资源描述
,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1,第一节 炭疽芽胞杆菌(,Bacillus anthracis,,,B.anthraci,),一、临床意义,炭疽是人畜共患的急性传染病,主要是牛、羊等食草类动物的传染病,人可通过接触或摄食病畜及畜产品而感染,皮肤炭疽、肠炭疽、肺炭疽等,,并发败血症,甚至炭疽性脑膜炎,1 第一节 炭疽芽胞杆菌(Bacillus anthra,2,致病物质,荚膜:,抗吞噬,有利于细菌在组织内繁殖扩散,炭疽毒素:,保护性抗原、致死因子、水肿因子,2致病物质荚膜:,3,所致疾病,炭疽病,:,传染源:患病食草动物及其制品或被污染物,传播途径:接触,皮肤炭疽,食用,肠炭疽,吸入,肺炭疽,可并发败血症,,死亡率极高,3所致疾病 炭疽病:,4,乙类传染病,发生肺炭疽按甲类处理,病后可获得持久免疫力,4乙类传染病病后可获得持久免疫力,5,形态染色,:,致病菌中最大的,G,+,杆菌,,两端平切、竹节状,有毒株可有明显荚膜,二、 微生物特性,炭疽芽胞杆菌,亚甲基蓝染色,1000,革兰染色,1000,5形态染色:二、 微生物特性 炭疽芽胞杆菌,6,芽胞,椭圆形,小于菌体,位于菌体中央,多在有氧条件下形成,,25,30,,在培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中,都易形成芽胞,在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞,,尸,体严禁解剖,6芽胞椭圆形,小于菌体,位于菌体中央,7,培养特性:,需氧或兼性厌氧,生长条件不严格,最适温,度,30,35,普通培养基,扁平、粗糙、不透明、灰白色、,无光泽,边缘不整齐的菌落,低倍镜下菌落边,缘呈卷发状,7培养特性:,8,BAP,:,12,15h,不溶血,,18,24h,轻微溶血,其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速,炭疽杆菌在血琼脂平板中菌落,8BAP:1215h不溶血,1824h轻微溶血炭疽杆菌在,9,肉汤,絮状沉淀生长,明胶,3718,24h,表面液化成漏斗状,由于细菌沿穿刺线向四周扩散形成倒松树状。,NaHCO,3,BAP,:,-,有毒株,5%CO,2,、,3724,48h,、产生荚膜,呈黏液型菌落,挑取时呈粘丝状,(,鉴别要点,),-,无毒株,粗糙型菌落,9肉汤絮状沉淀生长,10,生化反应:,分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖,,有些菌能迟缓发酵甘油和水杨素产酸不产气,水解淀粉、还原硝酸盐,不产生吲哚和硫化氢、不利用柠檬酸盐、不,分解尿素,在牛乳中生长,2,4,天牛乳凝固缓慢胨化,触酶(,+,)、卵磷脂酶弱(,+,),10生化反应:分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、蕈糖,,11,抗原构造:,菌体多糖抗原:,-,与毒力无关,耐热、耐腐败,长时间煮沸仍能与特异性抗体发生环状沉淀反应(,Ascoli,热沉淀反应)。,-,特异性不高,能与其他需氧芽胞杆菌、,14,型肺炎链球菌、人,A,血型抗原发生交叉反应。,11 抗原构造:,12,荚膜多肽抗原:,-,与毒力有关,有抗吞噬作用,有利于细,菌生长和扩散,-,荚膜肿胀试验,对本菌鉴定有意义,芽胞抗原:,有免疫原性和血清学诊断价值,12荚膜多肽抗原:,13,炭疽毒素:,-,保护性抗原(,PA),、致死因子(,LF,)、水肿,因子(,EF,)三个组分,-,单独皆无致病性,与,PA,结合才显示出致病性,-,具有抗吞噬和免疫原性,13炭疽毒素:,14,抵抗力:,-,芽胞抵抗力很强,煮沸,10min,或干热,140,3h,才能杀灭,-,在干燥土壤中或皮毛中常温下存活数十年致,病力不减,牧场一旦污染,传染性可持续数,十年,-,生物武器,14抵抗力:-芽胞抵抗力很强,煮沸10min或干热140,15,-,芽胞对化学消毒剂抵抗力不一,对碘和氧化,剂较敏感,常用以下方法杀菌:,1,:,2500,碘,10min,、,3%H,2,O,2,1h,、,4%,高锰酸钾,15min,、,0.5%,过氧乙酸,10min,-,对磺胺、青霉素、链霉素、四环素、红霉素、,氯酶素均敏感,15-芽胞对化学消毒剂抵抗力不一,对碘和氧化,16,要求快速检出、分离鉴定病原菌,以利早期确诊、查清疫源、及时治疗和采取预防对策,三、微生物学检验,16要求快速检出、分离鉴定病原菌,以利早期确诊、查清疫源、及,17,标本的采集与处理,皮肤炭疽:病灶深部标本,肺炭疽:痰和血液,肠炭疽:粪、呕吐物,脑膜炭疽:,CSF,、血液,死于败血症的动物,严禁宰杀和解剖,可消,毒皮肤后割取耳朵、舌尖采集少量血液,局,限性病灶可取病变组织或附近淋巴结。,17标本的采集与处理皮肤炭疽:病灶深部标本,18,无杂菌污染标本:直接接种肉汤增菌或固体培养基,污染杂菌固体标本:加,10,倍量生理盐水充分浸泡,振,荡,10,15min,、静置,10min,,取悬液,65,水浴,30min,或,855min,杀死杂菌,保留芽胞活性,再增菌和培养,污染杂菌液体标本:离心 ,弃上清液后,加,0.5%,洗涤,剂振荡,10,15min,,离心取沉淀物增菌和分离培养,18无杂菌污染标本:直接接种肉汤增菌或固体培养基,19,生化反应,噬菌体裂解,青霉素抑制,毒力试验,检验程序,皮毛、腐败脏器等,血液,Ascoli,试验,以,NG,制成悬液经加温或饱和尿素处理,肉汤增菌培养,BAP,或戊烷脒平板,2%,兔血清肉汤,4-8h,G,染色镜检,菌落特征,动力观察,串珠试验,确定报告,荚膜肿胀试验,19生化反应噬菌体裂解青霉素抑制毒力试验检验程序皮毛、腐败脏,20,痰、呕吐物、,CSF,及炎症分泌物,2%,兔血清肉汤快速增菌,374h,荚膜肿胀试验,直接涂片,荚膜染色,G,染色,初步报告,0.2ml,注射小白鼠腹腔,,8h,后解剖,涂片,G,染色、荚膜染色,初步报告,20痰、呕吐物、CSF及炎症分泌物2%兔血清肉汤快速增菌37,21,涂片染色:,-G,染色、荚膜染色、芽胞染色,初步报告,-,荚膜荧光抗体染色,核酸检测:,核酸杂交,分离培养:,-BAP,、戊烷脒多粘菌素,B,平板,-2%,兔血清肉汤增菌分离培养,21涂片染色:,22,鉴定试验,:,形态和菌落特征,生化试验,:,表,11-1,串珠试验,:,-,接种于含青霉素,(0.05,0.5U/ml),的肉汤,中,,37 6h,,大而均匀成串的圆球状菌体,-,与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关,-,类炭疽无此现象,22鉴定试验:,23,青霉素抑制试验:,接种于含青霉素,5,、,10,、,100U/ml,琼脂平板,,3724h,生长 受抑制不生长,串珠和青霉素抑制联合试验:,兔血琼脂平板,抑菌环,青霉素纸片,23青霉素抑制试验:兔血琼脂平板抑菌环青霉素纸片,24,噬菌体裂解试验:,AP631,炭疽噬菌体,NaHCO,3,毒力试验:,接种于含,0.5%NaHCO,3,和,10%,马血清的平板,,10%CO,2,、,37,、,24,48h,有毒株形成荚膜,黏液型菌落,无毒株不形成荚膜,粗糙型菌落,动物试验:,小鼠、家兔或豚鼠皮下接种,24 噬菌体裂解试验:AP631炭疽噬菌体,25,植物凝集素试验:,Ascoli,热沉淀试验:,可作追溯性诊断,25植物凝集素试验:,26,第二节 蜡样芽胞杆菌,(Bacillus cereus,B. cereus,),26第二节 蜡样芽胞杆菌(Bacillus cere,27,一,、临床意义,食物中毒,含菌量达,10,5,/g,以上,呕吐型,耐热肠毒素,腹泻型,不耐热肠毒素,全眼球炎(外伤后),心内膜炎、败血症和脑膜炎,27一、临床意义食物中毒,28,夏、秋季多见,食物有米饭、乳品、禽畜肉类、果汁饮料等,大多为加热烹调过的熟食,在米饭中极易繁殖,由米饭受污染引起的食物中毒在国内、外均为常见,中毒食物大多无腐败、变质现象,感官性状正常,应引起注意,28夏、秋季多见,29,形态与染色:,- G,+,大杆菌,-,生长,6h,后即形成圆形芽胞、位于,菌体中心或次末端、不突出菌体,-,菌体两端平截,多数呈链状排列,-,引起食物中毒的菌株多有周鞭,毛、无荚膜,二、微生物特性,29形态与染色:二、微生物特性,30,培养特性:,需氧或兼性厌氧,营养要求不高,最适温度,3035,普通琼脂平板:菌落较大,,灰白色,表面粗糙似,毛玻璃状,或,融蜡状,,有,蜡样光泽,30培养特性:,31,BAP,有,溶血,卵黄平板,生长迅速,培养,3h,后,虽看不到菌落,但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环,称,乳光反应,或,卵黄反应,31BAP 有溶血,32,生化反应:,能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊,精,产酸不产气,能胨化牛乳,液化明胶,,VP,(,+,)、卵磷脂,酶(,+,),多次传代后生化特性常可改变,32生化反应:,33,抵抗力:,耐热,肉汤中细菌需,10020min,才能杀死,,食物中毒菌株的游离芽胞耐受,10030min,、,干热,12060min,才能杀死,对氯霉素、红霉素、庆大霉素敏感,对青霉,素、磺胺、呋喃类耐药,33抵抗力:,34,三、微生物学检验,标本采集:,可疑食物、粪便、呕吐物,因食品暴露于空气中,在一定程度都会受到本菌污染,所以不能分离出该菌就认为是引起食物中毒的病原菌。,34三、微生物学检验标本采集:,35,确诊由该菌引起的食物中毒必须,:,从食物中分离出菌数,10,5,CFU/g,,提示本菌活跃生长,构成潜在危险,从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和,(,或,),呕吐物中分离到的菌株属同一血清型,35确诊由该菌引起的食物中毒必须:从食物中分离出菌数105,36,检验程序,呕吐物、残留食物等,活菌计数,接种 普通琼脂平板、,BAP,、卵黄平板,3718-24h,纯培养,动物试验(肠毒素测定),生化反应,血清凝集(分型),报告结果,直接涂片染色镜检,36检验程序呕吐物、残留食物等活菌计数 接种,37,检验方法:,直接镜检,分离培养与活菌计数,普通琼脂平板、,BAP,、卵黄平板,鉴定与分型:,根据菌落特点、形态染色、生化反应等初步鉴定,生化分型、血清分型、噬菌体分型,肠毒素检测,37检验方法:,38,第三节产单核细胞李斯特菌和红斑丹毒丝菌,38 第三节产单核细胞李斯特菌和红斑丹毒丝菌,39,一、产单核细胞李斯特菌,(,Listeria monocytogenes,),隶属于李斯特菌属,39一、产单核细胞李斯特菌(Listeria monoc,40,(,一,),临床意义,李斯特菌属有,7,个种,只有该菌对人和动物致病,分布广泛,土壤、水、植物、人和动物粪便中均存,在,亦可自甲壳动物、蝇、蜱中分离出,能引起多种野生动物和家畜感染(羊、马、狗、猫、,鸟、鱼等),正常人粪便带菌率达,10%,左右,,70%,的人可短期带,菌。新生儿、免疫功能降低者,易受该菌感染,40(一) 临床意义 李斯特菌属有7个种,只有该菌对人和动,41,致病物质:,李斯特菌溶血素,O(LLO),主要毒力因子,内在素,表面蛋白(侵袭性蛋白),磷脂酶,C,41致病物质:,42,所致疾病,:,健康带菌者是主要的传染源,污染食物,粪,-,口途径传播,通过肠道扩散全身,胎盘和产道,感染新生儿,接触病畜及产品,眼和皮肤的局部感染,42所致疾病:健康带菌者是主要的传染源,43,孕妇李斯特菌病,新生儿李斯特菌病,成人李斯特菌病,局部感染,43孕妇李斯特菌病,44,(二) 微生物特性,形态与染色:,G,+,短小杆菌,形态与培养时间有关,-37,3,6h,,菌体主要呈杆状,随后以球杆状为,主,,3,5,天常形成长丝状,无芽胞,一般不形成荚膜,在含血清的葡萄,糖蛋白胨水中能形成粘多糖荚膜,44(二) 微生物特性形态与染色:,45,20,25,形成周鞭毛,有动力;,37,时鞭毛,很少或无,细菌接种半固体培养基,置室温,由于动力,强,细菌自穿刺线向四周弥漫生长,在离琼,脂表面数毫米处出现一个,倒伞形,的生长,是,本菌特征之一,45 2025形成周鞭毛,有动力;37时鞭毛,46,培养特性:,兼性厌氧菌、生长温度范围广,0.5,45,均生长,(,4,冷增菌),最适,30,37,营养要求不高,在含血液、血清、腹水的培养基生,长更好,BAP,极小的露滴状、侧光微显蓝绿色灰白色,菌落。狭窄的,溶血环,萘啶酸选择性平板,细密湿润、边缘整齐的兰色圆,形小菌落,肉汤,均匀混浊,表面有菌膜,46培养特性:兼性厌氧菌、生长温度范围广0.545均生长,47,生化反应:,3724h,,发酵葡萄糖、果糖、蕈糖、麦芽糖和水杨素产酸不产气,触酶(,+,)甲基红(,+,),VP,(,+,),水解七叶苷、水解精氨酸产氨,CAMP,(,+,),47生化反应:3724h,发酵葡萄糖、果糖、蕈糖、麦芽糖和,48,分型:,根据,O,抗原和,H,抗原,分,4,个血清型,,1,、,3,、,4,型可分若干亚型,抗原结构与毒力无关,与地理分布有联系,与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、大肠,杆菌等有共同抗原,48分型:根据O抗原和H抗原,分4个血清型,,49,抵抗力:,耐盐、耐碱、不耐酸,对热、常用消毒剂敏感,多种抗生素敏感,首选氨苄青霉素,青霉素、链霉素、红霉素等也敏感,对杆菌肽、多粘菌素耐药,49抵抗力:耐盐、耐碱、不耐酸,50,(三),微生物学检验,标本采集:,血液、,CSF,、宫颈、阴道、鼻烟分泌物等,直接涂片:,-,在,CSF,标本中成对排列,形如球菌,易误认为肺,炎链球菌,-,G,染色过度脱色形似流感杆菌,-,有时与类白喉杆菌也极易混淆,可用该菌,1,型和,4,型及多价荧光抗体染色,同,时作动力检查,50(三) 微生物学检验标本采集:,51,分离培养:,BAP,、巧克力平板,杂菌污染标本可用,20%NaCl,心脑浸液肉汤,2,支,1,支,10%CO,2,,,3724,48h,分离培养(,BAP,、萘啶酸选择性平板),1,支,4,“,冷增菌,”,分离培养(每,24h,一,次,共,4,次,以后每周一次,至少,4,周),51分离培养:,52,鉴定:,形态特征、菌落特点、动力及生化反应作出,鉴定,可疑菌落用已知李斯特菌,1,型、,4,型或多价抗,血清做玻片凝集试验进行鉴定,与其他,G,+,菌鉴别,52鉴定:,53,触酶 动力 马尿酸盐水解,产单核李斯,+ + -,B,群链球菌,- - +,本菌有耐碱耐盐的特点,可用触酶试验与,肠球菌鉴别,53 触酶,54,二、 红斑丹毒丝菌,(,Erysipelothrix rhusiopathiae,,,E. rhusiopathiae,),本菌隶属于丹毒丝菌属,54二、 红斑丹毒丝菌(Erysipelothrix rh,55,(一) 临床意义,广泛分布于自然界,是许多脊髓动物和无脊,髓动物的共生菌或致病菌,易感动物有小鼠、猪、鱼、火鸡等,主要储存宿主是猪,人类可因接触病畜或其产品而感染,55(一) 临床意义 广泛分布于自然界,是许多脊髓动物和无,56,毒力与其产生的神经氨酸酶有关,能使 细菌粘附至靶细胞,从事屠宰、经营鱼类和皮革行业的人员及兽医等感染机会较多,通过破损皮肤侵入,引起局限性皮肤病灶,通常称,“,鱼毒,”,或,“,类丹毒,”,56毒力与其产生的神经氨酸酶有关,能使 细菌粘附至靶细胞,57,(二)微生物特性,形态与染色:,G,+,杆菌,菌体细长、直或稍弯,单个或短链状,慢性期分离的菌落为粗糙型,常呈长丝状,而且有分支及断裂,与放线菌近似,.,无荚膜、无芽胞、无鞭毛,红斑丹毒丝菌 革兰染色,1000,57(二)微生物特性形态与染色:红斑丹毒丝菌 革兰染色 10,58,培养特性,:,厌氧或微需氧、初次分离需在厌氧环境,传代后有氧环境也能生长,最适温度,30-35,。,在含葡萄糖或血清培养基生长旺盛,58培养特性:,59,BAP,:,3524h,可形成两种菌落,光滑型:菌落细小、透明突起、发亮、边缘整,齐、质软易于悬于液体中,毒力较强,粗糙型:菌落较大,颗粒状、扁平、边缘不齐,可呈卷发状,无毒力,BAP,上新分离的菌株有,轻微的,溶血,培养时,间延长溶血现象明显,,传代后溶血特性常消失,59BAP:3524h可形成两种菌落,60,在半固体表层下数,mm,处发育最好,常呈带状,含碲盐的培养基,黑色菌落,60 在半固体表层下数mm处发育最好,常呈带状,61,葡萄糖肉汤:培养,24h,后,呈轻微混 浊,不,形成菌膜,室温静置,23,天后,管底有少量,灰色沉淀;粗糙型沉淀较多。,S-R,变异同时毒力、抗原性也发生变异,但,遗传学上不稳定,常出现互变。,61 葡萄糖肉汤:培养24h后,呈轻微混 浊,不,62,(三)微生物学检验,标本:病灶边缘组织碎片或皮肤病变抽出液,直接涂片,G,染色镜检:,G,+,细长杆菌,有时长丝形,单独或呈短链状。,分离培养:,1%,葡萄糖肉汤,,355%CO2,环境增菌,每日移种,BAP,,可出现二种菌落(,S,型和,R,型),62(三)微生物学检验标本:病灶边缘组织碎片或皮肤病变抽出液,63,鉴定依据:,G,+,、,H,2,S +,、无动力、触酶,-,、吲哚,-,、,VP -,与产单核细胞李斯特菌鉴别(表,11-2,),新霉素敏感试验:红斑丹毒丝菌,R,产单核李斯特菌,S,动物毒力试验:对小鼠、大鼠、兔、鸽均有致,病性,,0.2ml,的,24,天培养物注入小鼠腹腔,,4-5,天后,败血症而死,心血培养(,+,),63鉴定依据:,64,第四节,阴道加特纳菌,(,Gardnerella vaginalis,,,GV,),属于加特纳菌属,此菌属只有本菌一个种,64第四节 阴道加特纳菌 (Gardnere,65,一、 临床意义,与非特异性阴道炎(细菌性阴道病)有关,65一、 临床意义与非特异性阴道炎(细菌性阴道病)有关,66,二、 微生物特性,形态与染色:,-G,染色视菌株和菌龄不同而异,实验室保存,菌株趋向,G,-,,新鲜临床标本中分离的菌株,趋向,G,+,,生长在高浓度的血清中呈,G,+,-,具有多形性,两端钝圆,无芽胞、无荚,膜、无鞭毛,66二、 微生物特性形态与染色:,67,培养特性,:,兼性厌氧,营养要求较高,在含,5%,人血琼脂,平板上,3%,5%CO,2,、,35,37,环境中培养,48h,后,可形成,0.3,0.5mm,大小、圆形、光滑不,透明的菌落,在兔血平板上可出现,溶血,,在羊血平板上不溶血。,67培养特性: 兼性厌氧,营养要求较高,在含5%人血琼脂,68,生化反应:,氧化酶,-,、触酶,-,、尿素酶,-,发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等产酸不产气,水解马尿酸钠和淀粉,吲哚,-,、明胶液化,-,、,甘露醇分解,-,抵抗力:,对氨苄青霉素、羟氨苄青霉素、苯唑青霉素、青霉素、万古霉素、甲硝哒唑敏感,对萘啶酸、新霉素、多粘菌素和磺胺嘧啶耐药。,68生化反应:,69,三、微生物学检验,标本采集:,阴道和宫颈分泌物等,直接湿片镜检:,大量阴道上皮细胞,少量脓细胞及无数成簇的细小杆菌群集并吸附于上皮细胞表面,使细胞特别是边缘不清,呈锯齿形,即为线索细胞,69三、微生物学检验标本采集:,70,涂片染色镜检:,观察线索细胞,了解阴道菌群状况,常见大量,小的,G,-,和染色不定的杆菌和球杆菌,而无大的,G,+,杆菌(乳酸杆菌),pH,测定:,pH,4.5,,提示细菌性阴道病,胺试验:滴加,10%KOH,即发出鱼腥嗅为“,+”,70涂片染色镜检:,71,分离培养:,5%,人血琼脂平板、,35,、,5%CO,2,环境,48h,鉴定:,菌落、涂片染色、氧化酶,-,、触酶,-,、,糖发酵及其他生化反应,71分离培养:,72,分泌物(阴道、宫颈),新鲜湿片(找线索细胞),涂片染色镜检,分离培养(,5%,人血平板),溶血菌落,纯培养(,5%,人血平板),触酶(,-,)氧化酶(,-,),GV,的主要鉴定试验,初步报告,最后报告,72分泌物(阴道、宫颈)新鲜湿片(找线索细胞)分离培养(5%,
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