产气肠杆菌课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第七章 肠杆菌科,第一节 概述,肠杆菌科包括24个与医学有关的菌属,G+Cmol39-59。,1. 四类引起人类腹泻和肠道感染的细菌：埃,希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌,属。,酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源,菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登,菌属和摩根菌属；,第七章 肠杆菌科 第一节 概述,1,3. 其中鼠疫耶尔森菌、伤寒沙门菌对,人致病性较强。此外，许多细菌既,是正常菌群，也是条件致病菌。在,机体抵抗力下降，寄居部位的改变,或菌群失调时能引起机会感染。,3. 其中鼠疫耶尔森菌、伤寒沙门菌对,2,二、临床意义,占临床分离菌总数的50和,-,总数的,80, 将近50的败血症70以上的泌尿,道感染和大量的肠道感染是由肠杆菌科,细菌引起的。,1. 人类肠道外感染 除志贺菌较少引起肠外,感染，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产,酸克雷伯菌、奇异变形杆菌、产气肠杆,菌、阴沟肠杆菌、粘质沙雷菌等均可引,起泌尿道、呼吸道、伤口和中枢神经系,统的感染;,二、临床意义,3,且往往为医院感染。鼠疫耶尔森菌可,引起烈性传染病鼠疫。,2. 人类肠道感染,埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属和耶,尔森菌属。主要引起各种急、慢性肠,道感染、食物中毒、旅行者腹泻及肠,热症等。,且往往为医院感染。鼠疫耶尔森菌可,4,三、共同特性 (1),1. 形态结构,-,杆状或球杆状、无芽孢、多数有鞭,毛，能运动。致病性菌株有菌毛。,2. 抗原成分,抗原是细胞壁成分脂多糖。以核,心多糖为中心的三层结构，内侧是脂类,A, 为内毒素的毒性成分。外侧是由重复,的特异多糖，决定抗原的特异性。,三、共同特性 (1),5, H抗原是不耐热的蛋白质抗原，氨基酸,序列和空间构型决定H抗原的特异性。, 表面抗原是包绕在抗原外侧的多糖抗,原，由多糖结构决定抗原特异性。大肠,埃希菌称K抗原、伤寒沙门菌称Vi抗原,和志贺菌称B抗原等。,O抗原和H抗原是肠杆菌科血清学分,群和分型的依据。表面抗原存在时可阻,断。抗原与相应抗体之间的反应，加热,处理能消除表面抗原的阻断作用。, H抗原是不耐热的蛋白质抗原，氨基酸,6,共同特性 (2),3. 变异性, S-R变异是初次分离的细菌，菌体,抗原上都有特异性多糖链，菌落为光滑,型。在人工培养基中反复传代时，细胞,壁上特异性多糖链消失而核心多糖仍保,留，菌落变为粗糙型。,H-O变异是有鞭毛的细菌, 失去鞭,毛，动力也随之消失，称H-O变异, 有,时见于新分离的菌株中。,共同特性 (,7,4. 培养和生化特性,营养要求不高，在普通培养基上生长,良好；兼性厌氧，主要生化特性包括发,酵葡萄糖(产酸或产酸产气)，触酶阳性,氧化酶阴性，可将硝酸盐还原至亚硝酸,盐。,5. 抵抗力,抵抗力不强，加热6030min即被杀,死，不耐干燥，对一般化学消毒剂均敏,感。对低温有耐受力。能耐胆盐，能抵,抗染料的抑菌作用。,4. 培养和生化特性,8,四、微生物检验,1. 标本采集, 肠外标本:采自不同的感染部位如血液,、体液、呼吸道、伤口、尿液及其他各,种标本。, 肠道标本:疾病早期留取新鲜粪便，挑,取粘液脓血部分进行培养。应在2h内进,行，以利志贺菌等检出。如不能及时培,养应冷藏待检。,2. 直接镜检 ,-,杆菌，形态及染色性无鉴别,意义。,四、微生物检验,9,3分离培养鉴定,(1) 肠外标本:采自无菌部位的标本用血,琼脂，血培养时可用肉汤增菌。其他,标本中含有杂菌，需用选择性培养基,以增加分离率，常用伊红美蓝(EMB),琼脂，因为EMB能促进肠杆菌科细,菌生长并抑制其他,-,菌。,3分离培养鉴定,10,(2) 肠道标本：常用的选择鉴别培,养基(如EMB)和针对沙门菌和志贺,菌的强选择鉴别培养基，(如SS琼脂),。如疑耶尔森菌感染可用耶尔森菌选,择琼脂(CIN)。,(2) 肠道标本：常用的选择鉴别培,11,肠杆菌科细菌,鉴定,1) 常规生化鉴定:为实验室最常用的方,法。各菌属(种)主要生化特性有助,于鉴定细菌。,2) 鉴定试剂盒:选用标准化和商品化的,微生物鉴定试剂盒，特点是质量可,靠稳定鉴定能力强，并与编码技术,结合，可用仪器读取结果，实现自,动化，并提高了工作效率。,肠杆菌科细菌鉴定,12,3) 血清学鉴定：用特异性抗血清进,行血清学分型鉴定后才能作出最,终报告。,4) 分子生物学鉴定：可鉴定至科、,属 、种、血清型和肠毒素基因,等。甚 至可区分致病菌株和非,致病菌株。,3) 血清学鉴定：用特异性抗血清进,13,耐药性问题日趋严重。粘质沙雷菌对青霉,素G等抗生素天然耐药，而大多数是形成的,获得性耐药。有染色体或质粒介导的超广谱,-内酰胺酶或AmpC酶而产生的耐药性。已,出现了耐多种抗菌药物的多重耐药菌株，因,此必须根据抗菌药物敏感试验选用抗生素，,并作好耐药性监控工作。同时细菌的耐药谱,还可成为医院感染流行病学调查中的标志。,(五) 抗菌药物敏感试验,耐药性问题日趋严重。粘质沙雷菌对青霉(五) 抗菌药物,14,一、分 类,埃希菌属包括5个种：, 大肠埃希菌是肠道中G,-,杆菌的主要,成员， 常引起肠内外的感染，是腹,泻和泌尿道感染的主要病原菌。, 蟑螂埃希菌偶而检出并有潜在的致,病性。,第二节 埃希菌属,一、分 类第二节 埃希菌属,15, 弗格森埃希菌；, 赫尔曼埃希菌；, 伤口埃希菌。,最近还发现称为不脱胺凝聚埃,希菌 G+Cmol为 4852。, 弗格森埃希菌；,16,二、临床意义 ,1. 致病因素, 侵袭力,K抗原能抗吞噬，并有抵抗抗体和,补体的作用。菌毛能帮助细菌粘附于,粘膜表面称定殖因子，能使细菌定殖,产生毒素而引起相应的症状，直接侵,犯粘膜引起炎症。,二、临床意义 ,17, 内毒素,具有发热、休克、DIC等病理作用。, 肠毒素,产生不耐热和耐热肠毒素两种肠,毒素：均可使肠道细胞中cAMP,的水平升高，引起肠液大量分泌,而导致腹泻。, 内毒素,18,二、临床意义 ,2. 所致疾病, 肠道外感染,是临床分离的G-杆菌中最常见的,菌种，可引起泌尿系等各种类型的感染。,引起泌尿系感染的菌株以血清型01、,2、6为多见，本菌还可引起菌血症、,胆囊炎、肺炎及新生儿脑膜炎等。 常,见于腹腔内脓肿、肠穿孔继发腹膜炎、,肠道手术后继发感染或大面积灼伤创面,感染。,二、临床意义 ,19,有时与类杆菌、粪肠球菌混合感染。产,生的脓液粘稠，有粪臭味。该菌对一般,抗生素敏感，易产生超广谱-内酰胺酶，而导致对第三代头孢菌素耐药。, 肠道内感染,其中有些菌株能引起轻微腹泻至霍乱,样严重腹泻，并能引起致死性并发症如,溶血性尿毒综合征。,有时与类杆菌、粪肠球菌混合感染。产,20,(1) 肠毒素型大肠埃希菌(ETEC)：,引起儿童腹泻和旅行者腹泻，类似轻型,霍乱样腹泻。该菌产生耐热肠毒素(ST),和不耐热肠毒素(LT)。,(2) 肠致病性大肠埃希菌(EPEC)：,引起婴幼儿肠道感染, 血清型是055、,0111等, 是婴儿腹泻的重要病原菌。,(3) 肠侵袭型大肠埃希菌(EIEC)：,类似于志贺菌，侵犯肠粘膜细胞，引起,菌痢样症状，出现脓血粘液便。,引起肠道感染的大肠埃希菌,(1) 肠毒素型大肠埃希菌(ETEC)：引起肠道感染的大肠埃,21,(4) 肠出血型大肠埃希菌(EHEC)，多为食,源性感染，通过粪-口途径传播。致病,因子是菌毛和Vero毒素，血清型是0157,：H7，可引起出血性结肠炎，有2,7发展成溶血性尿毒综合征，出现溶,血性贫血，血小板减少性紫癜和急性肾,衰竭，死亡率为310。,(5) 肠凝聚型大肠埃希菌(EaggEC)：代表,一群不产生LT或ST，不能用O：H血清,分型，可粘附于Hep-2细胞的菌株。与,世界各地慢性腹泻有关。,(4) 肠出血型大肠埃希菌(EHEC)，多为食,22,三、微生物特性,1. 形态结构,G-直短杆状，,大小为1.01.5m，,多数有鞭毛能运动，,引起肠外感染的菌株有荚膜(微,荚膜)和周身菌毛。,三、微生物特性,23,2. 抗原成分, O抗原是多糖磷脂复合物(LPS)，耐,热加热100不能灭活，已有171种,是血清学分型的基础。, H抗原是不耐热的蛋白质，已知有56,种，均为单相菌株。, K抗原是多糖荚膜抗原，对热稳定，,能阻止O凝集。血清型别按O：K：H,的顺序以数字表示。,2. 抗原成分,24,3. 培养特性,兼性厌氧，营养要求不高，在普通,琼脂上生长良好，形成圆形光滑、湿,润的菌落，在选择培养基上可发酵乳,糖形成有色菌落。IMViC 试验结果为,+-。,3. 培养特性,25,四、微生物检验 (1),肠道外感染标本,1. 标本采集,血液标本以无菌操作技术采集静脉血,5ml注入血液培养瓶。痰标本取清晨口,腔清洁后从深部咳出的痰液。脓、分泌,物等标本用无菌棉拭子直接采取。,2. 直接涂片染色检查,除血液标本外，脓、痰、分泌物等标本,均作涂片染色检查。尿液和各种体液离,心后取沉淀物作涂片, 可见G-短杆菌。,四、微生物检验 (1),26,3. 分离培养鉴定,(1) 血液标本接种肉汤增菌培养，待生,长后移种血平板。体液标本取离心,沉淀物接种于血平板。尿液标本应,同时作菌落计数。脓、痰和分泌物,标本可直接接种于血平板。35孵,育1824h后观察菌落形态。,3. 分离培养鉴定,27,(2) 鉴别培养基上挑选有色菌落，用生,化反应、血清学试验鉴定到属和种。,典型的生化反应特征：,TSIA(双糖铁)产酸产酸产气，,CIT(枸橼酸盐)阴性,URE(脲酶)阴性,IND(吲哚)阳性,MOT(动力)+-,ORN(鸟氨酸)+-。,(2) 鉴别培养基上挑选有色菌落，用生,28,四、微生物检验(2),肠道内感染标本,引起腹泻的ETEC、EPEC 、EIEC和EHEC具有与肠道外感染的大肠埃希菌相似的生物学特性，但分别具有特殊的血清型、肠毒素或毒力因子。,检验程序同肠道外标本。采集腹泻,和食物中毒患者粪便和残留食物，肛拭标本，接种肠道选择鉴别培养基分离培养和鉴定 。,四、微生物检验(2),29,肠道感染大肠埃希菌鉴定,1) ETEC 生化反应、血清分型加肠毒素,测定：生化反应符合大肠埃希菌，但血,清型别与致病没有一定的联系。主要依,赖ST和LT肠毒素的检测。,2) EPEC 生化反应加血清分型：用多价抗,血清检测O抗原，进行特异性抗血清的,凝集试验，阳性的菌株测定凝集滴度以,排除交叉反应，同时做H抗原测定,(O：H分型)。,肠道感染大肠埃希菌鉴定,30,3)EIEC 生化反应、血清分型加肠毒素测定：用O：H血清分型，赖氨酸脱羧酶阴性，无动力，常见的血清型0152和0124，与志贺菌相似，主要的鉴别试验是醋酸钠、葡萄糖铵利用试验和粘质酸盐产酸试验，大肠埃希菌三者均阳性，而志贺菌三者均阴性。,4)EHEC 血清分型加生化反应：应常规作0157：H7的培养，必须经生化反应证实为大肠埃希菌。凡山梨醇阴性的大肠埃希菌0157：H7分离株无须再做毒素的检测，因为均产生Vero毒素。,5)EaggEC 用液体培养-凝集试验，检测细菌对细胞的粘附性或用DNA探针技术。,3)EIEC 生化反应、血清分型加肠毒素测定：用O：H血清,31,可致多种感染，轻者为自愈性胃,肠炎，重者可引起致死性伤寒。伤,寒和副伤寒A、B引起胃肠炎、菌血,症和肠热症；猪霍乱沙门菌引起胃,肠炎和败血症，儿童多见。,第三节 沙门菌,可致多种感染，轻者为自愈性胃第三节 沙门菌,32,一、分 类,沙门菌属是肠杆菌科中最复杂的菌,属。根据O抗原分群，再根据H抗原,分血清型，将沙门菌属分为6个亚属,(亚属 1-6，其中亚属3再分为3a和3b,见表7。8)，绝大多数(99)沙门菌,的临床分离株是亚群1中的菌种。本,属细菌DNA G+C含量为50-53。,一、分 类,33,二、临床意义,(一) 致病因素,1. 侵袭力,有Vi抗原的具有侵袭力，穿过小肠,上皮被吞噬后，由于Vi抗原的保护, 反,而在细胞内繁殖，并随吞噬细胞至机体,其他部位，故称细胞内寄生菌。,二、临床意义,34,2. 内毒素,有较强的内毒素，可引起发热，白,细胞改变，中毒性休克，并能激活,补体，导致一系列病理生理变化。,3. 肠毒素,某些沙门菌(如鼠伤寒沙门菌)能产,生类似大肠埃希菌的肠毒素。,2. 内毒素,35,(二)所致疾病,1. 胃肠炎,最常见，引起腹泻，伴有低热，恶心,和呕吐。,2. 菌血症或败血症,以猪霍乱沙门菌感染为多，表现为高热,寒战。常伴有胆囊炎、骨髓炎。血培养,阳性而便培养阴性。,3. 肠热症,由伤寒沙门菌引起。血培养或肥达反应,阳性。经口感染，穿过小肠上皮到达淋,巴结，进入血流，第一次菌血症。出现,发热等症状。,(二)所致疾病,36,随血流播散至肝、脾等器官中继续繁,殖，再次进入血流扩散，第二次菌血症，,出现持续高热、肝脾肿大、皮疹和全身中,毒症状。细菌随胆汁进入肠腔，经粪便排,出。,潜伏期720天，典型病程3-4周，发病,2周后机体出现免疫反应，使疾病好转，,但同时也引起迟发性变态反应，导致肠壁,淋巴结坏死溃疡，可造成肠穿孔而危及生,命。,4. 携带者,约3患者成为携带者，粪便持续排菌达,1年以上。,随血流播散至肝、脾等器官中继续繁,37,三、微生物特性,1. 形态染色,G-杆菌细长，1.03.0m, 有鞭毛， 无芽胞,和荚膜。,2. 抗原结构有3种:, O抗原为多糖类脂蛋白质复合物，能耐,受100 2.5 h。共有58种，是分群的依据, 凡,含共同抗原的血清型归为一个群，沙门菌含,一种或数种O抗原,每群以O加上数字及括号,大写英文字母顺序编排，如02群(A)，Z以后,直接加数字表示，如051群。刺激机体产生,IgM抗体, 与相应抗血清反应呈颗粒状凝集。,三、微生物特性,38, H抗原,为蛋白质抗原，加热被破坏。有两个,相,第一相称特异相，用a、b、c表示,是定型的依据。刺激机体产生的IgG,抗体,与相应的抗血清呈絮状反应。, 表面抗原,为Vi抗原有保护作用。可阻止O抗原,与相应抗体发生凝集，故在沙门菌血,清学鉴定时应加以注意。, H抗原,39,三、微生物特性 ,3. 培养特性,兼性厌氧，生长温度3537，最适,生长pH为6.87.8;营养要求不高，在肠道,选择性培养基上因不发酵乳糖形成透明菌,落，在SS琼脂上形成黑色的菌落。,4. 抵抗力,不强，加热601h或6520min，在水,中能活23周，粪便中呵存活12个月,5. 变异性,有S-R变异、H-O变异和位相变异等具,有双相H抗原菌变成单相菌 。,三、微生物特性 ,40,四、微生物检验,1. 采集标本,伤寒沙门菌发病第l周取血。第2、3,周取粪便、尿液做培养的分离率高。,2. 直接镜检,革兰阴性杆菌。直接用胶乳凝集试验,检测病人标本或增菌培养物沙门菌抗,原，可快速诊断。,四、微生物检验,41,3. 分离培养与鉴定,常用肠道鉴别培养基或选择培养,基。在菌最较少时，血液和骨髓液,分离培养用增菌肉汤。35-37孵,育，选择透明的可疑菌落做鉴定。,3. 分离培养与鉴定,42,沙门菌的鉴定,1. 用生化试验将可疑菌落鉴定到属和种, 基本,生化反应特征： TSIA(双糖铁) 产碱产酸,或产碱产酸产气，H2S阳性、CIT(枸橼酸,盐) 阳或阴性、URE (脲酶)阴性、IND(吲哚),阴性、MOT(动力)阳性、VP阴性、ORN(鸟,氨酸)阳性。凡临床分离菌乳糖、吲哚阳性，,或脲酶阳性者，均不考虑为沙门菌。,沙门菌的鉴定,43,2. 血清学分型：,用抗血清对所分离菌种的O抗原、Vi,抗原、第一、二相H抗原进行凝集试,验。先用多价O抗血清(A-F)进行分群,，95以上都属A-F群，对早期诊断,有重要意义。再分别用单价因子血清,定群，用H因子血清检查H抗原。,综合O、H及Vi因子血清的检查结,果进行判断。,2. 血清学分型：,44,(五) 抗体检测(肥达反应),用已知伤寒、副伤寒沙门菌的O、H,抗原，检测受检血清中有无相应的抗体,的半定量试管内凝集试验，称为肥达反,应。能辅助诊断伤寒，甲、乙、丙型副,伤寒沙门菌引起的肠热症。,(五) 抗体检测(肥达反应),45,1. 方法,将受检血清用生理盐水作倍比稀,释，分别加入等量伤寒沙门菌O、H,抗原及副伤寒沙门菌甲、乙、丙的,H抗原，进行试管内凝集试验，凡,血清最高稀释度出现明显凝集者为,凝集效价。,1. 方法,46,2. 结果解释,(1) 正常值：各地区有所不同，O 80,H1：160，A、B，Cl：80；,或第二份血清效价增高4倍以上具有,诊断意义。,(2) O抗原的抗体为IgM，出现较早，H,抗体为IgG，出现较迟。O高H不高,可能为疾病早期；周后复查如升高,为肠热症。H高O不高，可能以往,患过伤寒或接受过预防接种，为回忆,反应。,2. 结果解释,47,、分 类,将志贺菌属分为4个血清群(种)：A群为,痢疾志贺菌；B群为福氏志贺菌；C群为鲍,特志贺菌；D群为宋内志贺菌。,最近将生化性状相近的A、B，C群归为,一群，统称志贺菌A、B、C血清群；而将,生化特征与之相异，鸟氨酸脱羧酶和-半,乳糖苷酶均阳性的宋内志贺菌单列出来。,DNA G+Cmol为4953。,第四节 志贺菌属,、分 类第四节 志贺菌属,48,二、临床意义,(一)致病因素,1. 侵袭力,因菌毛的作用，细菌粘附在肠粘膜表面;,2. 内毒素,造成粘膜细胞死亡发炎，并形成毛细血,管血栓，导致坏死脱落和溃疡，临床出现,脓血便；并引起全身中毒症状，导致发热,、意识障碍，甚至中毒性休克；,3. 外毒素,A群志贺菌和型产生志贺毒素，有,细胞毒、肠毒素和神经毒等生物学活性。,二、临床意义,49,(二) 所致疾病,有以下3种临床类型：,1急性细菌性痢疾,表现为腹痛发热，有里急后重现象,便中含有粘液和血。很少进血流，中毒,性菌痢见于小儿，常无消化道症状而表,现为全身中毒症状，往往造成死亡。,(二) 所致疾病,50,2. 慢性细菌性痢疾,菌痢治疗不彻底，造成反复发作,迁延不愈，超过2个月视为慢性菌,痢；,3. 携带者,有恢复期带菌、慢性带菌和健康,带菌等3种，是主要的传染源。,2. 慢性细菌性痢疾,51,三、微生物特性,1. G-杆菌，菌体短小，无芽胞荚膜和鞭,毛，有菌毛,2. 抗原成分,有群和型特异性两种O抗原，是分类依,据根据生化反应和O抗原的不同，分为 A 、B、C、D 4个血清群和40余个血清型。,O抗原耐热，加热100、60min不被破坏。K抗原能阻断O凝集。,三、微生物特性,52,3. 变异性,有S-R变异、耐药性变异。多重耐药性,问题己成为严重的医学问题。,4. 培养特性,兼性厌氧，生长温度37，pH7.27.4,。营养要求不高，能在普通培养基上生,长。在鉴别培养基上形成无色半透明的,菌落。,5. 抵抗力,比其他肠道细菌抵抗力低，在1石炭酸,中15-30min和加热6010min即被杀死,3. 变异性,53,四、微生物检验,1. 标本采集,在治疗前采集粘液脓血便作床边,接种，不能及时接种可置甘油保存,液送检;,2. 直接镜检,G-杆菌。胶乳凝集试验和免疫荧,光技术检测抗原。,四、微生物检验,54,3. 核酸检测,志贺菌携带一个非结合型大质粒, 能,编码与侵袭性相关的外膜蛋白, 是产,生痢疾综合征的重要致病因子, 从中,2.5kb侵袭相关区段中设计出ipaH引,物, 可用于检测志贺菌序列。,4. 分离培养,用鉴别培养基和选择培养基,取可疑,菌落鉴定。,3. 核酸检测,55,志贺菌鉴定（1）,1.生化试验,鉴定到属和种 基本生化反应特征: TSIA(双糖铁)产碱产酸、不产气, CIT(枸橼酸盐)阴性, URE(脲酶)阴性, MOT(动力) 阴性, YP阴性。,志贺菌鉴定（1）,56,志贺菌鉴定（2）,2. 血清学鉴定,先用志贺菌属4种多价 (A群1，2型、B群,16型、C群l6型及D群)作玻片凝集试,验，凝集者再进一步作定型。,A群：即痢疾志贺菌，为一群甘露醇阴性,的菌株，共有10个血清型(1)0)，其O抗,原从1 X共10种均为独立的血清理，,志贺菌鉴定（2）,57,群：即福氏志贺菌，有6个血清型,和X、Y 2个变型。6型菌株缺少共同,的群抗原，故多价血清中应包含6型因,子血清，否则将会造成漏检。,C群：即鲍特志贺菌。本菌共有15个,血清群，,D群：即宋内志贺菌：仅有个血清,型，但有光滑型(S)和粗糙型(R)两种茵,落; R型菌 不被S型血清所凝集；因此诊,断血清应含有S及R两种因子血清,群：即福氏志贺菌，有6个血清型,58,包括3种人类致病菌：鼠疫耶尔森,菌、小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶,尔森菌。还可从临床标本中分离到弗,氏、中间、克氏、舆氏、伯氏、莫氏,、罗氏和鲁氏等8种耶尔森菌。,第五节 耶尔森菌属,包括3种人类致病菌：鼠疫耶尔森第五节 耶尔森菌,59,一、鼠疫耶尔森菌,(一) 临床意义,是烈性自然疫源性传染病鼠疫的,病原菌。,1致病因素,有内毒素和鼠毒素两种毒素。鼠,毒素与毒力有关，作用于心血管系,统，引起不可逆性休克与死亡，该,毒素存在于细胞内，菌细胞裂解或,白溶后释放。,一、鼠疫耶尔森菌,60,2临床类型,1) 腺鼠疫：局部淋巴结(多为腹股沟淋,巴结)的肿胀、坏死和脓肿；,2) 败血型鼠疫：由细菌侵入血流大量,繁殖所致。可在2-3天内死亡；,3) 肺鼠疫：由腺鼠疫、败血型鼠疫继,发而成，可通过呼吸道在人与人之,间直接传播，引起原发性肺鼠疫，,死亡率极高。,2临床类型,61,(二) 微生物特性,1. G-杆状，0.51.0m，两极浓染，,有荚膜，无芽胞和鞭毛。,2. 抗原构造构造复杂，重要的有(1)F1,抗原:是封套抗原。特异性高，抗原,性强，产生的抗体有良好的保护作,用; (2)VW抗原：是菌体的表面,抗原，与本菌的毒力和侵袭力有关。,(3)T抗原：为为鼠毒素,有良好的抗,原性和免疫原性，可脱毒成类毒素,制成抗毒素。,(二) 微生物特性,62,3. 兼性厌氧，生长温度为2730，最,适pH为6.97.2, 血琼脂培养48h后形成,粗糙菌落，肉汤培养48h后形成菌膜，稍,加摇动后的菌膜钟乳石状下垂；本菌动,力为阴性；IMViC试验反应模式为+,、苯丙氨酸脱氨酶、脲酶、硫化氢,均为阴性；不液化明胶，当穿刺培养时,菌沿穿刺线纵树状发育；分解葡萄糖产,酸不产气，对多数糖不分解：,3. 兼性厌氧，生长温度为2730，最,63,(三) 微生物检验,鼠疫耶尔森菌传染性极强，故应严格遵守操,作规程，一旦疑为本菌，应立即向省市疾病控,制中心等部门报告，并将菌种送检验中心或专,业实验室作进一步的鉴定。鼠疫的确诊主要依,赖病原学诊断，须经全面生化反应、噬菌体裂,解试验和动物实验才得以作出最终鉴定。诊断,确立后除对患者进行隔离治疗外，对疫区及有,关人员须采取有效的预防隔离措施，防止疫情,扩散。,(三) 微生物检验,64,二、小肠结肠炎耶尔森菌,天然寄居在多种动物体内，如猪、鼠,、家畜和兔等。通过污染食物(牛奶、猪,肉等)和水，经粪口途径或因接触染疫,动物而感染。本菌具有侵袭性及肠毒素,为人兽共患病原菌,通过污染食物和水源,经消化道传播，或因接触带菌动物而感,染。临床表现以小肠、结肠炎为多见,还,可引起结节性红斑、反应性关节炎等自,身免疫性疾病。,二、小肠结肠炎耶尔森菌,65,(一) 微生物特性,1G-球杆菌，偶有两极浓染，无芽胞荚,膜，35无动力，2225有动力。,2根据O抗原可分为血清型，我国主要,为O9、O8、O5、O3等几种血清型与,致病性有关。3培养特性 兼性厌氧,耐低温，在440均能生长，最适,温度为2028。在普通琼脂上生,长良好。不发酵乳糖，能分解葡萄糖和,蔗糖产酸不产气，硫化氢阴性，脲酶阳,性，VP试验22-25阳性，35-37,阴性，鸟氨酸脱羧酶阳性。,(一) 微生物特性,66,(三) 微生物检验与鉴定,1. 采集粪便、食物，也取血液，尿液,等标本。,2. 直接涂片镜检 G-球杆菌。,3. 冷增菌 粪便标本可用7ml M15,Ph7.4 PBS 4增菌2-3周。,4. 耶尔森菌专用选择培养基(CIN)的,分离, 培养48h后, 菌落为粉红色。,(三) 微生物检验与鉴定,67,生化反应特征：TSIA(三糖铁)产酸,产酸，不产气，H2S阴性， CIT(枸橼酸,盐)阴性，URE(脲酶)阳性，PHE(苯丙氨,酸)阴性，OXI(氧化酶)阴性，IND(吲哚),阴性阳性，ORN(乌氨酸)阳性MOT(动,力)，V-P，-半乳糖苷酶)等结果与培养,温度有关(22-25阳性，35阴性)。,5. 血清定型。,生化反应特征：TSIA(三糖铁)产酸,68,四、假结核耶尔森菌,鼠和鸟类是天然宿主，人类感染少,见。多数病例为肠道感染，有时可引,起肠系膜淋巴结炎，症状类似阑尾炎。,标本接种选择鉴别培养基, 孵育24h,后为无色(乳糖阴性)的小菌落;,四、假结核耶尔森菌,69,生化反应特征：TSIA(三糖铁)产碱,产酸、不产气，H2S阴性，CIT(枸,橼酸盐)阴性，URE(脲酶)阳性，PHE,(苯丙氨酸)阴性，OXI(氧化阴性，V-P,阴性，IND(吲哚)阴性，MOT(动力),22-25阳性；35阴性；可与鼠疫,耶尔森菌区别。,生化反应特征：TSIA(三糖铁)产碱,70,五、其他耶尔森菌,弗氏、中间、克氏、奥氏、伯氏,、莫氏、罗氏和鲁氏耶尔森菌亦可,从肠道内外标本分离到，生化性状,相似，均能在4以及在CIN上生长,在冷冻食品中增殖，具有潜在的致,病性。,五、其他耶尔森菌,71,、分 类,包括4个种：弗劳地拘橼酸杆菌,异型拘橼酸杆菌, 无丙二酸盐枸橼酸,杆菌和无丙二酸盐拘橼酸杆菌生物,群1群。,第六节 枸橼酸杆菌属,、分 类第六节 枸橼酸杆菌属,72,二、临床意义,为条件致病菌，与腹泻和肠道外感,染有关。,1. 异型枸橼酸杆菌引起新生儿脑炎、,败血症；,2. 弗劳地枸橼酸杆菌引起胃肠道感,染，也可致菌血症及许多感染；,3. 无丙二酸盐拘橼酸杆菌很少在肠,道外部位分离到；有时与G-无芽,胞厌氧菌(产黑色素类杆菌等)合,并感染。,二、临床意义,73,三、微生物特性,1. 为G-杆菌，有动力(周身鞭毛)、无,芽孢、无荚膜。,2. 兼性厌氧，营养要求不高，能在普,通琼脂上生长。在血平板形成边缘,整齐，直径2-4mm的不溶血菌落。,在肠道选择培养基上为乳糖发酵的,菌落。,3. 弗劳地枸橼酸杆菌可产生硫化氢，,生化特性和抗原结构与沙门菌属,相似，应注意鉴别。,三、微生物特性,74,四、微生物检验,1. 直接镜检 G-杆菌 ；,2. 分离培养与鉴定 取可疑菌落乳糖,发酵菌株产生绿色金属光泽； SS上,菌落中央黑色，周围透明；,3. 将可疑菌落用生化、血清学试验进,步鉴定到属和种。,符合肠杆菌科和拘橼酸杆菌属的基本,特性。,四、微生物检验,75,五、枸橼酸杆菌属鉴定,1. 属的鉴别 生化反应与沙门,菌属(亚属1和3)及爱德华菌,属相似, 主要鉴别点是赖氨,酸脱羧酶阴性。,五、枸橼酸杆菌属鉴定,76,2.种间鉴别：弗劳地枸橼酸杆菌大部分菌株吲哚阴性，硫化氢多数阳性(80)而其他几个菌种相反，异型拘橼酸杆菌的生化特征为丙二酸盐和侧金盏花醇阳性，无丙二酸盐枸椽酸杆菌及生物l群之间的区别是后者棉子糖和蜜二糖阳性。,2.种间鉴别：弗劳地枸橼酸杆菌大部分菌株吲哚阴性，硫化氢多数,77,六、基本生化反应特征,TSI(三糖铁)产酸产酸产气或产碱,产酸产气，产生硫化氢，CIT(枸橼,酸盐)阳性，URE (脲酶)阴性阳性，,IND(吲哚)阳性阴性，MOT(动力)阳,性，V-P阴性，ORN(乌氨酸)阳性阴,性，ARG(精氨酸)阳性，LYS(赖氨酸),阴性。,六、基本生化反应特征,78,一、分 类,克雷伯菌属共有7个种：肺炎克雷,伯菌、产酸(催娩)克雷伯菌、解鸟氨,酸克雷伯菌、植生克雷伯菌、臭鼻克,雷伯菌、鼻硬结克雷伯菌和土生克雷,伯菌。,第七节 克雷伯菌属,一、分 类第七节 克雷伯菌属,79,二、临床意义（1）,肺炎克雷伯菌,可引起典型的原发性肺炎；该菌在,口咽带菌率为16，住院病人中,高达20，是酒精中毒者，糖尿病人,和慢性阻塞性肺部疾病患者并发肺部,感染的潜在危险因素。,二、临床意义（1）,80,也能引起肺外感染，包括肠炎和脑,膜炎(婴儿)，泌尿道感染(儿童和成人),及菌血症：由该菌引起的免疫低下患,者感染或医院感染不断增多，本菌对,氨苄西林天然耐药，对头孢菌素、妥,布霉素、阿米卡早和多粘菌素B等敏,感，易产生对第三代头孢菌素耐药。,也能引起肺外感染，包括肠炎和脑,81,二、临床意义（2）,本菌属存在于人和动物的胃肠道内,将近半数的产酸克雷伯菌分离自粪便,其次是血液：土生和植生克雷伯菌也,存在于自然界中，携带耐药质粒，能,引起多重耐药菌感染。,二、临床意义（2）,82,臭鼻克雷伯菌经常从萎缩性鼻炎和鼻,粘膜的化脓性感染中分离到，亦有引起,角膜溃疡的报道，以及从血、尿和其他,组织中分离出该菌的报告，致病范围比,以往所认识的更为广泛。,鼻硬结克雷伯菌引起呼吸道粘膜、口,咽部 鼻和鼻旁窦的感染，导致肉芽肿,性病变和硬结形成,臭鼻克雷伯菌经常从萎缩性鼻炎和鼻,83,三、微生物特性,1. 形态结构,G-杆菌 无鞭毛无芽胞, 有明显的荚膜。,2. 兼性厌氧，营养要求不高，形成较大,、凸起灰白色的粘液菌落，易发生融,合，用接种针沾取时可挑出长丝状细,丝。发酵乳糖产酸在MAC培养基形成,红色的菌落，红色可扩散至菌落周围,的培养中。,三、微生物特性,84,3. 基本生化反应特征： TSI(三糖铁)产,酸产酸产气或产酸产酸，CIT(枸,橼酸盐)阳性，URE(脲酶)阳性阴性,IND (吲哚)阴性，V-P阳性，MOT(动,力)阴性，ORN(鸟氨酸)阴性，丙二酸,盐阳性，DNA酶阴性。,3. 基本生化反应特征： TSI(三糖铁)产,85,1. 标本直接镜检G-杆菌, 有明显的荚,膜。,2. 标本接种在血琼脂或肠道选样鉴别,培养基，37培养挑选粘稠的粉红,色易融合的可疑菌落,进一步鉴定到,属和种。,3. 鉴定 氧化酶阴性，葡萄糖产酸产气,动力阴性，吲哚阴性(产酸克雷伯菌,和解鸟氨酸克雷伯菌阳性)，脲酶阳,性。,1. 标本直接镜检G-杆菌, 有明显的荚,86,克雷伯菌的鉴定,1. 属的鉴定：动力阴性，鸟氨酸脱羧,酶阴性(解鸟氨酸克雷伯菌阳性)。,2. 种的鉴定：肺炎克雷伯菌吲哚阴性,不能在5和10生长，能在41生,长。而产酸克雷伯菌吲哚阳性, 能在,10和4l生长，不能在5生长。,克雷伯菌的鉴定,87,3. 血清学鉴定,荚膜肿胀试验，可用特异性抗血清进行,荚膜肿胀试验加以确认。,方法是将待检菌接种于华弗(Worfel-,Ferguson)培养基(有利于荚膜的产生), 35,1824h培养后，取1滴培养物加于载玻片,上，加墨汁(或美蓝液)1滴，再加抗血清1,滴，混合后加盖玻片，置显微镜油镜下观,察，在菌体周围出现较大的空白圈者判为,阳性：同时作不加抗血清的空白对照以进,行对比。,3. 血清学鉴定,88,4. 肠毒素测定,对小儿肠炎患者除菌种鉴定之外,尚需作肠毒素测定以明确致病性：用,兔肠结扎试验、细胞形态变化等方法,测定，原理及方法同ETEC肠毒素测,定。,4. 肠毒素测定,89,一、分 类,1. 肠杆菌属 包括产气、阴沟、日勾,维、坂崎、泰洛、河生(分2个生物,群)、中间、阿氏、致癌、溶解和,超压肠杆菌11个种。,2. 多源菌属 包括聚团和弥散多源菌2,个种。,3. 哈夫尼菌属 包括蜂房哈夫尼菌1个,种。,第八节 肠杆菌属、多源菌属、,哈夫尼菌属,一、分 类第八节 肠杆菌属、多源菌属、,90,二、临床意义,肠杆菌是正常菌群，能引起条件,致病性感染。常见的是阴沟和产气,肠杆菌，可引起泌尿道、呼吸道和,伤口感染，败血症和脑膜炎, 有很,高的死亡率。治疗过程中易产生多,重耐药性。,二、临床意义,91,坂崎肠杆菌能引起新生儿脑膜炎和,败血症，死亡率高达75。日勾维肠,杆菌能引起泌尿道感染。,可从血和脑脊液中分离得到泰洛肠,杆菌，可从血液、尿液、粪便、伤口,和呼吸道中分离得到阿氏肠杆菌。,河生肠杆菌是水中的细菌，尚无引,起感染的证据。,坂崎肠杆菌能引起新生儿脑膜炎和,92,三、微生物特性,1. G-粗短杆菌，有周鞭毛无芽胞，有,些菌株有荚膜。,2. 兼性厌氧，营养要求不高，在普通,培养基上能够生长，形成大而湿润,的粘液状菌落，选择培养基上形成,乳糖发酵的菌落。,三、微生物特性,93,3. 生化特性及抗原结构(荚膜抗原)与肺,炎克雷伯菌相似，应注意鉴别。生化,反应特征是：TSI(三糖铁)产酸/产酸,产气或产酸/产酸，CIT(枸橼酸盐)阳,性，URE(脲酶)和IND(吲哚)阳性/阴,性，MOT(动力)阳性，V-P阳性阴,性，ORN(鸟氨酸脱羧酶)阳性。,3. 生化特性及抗原结构(荚膜抗原)与肺,94,四、微生物检验,1. 标本直接镜检 G-杆菌。,2. 分离培养 接种鉴别培养基，37 孵,育，挑选乳糖发酵的菌落, 进一步鉴,定到属和种。生化反应特征是：TSI,(三糖铁)产酸产酸产气或产酸产,酸，CIT(枸橼酸盐)阳性，URE(脲酶),和IND(吲哚)阳性阴性, MOT(动力),阳性，V-P阳性阴性，ORN(鸟氨酸,脱羧酶)阳性。,四、微生物检验,95,五、肠杆菌属鉴定,1. 初步鉴定:IMViC试验：为- - +，,大肠埃希菌为+ - -。动力和鸟苷,酸脱羧酶均阳性。,2. 主要菌种间的鉴别：产气肠杆,菌和日勾维肠杆菌对赖氨酸精,氨酸鸟氨酸的反应均为+-+,但前者侧金盏花醇+；,五、肠杆菌属鉴定,96, 阴沟、坂崎和泰洛肠杆菌对赖氨酸,/精氨酸/鸟氨酸的反应均为-/+/+,但坂崎肠杆菌能产生黄色色素；而,阴沟肠杆菌与泰洛肠杆菌在发酵糖,类有区别；, 阿氏肠杆菌的VP、动力和鼠李糖反,应均阴性。, 阴沟、坂崎和泰洛肠杆菌对赖氨酸,97,三、多源菌属,可分离到聚团多源菌，是条件致,病菌。为G-粗短杆菌，有周鞭毛，,无芽胞和荚膜。发酵乳糖不定，阳,性占40。根据分解葡萄糖分两个,生物型，生化反应不规则。,三、多源菌属,98,微生物学检验可参照克雷伯菌属,和肠杆菌属的程序和方法进行。,多源菌属以赖氨酸脱羧酶、精氨,酸双水解酶和鸟氨酸脱羧酶均阴性为,特征。,可用水杨苷试验鉴别本属两个菌种，聚团多源菌为阳性，弥散多源菌为阴性。,微生物学检验可参照克雷伯菌属,99,四、蜂房哈夫尼菌,本菌存在于人和鸟类的粪便中，属条件致病菌，因是混合感染，故在感染中的作用尚不明确。,生化特性与肠杆菌属相似，但分解糖产酸的能力较低，不发酵乳糖、蔗糖、侧金盏花醇、山梨醇等。不产生DNA酶和脂酶可与沙雷菌鉴别。,微生物学检验方法与克雷伯菌属相同。,四、蜂房哈夫尼菌本菌存在于人和鸟类的粪便中，属条件致病菌，因,100,第九节 沙雷菌属,一、分类,包括粘质沙雷菌、沙雷菌液化群、深红沙雷菌、臭味沙雷菌、普城沙雷菌、无花果沙雷菌和虫媒沙雷菌。,第九节 沙雷菌属 一、分类,101,二、临床意义,本菌具有侵袭性并对许多抗生素有耐药性，已成为一种重要的病原菌。,粘质沙雷菌是引起肠道外感染的主要病原菌，与医院内感染的暴发流行有关，可致肺炎、败血症、输血和术后感染及泌尿道感染等。,近来报道臭味沙雷菌与医院感染败血症有关，而普城沙雷菌是致社区感染的菌血症。,二、临床意义本菌具有侵袭性并对许多抗生素有耐药性，已成为一种,102,三、微生物特性,1.为G-小杆菌，有周鞭毛，臭味沙雷菌有微荚膜，无荚膜无芽胞。粘质沙雷菌是最小的细菌，可用于检查滤器的除菌效果。,2.兼性厌氧，营养要求不高，形成不透明红色的菌落。在室温中产生两种色素：灵菌红素和吡羧酸。灵菌红素是非水溶性色素不扩散，而吡羧酸是一种水溶性能扩散的粉红色色素。,3.生化反应特征：TSI(三糖铁)产碱产酸或产酸产酸，CIT(拘橼酸盐)阳性，URE(脲酶)阳性弱阳性 IND(吲哚)阴性，MOT(动力)阳性，ORN(鸟氨酸) 阳性(深红沙雷菌为阴性),丙二酸盐利用阴性(深红沙雷菌为阳性)。,三、微生物特性1.为G-小杆菌，有周鞭毛，臭味沙雷菌有微荚膜,103,四、微生物检验,1.标本直接镜检为G-杆菌。,2.接种肠道选择鉴别培养基，37孵育，挑选可疑菌落进一步鉴定到属和种。,四、微生物检验1.标本直接镜检为G-杆菌。,104,