免疫增殖性疾病的免疫学检验课件

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,第九单元,免疫增殖性疾病的免疫学检验,1,第九单元 1,概 述,免疫增殖病通常是指以浆细胞、淋巴细胞和巨噬细胞异常增生为特征的疾病，其表现往往有免疫功能异常及免疫球蛋白质和量的变化。,与免疫学检验最为密切的是,B,淋巴细胞异常增殖或其他导致免疫球蛋白异常的免疫球蛋白病，免疫球蛋白病主要表现为高免疫球蛋白血症。,2,概 述免疫增殖病通常是指以浆细胞、淋巴细胞和巨噬细胞异常增生,当临床上考虑为多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症或其它浆细胞恶变等免疫球蛋白病时，一般先以血清蛋白区带电泳、免疫球蛋白定量检测或尿本周蛋白定性作为初筛实验。,如果发现有异常球蛋白区带，继而进行免疫固定电泳、免疫球蛋白亚型定量等检测做进一步定量分析和免疫球蛋白分类鉴定。,3,当临床上考虑为多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症或其它浆细胞恶变等免,实验一,血清免疫固定电泳实验,4,实验一血清免疫固定电泳实验4,实验目的,本实验以血清免疫固定电泳实验为例进行实习,通过实习，熟悉血清免疫固定电泳的实验过程及注意事项；掌握血清免疫固定电泳检测,M,蛋白的基本原理与临床意义。,5,实验目的本实验以血清免疫固定电泳实验为例进行实习5,实验原理,将患者血清在琼脂糖凝胶介质上经电泳分离后，将固定剂和各型,Ig,及其轻链抗血清加于凝胶表面的各自泳道上，经孵育让固定剂和抗血清在各自泳道对应的凝胶内渗透并扩散，若有对应抗原存在，则在适当位置形成抗原抗体复合物并沉淀下来。电泳凝胶在洗脱液中漂洗，去除未结合蛋白质，仅保留贮存在凝胶内的抗原抗体复合物。经染色后蛋白质电泳参考道和抗原抗体沉淀区带被,Acide Violet,染色液着色。根据电泳移动距离分离出单克隆组分。,6,实验原理 将患者血清在琼脂糖凝胶介质上经电泳分离后，将固定剂,试剂与器材,Acide Violet,染色液：用,1L 10%,冰醋酸溶解,Acide,Violet,。,脱色液：用,1L,蒸馏水溶解,Citric Acid Destain,。,清洗液,：,8L,蒸馏水溶解,Tris-Buffered Saline,。,电泳仪：,spife 3000,全自动电泳仪。,7,试剂与器材Acide Violet染色液：用1L 10%冰醋,Spife 3000,全自动电泳仪,8,Spife 3000全自动电泳仪8,操作步骤,样本处理：,用生理盐水将血清标本适当稀释后备用，其中同一份血清第一泳道样本稀释,3,倍，第二至第六泳道样本稀释,5,倍。,9,操作步骤样本处理：9,区带电泳,上样,胶片准备,电泳,10,区带电泳10,沉淀反应,加抗血清,洗涤、烘干,着 色,11,沉淀反应 加抗血清洗涤、烘干着 色 11,结果分析,对染色烘干后的胶片进行判读。将第一泳道作为血清蛋白分子量参考道，观察第二至第六泳道有无对应的特异性单克隆免疫球蛋白条带。如图,12-1,所示,其中,sp,泳道为血清蛋白参考道，由下至上分别为白蛋白、,1,球蛋白、,2,球蛋白、,球蛋白、,球蛋白。第,2,、,3,、,4,、,5,、,6,泳道分别为,IgG,、,IgA,、,IgM,、,、,抗血清泳道。,12,结果分析 对染色烘干后的胶片进行判读。将第一泳道作为血清蛋白,13,13,注意事项,标本需取新鲜血清进行分析，为避免抗原过剩引起的带现象，血清于加样前应先作适当稀释并混匀。,总免疫球蛋白的水平,20g/L,稀释剂量加倍，当总免疫球蛋白水平,5g/L,稀释剂量减半（除了,ELP,泳道）。,某些样本（尤其是含有冷球蛋白或冷凝胶）冷藏或冰冻后，可能变得粘稠或混浊。这种样本可能由于扩散障碍而存在点样问题。在这样情况下，加,25l,液化剂于,75l,血清中，混匀,15s,。然后按规定程序继续进行。,14,注意事项标本需取新鲜血清进行分析，为避免抗原过剩引起的带现象,某些单克隆蛋白质可能因多聚体而导致所有的免疫固定泳道上均出现单克隆片段。在这样情况下可加,25l,还原剂（,1,-,巯基乙醇）于,75l,血清混匀并令其反应至少,15min,（至多,3h),后按规定程序继续进行。,在电泳之前，凝胶与电泳槽的贴合面充满电泳介质，并确保两者之间无气泡。,15,某些单克隆蛋白质可能因多聚体而导致所有的免疫固定泳道上均出现,在抗血清加入血清加样孔后，确保血清与凝胶之间无气泡。,染色之前的胶片一定要置于洗涤液中充分洗涤，以出去游离的血清和抗血清成分，降低染色后凝胶的背景色。,16,在抗血清加入血清加样孔后，确保血清与凝胶之间无气泡。16,临床应用,本法可对各类,Ig,及其轻链进行分型，最常用于临床常规,M,蛋白的分型与鉴定。通常用于单克隆,Ig,增殖病，单克隆,Ig,病，本周蛋白和游离轻链病、多组份单克隆,Ig,病，重链病、脑脊液寡克隆蛋白鉴别、多克隆,Ig,病的诊断和鉴别诊断。,免疫固定电泳的优点是分辨率高、敏感度高、操作周期短（仅需数小时）、结果易于分析。,17,临床应用本法可对各类Ig及其轻链进行分型，最常用于临床常规M,思考题,结合实验室的免疫固定电泳分析系统，简述血清免疫固定电泳的影响因素及其克服,的方法。,温州医学院 陶志华,18,思考题结合实验室的免疫固定电泳分析系统，简述血清免疫固定电泳,实验二 血清,IgG,定量检测的可报告范围评价实验,19,实验二 血清IgG定量检测的可报告范围评价实验 19,可报告范围指可以报告的所有结果范围，包含两种类型的范围，即分析测量范围和临床可报告范围。,分析测量范围指对没有进行任何预处理（稀释，浓缩等）的标本，分析方法能够直接测定出的待测物范围，也就是系统最终的输出值（活性或浓度）与被分析物的活性或浓度成线性比例的范围，它反映整个系统的输出特性。,概述,20,可报告范围指可以报告的所有结果范围，包含两种类型的范围，即分,临床可报告范围 是指对临床诊断、治疗有意义的待测物浓度范围。此范围如果超出了分析测量范围，可将标本通过稀释、浓缩等预处理使待测物浓度处于分析测量范围内，最后结果乘以稀释倍数。,21,临床可报告范围 是指对临床诊断、治疗有意义的待测物浓度范围,实验目的,掌握血清,IgG,定量检测的可报告范围评价的原理和方法学，了解血清,IgG,测定方法学的性能。,22,实验目的掌握血清IgG定量检测的可报告范围评价的原理和方法学,实验原理,由于抗原抗体反应的特殊性，免疫学检测项目应使用多点定标绘制标准曲线，在绘制的标准曲线上查阅结果。由于计算机技术的发展，仪器可对反应响应呈不同表现的结果做适当的处理，直接以最终计量单位方式报告检验结果，在此情况下，评价患者结果可报告范围时，可不必再去评价响应结果的真实曲线状态，只要将样品作不同程度的稀释或配制后，将预期值和实际检测值作比较，绘制在坐标纸上应呈一条通过原点、斜率为,1,的直线。直线所达的限值即为该方法的患者结果可报告范围。,23,实验原理由于抗原抗体反应的特殊性，免疫学检测项目应使用多点定,试剂与器材,选用与检测仪器相配套的试剂、校准品及其他辅助试剂,参考选用检测系统中血清,IgG,的检测范围选择低浓度标本和高浓度标本,24,试剂与器材选用与检测仪器相配套的试剂、校准品及其他辅助试剂2,操作步骤,按标本操作规程做好项目校准、常规质控，保证检测系统处于良好状态。,实验标本的配制，将血清,IgG,的高（,H,）和低（,L,）样品按：,5L,、,4L+1H,、,3L+2H,、,2L+3H,、,1L+4H,、,5H,关系各自配制混合，形成系列评价的实验样品。并计算各样品的预期值。,将系列评价的实验样品上机检测，每标本重复检测,24,次，结果记录于下表。,依照稀释关系，计算各实验样品的预期值。按实验要求，每个样品做,6,次重复测定，得,6,个实测值，它们和预期值形成,6,对数据。,25,操作步骤按标本操作规程做好项目校准、常规质控，保证检测系统处,结果分析,26,结果分析26,观察结果有无明显的数据差异，若有明显差异时，应判断是否为离群点。,在坐标纸上，以,X,表示各样品的预期值，以,Y,表示各样品的实测值，将实验结果点在图上。,若所有实验点在坐标纸上呈明显直线趋势，用直线回归对数据进行统计，得直线回归方程,Y=bX+a,，若,b,在,0.97,1.03,范围内，,a,接近于,0,，则可直接判断测定方法可报告范围在实验已涉及浓度。,若,b,不在,0.97,1.03,范围内，,a,较大，试着舍去某组数据，另作回归统计。若缩小分析范围后，回归式有明显改善，若,b,接近于,1,，,a,趋于,0,。此时，缩小的分析范围可作为真实的可报告范围。,27,观察结果有无明显的数据差异，若有明显差异时，应判断是否为离群,注意事项,进行可报告范围实验评价的样品必须与真实标本尽可能相似，也要与真实标本具有相同的基质状态。,评价样品要,5,个或以上系列浓度的实验样品，浓度范围遍及整个预期可报告范围。最高浓度的样品应达到可报告范围的上限。,若收不到低值样品，可收集高值样品，经系列不同程度稀释，形成系列评价样品。,一天内做完本实验，一般每个实验样品做,2,4,次重复测定。综合所有结果作统计学处理。,28,注意事项进行可报告范围实验评价的样品必须与真实标本尽可能相,应仔细阅读试剂说明书，某些检测项目不适宜用稀释方法获取系列浓度的临床新鲜血清标本，可采用商品质控物、校准品等。,临床可报告范围的评价要对分析标本进行最大稀释度的评价实验，以此作为临床可报告范围的上限；如果低限有临床意义时，可增加分析标本反应量来进行检测下限评价实验，并以此作为临床可报告范围下限。,29,应仔细阅读试剂说明书，某些检测项目不适宜用稀释方法获取系列浓,临床应用,可报告范围评价是评价在此范围内不同患者标本报告结果间的比值与各标本内含有的分析物确实存在这样的比例关系。,30,临床应用可报告范围评价是评价在此范围内不同患者标本报告结果间,思考题,若血清,IgG,低值为,0.5 g/L,（,L,）、高值为,40.0 g/L,（,H,），请计算按：,5L,、,4L+1H,、,3L+2H,、,1L+4H,、,5H,关系配制的系列实验样品理论浓度分别为多少？,温州医学院 陶志华,31,思考题若血清IgG低值为0.5 g/L（L）、高值为40.0,病案讨论 免疫增殖性疾病,32,病案讨论 免疫增殖性疾病32,某患者，男，,48,岁。主述“乏力，脸色苍白，骨骼疼痛、背痛”六个月，体检发现：皮肤黏膜苍白，局限性骨骼压痛，伴肝脾肿大。辅助检查发现：（,1,）血象：,Hb 8.2 g/dl,，,WBC,血小板 红细胞、白细胞和血小板镜检形态学正常，分类可见幼粒、幼红细胞，红细胞呈缗钱状排列；（,2,）骨髓象：增生活跃，浆细胞占,20,，并发现形态异常的骨髓瘤细胞。其余各系细胞大致正常；（,3,）骨,X,线片、,CT,或同位素扫描：可发现多部位穿凿样溶骨性病变或广泛性骨质疏松。,33,某患者，男，48岁。主述“乏力，脸色苍白，骨骼疼痛、背痛”六,问 题,根据以上初步检查结果，该患者初步诊断为什么疾病？,根据你的理论知识，该患者还需做哪些免疫学检验项目？可能结果如何？,与哪些疾病需进行鉴别诊断？,温州医学院 陶志华,34,问 题根据以上初步检查结果，该患者初步诊断为什么疾病？温州医,5,、世上最美好的事是：我已经长大，父母还未老,;,我有能力报答，父母仍然健康。,6,、没什么可怕的，大家都一样，在试探中不断前行。,7,、时间就像一张网，你撒在哪里，你的收获就在哪里。纽扣第一颗就扣错了，可你扣到最后一颗才发现。有些事一开始就是错的，可只有到最后才不得不承认。,8,、世上的事，只要肯用心去学，没有一件是太晚的。要始终保持敬畏之心，对阳光，对美，对痛楚。,9,、别再去抱怨身边人善变，多懂一些道理，明白一些事理，毕竟每个人都是越活越现实。,10,、山有封顶，还有彼岸，慢慢长途，终有回转，余味苦涩，终有回甘。,11,、人生就像是一个马尔可夫链，你的未来取决于你当下正在做的事，而无关于过去做完的事。,12,、女人，要么有美貌，要么有智慧，如果两者你都不占绝对优势，那你就选择善良。,13,、时间，抓住了就是黄金，虚度了就是流水。理想，努力了才叫梦想，放弃了那只是妄想。努力，虽然未必会收获，但放弃，就一定一无所获。,14,、一个人的知识，通过学习可以得到,;,一个人的成长，就必须通过磨练。若是自己没有尽力，就没有资格批评别人不用心。开口抱怨很容易，但是闭嘴努力的人更加值得尊敬。,15,、如果没有人为你遮风挡雨，那就学会自己披荆斩棘，面对一切，用倔强的骄傲，活出无人能及的精彩。,5,、人生每天都要笑，生活的下一秒发生什么，我们谁也不知道。所以，放下心里的纠结，放下脑中的烦恼，放下生活的不愉快，活在当下。人生喜怒哀乐，百般形态，不如在心里全部淡然处之，轻轻一笑，让心更自在，生命更恒久。积极者相信只有推动自己才能推动世界，只要推动自己就能推动世界。,6,、人性本善，纯如清溪流水凝露莹烁。欲望与情绪如风沙袭扰，把原本如天空旷蔚蓝的心蒙蔽。但我知道，每个人的心灵深处，不管乌云密布还是阴淤苍茫，但依然有一道彩虹，亮丽于心中某处。,7,、每个人的心里，都藏着一个了不起的自己，只要你不颓废，不消极，一直悄悄酝酿着乐观，培养着豁达，坚持着善良，只要在路上，就没有到达不了的远方！,8,、不要活在别人眼中，更不要活在别人嘴中。世界不会因为你的抱怨不满而为你改变，你能做到的只有改变你自己！,9,、欲戴王冠，必承其重。哪有什么好命天赐，不都是一路披荆斩棘才换来的。,10,、放手如拔牙。牙被拔掉的那一刻，你会觉得解脱。但舌头总会不由自主地往那个空空的牙洞里舔，一天数次。不痛了不代表你能完全无视，留下的那个空缺永远都在，偶尔甚至会异常挂念。适应是需要时间的，但牙总是要拔，因为太痛，所以终归还是要放手，随它去。,11,、这个世界其实很公平，你想要比别人强，你就必须去做别人不想做的事，你想要过更好的生活，你就必须去承受更多的困难，承受别人不能承受的压力。,12,、逆境给人宝贵的磨炼机会。只有经得起环境考验的人，才能算是真正的强者。自古以来的伟人，大多是抱着不屈不挠的精神，从逆境中挣扎奋斗过来的。,13,、不同的人生，有不同的幸福。去发现你所拥有幸运，少抱怨上苍的不公，把握属于自己的幸福。你，我，我们大家都可以经历幸福的人生。,14,、给自己一份坚强，擦干眼泪；给自己一份自信，不卑不亢；给自己一份洒脱，悠然前行。轻轻品，静静藏。为了看阳光，我来到这世上；为了与阳光同行，我笑对忧伤。,15,、总不能流血就喊痛，怕黑就开灯，想念就联系，疲惫就放空，被孤立就讨好，脆弱就想家，不要被现在而蒙蔽双眼，终究是要长大，最漆黑的那段路终要自己走完。,5,、从来不跌倒不算光彩，每次跌倒后能再站起来，才是最大的荣耀。,6,、这个世界到处充满着不公平，我们能做的不仅仅是接受，还要试着做一些反抗。,7,、一个最困苦、最卑贱、最为命运所屈辱的人，只要还抱有希望，便无所怨惧。,8,、有些人，因为陪你走的时间长了，你便淡然了，其实是他们给你撑起了生命的天空；有些人，分开了，就忘了吧，残缺是一种大美。,9,、照自己的意思去理解自己，不要小看自己，被别人的意见引入歧途。,10,、没人能让我输，除非我不想赢！,11,、花开不是为了花落，而是为了开的更加灿烂。,12,、随随便便浪费的时间，再也不能赢回来。,13,、不管从什么时候开始，重要的是开始以后不要停止；不管在什么时候结束，重要的是结束以后不要后悔。,14,、当你决定坚持一件事情，全世界都会为你让路。,15,、只有在开水里，茶叶才能展开生命浓郁的香气。,35,5、世上最美好的事是：我已经长大，父母还未老;我有能力报答，,