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,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验五 中毒性肾病,1,实验五 中毒性肾病1,实验目的,复制家兔升汞中毒性肾功能不全功能模型。并观察升汞中毒家兔的一般状态(症状),尿的变化,及肾脏大体形态改变。,2,实验目的 复制家兔升汞中毒性肾功能不,实验原理,氯化汞(HgCL2)主要有肾脏排泄并选择性地使近区小管变性坏死,从而形成急性肾功能不全。本实验用氯化汞造成家兔的中毒性肾病,通过观察动物尿质、尿量及肾脏形态学变化,测定酚红排泄率的异常改变,了解急性肾功能衰竭少尿期的主要症状及发生机理。,3,实验原理 氯化汞(HgCL2)主要有肾脏排泄并选择性地使近区,实验动物及试材,家兔,体重2.5kg以上。,兔实验台,手术器械一套,木试管夹,试管,滴管,酒精灯,输尿管塑料插管,载玻片,纱布,棉球,比色标准管1套,烧杯。,1% HgCL2,1%普鲁卡因,生理盐水,5%醋酸。,4,实验动物及试材 家兔,体重2.5kg以上。4,实验方法与步骤,模型复制,手术操作-收集尿液,肾脏功能检查,酚红排泄试验,尿液检查:,蛋白,、,细胞、管型,肾脏形态,5,实验方法与步骤模型复制5,试验结果,中毒兔,对照兔,尿蛋白定性,尿中细胞,尿中管型,酚红排泄率,解剖所见,6,试验结果中毒兔对照兔尿蛋白定性尿中细胞尿中管型酚红排泄率解剖,思考题,结合实验,讨论蛋白尿,管型尿的发生机制。,7,思考题结合实验,讨论蛋白尿,管型尿的发生机制。7,模型复制,实验前2d,取健康雄性兔2只,称重后一只皮下注射1% HgCL2,(按1.51.7mL/kg,一次注射),造成急性肾功能不全;另一只则在相同部位注射等量生理盐水作为对照备用,于实验前12h禁食。,8,模型复制实验前2d,取健康雄性兔2只,称重后一只皮下注射1%,手术操作,实验时将两兔称重后仰卧位固定于兔实验台上,下腹部剪毛,局麻.,在耻骨联合上1.5cm处正中切开长约4cm,暴露膀胱,并将膀胱翻向体外,在膀胱底部找到并分离两侧输尿管,在输尿管靠近膀胱处用线结扎。,9,手术操作9,手术操作,待输尿管充盈后,用眼科,剪剪一小口,向肾盂方向,插入一细塑料管,结扎固定,以便收集尿液。,自耳缘静脉缓慢注入生理盐水30mL,以保证有足够的尿量。,10,手术操作待输尿管充盈后,用眼科剪剪一小口,向肾盂方向插入一细,酚红排泄试验,待两侧插管滴尿无出血时,从家兔耳缘静脉准确快速注入酚红溶液(0.6%)1mL,同时计时。,记录酚红最早排除时间(即滴入瓶内的尿液变红的时间)。记录60 min尿量。,测定和计算:将收集的全部尿倒入500mL量筒内,加入水至500mL处,搅拌均匀,从中吸取10mL尿液置于试管中,与标准管比色,算出1h内酚红排出量。,11,酚红排泄试验待两侧插管滴尿无出血时,从家兔耳缘静脉准确快速注,尿蛋白测定检查,取正常及中毒家兔尿液各3mL分别放入试管中,以试管夹夹试管在酒精灯上加热至沸腾(切勿使尿液溢出)。,加入5%醋酸35滴,再煮沸。若尿变清,是尿酸盐所致;若变浊,则表示尿中含有蛋白,以浊度程度不同判断尿蛋白含量标准如下:,12,尿蛋白测定检查取正常及中毒家兔尿液各3mL分别放入试管中,以,蛋白浊度判断标准,清晰,轻度,浑浊,稀薄乳样浑浊,乳浊少量碎片,絮状,浑浊,程度,-,+,+,+,+,含蛋白量g%,0,0.01-0.05,0.05-0.2,0.2-0.5,0.5,13,蛋白浊度判断标准 清晰轻度稀薄乳样浑浊乳浊少量碎片絮状程度-,尿液镜检,取12滴的尿液涂片,先高倍后低倍观察。计算10个不同高倍视野细胞的近似平均数,低倍视野观察管型并计算。,14,尿液镜检 取12滴的尿液涂片,先高倍后低倍,形态学观察,将对照及中毒家兔一并杀死,解剖取出肾脏,观察并比较二者的肉眼变化如体积,皮质条纹,色泽等。,15,形态学观察 将对照及中毒家兔一并杀死,解剖,不同稀释倍数酚红(0.6%)对应的吸光度,%,500ml,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,1,A,0.088,0.178,0.268,0.337,0.442,0.51,0.54,0.595,0.66,0.7,16,不同稀释倍数酚红(0.6%)对应的吸光度%0.10.20.3,17,17,思考题,结合试验结果,讨论尿蛋白和管型发生的机制。,18,思考题 结合试验结果,讨论尿蛋白和管型发生的机制。,
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