医学生毕业答辩ppt课件样板

, , , , , ,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,医学生毕业答辩幻灯片样板,医学生毕业答辩幻灯片样板,1,一 研究背景,1.,ING 4,基因,(1),ING 4,基因的生物学特性及功能,p13.31,ING 4,，,8,个外显子,诱导,P21,表达上调,一 研究背景1. IN,2,（,2,）,ING 4,的变异与肿瘤发生的关系,神经母细胞瘤细胞株,肺 癌 细 胞 株,乳 腺 癌 细 胞 株,结直肠癌细胞株,ING 4,变异,白血病？,（2） ING 4的变异与肿瘤发生的关系神经母细胞瘤细胞株肺,3,健康人心、脑、肝、肺、肾组织,ING4-V1:30%,35%,ING4-V2:42%,50%,成人及胎儿心、脑、肝、肺、肾,肿瘤组织,白血病？,消化道肿瘤？,本研究检测白血病患者骨髓,中主要剪接方式,健康人心、脑、肝、肺、肾组织ING4-V1:30%35%成,4,(3),ING 4,在多种肿瘤组织中表达下调,ING 4,神经胶质瘤,头颈部鳞状细胞癌,肺癌,消化道肿瘤,白血病,？,(3) ING 4 在多种肿瘤组织中表达下调ING 4神经胶,5,2.,原癌基因,FP 248,8q24.3,，,FP,24,8,，,3,个外显子,8,与肝癌有关,FP 248,蛋白质，,208aa,其他肿瘤 ？,2.原癌基因FP 2488q24.3，FP248，3个外显子,6,二 研究内容和研究意义,1.,研究目的,建立检测,ING 4,和,FP 248,基因的,real time,RT-PCR,和,nested RT-PCR,方法，并分析,ING 4,和,FP 248,基因对白血病和消化道肿瘤的诊断意义。,3.,研究内容,建立采用,RT-PCR,和,real-time RT-PCR,检,测,ING 4,和,FP 248,mRNA,表达的方法,研究,ING 4,和,FP 248,在多种肿,瘤细胞株中的表达水平,ING 4,和,FP 248,基因在,白血病中的临床意义,ING 4,和,FP 248,基因在消化道,肿瘤中的临床意义,二 研究内容和研究意义1.研究目的,7,3.,研究意义,为白血病和消化道肿瘤的诊断和预后提供新的更为便捷的方 法和指,标，也为这些疾病的基因治疗提供了两个靶基因。,3.研究意义,8,注,:A,：,ING 4,标准品扩增曲线；,B,：,ING 4,标准品扩增产物融解曲线，,C,：,ING 4,标准曲线,.,图,1,. ING 4,标准品,三 方法建立,1.,成功建立了采用,real-time RT-PCR,检测,ING 4,和,FP 248,基因表达的方法,注：,A,：,FP 248,标准品扩增曲线；,B,：,FP 248,标准品扩增产物融解曲线,C,：,FP 248,标准曲线,.,图,2.,FP 248,标准品,注：,A,：,GAPDH,标准品扩增产物融解曲线；,B,：,GAPDH,标准品扩增曲线；,C,：,GAPDH,标准曲线。,图,3.,GAPDH,标准品,注:A：ING 4 标准品扩增曲线；B：ING 4标准品扩增,9,2.,成功建立了采用,Western,印迹技术检测,ING 4,蛋白质表达的方法；,3.,成功建立了采用免疫组织化学技术检测组织中,ING 4,蛋白质表达的方法。,表,1.real-time RT-PCR,关键参数,2.成功建立了采用Western 印迹技术检测ING 4蛋白,10,1.,实验设计,四、肿瘤细胞株中,ING4,和,FP 248,基因,表达检测,肿瘤细胞,抽提总,RNA,检测,ING 4,mRNA,检测,FP248,mRNA,1.实验设计四、肿瘤细胞株中ING4 和FP 248基因肿瘤,11,注：,A.,细胞株中,ING 4,基因及部分标准品扩增曲线 标准品浓度：,10,2,copies/l,和,10,3,copies/l,及,10,8,copies/l.,2.,研究结果,A,B. real-time RT-PCR,测定结果,1,：,SW480,；,2,：,SGC,；,3,：,U937,；,4,：,hBM-MSC.,B,C. RT-PCR,测定结果,1,：,SW480,；,2,：,SGC,；,3,：,U937,；,4,：,hBM-MSC.,C,图,4.,FP248,在肿瘤细胞中的表达,注： A.细胞株中ING 4基因及部分标准品扩增曲线,12,注：,A.real-time RT-PCR,扩增曲线。,B. real-time RT-PCR,检测,FP248,mRNA,实验重复,3,次。,1,：,U937,；,2,：,SGC,；,3,：,hBM-MSC,；,4,：,PLA801-95D,；,5,：,A549,。,C. RT-PCR,检测,FP 248,mRNA b,：,blank,；,1,：,U937,；,2,：,SGC,；,3,：,hBM-MSC,；,4,：,PLA801-95D,；,5,：,A549,；,6,：,PC3,；,7,：,SW480,；,M,：,DNA marker (100bps DNA Ladder),。,图,5.,FP248,在肿瘤细胞中的表达,A,B,C,注： A.real-time RT-PCR 扩增曲线,13,五、,ING 4,和,FP 248,基因检测在白血 病中的表达及临床意义,表,.,骨髓标本和标本资料,注：以上标本由江苏大学附属医院提供,五、 ING 4和FP 248基因检测在白血,14,骨髓和外周血,分离单个核细胞,抽提总,RNA,逆转录并检测,ING 4,基因表达,检测,FP 248,mRNA,分析临床意义,分析临床意义,抽提,DNA,测序,测序,1.,研究方案,骨髓和外周血分离单个核细胞抽提总RNA逆转录并检测检测FP,15,注：,I,.,部分骨髓及外周血标本中,ING4,基因扩增曲线,II,：,白血病患者骨髓中,ING 4,表达水平,1,：健康对照；,2,：缺铁性贫血患者骨髓；,3,：免疫性血小板减少患者骨髓；,4,：,ALL,患者骨髓；,5,：,CLL,患者骨髓；,6,：,CML,患者骨髓；,7,：,CML,急性变患者骨髓；,8,：,M2,骨髓；,9,：,MDS,骨髓。,III,：,白血患者外 周血,ING 4,1,：健康对照；,2,：,M2,；,3,：,AML,；,4,：,CML,；,5,：,ALL,。,IV,：,Western,印迹检测结果,A1,：缺铁性贫血；,A2,：,AML,；,B1,：缺铁性贫血；,B2,：,CML,；,C1,：缺铁性贫血；,C2,：,ALL,。,图,6.,ING 4,基因在白血病患者骨髓及外周血中的表达水平,I,II,III,2.,研究结果,IV,注：I.部分骨髓及外周血标本中ING4基因扩增曲线,16,注：,A,B,和,C.,ING4,基因,cDNA,测序部分图谱 框内部,分 为第四和第五外显子接头处易缺失序列。,A,：,AML, n=4; B,：,CML,，,n=5,；,C,：,ALL,，,n,5,。,A,B,C,D,图,7. ALL,患者骨髓中,ING4,基因组,DNA,测序部分图谱,D.,ALL,患者骨髓中,ING4,基因组,DNA,测序部分图谱 框内 部分为第四和第五外显子接头处易缺失序列，左为基因组,DNA,第四外显子部分序列，右为第五外显子部分序列，,n=5,。,注：A,B 和C. ING4基因cDNA测序部分图谱,17,注：,I.,部分白血病标本及对照组标本中,FP 248,定量扩增曲线,.,II.,real-time RT- PCR,测定结果,1,：缺铁性贫血和健 康人骨髓；,2,：,CML,患者骨髓；,3.,两例女性,CML,患者急性变后骨髓；,4,：两例女性,CML,患者急性变骨髓，,HA,和,DAT,化 疗,2,周后；,5,：,ALL,患者骨髓；,6,：,M2,患者骨髓；,7,：,M3,患者骨髓；,8,：,5,例,M2,外周血；,9,：健康体检者外周血。,III.,RT-PCR,测定结果,A.,白血病患者骨髓和外周血中,FP 248,mRNA,表达,1,：健康体检者外周血；,2,：,M2,外周血；,3,：,CML,患者骨髓；,4,：,CML,急性变患者骨髓；,5,：,ALL,患者骨髓；,6,：,M2,患者骨髓；,7,：,M3,患者骨髓；,8-12,：,缺铁性贫血患者骨髓；,13,：,blank,；,M,：,DNA marker,（,DL2000,）。,B. ALL,患者外周血中,FP 248,mRNA,表达,1,：健康体检,者外周血；,2,4,：,ALL,患者外周血；,M,：,DNA marker,（,DL2000,）。,C. ALL,患者骨髓中,FP 248,mRNA,表达,1:blank,；,2,：,ALL,骨髓；,3,：缺铁性贫血患者骨髓；,M,：,DNA marker,（,DL2000,）。,图,8.,白血病骨髓或外周血中,FP 248 mRNA,的表达,I,II,表,2.,白血病标本中,FP 248,mRNA,阳性率,III,P0.05,注：I.部分白血病标本及对照组标本中FP 248定量扩增曲线,18,六、,ING 4,和,FP 248,基因表达检测在 消化道肿瘤中的临床意义,表,3.,消化道肿瘤病例资料,注：,示采集手术前外周血和手术,1,周后外周血，健康体检者外周血资料同第五部分,六、ING 4和FP 248基因表达检测在,19,1.,研究方案,胃癌,结肠癌,直肠癌,组织,检测,ING4,蛋白质,检测,ING4,mRNA,外周血,检测,FP248,mRNA,分,析,临,床,意,义,检测,FP248,mRNA,检测,ING4,mRNA,食道癌组织,1.研究方案,20,A,B,C,D,a,b,注：,A .,ING 4,基因扩增曲线,B.,ING 4,基因,相对定量结果,1.,结肠癌；,2,和,3,为直肠癌；,4,16,为胃癌。,C.,Western,印迹检测,ING 4,蛋白表达水平,p,：阳性对照；,a,：胃癌；,b.,结肠癌；,c,：直肠癌；,d,：食道癌；,e,：食道癌；,1,表示癌旁组织，,2,表示癌组织。,D.,免疫组化技术检测,ING 4,在胃癌组织中的表 达,（,100,）,a.,胃癌旁组织；,b.,胃癌组织,图,9.,ING 4,消化道肿瘤组织中表达,2.,研究结果,ABCDab注：A .ING 4基因扩增曲线 B.ING,21,注：,A.,胃癌结肠癌直肠癌中各分期中,ING 4,基因表达 未见显著性差异,(P0.05),。,B,和,C.,ING4,表达水,平与组织分化程度的关系 组织分化水平越低，,ING 4,表达越低（,P0.05) .,D.,ING 4,表达水平与,患者预后的关系,2,年内复发或转移的患者表达水平显著低于未 复发的患者（,P0.05),。,图,10.,消化道肿瘤组织中,ING 4,基因表达水平与消化道肿瘤分期、组织分化程度以及患者预后的关系,表,4.,消化道肿瘤分期,及组织分化程度,分期方法：,Robson,分期法,高分化,中分化,中低分化,低分化,未复发,复发,注：A.胃癌结肠癌直肠癌中各分期中ING 4 基因表达,22,注,.,I,.,部分消化道组织中,FP248,基因扩增曲线,II,.real-time,定量,PCR,结果,a.,胃癌 ，,b.,结肠癌，,c.,直肠,癌 。,1,：癌旁组织；,2,：癌组织；,3,：癌旁淋巴结；,III.,RTPCR,结果,1,：结肠癌；,2,：直肠癌；,3,8,：胃癌；,9,：食道癌；,N,：癌旁组织；,C,：癌组织；,L,：淋巴结转移灶；,B,：,blank,；,S,：标准,品；,M,：,DNA marker (100bps DNA Ladder),。,图,11. real-time,定量,PCR,检测,FP 248,在 消化道肿瘤中的表达,I,II,III,表,5.,癌组织和淋巴结组织中,FP 248,mRNA,阳性率,注. I.部分消化道组织中FP248基因扩增曲线,23,注：,A.,胃癌、结肠癌和直肠癌中,FP 248,表达与病理分期之间的关系 未见显著性差异,(P0.05).,B,和,C,：,FP 248,mRNA,表达水平与组织分化程度的关系 分化程度越低，,FP 248,mRNA,表达水平越高,(P0.05),。,D.,FP 248,基因表达水平与患者预后的关系,2,年内复发的患者,FP 248,基因表达水平显著于未复发者,(P0.05),。,图,12.,消化道肿瘤组织中,FP 248,基因表达水平与消化道肿瘤分期、组织分化程度以及患者预后的关系,表,4.,消化道肿瘤分期及组织分化程度,分期方法：,Robson,分期法,高分化,中分化,中低分化,低分化,未复发,复发,注：A.胃癌、结肠癌和直肠癌中FP 248表达与病理分期之间,24,注：,A. RT-PCR,。,B. nested RT-PCR,。,blank,：空白对照。,a,、,b,和,c,：胃癌,; d,和,e,：结肠癌；,f,和,g,：直肠癌；,h,：,marker,，,DL2000,；,i,：健康体检。,1,为手术前，,2,为手术后。,图,13.,ING4,基因在消化道肿瘤患者外周血单个盒细胞中的表达,注：,a,、,b,、,c,为癌组织阳性的胃癌患者，,d,、,e,、,f,为 癌组织阳性的结肠癌患者，,g,、,h,为癌组织阳性的直肠,癌患者，,M,为,DNA marker (DL2000),。,图,14. nested RT-PCR,检测消化道肿瘤患者外周血单个核细胞中,FP 248,的表达,注：A. RT-PCR。B. nested RT-PCR。b,25,表,6.,手术前后外周血单个核细胞中,FP 248,mRNA,阳性率,表,7.,外周血单个核细胞中,FP 248,mRNA,阳性率与预后的关系,与健康对照组相比，,P0.05,，,2,检验,与手术一周后为阴性的患者相比，,P0.05,，,2,检验,表6.手术前后外周血单个核细胞中FP 248 mRNA阳性率,26,七,.,结论,ING4,基因表达下调和,FP248,基因与胃癌等消化道肿瘤和白血病的发生发展可能存在相关性，检测这两个基因的表达有助于消化道肿瘤的诊断和预后。,采用,nested RT-PCR,检测外周血单个核细胞中,FP248,基因是筛选消化道肿瘤的好方法。,七.结论IN,27,致谢,特别感谢许文荣教授的悉心指导！,衷心感谢钱晖老师和朱伟老师的关心和帮助！,感谢各位专家的百忙之中指导本人答辩！,感谢我的同学和师弟师妹们的帮助和支持！,致谢特别,28,发表文章,1.,李继刚， 许文荣， 钱 晖，朱 伟 ，王 胜，步雪峰，张 蕾,蕾，徐 静， 司煜安，陈 忠，周忠海，周洪兴，施晓凤,.,fp 248 mRNA,在白血病和肿瘤中的诊断意义,.,临床检验杂志，,2008,年第,3,期,.,2.Jigang Li, Wenrong Xu, Hui Qian, Wei Zhu. Ing 4 as a novel diagno,sis marker of tumor: the relationship between ing4 and leukaemia,and solid tumor.,（待发表）,.,3.,徐 静，许文荣，钱 晖，朱 伟，李继刚，周洪兴,周忠海，阴,晴，司煜安，张蕾蕾,.,白血病细胞、多种肿瘤细胞及胃癌组织中,Pokemon,基因的定量检测,.,临床检验杂志，,2008, 26(1): 42-45.,发表文章1. 李,29,谢谢大家,谢谢大家,30,