枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶培训ppt课件

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶,枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶,1,（优选）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶,（优选）枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶,2,二、实验原理,酶可由动物（如胰蛋白酶、胃蛋白酶）、植物（如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶）和微生物（细菌、霉菌、酵母）产生，其中工业酶制剂大多数由微生物发酵法生产。,由于微生物世代时间短，繁殖快、容易培养和管理，可大规模工业化生产，所以工业酶制剂大多由微生物发酵产生。,产酶微生物的获得：,1,、从有关菌种保藏机构购买,2,、从自然界分离筛选,二、实验原理酶可由动物（如胰蛋白酶、胃蛋白酶）、植物（如木瓜,3,产酶微生物的分离筛选方法,1),样品的采集：从富含酶作用底物的场所采集样品。,2),富集培养,:,投其所好，取其所抗。,3),分离获得纯培养,(pure culture),的微生物。,4),初筛：选出产酶菌种，以多为主。,5),复筛：选出产酶水平相对较高的菌株，以质为主。,产酶微生物的分离筛选方法1)样品的采集：从富含酶作用底物的场,4,产酶工艺条件及其调节控制,保藏细胞,细胞活化,细胞扩大培养,发酵产酶,分离纯化,酶,固定化细胞,原生质体,固定化原生质体,培养基,预培养,无菌空气,产酶工艺条件及其调节控制保藏细胞细胞活化细胞扩大培养发酵产酶,5,酶制剂的发酵生产过程图解,酶制剂的发酵生产过程图解,6,30,升全自动发酵罐,30升全自动发酵罐,7,枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶培训ppt课件,8,枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶培训ppt课件,9,发酵工艺参数的控制,pH,的调节控制,温度的调节控制,溶解氧的调节控制,泡沫的控制,染菌的控制,发酵工艺参数的控制pH的调节控制,10,酶的提取与分离纯化的工艺流程,发酵液,预处理（细菌絮凝）,固液分离（离心、过滤）,菌体（胞内酶）,动植物源酶,液体（胞外酶）,细胞破碎,提取,固液分离,液体,酶的提取与分离纯化的工艺流程发酵液预处理（细菌絮凝）固液分离,11,酶的比活力是酶纯度的一个指标，是指在特定条件下，单位重量（mg）蛋白质或RNA所具有的酶活力单位数。,001 g)可溶性淀粉(以绝干计)于烧杯中，用少量水调成浆状物，边搅拌边缓缓加入70 mL沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯，洗液倒人其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至100 mL。,外观：棕褐色液体 溶解性：易溶于水,在喷射液化工艺中瞬间温度达 105-110，仍能有效水解淀粉。,发酵结束时，显微镜检查每个发酵瓶是否污染，若无污染合并发酵液并测定发酵酶活力。,00 mL，用少量磷酸缓冲液充分溶解，将上清液小心倾入容量瓶中，若有剩余残渣，再加少量磷酸缓冲液充分研磨，最终样品全部移入容量瓶中，用磷酸缓冲液定容至刻度，摇匀。,4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。,液体剂型酶制剂和固体剂型酶制剂。,称取1 g 2 g酶粉(精确至0.,0条件下，1小时液化可溶性淀粉的克数。,本产品适用于酒精、啤酒、味精、发酵工业的液化以及纺织退浆等。,固液分离（离心、过滤）,中温 -液化型淀粉酶系用枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis)经发酵提炼精制而成。,酶活力测定的基本步骤：,3、工艺条件： 查资料，自行设计,（摇瓶发酵生产-淀粉酶）,(2) 根据酶的动力学性质，确定酶催化反应的温度、pH值、底物浓度、激活剂浓度等反应条件。,0 g碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至500 mL，贮存于棕色瓶中。,2、仪器耗材：恒温培养箱、冰箱、高压灭菌锅、无菌操作台、摇床、托盘天平、分析天平、电炉、白色搪瓷杯、三角瓶、量筒、纱布、绳子、pH 试纸、玻棒等。,按产品的适用温度分为:,工业、食品、饲料,浓缩,（蒸发、超滤、沉淀）,浓缩液,配方,干燥,医药、分析、科研,液体酶,固体酶,浓缩,分离纯化,（离心、沉淀、膜分离、,层析、电泳、萃取、结晶）,配方、制剂,干燥,液体酶,固体酶,酶的比活力是酶纯度的一个指标，是指在特定条件下，单位重量（m,12,酶活力的测定,酶活力：,也称酶活性，酶催化一定化学反应的能力。,酶活力大小可用在一定条件下，它所催化的某一化学反应的起始速率,V,0,表示，即用反应起始阶段产物增加,(,或底物减少,),的速率表示。,v,= -dS/d,t,=dP/d,t,酶活力的测定酶活力：v = -dS/dt =dP/dt,13,酶活力测定方法,酶活力测定的要求：快速、简便、准确。,包括两个阶段：,1,、将酶与反应底物混合均匀，在一定条件下反应一段时间；,2,、测定反应液中底物或产物的变化量。,酶活力测定方法酶活力测定的要求：快速、简便、准确。,14,酶活力测定的基本步骤：,(1),根据酶催化的专一性，选择适宜的底物，并配制成一定浓度的底物溶液。,(2),根据酶的动力学性质，确定酶催化反应的温度、,pH,值、底物浓度、激活剂浓度等反应条件。,(3),在一定的条件下，将一定量的酶液和底物溶液混合均匀，适时记下反应开始的时间。,(4),反应到一定的时间，取出适量的反应液，运用各种生化检测技术，测定产物的生成量或底物的减少量。,注意：若不能即时测出结果的，则要及时终止反应，然后再测定。,酶活力测定的基本步骤：(1) 根据酶催化的专一性，选择适宜的,15,终止酶反应的方法：,加热使酶失活；,加入适宜的酶变性剂（如三氯醋酸）；,调节,pH,值；,低温终止反应。,终止酶反应的方法：,16,酶活力测定方法,根据测量操作过程,终止反应法：在恒温反应系统中进行酶促反应，间隔一定时间取样，终止反应，进行测定。,连续反应法：基于反应过程中光谱吸收、酸碱度等变化用仪器跟踪反应的进程、记录结果。,酶活力测定方法根据测量操作过程,17,酶活力测定方法,根据底物或产物的物理化学性质,化学测定法、光学测定法、气体测定法等。,如化学滴定、比色法、紫外光吸收、荧光测定、同位素标记底物或称放射性化学法、酶偶联法等。,其中化学滴定、紫外、可见光比色法最为常用。,酶活力测定方法根据底物或产物的物理化学性质,18,酶的反应速度的影响因素,酶的反应速度受到许多条件的影响：底物浓度、温度、,pH,、金属离子等,要准确地测定酶的活力，必须满足这些前提条件。,最适反应条件：最适底物浓度、最适,pH,、最适温度、最适离子强度、必要的辅助因子；保证测定的是,V,0,，即线性部分,酶的反应速度的影响因素酶的反应速度受到许多条件的影响：底物浓,19,酶活力单位,国际单位：,1961,年国际生物化学与分子生物学联合会规定：在特定条件下，每,1 min,催化,1 mol,的底物转化为产物的酶量定义为,1,个酶活力单位。这个单位称为国际单位（,IU,）,国际上另一个常用的酶活力单位是卡特（,Kat,）。在特定条件下，每秒催化,1 mol,底物转化为产物的酶量定义为,1,卡特（,Kat,）。,酶活力单位国际单位：,20,酶的比活力,酶的比活力是酶纯度的一个指标，是指在特定条件下，单位重量（,mg,）蛋白质或,RNA,所具有的酶活力单位数。,酶活力：样品中酶总共有多少个酶单位。,比活力：每,mg,蛋白质中有多少个酶单位。,酶比活力酶活力（单位）,/ mg,（蛋白或,RNA,）,可用以比较每单位质量酶蛋白的催化能力。,对同一种酶，比活力可以代表酶的纯度，比活力愈高，表示酶愈纯。在酶纯化过程中，比活力增高。,酶的比活力酶的比活力是酶纯度的一个指标，是指在特定条件下，单,21,淀粉水解酶类,凡是能催化淀粉（或糖元）分子及其分子片段中的,-,葡萄糖苷键水解的酶，统称为淀粉酶，包括,-,淀粉酶，糖化酶，,-,淀粉酶，异淀粉酶，环状糊精生成酶，麦芽寡糖生成酶等。,广泛应用于淀粉糖工业、酒精、啤酒、味精、酿造、烘焙、饲料、纺织退浆、医药等领域。,淀粉水解酶类凡是能催化淀粉（或糖元）分子及其分子片段中的-,22,中温 -液化型淀粉酶系用枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis)经发酵提炼精制而成。,大规模液体深层发酵之前，首先在实验室对保藏的目的菌种进行活化和扩大培养，制得生产种子。,大规模液体深层发酵之前，首先在实验室对保藏的目的菌种进行活化和扩大培养，制得生产种子。,3、工艺条件： 查资料，自行设计,酶活力测定的基本步骤：,5 mL，摇匀后，置于600.,2)富集培养: 投其所好，取其所抗。,外观：棕褐色液体 溶解性：易溶于水,枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶,5 mL盐酸溶液和5.,n样品的稀释倍数（可通过反应时间和加入固定化酶的量来控制）。,溶解性：易溶于水,2(耐高温-淀粉酶制剂置于700.,液体剂型酶制剂和固体剂型酶制剂。,国际上另一个常用的酶活力单位是卡特（Kat）。,按产品的适用温度分为:,2、测定反应液中底物或产物的变化量。,2、培养基的准备： 查资料，自行设计,热稳定性：需Ca 2+ 150ppm，最适作用温度 60-70，在70-90之间，随着温度升高，其反应速度加快，但失活也加快，适用于最高达90的液化过程。,000 g(精确至0.,-,淀粉酶,alpha-amylase,能水解淀粉分子链中的,-1, 4-,葡萄糖苷键，将淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉粘度迅速下降的酶制剂。,产品分类,按产品的适用温度分为,:,中温,-,淀粉酶制剂和耐高温,-,淀粉酶制剂。,按产品形态分为：,液体剂型酶制剂和固体剂型酶制剂。,中温 -液化型淀粉酶系用枯草芽孢杆菌（Bacillus S,23,枯草杆菌摇瓶发酵生产淀粉酶培训ppt课件,24,中温,-,淀粉酶,中温,-,液化型淀粉酶系用枯草芽孢杆菌（,Bacillus Subtilis,),经发酵提炼精制而成。,用 途：,本产品适用于酒精、啤酒、味精、发酵工业的液化以及纺织退浆等。,产品特性：,物理特性,外观：棕褐色液体,溶解性：易溶于水,比重：,1.15-1.25g/ml,中温 -淀粉酶中温 -液化型淀粉酶系用枯草芽孢杆菌（Ba,25,化学物性,热稳定性：需,Ca,2+,150ppm,，最适作用温度,60-70,，在,70-90,之间，随着温度升高，其反应速度加快，但失活也加快，适用于最高达,90,的液化过程。,pH 6.0-7.0,较为稳定；最适作用,pH 6.0,，,pH5.0,以下失活严重。,产品规格：,1,， 中温,-,淀粉酶分为固体和液体两种剂型。,固体分为,2000,、,4000u/g, 6000u/g,三种。液体为,2000 u/ml,2,，酶活力定义：,1ml,酶液,(1g,酶粉,),在,60 ,，,pH6.0,条件下，,1,小时液化可溶性淀粉的克数。,化学物性,26,耐高温,-,淀粉酶,耐高温,-,淀粉酶采用地衣芽孢杆菌经深层培养，提取等工序精制而成，能随机水解淀粉、糖原及其降解物内部的,-1,，,4,葡萄糖苷健使得胶状淀粉溶液的粘度迅速下降，产生可溶性糊精和寡聚糖，过度的水解可产生少量葡萄糖和麦芽糖。,用途： 耐高温,-,淀粉酶具有极好的耐热性，能广泛应用于淀粉、酒精、啤酒、味精、酿造、纺织退浆等工业上。,产品特性,: (,物理特性,),外观：棕褐色液体 溶解性：易溶于水,比重：,1.15-1.25g/ml,耐高温 -淀粉酶耐高温 -淀粉酶采用地衣芽孢杆菌经深层培,27,化学物性,钙离子对酶活稳定性的影响：较低浓度的钙离子存在，本品即可有很好的稳定性，对于淀粉的水解，推荐加入,50-100ppm,钙离子。,pH,范围：,5.5-7.0,最适,6.0,温度范围：,90-95,在喷射液化工艺中瞬间温度达,105-110,，仍能有效水解淀粉。,产品规格：,1,，耐高温,-,淀粉酶为液体酶制剂。酶活力：,20000u/ml,。,2,，酶活力定义：,1ml,酶液在,70 ,，,pH6.0,条件下，,1,分钟液化可溶性淀粉的毫克数。,化学物性,28,-,淀粉酶制剂的理化要求,-淀粉酶制剂的理化要求,29,-,淀粉酶制剂的卫生要求,-淀粉酶制剂的卫生要求,30,三、实验内容,微生物发酵法是酶制剂生产的主要方法。发酵生产中多用液体深层发酵法制备酶。,大规模液体深层发酵之前，首先在实验室对保藏的目的菌种进行活化和扩大培养，制得生产种子。,扩大培养多采用摇瓶培养，即在锥形瓶中加入一定量的液体培养基，在摇床上以一定转速摇动进行恒温培养。,摇瓶培养也是实验室模拟生产上进行发酵产酶的一种模拟实验。（摇瓶发酵生产,-,淀粉酶）,发酵液酶活力的测定。,三、实验内容微生物发酵法是酶制剂生产的主要方法。发酵生产中多,31,（一）摇瓶发酵产酶,仪器和试剂,1,、菌种：枯草芽孢杆菌,2,、仪器耗材：恒温培养箱、冰箱、高压灭菌锅、无菌操作台、摇床、托盘天平、分析天平、电炉、白色搪瓷杯、三角瓶、量筒、纱布、绳子、,pH,试纸、玻棒等。,（一）摇瓶发酵产酶仪器和试剂,32,实验步骤,1,、菌种：枯草杆菌（已活化好，每组,1,支）,2,、培养基的准备： 查资料，自行设计,3,、工艺条件： 查资料，自行设计,4,、菌种的制备：将斜面菌种在无菌条件下接种至液体种子培养基中，在一定温度、转速下培养。,5,、发酵：将摇床培养好的种子培养液接入发酵培养基中，接种量为,5 mL,，共接,3,瓶（,100ml/250ml,瓶），做好标记。,实验步骤1、菌种：枯草杆菌（已活化好，每组1支）,33,实验步骤,发酵结束后：检查是否染菌,固液分离：方法自定；,发酵结束时，显微镜检查每个发酵瓶是否污染，若无污染合并发酵液并测定发酵酶活力。,实验步骤发酵结束后：检查是否染菌,34,（二）酶活测定,原理：,-,淀粉酶制剂能将淀粉分子链中的,-,1,4-,葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈篮紫色的特性反应逐渐消失，呈现棕红色，其颜色消失的速度与酶活性有关，据此可通过反应后的吸光度计算酶活力。,（二）酶活测定原理：-淀粉酶制剂能将淀粉分子链中的- 1,35,酶活定义,中温,a,一淀粉酶活力：,1g,固体酶粉,(,或,1 mL,液体酶,),，于,60,、,pH=6.0,条件下，,1h,液化,1g,可溶性淀粉所需的酶量，即为,1,个酶活力单位，以,u/g(u/mL),表示。,耐高温,a-,淀粉酶活力：,1g,固体酶粉,(,或,1 mL,液体酶,),，于,70,、,pH =6.0,条件下，,1 min,液化,1 mg,可溶性淀粉所需的酶量，即为,1,个酶活力单位，以,u/g(u/mL),表示。,酶活定义 中温a一淀粉酶活力：,36,固液分离（离心、过滤）,其中化学滴定、紫外、可见光比色法最为常用。,2、测定反应液中底物或产物的变化量。,3、工艺条件： 查资料，自行设计,0 g碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至500 mL，贮存于棕色瓶中。,其中化学滴定、紫外、可见光比色法最为常用。,中温a一淀粉酶活力：,酶比活力酶活力（单位）/ mg （蛋白或RNA）,外观：棕褐色液体 溶解性：易溶于水,本产品适用于酒精、啤酒、味精、发酵工业的液化以及纺织退浆等。,碘、碘化钾、 -淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。,X1 = c n,2、测定反应液中底物或产物的变化量。,5 mL，摇匀后，置于600.,1， 中温 -淀粉酶分为固体和液体两种剂型。,要准确地测定酶的活力，必须满足这些前提条件。,国际上另一个常用的酶活力单位是卡特（Kat）。,外观：棕褐色液体 溶解性：易溶于水,001 g)可溶性淀粉(以绝干计)于烧杯中，用少量水调成浆状物，边搅拌边缓缓加入70 mL沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯，洗液倒人其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至100 mL。,3、工艺条件： 查资料，自行设计,实验仪器及试剂,仪器：,分光光度计、恒温水浴锅（控温精度,0. 1,）、移液管、试管、烧杯、容量瓶、玻璃棒、秒表。,固液分离（离心、过滤）实验仪器及试剂仪器：,37,试剂及溶液,试剂：,碘、碘化钾、,-,淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。,溶液配制：,原碘液：称取,11.0 g,碘和,22.0 g,碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至,500 mL,，贮存于棕色瓶中。,稀碘液：吸取原碘液,2.00 mL,，加,20.0 g,碘化钾用水溶解并定容至,500 mL,，贮存于棕色瓶中。,试剂及溶液试剂：,38,试剂及溶液,溶液配制：,可溶性淀粉溶液,(20 g/ L),：称取,2. 000 g(,精确至,0. 001 g),可溶性淀粉,(,以绝干计,),于烧杯中，用少量水调成浆状物，边搅拌边缓缓加入,70 mL,沸水中，然后用水分次冲洗装淀粉的烧杯，洗液倒人其中，搅拌加热至完全透明，冷却定容至,100 mL,。溶液现配现用。,磷酸缓冲液,(pH=6.0),：称取,45. 23 g,磷酸氢二钠,(Na,2,HPO,4,12H,2,O),和,8. 07 g,柠檬酸,(C,6,H,8,O,7,H,2,O),，用水溶解并定容至,1 000 mL,。用,pH,计校正后使用。,盐酸溶液：,c ( HCI) = 0. 1 mol/L,。,试剂及溶液溶液配制：,39,实验方法,待测酶液的制备：,称取,1 g 2 g,酶粉,(,精确至,0.000 1 g),或准确吸取酶液,1.00 mL,，用少量磷酸缓冲液充分溶解，将上清液小心倾入容量瓶中，若有剩余残渣，再加少量磷酸缓冲液充分研磨，最终样品全部移入容量瓶中，用磷酸缓冲液定容至刻度，摇匀。用四层纱布过滤，滤液待用。,注,:,待测中温,a-,淀粉酶酶液酶活力控制酶浓度在,3.4 u/mL4. 5 u/mL,范围内，待测耐高温淀粉酶活力控制酶浓度在,60u/mL65u/mL,范围内。,实验方法待测酶液的制备：,40,酶活力测定,吸取,10.0 mL,可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸缓冲液,2.5 mL,，摇匀后，置于,600.2(,耐高温,-,淀粉酶制剂置于,700. 2),恒温水浴中预热,8 min,；加入,0.5 mL,稀释好的待测酶液，立即计时，摇匀，准确反应,5 min,；,立即用移液管吸取,1.0 mL,反应液，加到预先盛有,0.5 mL,盐酸溶液和,5. 00 mL,稀碘液的试管中，摇匀，并以,0.5 mL,盐酸溶液和,5.00 mL,稀碘液为空白，于,660 nm,波长下，用,10 mm,比色皿迅速测定其吸光度,(A),。根据吸光度查表,A.1,，求得测试酶液的浓度。,酶活力测定吸取10.0 mL可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸,41,0 g碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至500 mL，贮存于棕色瓶中。,n样品的稀释倍数（可通过反应时间和加入固定化酶的量来控制）。,大规模液体深层发酵之前，首先在实验室对保藏的目的菌种进行活化和扩大培养，制得生产种子。,原理：-淀粉酶制剂能将淀粉分子链中的- 1,4-葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈篮紫色的特性反应逐渐消失，呈现棕红色，其颜色消失的速度与酶活性有关，据此可通过反应后的吸光度计算酶活力。,（摇瓶发酵生产-淀粉酶）,0 mL可溶性淀粉溶液于试管中，加入磷酸缓冲液2.,中温 -液化型淀粉酶系用枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis)经发酵提炼精制而成。,2、测定反应液中底物或产物的变化量。,发酵结束时，显微镜检查每个发酵瓶是否污染，若无污染合并发酵液并测定发酵酶活力。,要准确地测定酶的活力，必须满足这些前提条件。,大规模液体深层发酵之前，首先在实验室对保藏的目的菌种进行活化和扩大培养，制得生产种子。,酶活力测定的要求：快速、简便、准确。,5 mL，摇匀后，置于600.,2)富集培养: 投其所好，取其所抗。,凡是能催化淀粉（或糖元）分子及其分子片段中的-葡萄糖苷键水解的酶，统称为淀粉酶，包括-淀粉酶，糖化酶，-淀粉酶，异淀粉酶，环状糊精生成酶，麦芽寡糖生成酶等。,5、发酵：将摇床培养好的种子培养液接入发酵培养基中，接种量为5 mL，共接3 瓶（100ml/250ml瓶），做好标记。,发酵生产中多用液体深层发酵法制备酶。,微生物发酵法是酶制剂生产的主要方法。,5 mL盐酸溶液和5.,中温 -液化型淀粉酶系用枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis)经发酵提炼精制而成。,耐高温 -淀粉酶采用地衣芽孢杆菌经深层培养，提取等工序精制而成，能随机水解淀粉、糖原及其降解物内部的-1，4葡萄糖苷健使得胶状淀粉溶液的粘度迅速下降，产生可溶性糊精和寡聚糖，过度的水解可产生少量葡萄糖和麦芽糖。,外观：棕褐色液体 溶解性：易溶于水,5 mL，摇匀后，置于600.,中温a一淀粉酶活力：,1、菌种：枯草芽孢杆菌,液体为2000 u/ml,要准确地测定酶的活力，必须满足这些前提条件。,如化学滴定、比色法、紫外光吸收、荧光测定、同位素标记底物或称放射性化学法、酶偶联法等。,酶的比活力是酶纯度的一个指标，是指在特定条件下，单位重量（mg）蛋白质或RNA所具有的酶活力单位数。,按产品的适用温度分为:,能水解淀粉分子链中的-1, 4-葡萄糖苷键，将淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉粘度迅速下降的酶制剂。,在喷射液化工艺中瞬间温度达 105-110，仍能有效水解淀粉。,磷酸缓冲液(pH=6.,2、培养基的准备： 查资料，自行设计,1，耐高温-淀粉酶为液体酶制剂。,酶比活力酶活力（单位）/ mg （蛋白或RNA）,固液分离（离心、过滤）,固液分离（离心、过滤）,可用以比较每单位质量酶蛋白的催化能力。,酶制剂的发酵生产过程图解,如化学滴定、比色法、紫外光吸收、荧光测定、同位素标记底物或称放射性化学法、酶偶联法等。,3、工艺条件： 查资料，自行设计,c测试酶样浓度，u/mL或u/g,能水解淀粉分子链中的-1, 4-葡萄糖苷键，将淀粉链切断成为短链糊精和少量麦芽糖和葡萄糖，使淀粉粘度迅速下降的酶制剂。,2、仪器耗材：恒温培养箱、冰箱、高压灭菌锅、无菌操作台、摇床、托盘天平、分析天平、电炉、白色搪瓷杯、三角瓶、量筒、纱布、绳子、pH 试纸、玻棒等。,液体为2000 u/ml,2、测定反应液中底物或产物的变化量。,要准确地测定酶的活力，必须满足这些前提条件。,(2) 根据酶的动力学性质，确定酶催化反应的温度、pH值、底物浓度、激活剂浓度等反应条件。,本产品适用于酒精、啤酒、味精、发酵工业的液化以及纺织退浆等。,4)初筛：选出产酶菌种，以多为主。,0 g碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至500 mL，贮存于棕色瓶中。,广泛应用于淀粉糖工业、酒精、啤酒、味精、酿造、烘焙、饲料、纺织退浆、医药等领域。,酶制剂的发酵生产过程图解,液体剂型酶制剂和固体剂型酶制剂。,5 mL盐酸溶液和5.,按产品的适用温度分为:,中温-淀粉酶制剂的酶活力按下式计算:,固体分为 2000、4000u/g, 6000u/g 三种。,1， 中温 -淀粉酶分为固体和液体两种剂型。,发酵生产中多用液体深层发酵法制备酶。,发酵结束时，显微镜检查每个发酵瓶是否污染，若无污染合并发酵液并测定发酵酶活力。,外观：棕褐色液体,酶比活力酶活力（单位）/ mg （蛋白或RNA）,广泛应用于淀粉糖工业、酒精、啤酒、味精、酿造、烘焙、饲料、纺织退浆、医药等领域。,0条件下，1小时液化可溶性淀粉的克数。,按产品的适用温度分为:,微生物发酵法是酶制剂生产的主要方法。,产酶微生物的分离筛选方法,要准确地测定酶的活力，必须满足这些前提条件。,摇瓶培养也是实验室模拟生产上进行发酵产酶的一种模拟实验。,溶解性：易溶于水,1， 中温 -淀粉酶分为固体和液体两种剂型。,5 mL，摇匀后，置于600.,（摇瓶发酵生产-淀粉酶）,产品特性 : (物理特性),（蒸发、超滤、沉淀）,比活力：每mg蛋白质中有多少个酶单位。,碘、碘化钾、 -淀粉酶制剂、磷酸氢二钠、柠檬酸、盐酸、可溶性淀粉（湖州展望化学药业有限公司）。,中温 -液化型淀粉酶系用枯草芽孢杆菌（Bacillus Subtilis)经发酵提炼精制而成。,2、测定反应液中底物或产物的变化量。,2、测定反应液中底物或产物的变化量。,酶活力测定的要求：快速、简便、准确。,酶活力计算,中温,-,淀粉酶制剂的酶活力按下式计算,:,X,1,= c,n,式中,:,X,1,样品的酶活力，,u/mL,或,u/g,c,测试酶样浓度，,u/mL,或,u/g,n,样品的稀释倍数（可通过反应时间和加入固定化酶的量来控制）。,所得结果表示至整数。,允许差： 平行试验相对误差不得超过,5%,0 g碘化钾，用少量水使碘完全溶解，定容至500 mL，贮存,42,