第7章 革兰阳性球菌课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,兽医微生物学,兽医微生物学,1,第7章 革兰阳性球菌,第一节 葡萄球菌属,第二节 链球菌属,第三节 肠球菌属,第四节 蜜蜂球菌属,第7章 革兰阳性球菌第一节 葡萄球菌属,2,革兰阳性球菌,球菌种类很多，按革兰染色特性分为革兰阳性球菌和阴性球菌两大类，兽医临床上重要的是革兰阳性球菌，其中的葡萄球菌属和链球菌属的某些成员是人和动物的重要致病菌。,革兰阳性球菌 球菌种类很多，按革兰染色特性分为,3,第一节 葡萄球菌属,一、属的特征：,1、葡萄球菌分布广泛:,空气、饲料、饮水、地面及物体表面。人及畜禽的皮肤、粘膜、肠道、呼吸道及乳腺中。,2、 致病性葡萄球菌常引起各种化脓性疾患、败血症或脓毒败血症。当污染食品时，可引起食物中毒。,3、,圆形，直径0.5-1.5,m，排列成葡萄状（如图）；,无芽胞、无鞭毛，有的可形成荚膜或粘液层。,第一节 葡萄球菌属一、属的特征：,4,第7章 革兰阳性球菌课件,5,4、需氧或兼性厌氧，,可在普通培养基中生长，但不能在麦康凯培养基中生长。最适温度35-40，最适pH为7.0-7.5。,5、,致病性菌株多能,产生脂溶性的黄色,或柠檬色，不着染,培养基。,4、需氧或兼性厌氧，可在普通培养基中生长，但不能在麦康凯培养,6,6、分类,（1）按产生色素颜色：,金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和柠檬色葡萄球菌。,（2）1974年葡萄球菌属分：,金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌。,（3）,伯吉系统细菌学手册,将本属细菌分为37种，许多种内还分亚种。常见的动物致病菌有,金黄色葡萄球菌,、猪葡萄球菌、中间葡萄球菌、伪中间葡萄球菌及海豚葡萄球菌。,6、分类,7,二、金黄色葡萄球菌,常见的致病菌多为金黄色葡萄球。,1. 培养及生化特性,在普通琼脂平板形成湿润、光滑、隆起的圆形菌落，直径1-2mm，有时可达4-5mm。菌落颜色依菌株而异，初呈灰白色，继而为金黄色。在血液琼脂平板形成的菌落较大，产溶血素的菌株多为病原菌，在菌落周围呈现明显的,溶血,。,2.抗原及变异,葡萄球菌细胞壁上的抗原构造比较复杂，含有多糖及蛋白质两类抗原。,二、金黄色葡萄球菌,8,多糖抗原,具有型特异性，可分为11个型，临床分离多为5型和8型。,蛋白抗原,人源菌株都含有,葡萄球菌蛋白A,(SPA),，来自动物源菌株则少见。SPA能与人、猴、猪、犬及几乎所有哺乳动物的免疫球蛋白的Fc段结合，结合后的IgG仍能与相应抗原特异性反应。用于免疫学及诊断技术（,协同凝集试验,）。SPA与IgG结合形成的复合物在机体内具有生物学作用（趋化性、抵抗吞噬、损伤血小板等）。,多糖抗原 具有型特异性，可分为11个型，临床分离多为5型和,9,第7章 革兰阳性球菌课件,10,3、抵抗力及药物敏感性,在无芽孢菌中，葡萄球菌的,抵抗力较强,。在干燥的脓汁或血液中可存养2-3个月，8030min才能杀死。对龙胆紫、洗必泰、消毒净、新洁尔灭、度米芬等敏感。对磺胺类、青霉素、金霉素、红霉素、新霉素等抗生素敏感，但,易产生耐药性,。,4、致病性及毒力因子,金色葡萄球菌可产生多种毒素和酶，故致病性强。常引起,化脓性疾病,（创伤感染、脓肿、乳腺炎、败血症、脓毒败血症等）及,毒素性疾病,（被葡萄球菌污染的食物或饲料可引起人或动物的食物中毒性疾病）。,3、抵抗力及药物敏感性 在无芽孢菌中，葡萄球菌的抵抗力较强,11,毒力因子：,葡萄球菌蛋白A、荚膜、毒素及酶,。,毒素,溶血素，与牛羊的坏疽性乳腺炎有关，它还导致白细胞等崩解。毒素是不耐热的蛋白质（外毒素），对多种哺乳动物红细胞有溶血作用，而从动物分离的菌株常见溶血素。,作用原理：,毒素分子插入红细胞的细胞膜疏水区，形成微孔，造成红细胞溶解，属于穿孔毒素。,肠毒素,引致人类食物中毒，刺激呕吐中枢，表现呕吐、腹泻。肠毒素是结构相似的一组蛋白质，耐热抗酸，能经受10030min或胃蛋白酶的水解 根据抗原性差异可以将其分为20多个血清型，A、B两型是引起食物中毒的常见血清型，其次是D型。,毒力因子：葡萄球菌蛋白A、荚膜、毒素及酶。,12,凝固酶,多数致病株能同时产生两种凝固酶，一种分泌于菌体外（游离凝固酶）。另一种结合在菌体表面（结合凝固酶），它们能使含有抗凝剂的家兔或人的血浆凝固，称为凝固酶。凝固酶耐热，经10030min或高压灭菌仅降低少量活性。,作用：,保护菌株，有助致病菌株抵御宿主体内吞噬细胞和杀菌物质的作用，同时也使感染局限化。检测葡萄球菌的凝固酶是鉴别菌株的重要指标，致病株多数为凝固酶阳性。,另外还有耐热核酸酶、溶纤维蛋白酶、透明质酸酶，又称为扩散因子。,凝固酶 多数致病株能同时产生两种凝固酶，一种分泌于菌体外（,13,5.微生物学诊断,（1）涂片染色镜检,取脓汁、渗出液、乳汁、血液，中毒症取剩余食物等。将病料涂片染色镜检。如发现有大量典型的葡萄球菌课初步诊断。,（2）分离培养鉴定,将病料划线接种于5绵羊或兔血液琼脂平板，37 培养18-24h，菌落金黄色，周围呈溶血圈者多为致病菌株。进一步鉴定还要做凝固酶试验、分解甘露醇试验，阳性者多为致病菌。必要时可做动物试验。,5.微生物学诊断,14,第二节 链球菌属,第二节 链球菌属,15,链球菌种类多、分布广。有些可致人或动物的各种化脓性疾病、肺炎、乳腺炎、败血症等。,一、分类,按溶血性分为、 3类。在鉴定链球菌的致病性方面有一定的意义。,型溶血链球菌,在菌落周围形成不透明的草绿色溶血环，红细胞未完全溶解，血红蛋白变成绿色。此菌致病力不强，多为条件性菌。,型溶血链球菌,菌落周围形成完全透明的溶血环，红细胞完全溶解。这类菌致病力强，常引起人及动物各种疾病。,链球菌种类多、分布广。有些可致人或动物的各种化脓,16,型溶血链球菌,菌落周围无溶血现象。一般为非致病菌。,二、形态与染色,链球菌呈圆形或卵圆形，直径小于2.0,m,，常排列成链状或成双。肉汤内对数生长期的链球菌常呈长链排列，革兰氏阳性，多有荚膜。,三、培养及生化特性,多为兼性厌氧菌，少数为厌氧菌。致病菌,营养要求较高,，普通培养基中生长不良，需添加血液、血清、葡萄糖等。在血液琼脂平板上长成直径0.1-1.0mm，灰白色，表面光滑，边缘整齐的小菌落。多数致病菌株有溶血性。血清肉汤中初呈均匀浑浊，后呈颗粒状沉淀，上清透明。（实验课培养的大肠杆菌的菌液）,型溶血链球菌 菌落周围无溶血现象。一般为非致病菌。,17,菌膜,菌沉淀,均匀浑浊,对照,菌膜菌沉淀均匀浑浊对照,18,四、致病性,致病性链球菌可产生多种毒素或酶，可致人及多种动物的很多疾病，化脓感染、肺炎、乳房炎等。,溶血素,分为对氧敏感溶血素O(SLO)和对氧稳定溶血素S(SLS)两种，呈溶血性。,致热外毒素,旧名红疹毒素，主要由A群链球菌产生，致人,猩红热,，小剂量皮内注射家兔可引起局部红疹，大剂量注射可致全身红疹。,其他,不同致病菌株，可产生链激酶（溶纤维蛋白酶），透明质酸酶等，其性质作用类葡菌 。,四、致病性 致病性链球菌可产生多种毒素或酶，可致人及多种动,19,细胞壁上的脂磷壁酸(LFA)与菌体吸附于宿主黏膜有关。其荚膜成分、M蛋白等具有抗吞噬作用。,五、抵抗力,本属细菌的抵抗力不强。对青霉素、磺胺类药物敏感，易产生耐药性。,六、免疫性,链球菌的抗原结构比较复杂，机体感染后有多种抗体产生，已知抗M蛋白的抗体具有保护作用，M蛋白有多种抗原型，各型间缺乏有效的交叉保护。我国研制的猪、羊链球菌疫苗有一定的免疫效果。,细胞壁上的脂磷壁酸(LFA)与菌体吸附于宿主,20,七、微生物学诊断,病料（脓汁、乳汁、血液、组织）涂片染色镜检，见革兰氏阳性、具荚膜、,成对或链状排列的球菌，可作初步诊断。,确诊需用血液琼脂平板分离培养，观察菌落、溶血等特征，并进行生理生化试验。用群、型特异性血清作血清学试验，对病原菌定群或定型。,七、微生物学诊断 病料（脓汁、乳汁、血液、组织）涂片染色镜,21,溶血性链球菌,溶血性链球菌,22,八、主要致病菌,（一）,无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌：,三种链球菌是牛、山羊和绵羊的急性、慢性,乳腺炎,的病原菌之一，其中最常见的是无乳链球菌。,形态及染色特性,三者形态相似，直径0.5-1.0,m。均无荚膜，革兰阳性。,无乳链球菌常呈长链,停乳链球菌形成中等长度的链,乳房链球菌的链较短，有时成对排列,八、主要致病菌无乳链球菌常呈长链停乳链球菌形成中等长度的链乳,23,抵抗力及药物敏感性,对热、干燥及消毒药的抵抗力不强。对青霉素、红霉素等抗生素及磺胺类等药物均敏感。,致病性及免疫性,引致牛、山羊和绵羊的急性、慢性乳腺炎，其中最常见的是无乳链球菌。感染后，三种菌均不产生明显的免疫，目前也无可靠的多价菌苗。,微生物学诊断,取少量乳汁或其离心沉淀物涂片、染色、镜检，如发现链球菌及大量的白细胞，可作出初步诊断。,需通过生化实验做进一步的鉴定。,抵抗力及药物敏感性 对热、干燥及消毒药的抵抗力不强。对青霉,24,(二),猪链球菌：,是,猪链球菌病,的重要致病菌，并可感染人而致死。,1、血清型：,按荚膜抗原的差异分为35个血清型，包括134和1/2，猪链球菌2型是其中毒力最强、最常见的一种，猪链球菌1型、7型及9型也可使猪发病死亡。,2、致病性：,表现败血症、脑膜炎、关节炎、心内膜炎、肺炎和突然死亡。,猪链球菌2型在猪群中通常通过口鼻感染，在扁桃体中增殖，还可存在于母猪的子宫或阴道中，携带猪链球菌2型的猪对其它猪具有传染性。,(二)猪链球菌：是猪链球菌病的重要致病菌，并可感染人而致死。,25,3、毒力因子,猪链球菌2型的溶菌酶释放因子（Muramidase-released protein MRP）、胞外因子（Extracellular factor EF）、荚膜多糖抗原（Capsular Polysaccharide biosynthesis locus,cps,）和溶血素等是主要的毒力因子。其中，荚膜多糖还是猪链球菌的型特异性抗原，据此可将猪链球菌分为35个血清型。 猪链球菌2型,cps2J,基因仅可以与2型与1/2血清型产生杂交。显示,cps2J,基因为猪链球菌2型的特异性基因，可以作为鉴定猪2型链球菌的依据。,3、毒力因子 猪链球菌2型的溶菌酶释放因子（Murami,26,4、我国流行情况,我国于1991年在广东省首次证实该病的存在；1998年和1999年夏季分别在江苏部分地区猪群中爆发，并导致特定人群的25人感染，致死1人；2005年夏季，在四川省资阳、内江等8地市21个县市区爆发，致死猪只647头，感染发病人数为204，其中致死38人。,4、我国流行情况 我国于1991年在广东省首次证实该病的存,27,第7章 革兰阳性球菌课件,28,4、微生物学诊断：,（1）取样：,安全问题：,a) 在标本采集过程中，注意使用一次性隔离服、手套、防护口罩等防护措施。,b)在标本采集过程中,严格采取防护措施，防止针头等锐器刺伤。,准备工作：,a)无菌、封闭性好的试管。,b)可以清楚标记且标记不易脱落的记号笔。,c)样品采样记录表。,d)采集组织标本的无菌容器。,e)无菌的剪刀、镊子和手术刀。,f)血平皿(或者使用血培养瓶)。,4、微生物学诊断：,29,（2）样品的处理：,将采集的样品接种于高葡萄糖肉汤培养基中，37培养6h。取培养液1mL，12000r/min离心3min，去掉上清。用200L灭菌双蒸水充分重悬菌泥，100煮沸15min，再12000r/min离心5min，收集上清。上清即可以作为模板进行PCR扩增。,（2）样品的处理：将采集的样品接种于高葡萄糖肉汤培养基中，3,30,（3）PCR,：在1 个PCR管中依次加入,10 Buffer： 2.5L,2m mol/L dNTP： 5L,epf-1、epf-2： 各0.2L,cps2J-1、cps2J-2：各0.3L,mrp-1、mrp-2： 各0.3L,Taq酶 0.3L,模板 1L,补双蒸水至 25L,94预变性2min，94 50s，53 40s，72 50s，运行30个循环，最后延伸8min。取5L PCR产物，于1%琼脂糖凝胶电泳，在紫外灯下观察。,（3）PCR：在1 个PCR管中依次加入,31,cps2J-,230bp,epf -,570bp,Mrp,-860bp,琼脂糖凝胶电泳结果,cps2J-230bp琼脂糖凝胶电泳结果,32,马链球菌兽疫亚种（旧称兽疫链球菌）：,可致多种家畜的,炎症及败血病,，包括马的创伤感染、败血症、子宫炎、流产、幼驹脐带炎；牛乳腺炎、子宫炎；猪败血症、关节炎；羊败血症、心包炎、胸膜炎、肺炎；鸡败血症等。,马链球菌马亚种（旧称马腺疫链球菌）,：是引起,马腺疫,的病原体。感染马下颌淋巴结形成脓灶。,肺炎链球菌(又名肺炎球菌、肺炎双球菌)：,常引起,人大叶性肺炎,或脑膜炎，亦可致,幼畜肺炎或败血症,。,马链球菌兽疫亚种（旧称兽疫链球菌）：可致多种家畜的炎,33,第三节 肠球菌属,肠球菌属原先属于链球菌属的D群成员。鉴于二者16S rRNA序列的差异，1984年Schleifer提议将其独立建属，并于1994年获得确认。现归属于球菌纲，乳酸杆菌目，肠球菌科。除肠球菌属外该科还包括,奇异杆菌属、蜜蜂球菌属、四联球菌属及漫游球菌属,。,第三节 肠球菌属 肠球菌属原先属于链球菌属的D群,34,形态及培养特性,肠球菌为圆形或椭圆形、呈链状排列的革兰阳性球菌，老龄菌可呈革兰阴性。无鞭毛、无芽孢，为需氧或兼性厌氧菌。对营养要求高，在血平板37培养18h，可形成灰白色、不透明、表面光滑、直径0.5-1mm大小的圆型菌落，不同的菌株产生不同的溶血现象。,致病性及致病机理,家畜最常见的是本属菌所致的尿道感染，鸡则为心内膜炎。,致病机理不明，推测可能与抗生素的滥用导致菌群失调有关，肠球菌因对抗生素有较大抗性而成为机会致病菌。,形态及培养特性 肠球菌为圆形或椭圆形、呈链状排列的,35,第四节 蜜蜂球菌属,本属菌属于球菌科，仅包括蜂房蜜蜂球菌1个种，曾称为蜂房链球菌，Baily经系统鉴定后改为本名。,第四节 蜜蜂球菌属 本属菌属于球菌科，仅包括蜂房蜜蜂球,36,主要生物学特性,披针形的球菌，多呈单个存在，有时排列成对或短链状，革兰阳性，但染色不稳定，有时阴性。无荚膜，无芽孢、无运动性。微需氧或厌氧且需二氧化碳，在马铃薯琼脂培养基上生长良好。培养2448h，可形成珍珠白或半透明水滴样、边缘整齐、表面光滑、中心凸突的小菌落。,主要生物学特性 披针形的球菌，多呈单个存在，有时排,37,致病性,是欧洲幼虫腐臭病的原发病原。各品种各日龄的蜜蜂均易感，东方蜜蜂比西方蜜蜂易感，幼龄蜂比成年蜂更易感。消化道感染，潜伏期23d，12日龄幼虫最易感，侵染中肠上皮，细菌随粪便排至幼虫巢房内，成为重要的感染源。,该菌致病机理不详，酪胺是目前发现的唯一毒力因子，系细胞毒素，对45日龄蜜蜂幼虫的致死量为0.3mg。,致病性 是欧洲幼虫腐臭病的原发病原。各品种各日龄的,38,微生物学诊断,应作细菌分离培养，所获细菌再根据染色特性、形态和生化试验进行鉴定，也可采用抗血清做玻片凝集试验确诊。PCR或套式PCR法可用于快速诊断。,防控,定期检查幼虫蜂房，并对养蜂工具等进行消毒处理。隔离病蜂，轻者用链霉素、土霉素等抗生素治疗，重者焚烧患病蜂群以杜绝病害蔓延。可用灭活疫苗预防。,微生物学诊断 应作细菌分离培养，所获细菌再根据染色特性、形,39,复习思考题,1、金黄色葡萄球菌常致动物哪些疾病？,2、链球菌各型的溶血表现及在血清肉汤中的生长特性如何？,3、肠球菌属的致病性如何？,4、试述蜂房蜜蜂球菌的致病特点。,复习思考题1、金黄色葡萄球菌常致动物哪些疾病？,40,