17项肿瘤标志物化学发光检测课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2020/9/14,#,肿瘤标志物,17,项,（化学发光免疫分析法）,2016-5-26,肿瘤标志物17项2016-5-26,各种类型肿瘤发生率,(,不考虑性别,),100,90,80,70,60,50,40,30,20,10,0,27,13,18,75,12,52,12,45,9,70,7,38,4,3,4,75,4,67,肺,乳腺,结直肠,胃,前列腺,卵巢,胰腺,膀胱,宫颈,发生率,5,年生存率,数据来自,the American Cancer Society,各种类型肿瘤发生率 10027131875125212459,肿瘤诊断方法,1,、临床,病史、体症,2,、辅助,物理检查：,X,光、,CT,、核磁共振、,B,超、 红外扫描,病理 术前：穿刺、刮片、拉网,术后：组织切片,免疫学检查：,肿瘤标志物,和代谢物测定,分子生物学检查： 核酸分析,肿瘤诊断方法1、临床病史、体症,在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞合成、释放、或者是宿主对肿瘤反应产生的一类生化物质。,在血液、体液及组织中肿瘤标志物的定量或定性检测可以作为肿瘤筛查、鉴别诊断、治疗后病情监测及预后判断的标志与依据。,这些物质必须在正常人中不存在或者是在癌症患者中出现的水平显著高于正常人。,肿瘤标志物,【tumor markers TM】,肿瘤标志物 【tumor markers TM】,肿瘤标志物的分类（化学特性）,癌胚抗原类标志物,糖类抗原标记物,酶类标志物,激素类标志物,癌基因,其他,肿瘤标志物的分类（化学特性）癌胚抗原类标志物,理想的肿瘤标志物的标准,特异性,100%,灵敏度,100%,器官特异性,与肿瘤大小或分期有关,能进行疗效观察,与预后有关,可靠的预测价值,然而目前所应用的肿瘤标志物均未达到上述要求，但如,正确合理使用，仍有很大临床价值，关键是要正确评价肿瘤,标志物检测的临床意义。,理想的肿瘤标志物的标准 特异性100% 然而目,目前临床应用肿瘤标志物现状,理想形式,特异性,100%,真阴性,100%,假阳性,0%,健康人,临界值,敏感性,100%,真阳性,100%,假阴性,0%,肿瘤患者,实际状况,假阴性,假阳性,临界值,敏感性,100%,特异性,- 60%,健康人,肿瘤患者,特异性,100%,敏感性,- 50%,敏感性上升,特异性上升,肿瘤标志物参数在健康人和肿瘤患者两组人群间的区别,实际状态：假阴性和假阳性在选择临界值中的作用：,特异性越高，敏感性越低，反之亦然,目前临床应用肿瘤标志物现状理想形式特异性100%健康人临界值,肿瘤标志物的临床应用,正常人群中的筛查,有症状者的辅助诊断,癌症的临床阶段的分期,疾病进程的预后指标,评估治疗方案,判断癌症是否复发,治疗应答的监测,肿瘤标志物的临床应用 正常人群中的筛查,肿瘤标志物的注意事项,定位,TM,基本上不能对肿瘤定位。极少数,TM,如,PSA,，甲状腺球白等具器官特异性，但不是肿瘤特异性。,确诊,通常不能进行确诊。,分期,大多数,TM,与疾病分期有关，且浓度与肿瘤大小通常存在关联，但并不能根据个体测得值来判断肿瘤大小，也不能以,TM,浓度精确指示各期肿瘤，因为各期肿瘤的,TM,浓度范围极广，且互相重叠。,预后,术前,TM,浓度增加，术后降低，表示这些,TM,对此肿瘤有预后价值。,在病程监测中，,TM,的浓度增加或降低与疾病的预后密切相关,。,肿瘤标志物的注意事项定位,TM,评价治疗有效性方案（,Beastall, 1991,),无效：,TM,浓度与治疗前相比下降,50%,有效：,TM,浓度与治疗前相比下降,90%,显效：,TM,浓度下降至临界值以下,TM评价治疗有效性方案（Beastall, 1991)无效,检测肿瘤标志物的试验方法,放射免疫法,（,RIA,）,免疫放射法,（,IRMA,）,ELISA,法,斑点法,金标法,荧光免疫法,流式荧光免疫法,时间分辨免疫荧光法,化学发光法,（,CLIA,）,磁微粒化学发光法,电化学发光法,（,ECLIA,）,蛋白芯片技术,检测肿瘤标志物的试验方法放射免疫法（RIA）荧光免疫法,化学发光免疫分析,化学发光免疫分析包含两个部分,即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化,形成一个激发态的中间体,当这种激发态中间体回到稳定的基态时,同时发射出光子,(hM) ,利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统,是将发光物质,(,在反应剂激发下生成激发态中间体,),直接标记在抗原,(,化学发光免疫分析,),或抗体,(,免疫化学发光分析,),上,或,酶作用于发光底物,进样系统,反应池,PMT,放大器,记录仪,负高压,检测系统,化学发光分析法仪器方框图,PMT:,光电倍增管,化学发光免疫分析化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系,肿瘤类型,已选标志物,补充标志物,肺癌,肝癌,乳腺癌,胃癌,前列腺癌,结肠直肠癌,胰腺癌,卵巢癌,睾丸肿瘤,CEA,AFP,、,CEA,CA15-3,、,CEA,CEA,、,CA199,PSA,CEA,、,CA199,CA199,、,CEA,、,CA50,HE4,、,CA125,、,CEA,AFP,NSE,、,CFRA21-1,、,SCCA,HCG,CA724,fPSA,CA242,CA242,HCG,、,CA724,HCG,肿瘤标志物的选择,肿瘤类型已选标志物补充标志物肺癌CEANSE、CFRA21-,生化特性：,糖蛋白，,4560%,糖，电泳,迁移率， 抗原决定基,分子量：,180,000,发生部位：,胚胎及胎儿肠黏膜,参考值范围：,5ng/ml,临床应用：,监测结直肠癌、胃癌、乳腺癌和支气管癌病程及疗效,影响因素：,5%,吸烟者检测值可至,2.55ng/ml,，,1%,至,1020ng/ml,；肝炎疾病可使,CEA,水平短暂升高,（一）癌胚抗原 （,CEA,）,生化特性： 糖蛋白，4560%糖，电泳迁移率， 抗,60,50,40,30,20,10,0,肿瘤患者,%,7.0 7.0 4.2 7.0 7.4,临界值,(n,g,/ml),50,33,28,27,22,在实体肿瘤患者中,CEA,特异性为,95%,时的敏感性,参考值范围：,5n,g,/ml,在实体肿瘤患者中,CEA,表达状况,60肿瘤患者 7.0 7.0,生化特性：,糖蛋白，,4%,糖，电泳,-1-,迁移率,分子量：,70,，,000,发生部位：,卵黄囊、胚胎肝,参考值范围：,10ng/ml,临床应用：,发现原发性肝细胞癌，监测治疗效果；用于诊断生殖细胞肿瘤,影响因素：,肝炎疾病可使,AFP,水平短暂升高；,AFP,可通过胎盘，妊娠,3236,周可达高峰。,（二）甲胎蛋白（,AFP,）,生化特性： 糖蛋白，4%糖，电泳-1-迁移率（二）甲,（三）糖类抗原,242,（,CA242,）,生化特性：,是一种唾液酸化的新型粘蛋白类糖类肿瘤抗原,临床应用：,CA242,可作为胰腺癌和结肠癌校好的肿瘤标志物，其灵敏度与,CA19-9,相仿（,70% 92%,），但特异性、诊断效率则优于,CA19-9,。,参考值：,25U/ml,（三）糖类抗原242 （CA242）生化特性：是一种唾液酸化,生化特性,： 糖蛋白，由两个单克隆抗体：,1.115D8,抗乳脂膜及,2.DF3,抗乳腺癌,细胞系所证实,分子量：,115D8,：,400,，,000,；,DF3290,，,000,发生部位：,乳腺癌细胞和某些上皮细胞,参考值范围：,28U/ml,临床应用：,监测乳腺癌疗效,影响因素：,与,CEA,联合检测,（四）癌抗原,15-3,（,CA15-3,）,？,生化特性： 糖蛋白，由两个单克隆抗体：（四）癌抗原15,生化特性：,糖脂,Lewis,血型决定基半抗原,分子量：,抗原,:36,000;,粘蛋白,:106D,发生部位：,各种肿瘤,在胎儿胃肠道上皮细胞,许多,粘膜细胞,参考值范围：,37U/ml,临床应用：,监测胰腺癌疗效,影响因素：,结直肠,TM,的第二选择,（五）糖类抗原,19-9,（,CA19-9,）,生化特性： 糖脂,Lewis血型决定基半抗原（五）糖类,生化特性：,糖蛋白,以卵巢癌细胞系免疫所获,单克隆抗体所证实,分子量：,200,000,发生部位：,卵巢癌,(,膜结合物,),胎儿和成人支气,管正常上皮细胞,参考值范围：,35U/ml (,65U/ml),临床应用：,监测卵巢癌病程及疗效，透明细胞癌，子宫内膜癌、输卵,管埃及未分化卵巢癌明显升高,影响因素：,来源于体腔上皮细胞衍生物的分化抗原，特异性低；血清浓度轻微升高正常妇女，以及良性卵巢疾患， 怀孕前,3,个月、行经期、肝硬化、子宫纤维变性、急性输卵 管炎、胸膜炎和心包感染等也稍高。,（六）糖类抗原,125,（,CA125,）,生化特性： 糖蛋白,以卵巢癌细胞系免疫所获（六）糖类抗,（七）糖类抗原,50,（,CA50,）,生化特性：,糖类抗原,CA50,是一种以唾液酸酯和唾液酸糖蛋白为主,的肿瘤标志物,参考范围：,23U/ml,临床意义：,糖类抗原,CA50,是一种非特异性的广谱肿瘤标志物，与癌抗原,19-9,有一定的交叉抗原性，主要用于胰腺癌、结肠直肠癌、胃癌的辅助诊断，其中胰腺癌病人增高最明显。,增高：见于胰腺癌（阳性率可达,87,）、结肠直肠癌、胃癌、肺癌。肝癌。卵巢癌、乳腺癌等恶性肿瘤；溃疡性结肠炎、肝硬化、黑色素瘤、淋巴瘤、自身免疫性疾病等也增高,（七）糖类抗原50 （CA50）,生化特性：,糖蛋白,分子量：,400,000,发生部位：,上皮细胞,参考值范围：,3U/ml,临床应用：,胃癌,卵巢粘液癌,影响因素,:,与,CEA,联合检测胃癌,卵巢癌的第二选择标志物,（八）癌抗原,72-4,（,CA72-4,）,生化特性： 糖蛋白（八）癌抗原72-4 （ CA7,CA72-4,临床应用,CA72-4,的参考范围高限值为,10U/ml,具有高特异性。,在胃癌患者血清中,其水平升高尤为明显。,经过对,50,例良性胃肠道疾病和,197,例处于活动期胃癌的研究发现,CA72-4,对胃癌的特异性为,100%,灵敏度为,48%,。,CA72-4,的测定对胃癌的生长期和治疗效果极为重要,最好联合测定,CA72-4,和,CEA,。,CA72-4,也见于卵巢癌中。,CA72-4临床应用,胃癌单项或联合测定,CEA,、,CA19-9,及,CA72-4,的敏感性,80,60,40,20,0,敏感性（,%,）,27,29,66,40,66,72,CEA,（,10.1,）,CA19-9,（,96,）,CA72-4,（,2.4,）,CA19-9,（,107,）,CEA,（,10.1,）,CA72-4,（,2.4,）,CA19-9,（,260,）,CA72-4,（,2.4,）,CEA,（,10.4,）,胃癌特异性,95%,情况下，敏感性指标,胃癌单项或联合测定CEA、CA19-9及CA72-4的敏感性,生化特性：,烯醇化酶二聚体,分子量：,87,000,发生部位：,神经系统的神经元和神经内分泌细胞,红细胞,血小板,参考值范围：,15.0ng/ml,临床应用：,增高：见于小细胞肺癌,SCLC,（最敏感最特异的肿瘤标志物之一） 、神经母细胞瘤、神经内分泌细胞肿瘤（如嗜铬细胞,瘤、胰岛细胞瘤、黑色素瘤）等,影响因素：,不要将血放置太久，否则将出现假高值；,1,小时内离心；检测,SCLC,时，与,CEA,联合应用,.,（九）神经特异性烯醇化酶 （,NSE,）,生化特性： 烯醇化酶二聚体（九）神经特异性烯醇化酶 （N,生化特性,：,糖蛋白,肿瘤抗原,T4,分子量：,48,000,发生部位：,主要存在于子宫颈鳞状细胞癌,正常,鳞状上皮,参考值范围：,1.2ng/ml,临床应用：,监测宫颈、耳、鼻、喉、肺和食管鳞,状细胞癌病程及治疗,影响因素：,被皮肤或唾液污染后可导致假性高值,（十）鳞状上皮细胞癌抗原 （,SCC,）,生化特性： 糖蛋白,肿瘤抗原T4（十）鳞状上皮细胞癌抗,生化特性：,细胞角蛋白片段,19,分子量：,30,000,发生部位：,正常及恶性的上皮细胞支架蛋白，已知有,20,种，,存在于许多组织中，特别是肺中,参考值范围：,3.3ng/ml,临床应用：,非小细胞肺癌,影响因素：,被唾液污染后可导致假性高值,（十一）细胞角蛋白组分,19 (CYFRA21-1),生化特性： 细胞角蛋白片段19（十一）细胞角蛋白组分,肺癌中肿瘤标志物的应用,CYFRA21-1,CEA,NSE,治疗前,治疗后复查,组织类型不明确,腺癌,鳞状细胞癌,小细胞肺癌,大细胞肺癌,肺癌中肿瘤标志物的应用CYFRA21-1CEANSE治疗前治,（十二）,前列腺特异抗原 （,t-PSA,）和游离前列腺特异性抗原（,fPSA,）,PSA,是前列腺的特异性标记物，在正常男性含量小于,4,g/L。,属于器官特异性抗原，不具备肿瘤特异性,前列腺癌、前列腺增生、前列腺炎和前列腺损伤都会导致血清,PSA,升高,游离,PSA,在正常男性含量小于,1,g/L,（十二）前列腺特异抗原 （ t-PSA）和游离前列腺特异性,临床应用：,当,TPSA,在,4-10ng/ml,之间时，,区别良性与恶性前列腺疾病，测定游离,PSA,（,f-PSA,）与总,PSA,（,tPSA),的比率更有临床价值。,f-PSA,tPSA,大于,25%,：多为良性病人。,f-PSA,tPSA,小于,10%,：多为前列腺癌。,临床应用：,生化特性：,与,IgG,分子的重链和轻链的,C,片段同型,与,HLA,共同片段的部分相同,分子量：,11,800,发生部位：,淋巴细胞，巨嗜细胞和一些上皮细胞表面,参考值范围：,1.22.5mg/l,临床应用：,多发性骨髓瘤,非何杰金氏淋巴瘤（,NHL,）,影响因素：,在肾脏疾病诊断中也有重要意义,（十四）,2-,微球蛋白 （,2,-MG,）,生化特性： 与IgG分子的重链和轻链的C片段同型,与（十,（十五）人附睾蛋白（,HE4,）,HE4,（,Human Epididymis Secretory Protein 4,人附睾分泌蛋白,4,），是一种酸性蛋白质。,HE4,在恶性肿瘤中的高表达多见于卵巢癌、子宫内膜癌，少见于肺腺癌及间皮瘤。,HE4,在早期（,I,期）的卵巢癌中的敏感性及检测卵巢癌总的敏感性均高于,CA125,，是卵巢癌敏感及特异的标志物，可用于对卵巢癌的早期诊断及辅助监控卵巢癌患者的治疗情况。,英国的一项研究对,200,，,000,妇女用,30,多种肿瘤标记物分别单独或与,CA125,联合进行卵巢癌筛查，,HE4,可以使诊断卵巢癌的敏感度和特异度提高 。,（十五）人附睾蛋白（HE4）HE4 （Human Epidi,HGH,又被称为人体生长激素。研究发现人类生长素随着年龄的增长而分泌量趋于减少。,（,1,）升高：垂体肿瘤：肢端肥大症、脑垂体性巨人症。非垂体肿瘤：,糖尿病,、部分肝病、,肾功能不全,、胰腺癌。可用抑制试验鉴别非垂体肿瘤所致,GH,之增高。,（,2,）降低：,垂体性侏儒症,及其他原因所致的垂体前叶功能减低症。,非垂体疾病所致,GH,值降低：肝硬化、垂体附近的脑肿瘤。,（十六）人生长激素（,hGH,）,HGH又被称为人体生长激素。研究发现人类生长素随着年龄的增长,消化系恶性肿瘤,肿瘤标志物,CEA,AFP,CA19-9,CA125,四指标联检,检出率,58.50%,62.26%,52.83%,47.17%,88.68%,检验医学与临床, 2008,年,5,期,肿瘤标志物在诊断消化系恶性肿瘤中的应用价值,卵巢癌,肿瘤标志物,CA125,CA19-9,CEA,三指标联检,敏感性,80.6%,58.1%,41.9%,96.7%,多指标联合评价有利于提高检测的,灵敏度,，已成为公认的肿瘤标志物临床应用的原则之一。,肿瘤标志物多指标联合检测技术,健康体检,普适技术,！,多指标联合检测的意义,肿瘤研究与临床, 2007,年,Z1,期,三项肿瘤标志物联合检测对卵巢癌的临床应用价值,消化系恶性肿瘤肿瘤标志物CEAAFPCA19-9CA125四,几种主要,TMs,联检技术比较,技术平台,Array-ELISA,化学发光,电化学发光（,ECL,）,ELISA,流式荧光,操作性,简单方便,操作简便,全自动,简单方便,操作要求高,样本用量,5-10,L,25-100ul,100-200,L,50,L,10,L,检测效率,快速,较快,较快,较慢,快速,局限性,六种检测指标不能选择性检测,多重指标需重复检测,多指标检测时出结果时间长,多重指标需重复检测,阵列区域存在相互干扰，易产生假阳性与假阴性,成本,低,较低,高,较低,较高,几种主要TMs联检技术比较 技术平台Array-ELISA化,技术平台,酶促化学发光,直接化学发光,电化学发光,（,ECL,）,操作性,简单方便,全自动,全自动,包被载体,发光板,磁颗粒,磁颗粒,检测效率,较快,1h,较快,较快,局限性,样本少，且间断性送样的模式,多指标检测时出结果时间长,多指标检测时出结果时间长,优势,与传统酶免相似，简单，反应模式基本上一致,-,-,成本,低,较低,高,技术平台酶促化学发光直接化学发光 电化学发光操作性 简单方,优势,方法学：通俗易懂，与传统酶联免疫法类似，但操作更简单，更加灵敏。,肿瘤标志物覆盖范围广：几乎涵盖了各种肿瘤疾病，联合检测增加敏感度和特异性。在,Array-elisa,（,6,项）的基础上任意组合。,操作统一：反应时间、加样模式基本统一。,优势方法学：通俗易懂，与传统酶联免疫法类似，但操作更简单，更,结束语,当,你尽了自己的最大努力,时,，,失败,也是伟大,的，所以不要放弃，坚持就是正确的。,When You Do Your Best, Failure Is Great, So DonT Give Up, Stick To The,End,结束语,38,感谢聆听,不足之处请大家批评指导,Please Criticize And Guide The,Shortcomings,演讲人：,XXXXXX,时 间：,XX,年,XX,月,XX,日,感谢聆听演讲人：XXXXXX 时 间：XX年,39,