霍乱弧菌实验室检测 ppt课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,霍乱弧菌的实验室检测,霍乱弧菌的实验室检测,1,目的:提高检出率减少漏检以及误判的发,生,手段,检测人员是否有足够的责任心?,检测试剂准备是否齐全且符合要求?,是否严格按照检测流程进行操作?,目的:提高检出率减少漏检以及误判的发,2,雪沉概述,什么是霍乱?,霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌(V.cho/erae),引起的急性肠道传染病,发病急、传播速度快、波,及范围广、危害严重的甲类传染病。,古典生物型,01群,稻叶型lna,埃尔托生物型,彦岛型Hkc,霍乱弧菌,框乱病原菌,0139群( Benga,非o1群A,o2o200群,腹泻病原菌,雪沉概述,3,病原体,O1群,O139群霍乱弧菌,发病特征:,剧烈腹泻、呕吐、严重脱水时致酸中毒、循环衰竭而致死亡,不治疗或医疗很差的条件下病死率可达到20-50%(重症病人达70,100%),培养特性:,营养要求不高,兼性厌氧,37生长,怕酸嗜碱,pH:7.4-9.6快速生,检验依据:,WS289-2019霍乱诊断标准,霍乱防治手册(2019年第五版),病原体,4,乱的实验室验测,一样品的采集和运输,不同样品的病原分离流程及技术要点,粪便,水体,水产品,食品等,一平板分离及可疑菌落挑取,一菌落鉴定,常用快速检测方法,胶体金检测条,荧光PCR检测,检测工作中应关注的事项,乱的实验室验测,5,样品的采桌运物,采集:,病例:粪便、肛拭子、呕吐物未使用抗生素之前,健康”人:粪便、肛拭子,其他传播环节的标本:食物、水、环境类样品,监测:水样,水产品等,运输:,般要求在3小时内室温(20-25)条件下送达实验室检测,C-B运输培养基(pH8.4);(或文腊二氏保存液),碱性蛋白胨水(pH8.49.2):不是最佳的,尤其6小时内还不能进,行培养时,尽量采用CB运输培养基。,样品的采桌运物,6,分离流及技术要点,粪便的采集与保存运送,以采集病人自然排除的新鲜粪便为主,水样便采取13mL,成形便采取,指甲大小的粪量,亦可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内35cm处,采取,采集后的样品应尽快挑取接种于碱性蛋白胨水(PH8.6-9.2),同时划线分离选择性培养基(庆大/四号/TCBS平板),如不能在6,小时内送达实验室检测的样品,应插入 Cary-Blair二氏半固体保存培养基,(或文腊二氏保存液)中送检。标本与保存液比例约为1:5,分离培养要点(两管三板法):,挑取粪便,直接接种于碱性蛋白胨水(第一管)中,同时划线分离选择,性平板(庆大/四号/TCBS平板,第一板)。,第一管碱性蛋白胨水在37增菌6-8小时,沾取菌膜下表层液体,划线分离选择性平板(庆大/四号/TCBS平板,第二板),0.10.2mi表层培养物,接种碱性蛋白陈水(第二管)。同时吸取,第二管碱性蛋白胨水增菌18小时后划线分离选择性平板(庆大/四号,TCBS平板,第三板),分离流及技术要点,7,k水分流要点A,水体的采集与保存运送,水体的采集一般用无菌的500m水样瓶采集相对静止的表层水(深度为,30cm以內)500ml,密封加盖后于室温(2025)3小时内送达实验室,检测。,分离培养要点(十倍浓缩碱胨水增菌培养法):,取450m水样,用1M氬氧化钠调整至pH8.49.2。然后加10倍浓缩碱性,胨水50ml。再加入1%亚碲酸钾0.250.5m和1000单位/m青霉素lml,37培养过夜,取菌膜下表层培养物接种选择性培养基(庆大/四号/,TCBS平板)分离培养,同时吸0.10.2m表层培养物转种于碱性胨,水管中作二次增菌,37培养6&h再划线接种于选择性培养基(庆大/,四号/TCBS平板)。,k水分流要点A,8,k水产品分流况要点口,水产品的采集与保存运送,通常选取活的或者新鲜的水生动物为采集对象,有时也应考虑冰冻的水生,动物,有条件的采样点可将水生动物整体采回实验室再进行相关处置,涂抹采集:,使用无菌棉签涂抹5只以上水水生动物表面、腮部及泄殖腔,直接接种到,20ml碱性蛋白胨水作为增菌液处理。,整体或局部采集,在实验室应以无菌操作将其解剖,取鳃部和肠内容物25克剪碎后,置灭菌均,质杯或均质袋中,加入225mL倍体积的碱性蛋白胨水增菌;但小贝壳类动物,则用锤子将外壳击碎,整体放入100m三角瓶中,加入5-10倍的碱性蛋白陈,水增菌;甲壳类动物除含肉质部分外,其余部分(包括鳃、肠、足、表层外,壳等整体放入100ml三角瓶中,加入5-10倍的碱性蛋白胨水增菌,分离培养(两管两板法):,接种后的碱性蛋白胨水37培养过夜,取菌膜下表层培养物接种选择性培养,基(庆大/四号/TCBS平板).同时吸0.10.2m表层培养物转种于,陈水管中作二次增菌,37培,种于选择性培养,k水产品分流况要点口,9,图9-71霍乱弧菌在碱性蛋白胨水培养基,(pH2)中生长,液体呈均匀混浊,有菌膜(68h),左侧为阴性对照。,图9-71霍乱弧菌在碱性蛋白胨水培养基,10,霍乱弧菌实验室检测 ppt课件,11,霍乱弧菌实验室检测 ppt课件,12,霍乱弧菌实验室检测 ppt课件,13,霍乱弧菌实验室检测 ppt课件,14,霍乱弧菌实验室检测 ppt课件,15,霍乱弧菌实验室检测 ppt课件,16,霍乱弧菌实验室检测 ppt课件,17,霍乱弧菌实验室检测 ppt课件,18,霍乱弧菌实验室检测 ppt课件,19,霍乱弧菌实验室检测 ppt课件,20,霍乱弧菌实验室检测 ppt课件,21,霍乱弧菌实验室检测 ppt课件,22,