第十三章--革兰氏阳性产芽孢杆菌教材课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第十三章,革兰氏阳性产芽孢杆菌,第十三章革兰氏阳性产芽孢杆菌,第一节 芽孢杆菌属,(,Bacillus,),本属目前有,34,个正式种和,200,个位置不定的种，大多数为非病原菌。其中,炭疽芽孢杆菌,是人和动物的病原菌，,蜡状芽孢杆菌,可引致食物中毒，另还有一些种为条件致病菌。,第一节 芽孢杆菌属(Bacillus) 本属目前有34个正,炭疽芽孢杆菌,(,B.anthracis,),简称,炭疽杆菌,，是人类、各种家畜和野生动物,炭疽病,的病原体，该菌在兽医学和医学上均占有相当重要的地位。,炭疽芽孢杆菌(B.anthracis) 简称炭疽杆菌，是人类,一、主要生物学特性,（一）形态及染色,G,大杆菌（,5,10m,），无鞭毛，不运动。,动物体内,常,3,5,个菌体连成短链，外有荚膜，不形成芽孢。,培养基中,形成长链，形成芽孢。普通培养基中不形成荚膜，但在含血液、血清的培养基，,CO,2,环境中培养则形成荚膜。,一、主要生物学特性,炭疽杆菌典型形态,炭疽杆菌典型形态,炭疽杆菌培养物涂片,炭疽杆菌培养物涂片,炭疽杆菌的芽孢,炭疽杆菌的芽孢,炭疽杆菌形成芽孢的条件：, 有充分的,O,2, 25,35,有一定的湿度, 中性或弱碱性环境,由于炭疽杆菌在体外可形成芽孢，所以，我国兽医法规定：,禁止解剖死于炭疽的动物尸体。,炭疽杆菌形成芽孢的条件：,（二）生长要求及培养特性,1,、生长要求,37,、有氧、普通培养基,（二）生长要求及培养特性,2,、培养特性,普通琼脂,形成灰白色、不透明、大而扁平、,表面干燥、边缘呈卷发状的菌落。,血 琼 脂,不溶血，个别菌株可轻微溶血。,普通肉汤,24h,后，上部液体透明，管底有白,色絮状沉淀，轻摇试管，沉淀物徐,徐上升，卷绕成团而不散开。,明胶穿刺,倒松树状生长，明胶上部逐渐液化,呈漏斗状。,青霉素培养基,0.5IU,ml,，串珠反应,2、培养特性,炭疽杆菌在普通琼脂培养基上形成的卷发样菌落,炭疽杆菌在普通琼脂培养基上形成的卷发样菌落,炭疽杆菌在血琼脂培养基上形成的菌落,炭疽杆菌在血琼脂培养基上形成的菌落,（三）抵抗力,本菌,繁殖体,的抵抗力并不强，与一般细菌相似。,755,15min,即可将其杀死。,但该菌的,芽孢,抵抗力特别强。煮,15min,通常不能将其杀死，需高压或干烤方能将其杀死。,干燥皮毛上的芽孢，可存活,10,年以上。土壤被其污染，传染性常可保持,20,30,年。,（三）抵抗力,（四）抗原结构,1,、荚膜抗原,为半抗原，成分为多肽，仅见于有毒菌株，与毒力有关。此抗原的抗体无保护作用，但其反应性较特异，可用于血清学鉴定，如荚膜肿胀试验及免疫荧光抗体法等检测的就是这种抗原。,2,、菌体抗原,成分为多糖，与毒力无关，但性质稳定，经腐败和高温处理不被破坏，可与炭疽阳性血清发生沉淀反应，故可用于皮毛等畜产品的检验。,（四）抗原结构,3,、保护性抗原（,PA,）,是一种胞外蛋白质抗原，为炭疽毒素的组成成分之一，具有免疫原性，能使机体产生抗炭疽杆菌感染的保护力。,4,、芽孢抗原,是芽孢外膜层含有的抗原决定簇，它与皮质一起组成炭疽芽孢的特异性抗原，具有免疫原性和血清学诊断价值。,3、保护性抗原（PA）,二、致病性,（一）毒力因子,1,、荚膜,增强细菌的抗吞噬能力，有利于细菌扩散。,2,、炭疽毒素,(,anthrax toxin,),包括水肿毒素及致死毒素两种。毒性作用主要是损伤微血管的内皮，增强微血管的通透性，改变血液循环动力学，损害肾脏功能，干扰糖代谢，血液呈高凝状态，易形成感染性休克和弥漫性血管内凝血，最后导致动物死亡。,二、致病性,炭疽毒素由三种亚单位构成。,水肿因子（,edema factor,EF,）,致死因子（,lethal factor,LF,）,保护性抗原（,protective antigen,PA,）,三者单独存在均无毒性，只有,PA,与,EF,或,者,LF,结合才有毒性作用。,炭疽毒素由三种亚单位构成。,（二）所致疾病,本菌可致各种家畜、野兽和人类的炭疽病。主要通过消化道传染，但也可经呼吸道及皮肤创伤或通过吸血昆虫传播。,草食动物,急性败血症,肉食动物,胃肠炎、咽炎,杂食动物,慢性咽喉肿胀或隐性感染,人,肠炭疽、肺炭疽或皮肤炭疽,实验动物,小白鼠、豚鼠、家兔均易感,（二）所致疾病,死于炭疽的牛瘤胃鼓气，天然孔流血，肛门突出,死于炭疽的牛瘤胃鼓气，天然孔流血，肛门突出,病猪咽喉部肿大,病猪咽喉部肿大,死于炭疽的牛脾脏显著肿大,死于炭疽的牛脾脏显著肿大,人的皮肤炭疽,人的皮肤炭疽,人的皮肤炭疽,人的皮肤炭疽,三、微生物学诊断,死于炭疽的病畜尸体严禁剖检。,炭疽尸体特征变化：,天然孔出血、血凝不良、尸僵不全、腹部鼓胀、可视粘膜发绀、皮下结缔组织呈黄色胶样浸润。,确诊可作细菌学检查和血清学检查。,三、微生物学诊断,（,一）细菌学检查,1,、病料采集,生前：水肿液或血液,死后：耳朵,肠炭疽：粪便,若已错剖畜尸，可采取脾、肝等进行检验，尸体就地深埋,2,米以下，表面用,20%,的石灰乳消毒。,（一）细菌学检查,2,、镜检,病料涂片干燥后，在,10%,的福尔马林溶液或在,0.1%,升汞中浸泡,10,15,分钟，然后用美蓝或瑞氏染色法染色镜检，如发现有荚膜的竹节状大杆菌，即可作出初步诊断。,2、镜检,3,、分离培养,可用普通琼脂或血琼脂平板，得到的纯培养物可作以下鉴定：, 噬菌体裂解试验, 青霉素抑菌试验, 荚膜形成试验, 串珠试验, 溶血试验,3、分离培养,4,、动物试验,将被检材料制成,1,：,5,悬液，皮下注射小鼠、豚鼠或家兔。动物通常于注射后,24,72h,死于败血症。,剖检可见注射部位胶样浸润及脾脏肿大等病理变化。取血液、脏器涂片镜检，当发现竹节状有荚膜的大杆菌时，即可诊断。,4、动物试验,（二）血清学检查,多用已知抗体检查被检的抗原。,如：,炭疽环状沉淀反应（,Ascoli,氏反应）,协同凝集试验,串珠荧光抗体检查,琼脂扩散试验,酶标,SPA,间接染色法,（二）血清学检查,四、免疫防治,1,、,号炭疽芽孢苗,用于牛、马、驴、骡、骆驼、绵羊、山羊和猪。注射后,14d,即可产生坚强免疫力，免疫期一年。,2,、无毒炭疽芽孢苗,适用于牛、马、驴、骡、绵羊和猪，免疫期一年。此苗对山羊反应强烈，可引起严重局部反应，有的甚至发生死亡，故禁用于山羊。,3,、抗炭疽血清,可用于治疗，或在发生炭疽的疫区作紧急预防。,四、免疫防治,第二节 梭菌属,(,Clostridium,),梭菌是一群,G,大杆菌，均能形成芽孢，芽孢直径多超过菌体横经，芽孢位于菌体中央时，使菌体膨胀变形呈梭形，故名,梭状芽孢杆菌,，简称,梭菌,。,本属细菌均为厌氧菌，绝大多数严格厌氧，少数可在微氧环境生长。,第二节 梭菌属(Clostridium)梭菌是一群G大杆,本属有,74,个正式种和,100,多个位置不定的种。分布于土壤、污水、海洋沉积物、腐烂的植物、动植物产品、人和其他动物及昆虫的肠道、人与动物的伤口及软组织感染灶。,多数为非病原菌，约有,30,梭菌具有弱致病性，约有,10,种梭菌具有强致病性，多为人兽共患病病原。,本属有74个正式种和100多个位置不定的种。分布于土壤、污水,常见病原梭菌及其所致疾病,细菌种型 所致疾病,产气荚膜梭菌,A,型,(,C.Perfringens type A,),恶性水肿，人食物中毒,产气荚膜梭菌,B,型,(,C.Perfringens type B,),羔羊痢，驹、绵羊、山羊肠毒血症,产气荚膜梭菌,C,型,(,C.Perfringens type C,),羊猝狙，犊牛、羔羊、仔猪肠毒血,症，人、禽类坏死性肠炎,产气荚膜梭菌,D,型,(,C.Perfringens type D,),绵羊、山羊、牛肠毒血症,产气荚膜梭菌,E,型,(,C.Perfringens type E,),犊牛、羔羊痢疾,气肿疽梭菌,(,C.chauvoei,),气肿疽,腐败梭菌,(,C.septiccum,),恶性水肿、羊快疫,诺维梭菌,A,型,(,C.novyi type A,),恶性水肿,诺维梭菌,B,型,(,C.novyi type B,),黑疫,诺维梭菌,C,型,(,C.novyi type C,),水牛骨髓炎,溶血梭菌,(,C.haemoiyticum,),牛、羊细菌性血红素尿,肉毒梭菌,A,F,型,(,C.Botulinum type A,F,),动物和人肉毒中毒症,阿根廷梭菌,(,C.argentinense,),人肉毒中毒症（阿根廷）,破伤风梭菌,(,C.tetani,),破伤风,艰难梭菌,(,C.difficiie,),人、犬、猪、驹肠炎、腹泻,常见病原梭菌及其所致疾病 细菌种型,梭菌病的分类及诊断,梭菌病，按性质和症状大致可分为,5,类。,气肿疽与恶性水肿,快疫与类快疫,痢疾与肠炎,食物中毒,破伤风,除第一类外，其余主要是由细菌毒素所致，所以,诊断重点应是毒素检查,。而气肿疽与恶性水肿是由细菌感染引起，诊断应进行细菌学检查。,梭菌病的分类及诊断,一、产气荚膜梭菌,(,Cl.perfringens,),又名魏氏梭菌、产气荚膜杆菌。,该菌是羔羊痢、羊猝狙和羊肠毒血症的病原体，也可引起人恶性水肿。,一、产气荚膜梭菌(Cl.perfringens) 又名魏氏梭,（一）形态及染色,G,大杆菌，长约,l.3,19.0m,，单独散在。无鞭毛。芽孢位于菌体中央，使菌体膨胀呈梭形。多数菌株可形成荚膜。,（一）形态及染色,（二）生长要求及培养特性,生长要求,在厌氧，加葡萄糖、血液或血清的培养基中培养。,（二）生长要求及培养特性,培养特性,生长迅速，,8min,繁殖一代。,血琼脂,形成灰白色、边缘整齐的圆顶状菌落或边缘呈锯齿状的大菌落。大多数菌株可产生双层溶血环。,葡萄糖血清琼脂,灰白色，半透明，,“,勋章,”样的大菌落,。,厌氧肝汤,培养,5,6 h,即呈均匀浑浊，并产生大量气体。,培养特性,（三）生化特性,最突出的是对牛乳培养基的,“,暴烈发酵,”,。,（三）生化特性,（四）分型,该菌至少可产生,20,种外毒素，毒素以小写希腊字母表示，其中,、,、,和,是主要致死毒素，其余为次要致死毒素和非致死性毒素。,根据主要致死毒素与其抗毒素的中和试验可将此菌分为,A,、,B,、,C,、,D,和,E 5,个型。,（四）分型,（五）致病性,本菌致病的主要物质是其产生的毒素。,A,型菌,人气性坏疽和食物中毒,B,型菌,羔羊痢,C,型菌,羊猝狙,(struck),D,型菌,羊、牛的肠毒血症,E,型菌,犊牛、羔羊肠毒血症,（五）致病性,羊肠毒血症,:,肠道浆膜、粘膜充血、出血,羊肠毒血症: 肠道浆膜、粘膜充血、出血,仔猪梭菌性肠炎，小肠严重出血,仔猪梭菌性肠炎，小肠严重出血,（六）微生物学诊断,A,型,所致气性坏疽的微生物学诊断，主要依靠细菌分离鉴定。,其余各型,所致的疾病，均系细菌在肠道内产生毒素所致，诊断重点是作肠毒素检查。,（六）微生物学诊断,毒素检查方法,取回肠内容物，加,5,10,倍灭菌生理盐水稀释，离心沉淀取上清液，即检样。,检样分成两份，一份不加热，一份煮沸,30 min,，然后分别静脉注射家兔,(1,2m1),或小鼠,(0.1,0.3m1),。,如不加热组动物死亡，加热组动物不死亡，证明有毒素存在。,确定毒素的型，须进一步做毒素中和保护试验。,毒素检查方法,中和试验方法,将未煮沸的上清液分为,4,份，每份,1ml,，分别加入,B,、,C,、,D,型抗毒素及生理盐水,1ml,，混合均匀后在,37,下作用,40min,，然后分别静脉注射小鼠或家兔一组，观察,24h,，记录各组动物的死亡及存活情况，判定菌型。,此外，毒素检查亦可用,PCR,技术。,中和试验方法,（七）免疫防治,预防羔羊痢、猝狙、肠毒血症以及仔猪肠毒血症等，可用厌氧菌三联苗或五联苗。,三联苗,（快疫,-,猝狙,-,肠毒血症）,五联苗,（羊快疫,-,猝狙,-,肠毒血症,-,羔羊痢疾,-,黑疫）,五联菌苗免疫期，除对羊快疫较短外，对其它四病可达一年。,（七）免疫防治,二、肉毒梭菌,(,C1.botulinum,),肉毒梭菌是一种腐生性的,G,大杆菌，专性厌氧。该菌分布于土壤，海洋和湖泊的沉积物，哺乳动物、鸟类和鱼的肠道，饲料以及食品中。当有适宜营养且获得厌氧环境时，即可生长繁殖并产生肉毒毒素。人畜食入含此毒素的食品、饲料时即可发生肉毒中毒症,(botulism),。,二、肉毒梭菌(C1.botulinum)肉毒梭菌是一种腐生性,（一）主要特性,1,、形态染色,革兰氏阳性大杆状，形成芽孢，有,周鞭毛。,2,、培养,专性厌氧，产毒最适温度,25,30,。,血琼脂：,直径,1,6mm,不规则菌落，,溶血,（一）主要特性,第十三章-革兰氏阳性产芽孢杆菌教材课件,3,、肉毒毒素,肉毒毒素是一类锌结合蛋白质，具蛋白酶活性，性质稳定，是毒性最强的神经麻痹毒素之一。,该毒素可作用于胆碱能神经末梢，阻断乙酰胆碱的释放，导致肌肉麻痹。,3、肉毒毒素,（二）细菌分型及所产毒素,菌型 毒素类型 最易感动物 毒素来源,A A,人、鸡、貂 蔬菜、水果、肉、鱼,B B,人 肉及肉制品、蔬菜、鱼,C C,1,、,D,水禽 无脊椎动物,C C,2,、,D,牛、马、貂、犬 尸体、青贮饲料,D C,2,、,D,牛、绵羊 小动物尸体,E E,人、鱼类、野鸟 鱼及鱼制品、鱼塘污泥,F F,人 肝酱、鱼,根据毒素抗原性的差异，分为,7,个型。,（二）细菌分型及所产毒素 菌型 毒素类型 最易,（三）致病性,A,、,B,型毒素：引起马、牛、水貂等动物饲,料中毒和鸡软颈病。,C,型毒素：主要引起禽类、马、牛、羊,以及水貂肉毒中毒症。,D,型毒素：是南非和澳大利亚牛、绵羊,肉毒中毒的病因。,A,、,B,、,E,及,F,型毒素引起人的食物中毒。,（三）致病性,（四）微生物学诊断,主要是检查肉毒毒素，定型用毒素中和试验。,此外，也可用间接血凝试验或琼脂扩散试验检测毒素。,（四）微生物学诊断,（五）免疫防治,在动物肉毒中毒症常发地区，可用,明矾沉淀类毒素,作预防注射，有效免疫期可持续半年至一年，也可用,氢氧化铝或明矾菌苗,接种。,（五）免疫防治,三、气肿疽梭菌,(,C1.chauvoei,),（一）病原性,又名费氏梭菌,(Cl.feseri),，俗称黑腿病杆菌，为,气肿疽,的病原体。,此病主要发生于幼牛,(6,个月,3,岁,),，通过消化道或创伤感染而发病，症状主要是在肌肉丰满部位发生气性水肿，触诊时有捻发音。受害肌肉常呈暗红色到黑色，并常伴有跛行，故又称为,黑腿病,(Blackleg),。,三、气肿疽梭菌(C1.chauvoei) （一）病原性,（二）诊断,主要根据镜检、分离培养、生化反应及动物试验等。,要注意与腐败梭菌鉴别。,（三）免疫防治,菌苗有,氢氧化铝甲醛菌苗,和,明矾甲醛菌苗,两种。注射后,14d,能产生可靠免疫力，免疫期均为半年。,（二）诊断,四、腐败梭菌,(,CI.septicum,),又名腐败杆菌、腐败弧菌、恶性水肿杆菌,（一）病原性,该菌经创伤侵入动物体内可引起动物和人的,恶性水肿，经消化道感染可引起羊快疫。,（二）诊断,主要是细菌学诊断，注意与气肿疽梭菌及其,它梭菌鉴别。,（三）免疫防治,对羊快疫的免疫预防，我国现用厌氧菌三联,苗或五联苗。,四、腐败梭菌(CI.septicum) 又名腐败杆菌、腐败,腐败梭菌与气肿疽梭菌的鉴别要点,项 目 腐 败 梭 菌 气肿疽梭菌,动物肝触片 菌体呈长丝状 散在、带芽孢大杆菌,血琼脂平板菌落 呈花边状 呈钮扣状,杨苷发酵, ,蔗糖发酵, ,对家兔致病力 强 弱,本动物发病特点 马皮下组织恶性水肿 幼牛肌肉气性水肿,腐败梭菌与气肿疽梭菌的鉴别要点 项 目,五、诺维梭菌,(,C1.novyi,),（一）分型,此菌可产生,8,种毒素，按其毒素的差异，可分为,A,、,B,、,C,3,个不同的菌型。,溶血梭菌因产生的几种毒素与诺维梭菌相同，故曾称为,D,型诺维梭菌。,五、诺维梭菌(C1.novyi)（一）分型,（二）致病性,A,型菌 人气性坏疽、动物恶性水肿,B,型菌 绵羊的黑疫,C,型菌 水牛骨髓坏死,D,型菌 牛细菌性血红蛋白尿病,（三）微生物学诊断,可采用细菌学检查和毒素检查。,（,四）免疫防治,可用甲醛菌苗和厌氧菌五联苗预防。,（二）致病性,六、破伤风梭菌,(,C1.tetani,),又名破伤风杆菌,(,Bacillus tetani,),，是人畜破伤风的病原。本病以骨骼肌发生强直性痉挛为特征，故又称为强直症，此菌也因之称为强直梭菌。,六、破伤风梭菌(C1.tetani) 又名破伤风杆菌(Bac,（一）主要生物学特性,1,、形态,本菌,G,大杆菌，多单在，无荚膜，有周鞭毛能运动。形成芽孢时使菌体呈鼓槌状。,（一）主要生物学特性,第十三章-革兰氏阳性产芽孢杆菌教材课件,2,、培养,厌氧，,37,，普通培养基中即能生长。,血琼脂,菌落周围有轻度溶血环。,厌氧肉肝汤,轻微混浊生长，肉渣部分消化且微变黑，产生气体并散发特殊臭味。,2、培养,（二）致病性,致病物质,为,破伤风痉挛毒素,，该毒素可引起神经兴奋性的异常增高和骨骼肌痉挛。,所致疾病,感染人和多种动物，引起,破伤风,。,（二）致病性,（三）微生物学诊断,破伤风临床症状特征，一般不需微生物学诊断。必要时可进行细菌学检查。,（四）免疫防治,主动免疫：,明矾沉淀破伤风类毒素,紧急预防及治疗：,破伤风抗毒素,（三）微生物学诊断,