非小细胞肺癌EGFR基因突变检测 ppt课件

*,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,完整编辑ppt,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,完整编辑ppt,*,非小细胞肺癌,EGFR,基因突变检测,完整编辑ppt,非小细胞肺癌EGFR基因突变检测完整编辑ppt,主要内容,EGFR,检测的背景及意义,EGFR,检测的标本类型,EGFR,检测的临床开展及成功关键,完整编辑ppt,主要内容EGFR检测的背景及意义完整编辑ppt,肺癌精准医学是精确诊断与靶向治疗的结合,精确诊断 靶向治疗,分子靶点,药物,EGFR,吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼、阿法替尼、,CO-1686, AZD9291,ALK,克唑替尼、,Alectinib,Met,Tivantinib(ARQ197), Onartuzumab(MetMab),Cabozantinib(XL184),FGFR1,Nintedanib, XL999,HER-2,阿法替尼,RET/ROS,融合基因,克唑替尼, AP 26113, ASP 3026,RAS/MAPK,通路,Trametinib(GSK1120212),，,Pimastertib,，,Refametinib, TAK733,PI3K/PTEN/AKT,BEZ235, XL-765,PD-1/PDL-1,Nivolumab,MPDL3280A,HSP 90 .,Ganetespib,Li TH, et al. J Clin Oncol 2013; 31:1039-1049.,Vari S, et al. Expert Opin Drug Discov 2013; 8(11):1381-1397.,完整编辑ppt,肺癌精准医学是精确诊断与靶向治疗的结合精确诊断,多部权威指南强调治疗前的EGFR突变检测,ASCO2015,指南,：,考虑用,EGFR TKI,进行一线治疗的非小细胞肺癌患者应该进行肿瘤,EGFR,突变检测,来确定适合一线使用,EGFR TKI,还是一线使用化疗药物治疗。,ESMO2015,指南,：,进行个体化治疗决定前应有足够的组织材料进行组织学诊断和分子检测,在疾病进展时应考虑,重新检测,应当系统分析,EGFR,突变状态,在晚期非小细胞肺癌患者组织中进行,标准检测,A.,NCCN2016,指南：,对晚期非鳞,NSCLC,及不吸烟,/,小标本鳞癌的治疗强调了治疗前必须检测,EGFR/ALK,，并指出 “多重,/,下一代测序项目应该包含这,2,个靶点的检测”,中国原发性肺癌诊疗规范（,2016,版）,在推荐所有,NSCLC,患者的肿瘤组织都应进行,EGFR,基因突变检测基础上，补充了如果肿瘤标本不可评估可使用从血液（血浆）标本中获得的,ctDNA,进行评估,.,完整编辑ppt,多部权威指南强调治疗前的EGFR突变检测ASCO2015指南,EGFR,基因突变,和,EGFR,靶向治疗,中国肺腺癌驱动基因突变图谱,NSCLC,中药物疗效相关的,EGFR,突变,研究,RR,中位,PFS,IPASS,71.2% vs 47.3%,9.8 vs 6.4,月,First-SIGNAL,84.6% vs 37.5%,8.4 vs 6.7,月,WJTOG 3405,62.1% vs 32.2%,9.6 vs 6.6,月,NEJGSG002,73.7% vs 30.7%,10.8 vs 5.4,月,OPTIMAL,83% vs 36%,13.1 vs 4.6,月,EURTAC,58% vs 15%,9.7 vs 5.2,月,LUX-LUNG 3,61% vs 22%,11.1 vs 6.9,月,LUX-LUNG 6,67% vs 23%,11.0 vs5.6,月,八项随机研究奠定了,TKI,在,EGFR,基因突变阳性患者中一线治疗的地位,NCCN Guidelines Version 3.2016 Non-Small Cell Lung Cancer,Mok et al., 2008;Kim et al., 2008;Hirsch et al., 2006,突变类型,所占比例,对,EGFR-TKI,敏感性,19 del; L858R,90%,敏感,G719X; L861Q; S768I,7%,亚敏感,T790M alone; 20 ins,3%,不敏感,完整编辑ppt,EGFR基因突变和EGFR靶向治疗中国肺腺癌驱动基因突变图谱,EGFR,检测样本来源,组织活检,（肿瘤蜡片）,目前检测金标准,细胞学标本,（恶性胸水）,样本品质和 肿瘤细胞含量可能比 组织样本较低,血液标本,（,ctDNA,）,-,当无法获取组织或细胞学样本的晚期转移患者，作为有效补充,DNA,片段化,/,假阴性较多，,需要高敏感度技术,+,+,+,-,-,+,-,-,侵入性,每个病人,都适用,动态检测,对于组织和胸水都取不到的患者，血液样本是一个很好的补充,Pirker R et al. J Thorac Oncol 2010;5:17061713; Savic S et al. Br J Cancer 2008; 98:154160;,Rekhtman N et al. J Thorac Oncol 2011;6:451458; Tanaka T et al. Cancer Sci 2007;98:246252;,-,+,+,质量控制,EGFR检测样本来源组织活检目前检测金标准 细胞学标本样本品,组织/细胞学检测是目前的金标准,目前国内送检以组织和细胞学标本为主，组织,/,细胞学检测仍是目前的金标准,目前的低送检率源于：,医生观念,经济因素,约,20%,患者无组织标本,From AZ 2015 internal data,组织/细胞学检测是目前的金标准目前国内送检以组织和细胞学标本,肉眼判断是否,10%,肿瘤组织,H&E,染色,&,确定肿瘤组织,Step 1,标本病理质控,DNA,样本制备,DNA,纯化,DNA,定量,Step 2,DNA,的抽提,建立,PCR,反应体系,Step 3,PCR,反应,数据的分析,Step 4,报告的解读,报告,组织检测基本流程,肉眼判断是否10% 肿瘤组织H&E 染色 & 确定肿瘤组,组织及细胞学标本的处理,-,需要临床科室的协助与配合,组织学标本,固定要及时，离体后即时处理（,15-30,分钟内,),固定液：,10%,中性缓冲福尔马林,（终浓度,4%,）；固定液的量一般为组织体积的,10-15,倍,.,固定时间： 活检标本直接放入固定液，支气管镜活检标本的固定时间为,6,24 h,，手术切除标本的固定时间为,12 h-48 h.,细胞学标本,采用,95%,乙醇固定液，时间不宜少于,15 min,，或采用非妇科液基细胞学固定液，固定时间和方法可按说明书进行操作,所有细胞学标本应尽量制作福尔马林固定石蜡包埋（,formalin-fixed and parrffin-enbedded, FFPE,）细胞学蜡块。将细胞学标本离心沉淀置于包埋盒中，后续操作同组织学标本制作蜡块流程,中国原发性肺癌诊疗规范,2016,版,组织及细胞学标本的处理-需要临床科室的协助与配合组织学标本中,病理评估和质控对于基因检测至关重要,-,蜡块 未染色切片,H&E,染色切片,标记,肿瘤细胞比例高的区域,刮取标记以内的区域,组织处理、蜡块和,H&E,染色切片制作,病理质量控制,EGFR,基因突变,检测,无,EGFR,基因,突变检测,标本接收,质量达标,质量不达标,为什么,EGFR,检测要在,病理科开展？,病理评估和质控对于基因检测至关重要- 蜡块,肿瘤细胞含量评估对于,EGFR,结果判读影响,病理肿瘤细胞含量评估对于,EGFR,突变结果影响较大，检测流程如果没有该步骤，会造成较多的,假阴性,。,肿瘤细胞含量评估对于EGFR结果判读影响病理肿瘤细胞含量评估,血液检测的价值与优势,作为无法获取组织标本,的补充，无创取样后的,检测结果指导临床用药,实现实时动态监测，,提高全程管理水平,循环而匀质的血液,标本，在一定程度,有效克服异质性,*,已可以指导,EGFR,敏感性突变治疗用药,1. Molina-Vila M et al. J Thorac Oncol 2008;3:12241235; 2. Smouse J et al. Cancer Cytopathol 2009;117:6772; 3. Van Ejik R et al. PLoS One 2011;6:e177791; 4. Rekhtman N et al. J Thorac Oncol 2011;6:451458,血液检测的价值与优势作为无法获取组织标本实现实时动态监测，循,吉非替尼获得血液,ctDNA,伴随诊断适应症,欧盟和中国,相继批准阿斯利康易瑞沙,血液,ctDNA,伴随诊断非小细胞肺癌患者用药前检测,EGFR,突变,完整编辑ppt,吉非替尼获得血液ctDNA伴随诊断适应症欧盟和中国相继批准阿,循环血肿瘤细胞,(circulating tumour cell,，,CTC),即释放到外周血中的肿瘤细胞，目前,CTC,的捕获比较困难,循环肿瘤,DNA(circulating tumor DNA,，,ctDNA),即循环肿瘤,DNA,，指由肿瘤细胞释放到血液循环系统中的,DNA,血液标本的检测对象,完整编辑ppt,循环血肿瘤细胞(circulating tumour cel,总量少, 500,DNA,拷贝数,/200uL,血浆,ctDNA,丰度低,血浆,ctDNA,的特点,片段小,集中在,170bp,左右，检测方法需要能够耐受,In-house data,Fraction of EGFR mutant in total cfDNA,Number of EGFR M+ plasma samples,6,13,7,6,3,5,3,activating mutations, N=32,T790M, N=11,Newman,et al., Nat,Med,(2014),Taniguchi et al., Clin Cancer Res (2011),信息丢失,-,能代表全基因组信息？,Translational Oncology. 2013,Nature Volume. 2013,完整编辑ppt,总量少 ,未转移,4,期,3,期,2,期,1,期,晚期、无法获得组织标本的,NSCLC,患者,100,80,60,40,20,0,结直肠,胃食管,胰腺,乳腺,局限期,转移性,可检测ctDNA的发生率(%),100,80,60,40,20,0,可检测ctDNA的发生率(%),I,期,III,期,II,期,IV,期,1.0*10,06,1.0*10,05,1.0*10,04,1.0*10,03,1.0*10,02,1.0*10,01,1.0*10,0,1.0*10,-01,每,5ml,的突变片断,I,期,III,期,II,期,IV,期,Bettegowda et. al., Sci Transl Med (2014),完整编辑ppt,血液检测的获益人群转移未转移100806040200结直肠,非小细胞肺癌血液,EGFR,基因突变检测,中国专家共识,(2015,年,12,月,),中国国家食品药品监督管理总局（,CFDA,）在,2015,年,2,月已批准吉非替尼说明书更新，在推荐所有,NSCLC,患者的肿瘤组织都应进行,EGFR,基因突变检测基础上，如果,肿瘤标本不可评估,，则,可使用从血液（血浆）标本中获得的,ctDNA,进行评估,。,EGFR,基因突变检测流程,完整编辑ppt,非小细胞肺癌血液EGFR基因突变检测 中国国,血液检测实验流程,血浆,cfDNA,EGFR,突变检测,cfDNA,提取,加样,分离,全血,采集时间,采集方式,采血管,（,EDTA,抗凝）,及时,高效,避免污染,使用可信赖的血浆,cfDNA,提取试剂盒,使用可信赖的检测试剂盒,筛选合适,人群,cfDNA,（肿瘤标本不可评估）,（,2h,内）,采用,EDTA,抗凝管，采集,10mL,全血,2,小时内将全血充分低温离心两次，分离出不含细胞成分的血浆，放置于,-70,冻存,完整编辑ppt,血液检测实验流程血浆cfDNAEGFR突变检测cfDNA提取,慎重对待,ARMS,法的血液检测结果,EMQN External Quality Assessment Scheme for Lung Cancer (2014).,检测到突变,未检测到突变,根据突变类型指导用药,参考临床优势特征,用药,血液检测报告,完整编辑ppt,慎重对待ARMS法的血液检测结果EMQN External,非小细胞肺癌,EGFR,检测,各标本处理方式,患者,手术,标本,小活检,标本,细胞学,标本,新鲜组织于,10%,中性福尔马林固定,12h,纤支镜标本,取材后固定于,10%,中性福尔马林,穿刺标本,取材后固定于,10%,中性福尔马林,血液标本,针对晚期转移、且取不到组织（或胸水）标本的患者,，,以,EDTA,抗凝管取,10mL,全血，务必于,2h,内送至分子检测平台,将胸水引入,500ml,玻璃瓶中，并按照,1,支肝素钠,/100ml,添加抗凝，及时送到病理科处理,胸水抽取原则：抽多少送多少，送多少包埋多少，最少,50ml,，但有无肿瘤细胞与胸水量没有直接关系,完整编辑ppt,非小细胞肺癌EGFR检测各标本处理方式患者手术小活检细胞,总结,重要讯息回顾,EGFR,突变,样本,检测方法,在中国,NSCLC,患者中，约,50%,存在,EGFR,突变,准确的驱动基因检测是实现精准治疗的基础与关键,严格的质量控制是保障报告准确的关键,组织活检是目前金标准，胸水是另一选择。血液检测适用于晚期、转移且取不到组织标本的,NSCLC,患者，可作为补充,血液检测的优势在于便捷，无创，并可实现动态、定量监测,对,EGFR,敏感突变，,ARMs,有较高灵敏度和特异性,ARMS,检测血液,EGFR,突变的阴性结果需慎重解读,完整编辑ppt,总结重要讯息回顾EGFR突变样本检测方法在中国NSCLC,谢 谢！,完整编辑ppt,谢 谢！完整编辑ppt,感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络，,如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！,完整编辑ppt,感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络，完整编辑ppt,