酶免疫测定常用仪器设备的使用和维护课件整理

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,酶免疫测定常用仪器设备的使用和维护,卫生部临床检验中心,王露楠,酶免疫测定常用仪器设备的使用和维护卫生部临床检验中心,1,主要仪器设备,加样器,加样系统,洗板机,酶标仪,全自动检测系统,主要仪器设备加样器,2,酶标仪-,酶标仪的发展,功能的拓展,更宽的测定吸光度范围。,从可见光扩展到紫外检测。,增加温控功能。,增加了酶动力学及凝集等测定功能。,增加了滤光片自动识别功能,增加了比色测定前的振板功能,增加了双波长或多波长测定功能。,增加定性和定量测定统计分析软件功能。,酶标仪-酶标仪的发展功能的拓展,3,酶标仪-,酶标仪的发展,适,用性的拓展,酶标仪由通常的96孔检测模式扩展到384甚至1536孔模式，这种酶标仪对于工作量较大、检测项目较多的实验室可加快检测速度。,酶标仪由单纯的比色测定仪器发展至与发光、荧光、时间分辨荧光、紫外检测相结合的多功能检测仪器。此外，Wallac ViewLux也有比色、发光、荧光和时间分辨荧光测定功能。这些多功能免疫测定仪器的出现，对于实验室来说，在进行ELISA测定的同时，也可以很方便地开展使用发光、荧光、时间分辨荧光方法的检测项目，而无需再额外购买仪器设备，可大大节省实验室的空间。,酶标仪-酶标仪的发展适用性的拓展,4,酶标仪-,酶标仪的使用,1.测定波长,波长范围：,400 nm750或800 nm,常用波长：,450 nm和492 nm,目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根,过氧化物酶（HRP），底物通常为四甲基联苯胺（TMB）,和邻苯二胺（OPD）,双波长比色：,应有620 nm 或630 nm或650 nm和 405 nm波长的滤光片,酶标仪-酶标仪的使用1.测定波长,5,酶标仪-,酶标仪的使用,2.,测定的吸光度范围,通常：,在02.5之间即可以满足ELISA的测定,拓宽：,可达到3.5以上,要求：,对于酶标仪的吸光度范围不必去刻意追求大的吸光度范围，主要要看在一定的吸光度范围内的线性和精密度如何,酶标仪-酶标仪的使用2.测定的吸光度范围,6,酶标仪-,酶标仪的使用,3.,光学系统,：,酶标仪的光学系统采用的是垂直光路多通道（通常为八或十二通道，亦有单通道）检测，一般为硅光管或光导纤维，除测定通道外，有的酶标仪还有一个参比通道，每次测定可进行自我校准。,性能指标：,吸光度范围、线性度、精密度和准确度,多通道：,测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系。,单通道：,可避免因通道不同所致的差异,酶标仪-酶标仪的使用3.光学系统：,7,温育功能只是酶标仪的一个附加功能，是否具有并不能说明酶标仪档次的高低及仪器的优劣。,洗板机-洗板机的选用,目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根,5之间即可以满足ELISA的测定,增加了滤光片自动识别功能,酶标仪如具有阳性判断值（CUTOFF）及其测定“灰区”（即指测定吸光度处于CUTOFF周围的一定区域，此区域内结果应为“可疑”）的统计计算功能，不但方便了实验室工作人员，而且在某些特定的情况下，有很高的实用价值。,不可把容量计数调超其适用范围。,最小可调体积（不小于拟校准体积的10%）。,选用492nm波长,在吸光度0.,按上述步骤称量10次；,以加满为宜，但不可溢出，一般为每孔300微升,洗板机-洗板机的选用,性能指标：吸光度范围、线性度、精密度和准确度,多通道：测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系。,过氧化物酶（HRP），底物通常为四甲基联苯胺（TMB）,酶标仪-酶标仪的使用,加样器-加样器的使用,多通道连续可调式移液器,以加满为宜，但不可溢出，一般为每孔300微升,按校准结果调节加样器。,酶标仪-,酶标仪的使用,4.,检测速度,酶标仪的检测速度是指其完成比色测定所需要的时间。检测速度快，有利于提高检测的精密度，即避免由于测定过程中，因测定时间不同所致的各微孔间吸光度间的差异。,温育功能只是酶标仪的一个附加功能，是否具有并不能说明酶标仪档,8,酶标仪-,酶标仪的使用,5.,震板功能,震板目的：板孔内颜色均一,6.,温育功能,无需再外配温箱。,温育功能只是酶标仪的一个附加功能，是否具有并不能说明酶标仪档次的高低及仪器的优劣。作为实验室是否选择，则可根据自已实验室的条件及需要来决定。,酶标仪-酶标仪的使用5.震板功能,9,酶标仪-,酶标仪的使用,7.,软件功能：,指酶标仪所具有的对ELISA定性和定量测定及其它测定方式如酶标动力学、紫外和凝集等的统计分析并报告结果的功能,。,灰区：,软件功能是中高档酶标仪的一个非常重要的功能。酶标仪如具有阳性判断值（CUTOFF）及其测定“灰区”（即指测定吸光度处于CUTOFF周围的一定区域，此区域内结果应为“可疑”）的统计计算功能，不但方便了实验室工作人员，而且在某些特定的情况下，有很高的实用价值。,定量：,四参数方程能较好地反映免疫测定的剂量反应曲线，最为适合于定量酶免疫测定的曲线拟合。,酶标仪-酶标仪的使用7.软件功能：指酶标仪所具有的对ELI,10,酶标仪,酶,标仪的选择,（1）工作需要,（2）酶标仪的性能：测定波长范围,滤光片配置,检测速度,吸光度范围,线性范围,分辨率,准确度,精密度等。,（3）实验室的财力,（4）售后服务,（5）外语水平,酶标仪酶标仪的选择（1）工作需要,11,酶标仪,酶,标仪的选择,酶标仪的中心定位,仪器会自动对酶标孔进行中心定位，中心定位是要消除酶标孔底的凸凹引起的厚薄不均带来检测的不准确。,光源的参照通道,参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响,酶标仪酶标仪的选择酶标仪的中心定位,12,酶标仪-,酶标仪的自检和校准,1,.外观,酶标仪上应有仪器名称,型号,编号,生产厂家,出厂日期和电源电压;各调节旋钮,按键和开关均能正常工作,外表面无明显机械损伤;显示文字应清楚完整。,2.,酶标仪的稳定性(漂移),选用492nm波长,在吸光度0.0A处,测定标称值为1.0A的光谱中性滤光片(测定操作按仪器说明进行),记录仪器示值或均值,10分钟后再次记录仪器示值或均值,前后两次测定值之差不应超过0.005A。,酶标仪-酶标仪的自检和校准 1.外观,13,酶标仪-,酶标仪的自检和校准,3.,吸光度测定的准确度,A=1/3(A,1,+A,2,+A,3,)-A,s,(A,s,为标准值);.,4.吸光度测定的重复性,在酶标板第一排加注空白溶液,第二排加入浓度为200g/ml的重铬酸钾溶液,重复测定5次.记录每次测定的第二排吸光度值,取第二排任一孔吸光度值与各次对应孔吸光度值.计算重复性。,酶标仪-酶标仪的自检和校准 3.吸光度测定的准确度,14,酶标仪-,酶标仪的自检和校准,5.,酶标仪的线性,选用540nm波长,将标称值0.5,1.0A中性滤光片分别放入专用测试板样本位置中,以空气为参比,各重复测定3次;然后将以上两片中性滤光片叠加后置于专用测试板的同一孔位中,重复测定3次.线性误差,6.,测定速度的检定,选用492nm波长，放入96孔酶标板进行测定，用秒表计测仪器的打印出全部数据的时间。,酶标仪-酶标仪的自检和校准 5.酶标仪的线性,15,酶标仪-,酶标仪的自检和校准,7,.通道差检测：取一只酶标板小孔杯（杯底须光滑、透明、无划痕、无污染）以酶标板架作载体，分别加入三种不同浓度的甲基橙溶液,200 ul,先后置于,8,个通道的相应位置，蒸馏水调零，采用双波长（测定波长,490nm,，参比波长,630,或,650nm,，以下均相同）连续测三次，观察其不同通道之间测量结果的一致性可用极差值来表示其通道差。,8.孔间差的测量：选择同一厂家、同一批号酶标板条（,8,条共,96,孔）分别加入,200 ul,甲基橙溶液（吸光度调至,0.065,0.070 A,）先后置于同一通道，蒸馏水调零，采用双波长检测，其误差大小用,1.96s,衡量。,酶标仪-酶标仪的自检和校准7.通道差检测：取一只酶标板小孔,16,酶标仪,双,波长问题,双波长测定：,由于标本中干扰组份的存在以及小孔杯本身质量等原因，常常导致测定结果的假性增高，而酶标仪提供的双波长测定功能则可以消除干扰组份或因素对测定结果的影响。,对于标本中干扰组份的清除，在选择参比波长时，我们应对于扰组份的光谱进行研究，以正确选择参比波长；而对于小孔杯本身质量问题等干扰因素的消除，只要选择远离测定波长的参比波长即可以了，这对保证测定结果的准确性是非常重要的。,酶标仪双波长问题双波长测定：,17,洗板机,-,洗板机的选用,1.,洗涤功能的充分性,基本参数：洗板次数、条数、浸泡时间,另外尽可能有：底部冲洗、两点吸液,最小的残留量,2.,板孔的兼容性与扩展性,兼容性,主要是对于国内不同规格、尺寸略有差异的微孔板的兼容，仪器应具有对微孔板的位置调节功能，适应国内ELISA试剂盒中微孔板条的实际情况。,扩展性,主要是为了适应新出现的一些应用情况，如86式的微孔板，许多洗板机无法清洗。,洗板机-洗板机的选用 1.洗涤功能的充分性,18,移液温度不得超过70。,增加定性和定量测定统计分析软件功能。,加样器-加样器的校准,将吸头离开液面，靠在管壁，去掉吸头外部的液体；,兼容性主要是对于国内不同规格、尺寸略有差异的微孔板的兼容，仪器应具有对微孔板的位置调节功能，适应国内ELISA试剂盒中微孔板条的实际情况。,在调整取液量的旋钮时，不要用力过猛，并应注意计数器显示的数值不要超过其可调范围。,通道差检测：取一只酶标板小孔杯（杯底须光滑、透明、无划痕、无污染）以酶标板架作载体，分别加入三种不同浓度的甲基橙溶液 200 ul先后置于8个通道的相应位置，蒸馏水调零，采用双波长（测定波长490nm，参比波长630或650nm，以下均相同）连续测三次，观察其不同通道之间测量结果的一致性可用极差值来表示其通道差。,发现吸嘴内有残液时必须更换；,增加了双波长或多波长测定功能。,多通道：测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系。,以加满为宜，但不可溢出，一般为每孔300微升,洗板机-洗板机的选用,加样器-加样器的使用,光源的参照通道参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响,二是洗涤效果的可靠性，即真正达到代替手工洗涤、甚至优于手工洗涤的目的，这需要咨询使用该仪器的上级单位或典型用户。,目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根,酶标仪-酶标仪的使用,光源的参照通道参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响,酶标仪-酶标仪的自检和校准,室 温：2025，测定中波动范围不大于0.,多通道：测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系。,洗板机,-,洗板机的选用,（3.仪器自身及洗涤效果的可靠性,一是仪器自身的可靠性，保证仪器在使用寿命期内可以正常显示、精确运动等，这可通过考查仪器生产厂商的技术与生产实力来论证；,二是洗涤效果的可靠性，即真正达到代替手工洗涤、甚至优于手工洗涤的目的，这需要咨询使用该仪器的上级单位或典型用户,。,（4.配件是否充分,提供常用的、易损的配件，如清洗头，应该8道、12道各备用一个，并且定期淘汰，象洗液瓶、硅胶管等应可方便买到,移液温度不得超过70。洗板机-洗板机的选用（3.仪,19,洗板机,-,洗板机的选用,5.售后服务是否及时、价格是否合理,洗板机是使用率相对较高的仪器，单从运动角度对比，其频率是酶标仪的几十倍。,6.人机界面是否友好，最好是中文显示。,洗板机-洗板机的选用 5.售后服务是否及时、价格是否合理,20,洗板机,注,意事项,1.有一定的洗涤次数,多次洗涤有利于取得好的效果，一般不超过6次。,2.注意每孔的加液量,以加满为宜，但不可溢出，一般为每孔300微升,3.建议在洗涤前进行位置调节，吸针要到微孔底部，以降低残留量。,4.建议用户采用两点吸液与底部冲洗方式，以得到好的洗涤效果。,5.每天使用后用双蒸水冲洗管路。,6.,定期维护、检修仪器及配件。,洗板机注意事项 1.有一定的洗涤次数,21,加样器-,加样器的类型,单道连续可调式移液器,多通道连续可调式移液器,单道连续移液器,单道移液管配合使用的移液器,加样器-加样器的类型单道连续可调式移液器,22,加样器-,加样器的使用,加样器-加样器的使用,23,加样器-,加样器的校准,校准环境和用具要求,：,室 温：2025,，测定中波动范围不大于,0.5。,电子天平：放置于无尘和震动影响的台面上，房间尽可能有空调。称量时，为保证天平内的湿度（相对湿度60-90%），天平内应放置一装有10 ml蒸馏水的小烧杯。,小烧杯：5,10 ml体积。,测定液体：温度为,2025,的去气双蒸水。,选定校准体积：,加样器标定体积的中间体积；,最小可调体积（不小于拟校准体积的10%）。,拟校准体积；,如为固定体积加样器，则只有一种校准体积。,加样器-加样器的校准校准环境和用具要求：,24,加样器-,加样器的校准,校准步骤,：,将加样器调至拟校准体积，选择合适的吸头；,调节好天平；,来回吸吹蒸馏水3次，以使吸头湿润，用纱布拭干吸头,垂直握住加样器，将吸头浸入液面23 mm处，缓慢（13秒）一致地吸取蒸馏水；,将吸头离开液面，靠在管壁，去掉吸头外部的液体；将加样器以30,角放入称量烧杯中，缓慢一致地将加样器压至第一,档，等待13秒，再压至第二档，使吸头里的液体完全排出；,记录称量值；,擦干吸头外面；,按上述步骤称量10次；,取10次测定值的均值作为最后加样器吸取的蒸馏水重量，按附表所列蒸馏水Z因子计算体积。按校准结果调节加样器。,加样器-加样器的校准校准步骤：,25,加样器,注,意事项,根据所需取液量选择相应的移液器及吸头,吸取液体时应缓慢匀速吸取，避免液体回吸。,在调整取液量的旋钮时，不要用力过猛，并应注意计数器显示的数值不要超过其可调范围。,连续可调式移液器不可在无吸头时使用，吸头有液体时不可平放或倒置。,操作时要慢和稳，吸嘴浸入液体深度要合适，吸液过程尽量保持不变；改吸不同液体、样品或试剂前要换新吸嘴；发现吸嘴内有残液时必须更换；新吸嘴使用前应先预测。,加样器注意事项根据所需取液量选择相应的移液器及吸头,26,加样器,注,意事项,使用了酸或有腐蚀蒸气的溶液后，最好拆下套筒，用蒸馏水清洗活塞及密封圈。,连续可调式移液器在使用完毕后应置于以液器架上，远离潮湿及腐蚀性物质。,在取液之前，所取液体应在室温（15-25,C）平衡；液体温度与室温有异时，将吸嘴预洗多次再用；移液温度不得超过70。,不可把容量计数调超其适用范围。,加样器注意事项使用了酸或有腐蚀蒸气的溶液后，最好拆下套筒，,27,自动加样系统-,选择,1.通量、速度,2.加样针：一次性，永久性,3.洗涤方式，洗涤液,4.维护校准、培训、售后服务,自动加样系统-选择1.通量、速度,28,按校准结果调节加样器。,按上述步骤称量10次；,二是洗涤效果的可靠性，即真正达到代替手工洗涤、甚至优于手工洗涤的目的，这需要咨询使用该仪器的上级单位或典型用户。,酶标仪-酶标仪的发展,软件功能：指酶标仪所具有的对ELISA定性和定量测定及其它测定方式如酶标动力学、紫外和凝集等的统计分析并报告结果的功能。,测定液体：温度为2025的去气双蒸水。,酶标仪如具有阳性判断值（CUTOFF）及其测定“灰区”（即指测定吸光度处于CUTOFF周围的一定区域，此区域内结果应为“可疑”）的统计计算功能，不但方便了实验室工作人员，而且在某些特定的情况下，有很高的实用价值。,酶标仪-酶标仪的使用,发现吸嘴内有残液时必须更换；,不可把容量计数调超其适用范围。,常用波长：450 nm和492 nm,多通道：测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系。,多通道连续可调式移液器,将吸头离开液面，靠在管壁，去掉吸头外部的液体；,最小可调体积（不小于拟校准体积的10%）。,仪器自身及洗涤效果的可靠性,温育功能只是酶标仪的一个附加功能，是否具有并不能说明酶标仪档次的高低及仪器的优劣。,根据所需取液量选择相应的移液器及吸头,将加样器以30角放入称量烧杯中，缓慢一致地将加样器压至第一,酶标仪-酶标仪的使用,灰区：软件功能是中高档酶标仪的一个非常重要的功能。,酶标仪-酶标仪的使用,加样针：一次性，永久性,过氧化物酶（HRP），底物通常为四甲基联苯胺（TMB）,酶标仪的光学系统采用的是垂直光路多通道（通常为八或十二通道，亦有单通道）检测，一般为硅光管或光导纤维，除测定通道外，有的酶标仪还有一个参比通道，每次测定可进行自我校准。,选用492nm波长，放入96孔酶标板进行测定，用秒表计测仪器的打印出全部数据的时间。,酶标仪如具有阳性判断值（CUTOFF）及其测定“灰区”（即指测定吸光度处于CUTOFF周围的一定区域，此区域内结果应为“可疑”）的统计计算功能，不但方便了实验室工作人员，而且在某些特定的情况下，有很高的实用价值。,不可把容量计数调超其适用范围。,目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根,酶标仪上应有仪器名称,型号,编号,生产厂家,出厂日期和电源电压;各调节旋钮,按键和开关均能正常工作,外表面无明显机械损伤;显示文字应清楚完整。,070 A）先后置于同一通道，蒸馏水调零，采用双波长检测，其误差大小用1.,作为实验室是否选择，则可根据自已实验室的条件及需要来决定。,称量时，为保证天平内的湿度（相对湿度60-90%），天平内应放置一装有10 ml蒸馏水的小烧杯。,单道移液管配合使用的移液器,灰区：软件功能是中高档酶标仪的一个非常重要的功能。,改吸不同液体、样品或试剂前要换新吸嘴；,5之间即可以满足ELISA的测定,酶标仪-酶标仪的使用,常用波长：450 nm和492 nm,人机界面是否友好，最好是中文显示。,称量时，为保证天平内的湿度（相对湿度60-90%），天平内应放置一装有10 ml蒸馏水的小烧杯。,液体温度与室温有异时，将吸嘴预洗多次再用；,自动加样系统-,维护、校准,管路冲洗,洗涤液量,洗涤次数,冲洗时间,洗涤液的选择,日常清洁维护,定期清洁维护,校准,准确度和精密度,按校准结果调节加样器。酶标仪-酶标仪的使用自动加样系统-维,29,070 A）先后置于同一通道，蒸馏水调零，采用双波长检测，其误差大小用1.,洗板机-洗板机的选用,光源的参照通道参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响,连续可调式移液器在使用完毕后应置于以液器架上，远离潮湿及腐蚀性物质。,不可把容量计数调超其适用范围。,提供常用的、易损的配件，如清洗头，应该8道、12道各备用一个，并且定期淘汰，象洗液瓶、硅胶管等应可方便买到,不可把容量计数调超其适用范围。,不可把容量计数调超其适用范围。,而对于小孔杯本身质量问题等干扰因素的消除，只要选择远离测定波长的参比波长即可以了，这对保证测定结果的准确性是非常重要的。,选用540nm波长,将标称值0.,酶标仪的检测速度是指其完成比色测定所需要的时间。,光源的参照通道参照通道是用来校准由于电压不稳或灯泡磨损带来的影响,增加了酶动力学及凝集等测定功能。,酶标仪的光学系统采用的是垂直光路多通道（通常为八或十二通道，亦有单通道）检测，一般为硅光管或光导纤维，除测定通道外，有的酶标仪还有一个参比通道，每次测定可进行自我校准。,称量时，为保证天平内的湿度（相对湿度60-90%），天平内应放置一装有10 ml蒸馏水的小烧杯。,按上述步骤称量10次；,酶标仪如具有阳性判断值（CUTOFF）及其测定“灰区”（即指测定吸光度处于CUTOFF周围的一定区域，此区域内结果应为“可疑”）的统计计算功能，不但方便了实验室工作人员，而且在某些特定的情况下，有很高的实用价值。,酶标仪-酶标仪的使用,通道差检测：取一只酶标板小孔杯（杯底须光滑、透明、无划痕、无污染）以酶标板架作载体，分别加入三种不同浓度的甲基橙溶液 200 ul先后置于8个通道的相应位置，蒸馏水调零，采用双波长（测定波长490nm，参比波长630或650nm，以下均相同）连续测三次，观察其不同通道之间测量结果的一致性可用极差值来表示其通道差。,室 温：2025，测定中波动范围不大于0.,按校准结果调节加样器。,小烧杯：510 ml体积。,孔间差的测量：选择同一厂家、同一批号酶标板条（8条共96 孔）分别加入200 ul甲基橙溶液（吸光度调至0.,检测速度快，有利于提高检测的精密度，即避免由于测定过程中，因测定时间不同所致的各微孔间吸光度间的差异。,多次洗涤有利于取得好的效果，一般不超过6次。,增加定性和定量测定统计分析软件功能。,酶免疫测定常用仪器设备的使用和维护,移液温度不得超过70。,移液温度不得超过70。,不可把容量计数调超其适用范围。,售后服务是否及时、价格是否合理,酶标仪-酶标仪的使用,软件功能：指酶标仪所具有的对ELISA定性和定量测定及其它测定方式如酶标动力学、紫外和凝集等的统计分析并报告结果的功能。,目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根,每天使用后用双蒸水冲洗管路。,更宽的测定吸光度范围。,选用540nm波长,将标称值0.,最小可调体积（不小于拟校准体积的10%）。,按校准结果调节加样器。,此外，Wallac ViewLux也有比色、发光、荧光和时间分辨荧光测定功能。,最小可调体积（不小于拟校准体积的10%）。,通道差检测：取一只酶标板小孔杯（杯底须光滑、透明、无划痕、无污染）以酶标板架作载体，分别加入三种不同浓度的甲基橙溶液 200 ul先后置于8个通道的相应位置，蒸馏水调零，采用双波长（测定波长490nm，参比波长630或650nm，以下均相同）连续测三次，观察其不同通道之间测量结果的一致性可用极差值来表示其通道差。,作为实验室是否选择，则可根据自已实验室的条件及需要来决定。,谢谢,070 A）先后置于同一通道，蒸馏水调零，采用双波长检测，其,30,