病原微生物病毒感染的检查方法与防治原则课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,第一节 病毒感染的检查方法,第一节 病毒感染的检查方法,1,病毒感染的检查,一般原则：特异、敏感、快速、简便,方法,1,根据流行病学和临床特点初步判定可能感染的病毒。,2,根据可疑病毒的生物学性状，机体免疫应答和临床过程以及病人当前所处的时机，确定实验诊断方法。,病毒感染的检查 一般原则：特异、敏感、快速、简便,2,病毒感染的检查,检测内容,查病毒,查特异性,抗体,病毒颗粒,病毒抗原,病毒核酸,病毒酶类：如逆转录酶,电镜直接观察,光镜检查包含体,分离培养,病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体 病毒颗粒 电镜,3,一、标本的采集与送检,原则基本与细菌相似,，但,应注意：,1.,标本用,“,双抗,”,或两性霉素B处理,2.低温保存,，,尽快送检,3.血清学诊断采双份血清,一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意：,4,二、病毒的分离与鉴定,一般程序：,标本,无菌处理,动物接种,鸡胚培养,细胞培养,指标,阳性,指标,阴性,病毒鉴定,盲传2,3代,指标阴性,病毒阴性,二、病毒的分离与鉴定一般程序：标本无菌处理动物接种指标阳性,5,（一）病毒的分离培养,1.,细胞培养,单层细胞培养,分类,悬浮细胞培养,原代细胞,细胞种类,二倍体细胞,传代细胞系,（一）病毒的分离培养,6,病毒的细胞培养,细胞培养瓶,单层细胞,病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞,7,微生物及其代谢产物,抗原变异病毒基因的鉴定,微生物及其代谢产物,干扰素和干扰素诱生剂,动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等,（三）病毒感染的血清学诊断,核酸杂交技术,血清丙种球蛋白,基因产物 （如乙肝疫苗）,免疫细胞,羊膜腔（amniotic cavity）,可激发HI，安全、方便；,(1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ）,第三节 病毒感染的治疗,除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。,(3)凝胶免疫扩散试验,细胞种类 二倍体细胞,优点：易管理，不带微生物，成本较低,优点：易管理，不带微生物，成本较低,病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）,微生物及其代谢产物,8,病原微生物病毒感染的检查方法与防治原则课件,9,对一般病毒检测意义不大,病毒性感染的快速诊断方法有哪些？,二、人工被动免疫常用生物制品,为证实所分离的病毒的临床意义,治疗性疫苗,动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等,进行血清流行病学调查等,IFN-、,EBV早期抗原抗体,形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；,病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）,除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。,1根据流行病学和临床特点初步判定可能感染的病毒。,卵黄囊（yolk sac）,病毒中和抗体 病毒失去感染性,EBV早期抗原抗体,接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒,微生物及其代谢产物,2.鸡胚培养,采用孵化,914,天的鸡胚,绒毛尿囊膜,（,allantocherion,）,痘苗病毒、人类疱疹病毒,尿囊腔,（,allantoic cavity,）,接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒,羊膜腔,（,amniotic cavity,）,流感病毒的初次分离,卵黄囊,（,yolk sac,）,嗜神经病毒,对一般病毒检测意义不大2.鸡胚培养,10,病原微生物病毒感染的检查方法与防治原则课件,11,2,、鸡胚培养,优点：,易管理,，,不带微生物,，,成本较低,缺点：,操作程序复杂,2、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低,12,病原微生物病毒感染的检查方法与防治原则课件,13,3.动物接种,应用：,尚无敏感细胞的病毒培养,动物：,兔、鼠、黑猩猩、猴等,优点：,结果易观察，可建立动物模型,缺点：,有饲养条件要求，费用高,，,动物,体内常带有潜伏病毒,3.动物接种,14,1病毒增殖鉴定,(1),细胞病变效应,（cytopath,ic,effect,CPE ）,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）,；,形成多核巨细胞或称融合细胞（,麻疹病毒,、,巨细胞病毒,、,呼吸道合胞病毒,等）,；,在培养细胞中形成包涵体,（,狂犬病病毒、麻疹病毒等,）。,（二）病毒的鉴定,1病毒增殖鉴定（二）病毒的鉴定,15,病原微生物病毒感染的检查方法与防治原则课件,16,2,.,病毒形态学鉴定,电子显微镜,：设备、操作复杂，,应用受限,光学显微镜,：可见,大病毒,（,痘类病毒），,对一般病毒检测,意义不大,2.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限,17,3,.,病毒血清学鉴定,鉴定病毒种、型、亚型,(,1,),血凝抑制试验,正粘,病毒型与亚型鉴定,病毒,鸡,红细胞,凝集,（血凝试验）,病毒,特异性抗体,鸡,红细胞,不凝集,（,血凝抑制试验,）,3.病毒血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型,18,(2),免疫标记法,（,FIA、EIA、RIA,）,多种病毒鉴定,(,3,),凝胶免疫扩散试验,多种病毒鉴定,(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）,19,4,.,病毒分子生物学鉴定,抗原变异病毒基因的鉴定,核酸扩增,核酸杂交,基因芯片,基因测序,4.病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定,20,（三）,病毒数量与感染性测定,1,.,血凝试验：病毒总量（活病毒,死病毒）,2.蚀斑形成试验,3,.,50,组织细胞感染量,感染性病毒量,（三）病毒数量与感染性测定1.血凝试验：病毒总量（活病毒死,21,卵黄囊（yolk sac）,(3)凝胶免疫扩散试验,如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。,接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒,生物制品 动物免疫血清,可诊断急性感染,如食用西红柿，获得乙肝疫苗的接种。,嗜神经病毒,痘苗病毒、人类疱疹病毒,可诊断急性感染,将编码某一病原体保护性抗原的基因转入植物并在植物中表达，人们食用植物时，就完成了预防接种。,四、病毒感染的快速诊断,缺点是免疫原性弱、只激发B细胞引起HI，因为抗病毒依赖CMI）。,采用孵化914天的鸡胚,除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。,葡萄球菌的自身疫苗治疗葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治疗乙肝带毒者。,羊膜腔（amniotic cavity）,优点：易管理，不带微生物，成本较低,采用孵化914天的鸡胚,在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。,特点：特异性低，抗体出现早，消失快,(,四,),新病毒的鉴定,核酸类型的测定,理化性状的检测,形态学鉴定,血清学鉴定,基因测序和生物对比,卵黄囊（yolk sac）(四) 新病毒的鉴定核酸类型的测定,22,四、病毒感染的快速诊断,数小时内出结果,病毒颗粒,病毒成分（抗原或核酸）,早期抗体检测,（,I,gM,）,四、病毒感染的快速诊断数小时内出结果,23,（一）,形态学检查,电镜和免疫电镜检查,普通光学显微镜检查,包涵体,（一）形态学检查电镜和免疫电镜检查,24,（二）,病毒成分检测,1,.,病毒蛋白抗原检测,免疫标记技术,2,.,病毒核酸检测,核酸扩增技术,核酸杂交技术,基因芯片技术,基因测序,（二）病毒成分检测1.病毒蛋白抗原检测,25,（三）病毒感染的血清学诊断,应用,：,采取标本分离病毒为时已晚,目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒,为证实所分离的病毒的临床意义,进行血清流行病学调查等,（三）病毒感染的血清学诊断应用：,26,1,.,中和试验,（,neutralizing test,）,病毒,中和抗体,病毒失去感染性,特点：,特异性高，抗体维持时间长,应用：,人群免疫情况的调查,临床诊断少用,1.中和试验（neutralizing test）病毒中和,27,2.补体结合试验,用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体,特点：,特异性低，抗体出现早，消失快,应用：,近期感染指标。,3.血凝抑制试验,流感疫苗接种后效果观察及流感流行病学调查,2.补体结合试验 用已知病毒可溶性补体抗原检测病人,28,早期抗体检测（IgM）,特点：特异性高，抗体维持时间长,可激发HI，安全、方便；,二、人工被动免疫常用生物制品,对一般病毒检测意义不大,可激发HI，安全、方便；,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；,分离培养病毒的方法有那些?,除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。,除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。,除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。,形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；,基因芯片技术,二、人工被动免疫常用生物制品,基因整合 基因产物 疫苗,中草药,血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）,四、病毒感染的快速诊断,病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）,嗜神经病毒,4,、,早期抗体检测,可诊断急性感染,特异性,IgM,抗体,：,孕妇感染风疹病毒,EBV,早期抗原,抗体,EAV,核心抗原,抗体,早期抗原的抗体,EAV,衣壳抗原,抗体,早期抗体检测（IgM）4、早期抗体检测 可诊断急,29,(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）,细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12,葡萄球菌的自身疫苗治疗葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治疗乙肝带毒者。,临床诊断少用,尿囊腔（allantoic cavity）,流感病毒的初次分离,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；,特点：特异性低，抗体出现早，消失快,基因产物 （如乙肝疫苗）,除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。,多由减毒病原菌制成；,基因芯片技术,如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。,偶可发生回复突变，毒力回升，接种后发病。,二、人工被动免疫常用生物制品,蛋白质抗原基因 减毒的病毒或细菌,第一节 病毒感染的检查方法,悬浮细胞培养,1根据流行病学和临床特点初步判定可能感染的病毒。,目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒,第二节 病毒感染的特异性预防,微生物及其代谢产物,生物制品,动物免疫血清,免疫细胞,细胞因子,防治和诊断感染性疾病,(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）第二节 病毒感染的,30,疫苗:,死疫苗(,killed vaccine),如白百破、伤寒、流脑、乙脑、流感、钩端螺旋体等。,可激发,HI，,安全、方便；但抗原性改变，效果差，需多次注射；反应重）。,活疫苗（,living vaccine）,如,BCG、,鼠疫、炭疽、脊髓灰质炎和麻疹疫苗等。,可激发,HI、CMI；,多由减毒病原菌制成；偶可发生回复突变，毒力回升，接种后发病。联合疫苗在试用中。,基因工程疫苗：,目的基因 原核或真核细胞,基因产物 （如乙肝疫苗）,导入,人工培养,一、人工主动免疫常用生物制品,疫苗: 死疫苗(killed vaccine)如白百破,31,重组载体疫苗：,蛋白质抗原基因 减毒的病毒或细菌,基因整合,基因产物 疫苗,合成疫苗：,根据病原体抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作为疫苗。,如,流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。,缺点,是免疫原性弱、只激发,B,细胞引起,HI，,因为抗病毒依赖,CMI）。,转入,培养,表达,重组载体疫苗： 转入 培养 表达,32,亚单位疫苗：,除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。,如,脑膜炎球菌和流感杆菌,表面的特异性多糖+ 吸附剂制成疫苗（不含类脂、无毒） 、,流感疫苗、乙肝疫苗等，,这种疫苗,防止,减毒活疫苗回复突变和肿瘤病毒潜在的致癌作用。,DNA,疫苗：,即,基因疫苗或核酸疫苗,（第三代疫苗），这种,核酸,既是载体又能在真核细胞中表达抗原，诱导产生细胞毒杀伤功能的,T,细胞,，有效预防病毒、胞内寄生菌及寄生虫引起的传染。,亚单位疫苗：,33,转基因植物疫苗：,将编码某一病原体,保护性抗原的基因转入植物并在植物中表达，,人们食用植物时，就完成了预防接种。如食用,西红柿,，获得乙肝疫苗的接种,。,治疗疫苗：,葡萄球菌的自身疫苗,治疗葡萄球菌的感染、,乙肝疫苗,治疗乙肝带毒者。可能的机制是前者是脱敏作用，后者是打破免疫耐受。,类毒素：,细菌,外毒素,+0.3%0.4%甲醛,类毒素,(毒性消失,保留抗原性).如白百破疫苗.,转基因植物疫苗：,34,绒毛尿囊膜（allantocherion）,病毒特异性抗体鸡红细胞不凝集,如脑膜炎球菌和流感杆菌表面的特异性多糖+ 吸附剂制成疫苗（不含类脂、无毒） 、流感疫苗、乙肝疫苗等，这种疫苗防止减毒活疫苗回复突变和肿瘤病毒潜在的致癌作用。,核酶（ribozyme）,对一般病毒检测意义不大,采取标本分离病毒为时已晚,绒毛尿囊膜（allantocherion）,EAV核心抗原抗体,(1)血凝抑制试验正粘病毒型与亚型鉴定,多由减毒病原菌制成；,绒毛尿囊膜（allantocherion）,临床诊断少用,嗜神经病毒,卵黄囊（yolk sac）,目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒,形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；,优点：结果易观察，可建立动物模型,痘苗病毒、人类疱疹病毒,接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒,目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒,二、人工被动免疫常用生物制品,免疫球蛋白,血清丙种球蛋白,细胞免疫制剂,IFN-,、,细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12,TNF 、CSF,淋巴因子激活的杀伤细胞,LAK,细胞,绒毛尿囊膜（allantocherion）二、人工被动免疫常,35,第三节 病毒感染的治疗,核苷类药物,非核苷类反转录酶抑制剂,蛋白酶抑制剂, 其他抗病毒药物,干扰素和干扰素诱生剂,中草药,基因治疗剂,治疗性疫苗,抗病化学制剂,反义寡核苷酸,干扰,RNA,核酶（,ribozyme,）,第三节 病毒感染的治疗,36,思考题,1.,分离培养病毒的方法有那些?,2.,病毒性感染的快速诊断方法有哪些？,3.,预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制剂？,4.,诊断病毒的核酸技术有哪些？,思考题1. 分离培养病毒的方法有那些?,37,Bye,Bye,38,2.鸡胚培养,采用孵化,914,天的鸡胚,绒毛尿囊膜,（,allantocherion,）,痘苗病毒、人类疱疹病毒,尿囊腔,（,allantoic cavity,）,接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒,羊膜腔,（,amniotic cavity,）,流感病毒的初次分离,卵黄囊,（,yolk sac,）,嗜神经病毒,2.鸡胚培养,39,2,、鸡胚培养,优点：,易管理,，,不带微生物,，,成本较低,缺点：,操作程序复杂,2、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低,40,1病毒增殖鉴定,(1),细胞病变效应,（cytopath,ic,effect,CPE ）,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）,；,形成多核巨细胞或称融合细胞（,麻疹病毒,、,巨细胞病毒,、,呼吸道合胞病毒,等）,；,在培养细胞中形成包涵体,（,狂犬病病毒、麻疹病毒等,）。,（二）病毒的鉴定,1病毒增殖鉴定（二）病毒的鉴定,41,3,.,病毒血清学鉴定,鉴定病毒种、型、亚型,(,1,),血凝抑制试验,正粘,病毒型与亚型鉴定,病毒,鸡,红细胞,凝集,（血凝试验）,病毒,特异性抗体,鸡,红细胞,不凝集,（,血凝抑制试验,）,3.病毒血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型,42,（三）病毒感染的血清学诊断,应用,：,采取标本分离病毒为时已晚,目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒,为证实所分离的病毒的临床意义,进行血清流行病学调查等,（三）病毒感染的血清学诊断应用：,43,缺点：有饲养条件要求，费用高，动物,接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒,早期抗体检测（IgM）,四、病毒感染的快速诊断,(1)血凝抑制试验正粘病毒型与亚型鉴定,除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。,第一节 病毒感染的检查方法,悬浮细胞培养,除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。,细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12,EAV衣壳抗原抗体,(1)血凝抑制试验正粘病毒型与亚型鉴定,二、人工被动免疫常用生物制品,（三）病毒数量与感染性测定,绒毛尿囊膜（allantocherion）,一般原则：特异、敏感、快速、简便,(1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ）,为证实所分离的病毒的临床意义,应用：近期感染指标。,绒毛尿囊膜（allantocherion）,优点：结果易观察，可建立动物模型,1根据流行病学和临床特点初步判定可能感染的病毒。,鉴定病毒种、型、亚型,(1)血凝抑制试验正粘病毒型与亚型鉴定,卵黄囊（yolk sac）,第一节 病毒感染的检查方法,采取标本分离病毒为时已晚,将编码某一病原体保护性抗原的基因转入植物并在植物中表达，人们食用植物时，就完成了预防接种。,第一节 病毒感染的检查方法,痘苗病毒、人类疱疹病毒,病毒鸡红细胞凝集（血凝试验）,蛋白酶抑制剂, 其他抗病毒药物,细胞因子 IL-2、IL-6、IL-12,采用孵化914天的鸡胚,EBV早期抗原抗体,微生物及其代谢产物,（三）病毒数量与感染性测定,优点：结果易观察，可建立动物模型,应用：近期感染指标。,可激发HI，安全、方便；,EAV衣壳抗原抗体,葡萄球菌的自身疫苗治疗葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治疗乙肝带毒者。,卵黄囊（yolk sac）,接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒,血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒）,第一节 病毒感染的检查方法,可诊断急性感染,动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等,目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒,除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。,悬浮细胞培养,EAV核心抗原抗体,细胞种类 二倍体细胞,动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等,干扰素和干扰素诱生剂,尿囊腔（allantoic cavity）,根据病原体抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作为疫苗。,细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；,亚单位疫苗：,除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。,如,脑膜炎球菌和流感杆菌,表面的特异性多糖+ 吸附剂制成疫苗（不含类脂、无毒） 、,流感疫苗、乙肝疫苗等，,这种疫苗,防止,减毒活疫苗回复突变和肿瘤病毒潜在的致癌作用。,DNA,疫苗：,即,基因疫苗或核酸疫苗,（第三代疫苗），这种,核酸,既是载体又能在真核细胞中表达抗原，诱导产生细胞毒杀伤功能的,T,细胞,，有效预防病毒、胞内寄生菌及寄生虫引起的传染。,缺点：有饲养条件要求，费用高，动物应用：近期感染指标。应用：,44,