海贫血面容,溶血性贫血（需输血）,轻型,地贫,+,/,A,、,0,/,A,0,/,A,能合成适量的,链,贫血不明显或轻度贫血,中间型,地贫,+,/,+,链部分合成,介于重型和轻型之间（不需输血）,遗传性胎儿血红蛋白持续增多症,缺失或突变,链和链合成受抑制,链合成明显增加,成人,Hb F,持续增加，无症状,南方医科大学-地中海贫血临床分类临 床 类 型基 因,33,南方医科大学,患儿颅骨及面颊部骨骼增大，头颅变大，额部隆起，颧高，鼻梁塌陷，两眼距离增宽，眼睑浮肿，形成地中海贫血的特殊面容。,南方医科大学患儿颅骨及面颊部骨骼增大，头颅变大，额部隆起，颧,34,南方医科大学,X,线颅骨照片可见颅骨内外板变薄，板障增宽，在骨皮质间出现垂直短发样骨刺,南方医科大学X线颅骨照片可见颅骨内外板变薄，板障增宽，在骨皮,35,南方医科大学,-,地中海贫血的分子基础,地中海贫血已发现,100,多种突变类型，包括点突变和,基因缺失。,绝大多数,地中海贫血是由于基因发生点突变所致，突,变涉及基因内及侧翼序列。,（,1,）编码区突变,（,2,）非编码区突变,（,3,）启动子区突变,（,4,）,RNA,裂解信号突变,（,5,）加帽位点单个碱基突变,南方医科大学-地中海贫血的分子基础 地中海贫血已发现1,36,南方医科大学,编码区突变,mRNA,稳定性降低或形成无功能,mRNA,（,1,）无义突变,密码子,17,：,AC,密码子,43,：,GT,0,地贫,（,2,）移码突变,密码子,71/72,：,+A,密码子,41/42,：,TCTT,0,地贫,（,3,）起始密码突变,ATGAGG,0,地贫,南方医科大学编码区突变（1）无义突变,37,南方医科大学,内含子,I,G,T,A,T,丧失一个剪切信号。, 新的切点产生 同义突变激活,I,和,Exon,隐蔽裂解位点,如：,G,GT,AG,T,产生新的剪切点,非编码区突变,影响,mRNA,剪切、加工过程,南方医科大学 内含子I GTAT丧失一个剪切信号。,38,南方医科大学,G,T,A,T,GGTAGT,，激活隐蔽剪切位点,南方医科大学GTATGGTAGT，激活隐蔽剪切位点,39,南方医科大学,启动子区突变,降低,mRNA,的转录效率,-28,位,AG,突变破坏了,TATA Box,。,南方医科大学启动子区突变-28位AG 突变破坏了TA,40,南方医科大学,RNA,裂解信号突变,不能准确裂解和加,polyA,珠蛋白基因,3,侧翼序列中,AA,T,AAAAA,C,AAA,加帽位点单个碱基突变,不能准确裂解和加,polyA,加帽位点发生,A,C,颠换，影响转录效率。通常是,mRNA,的第一个核苷酸。,南方医科大学RNA裂解信号突变珠蛋白基因 3侧翼序列中,41,南方医科大学,分子诊断方法,PCR,反向点杂交,(PCR-RDB),法,PCR,RFLP,法,基因芯片法等,N,D,1,2,3,4,6,5,8,7,10,9,11,南方医科大学分子诊断方法 PCR反向点杂交(PCR-RDB),42,南方医科大学,二、血友病,人体的凝血过程需要多种凝血因子参加。由于凝血因子基因的缺陷而使其中某一凝血因子蛋白表达降低或缺如即造成,血友病,(hemophilia),。,85, 的血友病患者是由于血浆中缺乏凝血第,8,因子,(F),所致，约,10,的患者是由于缺乏凝血第,9,因子,(F),，前者称为甲型血友病，后者称为乙型血友病 。,南方医科大学 二、血友病 人体的凝血过程需要多,43,南方医科大学,（一）甲型血友病及其分子诊断,甲型血友病是由于凝血因子,(F),即,抗血友病球蛋白,(antihemophilic globulin, AHG),缺乏所导致的凝血机制异常的遗传性疾病。,南方医科大学 （一）甲型血友病及其分子诊断甲型血友病是由于凝,44,南方医科大学,2,甲型血友病的分子机制,在,F,基因区域内，有一种,A,基因存在三个拷贝，其功能不详，其中一个,A,基因位于,F,基因的第,22,号内含子内,(A1),，另外两个位于,X,染色体的末端,(A2,、,A3),。,A1,基因可以与其上游的两个,A,基因拷贝中的一个发生同源重组，引起,F,基因的,1-22,外显子片段倒位，这种倒位导致,F,功能完全丧失而发生严重的血友病 。,南方医科大学 2甲型血友病的分子机制 在F,45,南方医科大学,甲型血友病,分子诊断,（,1,）基因倒位的检测,由于,50,左右的甲型血友病是由于,F,基因中的,22,号内含子倒位引起的，所以检测该突变成为对患者进行基因诊断的首选方法。在检测基因倒位的方法中首选的是,长距离,PCR(LD-PCR),技术。,南方医科大学甲型血友病分子诊断 （1）基因倒位的检测,46,南方医科大学,(2),非基因倒位的检测,点突变是非基因倒位引起甲型血友病的主要原因，因此对该类患者的家系分析和携带者的基因检测主要是通过点突变的检测技术进行。,南方医科大学(2)非基因倒位的检测,47,南方医科大学,1)PCR-RFLP,法,2)VNTR,法,3)STR,法,4)PCR-SSCP,法,南方医科大学1)PCR-RFLP法,48,南方医科大学,（二）乙型血友病及其分子诊断,乙型血友病，又称,Christmas,病或,血浆凝血活酶成分,(plasma thromboplastin component, PTC),缺乏症，是凝血因子,(F),缺陷所致的一种严重的遗传性出血性疾病。,南方医科大学 （二）乙型血友病及其分子诊断乙型血友病，又称C,49,南方医科大学,分子机制,为编码,F,基因缺陷，导致,F,含量缺乏或结构异常，从而凝血功能障碍。临床表现与甲型血友病完全相似。,南方医科大学分子机制,50,南方医科大学,分子诊断,直接测序法、 基因芯片法和毛细管电泳,(capillary electrophoresis, CE),；,间接检测方法有：,RFLP,法、,SSCP,法、,DGGE,法、,双脱氧指纹图谱,(dideoxy fingerprint, ddF),、,变性高效液相色谱法,(denaturing high performance liquid chromatography, DHPLC,）,南方医科大学分子诊断,51,南方医科大学,三、肌营养不良症,肌营养不良症又称为假性肥大性肌营养不良。主要有,杜氏肌营养不良症,(Duchenne muscular dystrophy, DMD),和,贝氏肌营养不良症,(Becker muscular dystrophy, BMD),，它们是一种常见的,X,连锁性隐性遗传病，因此患者都为男孩。,南方医科大学三、肌营养不良症 肌营养不良症又称,52,南方医科大学,发病机制,主要为,抗肌萎缩蛋白基因（,dystrophin gene),的突变导致肌细胞膜上的,抗肌萎缩蛋白,(dystrophin),发生结构和功能的改变所致。,Dystrophin,是抗肌萎缩蛋白基因,(DMD,基因,),的产物，当,DMD,基因突变后,Dystrophin,合成缺乏，该复合物无法有效形成，使细胞膜不稳定，最终造成肌细胞因通透性增加而变性或坏死，导致,DMD,的发生。,南方医科大学发病机制 主要为抗肌萎缩蛋白基因（,53,南方医科大学,2,杜氏和贝氏肌营养不良症的分子诊断,(1),多重,PCR,技术,（,2,）,短串联重复序列,(short tandem repeat, STR),连锁分析,（,3,）定量,PCR,技术,（,4,）,RT-PCR,技术,南方医科大学 2杜氏和贝氏肌营养不良症的分子诊断 (1)多,54,南方医科大学,四、苯丙酮尿症,PKU,是由挪威科学家,Folling,发现的，当时被命名为,“,苯丙酮尿性智力发育不全,”,，,1937,年,Penrose,和,Quastel,将之命名为,苯丙酮尿症,(phenylketonuria, PKU),。其主要是由于肝内,苯丙氨酸羟化酶（,phenylalanine hydroxylase, PAH,）,严重缺失所致的苯丙氨酸代谢异常，为常染色体隐性遗传病。,南方医科大学四、苯丙酮尿症PKU是由挪威科学家Folling,55,南方医科大学,(,二,),苯丙酮酸尿症的分子诊断,1,PCR,STR,连锁分析,2,PCR-SSCP,法,3,PCR-RFLP,4,多重,ASPCR,法,南方医科大学(二)苯丙酮酸尿症的分子诊断1PCRSTR,56,南方医科大学,五、囊性纤维化,(cystic fibrosis, CF),CF,是由,囊性纤维化穿膜传导调节因子,(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator, CFTR),基因突变所致，为白种人中最常见一种家族常染色体隐性遗传性先天性致死性疾病，多累及儿童和青年，发病率以西、北欧及北美人群为高。,CF,常累及胃肠道和呼吸道，极易发生呼吸道感染而引起气道梗阻及呼吸功能不全，多数病人仅能成活数年到十余年。,南方医科大学 五、囊性纤维化(cystic fibrosis,57,南方医科大学,CF,分子机制,CFTR,基因突变已达,1000,余种，已知的,CF,突变在,CFTR,基因中的分布是非随机的，绝大多数集中于编码,CFTR,蛋白,NBFs,区的外显子,9,、,10,、,11,、,12,、,19,、,20,、,21,、,22,，跨膜区的外显子,3,、,4,、,7,、,14a,、,14b,、,17b,以及,R,区的第,13,外显子，其中除,F508,及另外十余种较为常见的突变外，其余均为罕见突变或仅见于个别病例。,南方医科大学CF分子机制 CFTR基因突变已达1000 余种,58,南方医科大学,CF,分子诊断,早期,CF,的基因诊断基于,RFLP,连锁分析，采用的探针多为基因克隆过程中获得的基因侧翼,DNA,片段。在,CF,基因克隆和测序以后，,PCR,技术被用于直接基因诊断。同时，新的突变分析方法也相继问世。,南方医科大学CF 分子诊断 早期CF的基因诊断基于RFLP连,59,南方医科大学,六、亨廷顿病,亨廷顿病（,Huntingtons disease, HD),是一种有,IT 15,基因上,CAG,重复序列一场扩展所致常染色体显性遗传的以舞蹈运动为主要特征神经退行性的疾病。,南方医科大学 六、亨廷顿病 亨廷顿病（Hunt,60,南方医科大学,HD,分子机制,HD,即由,CAG,重复序列的异常扩展突变引起，,CAG,重复范围在正常的染色体为,9,35,个拷贝，而在,HD,患者的染色体上，重复长度大于拷贝，,CAG,的拷贝数目与,HD,的发病年龄负相关，其基因突变率在人类单基因遗传性疾病中最低。,南方医科大学HD 分子机制 HD即由CAG重,61,南方医科大学,HD,的分子诊断,针对不同个体运用三条引物进行,PCR,扩增，扩增产物变性聚丙烯酰胺凝胶电泳放射自显影鉴定,IT 15,基因（,CAG),串联重复序列拷贝数，此法能对超过,95,HD,患者诊断和排除诊断。,南方医科大学HD的分子诊断 针对不同个体运用三条引物进行PC,62,南方医科大学,七 脆性,X,综合征,脆性,X,综合征（,fragile X syndrome, FraX,）,是仅次于,Down,s,综合征的又一常见遗传性智力缺陷疾病。,南方医科大学 七 脆性X综合征 脆性X综合征（,63,南方医科大学,脆性,X,综合症 分子机制,1,FMR-1,基因,5,端,(CGG)n,重复序列异常,2,FMR-1,基因,5,端,CpG,岛的异常甲基化,3,FMR-1,基因缺失,4,FMR-1,基因点突变,南方医科大学脆性X综合症 分子机制1FMR-1 基因5端,64,南方医科大学,脆性,X,综合征的分子诊断,1,Southern,印迹杂交法,2,PCR,法,3,微卫星序列分析法,南方医科大学脆性X综合征的分子诊断 1Southern印迹,65,南方医科大学,第三节 产前（包括胚胎植入前）遗传缺陷的分子诊断,产前诊断（,prenatal diagnosis, PND,）*,就是在胎儿出生以前，通过对某些特异基因进行分析，以判断胎儿是否有某种遗传性疾病的手段。,植入前遗传学诊断（,preimplantation genetic diagnosis, PGD,）*,主要是指在显微操作下从,体外受精（,in vitro,fertilization, IVF,）,发育至,6,8,个细胞期的胚胎中，活检,1,2,个卵裂球细胞或直接获取受精前后的极体，通过,PCR,或,FISH,，进行快速遗传学诊断，选择正常胚胎植入宫内，从而获得健康胎儿。,南方医科大学第三节 产前（包括胚胎植入前）遗传缺陷的分子诊断,66,南方医科大学,IVF,过 程,南方医科大学IVF 过 程,67,南方医科大学,南方医科大学,68,南方医科大学,产前遗传缺陷的分子诊断内容,一、染色体异常分子诊断,二、单基因病的产前（植入前）分子诊断,南方医科大学 产前遗传缺陷的分子诊断内容一、染色体异常分子诊,69,南方医科大学,一、染色体异常分子诊断,1,荧光原位杂交,2,比较基因组杂交,3,间期染色体转化,南方医科大学 一、染色体异常分子诊断1荧光原位杂交,70,南方医科大学,二、单基因病的产前（植入前）分子诊断,1,PND,和,PGD,可诊断的单基因病,2,PND,和,PGD,诊断单基因病的分子诊断技术,（,1,）巢式,PCR,（,2,）全基因组扩增（,WGA,）,（,3,）多重,PCR,（,4,）荧光,PCR,（,5,）突变分析法,南方医科大学 二、单基因病的产前（植入前）分子诊断 1PN,71,南方医科大学,PND,与,PGD,的适应证,可能孕严重遗传病、先天畸形胎儿的孕妇,有家族史,夫妇一方有染色体异常,服致畸药史、病毒感染史,原因不明的多次流产、死胎等,胎儿发育迟缓,孕妇年龄超过,35,岁,南方医科大学PND与PGD的适应证可能孕严重遗传病、先天畸形,72,