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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,革兰氏阴性 革兰氏阳性,细菌细胞壁结构,染色结果,G,菌,G,菌,仔细观察（染色性，形态，排列），绘图,革兰氏染色法由丹麦医生,Hans Christian Gram(1853-1938),于,1884,年创立，是细菌学中重要的鉴别染色法。,通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰阳性菌（,G+,）和革兰阴性菌（,G-,）两大类。,革兰氏染色的意义,鉴别细菌，初筛标本,帮助选择用药,帮助确定致病物质,Gram,HC(1884).ber die isolierte Frbung der Schizomyceten in Schnitt-und Trockenprparaten(in German).Fortschritte der Medizin 2:185189.,G,菌,胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入。同时乙醇使细胞壁脱水形成一道屏障，阻止结晶紫,碘复合物从胞内渗出，故细菌仍保留初染时的,紫色。,G,菌,胞壁结构较为疏松，肽聚糖层很薄，外膜含大量脂质，易被乙醇溶解，致使细胞壁通透性变大，使结晶紫,-,碘复合物被乙醇溶解析出而脱色，故细菌呈复染时的,红色。,法国生物梅里埃全自动革兰氏染色系统,PREVI Color Gram,操作简便，只需手工加载涂片,5,分钟内即可得到标准化结果,显著提高结果重复性、可靠性,操作完成后涂片已干燥，可直接镜检,减少接触感染性标本，提高生物安全性,高通量设计，每小时可处理,180/450,张涂片,涂片卡玻片转盘的卡位上，随转盘高速旋转。,玻片位置固定，没相互接触，不会交叉污染。,5,个喷嘴在设定的时间内定量定时喷出不同的溶液以完成染色过程。,染色步骤可设定，节省试剂。,标准的八步骤染色流程，结果标准可靠。,喷雾染色,关键技术,革兰氏染色,机械转盘,PREVI Color Gram,实验内容,一，革兰氏染色（操作）,二，细菌接种,平板划线法（操作）,斜面培养基接种法（操作）,半固体培养基接种法,/,穿刺接种法（操作）,液体培养基接种法（操作）,细菌在液体、固体、半固体培养基中的生长现象（示教）,实验步骤（无菌操作）,拔或塞试管帽时，应将试管口通过火焰略加烧灼；,接种环使用前后应在火焰上烧灼灭菌,实验步骤（制备玻片标本）,涂片：,先取一接种环生理盐水放于载玻片的一端，左手持菌液试管，右手持接种环，用接种环从试管培养液中挑取少许,大肠杆菌或金黄色葡萄球菌,培养物与盐水混匀，涂成直径约,1,厘米的涂片，涂片应薄而均匀。,干燥：,涂片最好放置室温中，待其自然干燥。,固定：,手执玻片的一端，标本面向上，在火焰外层较快地来回通过三次，约,23,秒，以玻片反面触及皮肤，以不觉过分地烫为度。（待放置冷却后，进行染色。）,固定的目的,杀死微生物，固定其细胞结构,保证菌体能牢固地粘附在载玻片上，以免水洗时被水冲掉,改变菌体对染料的通透性，一般死细胞原生质容易着色。,实验步骤（革兰氏染色）,初染：滴加,结晶紫,染液,染,1,分钟,水洗。,媒染：滴加,卢戈氏碘液,作用,1,分钟后,水洗。,脱色：加,95%,酒精,23,滴于涂片上,频频摇晃,35,秒钟后,斜持玻片,使酒精流去,;,再滴加酒精,如此反复,23,次,直至流下的酒精无色或稍呈淡紫色时为止,约半分钟。水洗。,复染：滴加,稀释石炭酸复红,染,1/21,分钟,水洗,待干,油镜检查。,实验步骤（油镜的使用）,准备：将所用低倍物镜拉下，,上抬载物台使玻片靠近物镜最近,聚焦：先用粗调螺旋，,往下调节载物台，使玻片缓慢远离物镜，找到物象,，再用细调螺旋，聚焦,先用低倍镜，并将所要观察部分移至视野的中央。,移开低倍镜，换用高倍镜（,20X,；,40X,）进一步聚焦，并把所要观察部分移至视野中央。,移开高倍镜，并将油镜转玻片一侧备用。,在盖玻片上滴一滴香柏油，然后将油镜转正对准通光孔，油镜镜头浸入香柏油,(,注意操作动作要慢，以免压碎玻片或损坏镜头,),。,从目镜内观察，用细调螺旋微微上下聚焦，至视野内出现清晰的物像时为止。,实验步骤（油镜的清洁和显微镜的保护）,油镜使用完毕后，必须用拭镜纸沾少许二甲苯将油镜上的香柏油擦净，并用干的拭镜纸檫去二甲苯。,显微镜用毕后，升高镜筒，取下玻片标本，转动旋转盘，使每个物镜都不对准通光孔，再下降镜筒，使物镜接近载物台，将聚光镜降下，最后放回橱内。,平板分区划线,平板分区划线,The Robobact System is a modern,completely automatic processor which allows bacteriological isolation without the need to open the sample container,guaranteeing maximum safety for the operator and complete standardization of seeding.,意大利,Diesse,公司产品,Robobact,System,关键技术,划线分离技术,条形码识别,轨道和机械臂,计算机控制,专用样本采集管,测定培养基导电性和电压,测定气压,光电技术,(CO,2,感受器，指示剂变色或释放荧光,-,电信号,),培养基,适合于细菌生长繁殖需要的各种营养物质在,PH(7.27.6),条件下配制而成的基质。,培养基配成后,灭菌,培养基分类,（,按物理性状分,）,液体培养基,半固体培养基（含,0.,1,0.5,%,琼脂）,观察穿刺线、保存菌种,固体培养基（含,2,3%,琼脂）,平板：划线分离，菌落计数，分离纯化,斜面：纯种移种,培养基分类,（,按营养成分分类,）,基础培养基,含细菌菌生长的基本营养成份,营养培养基,加入糖，血，血清，酵母浸膏等，用于营养要求高的细菌的培养，如：血平板,培养基分类,（,按用途分,）,合成培养基,用于研究细菌代谢过程、特殊菌的分离培养,鉴别培养基,含有特定的作用底物，如糖发酵管，葡萄糖蛋白胨水,选择培养基,在培养基中加入抑制某些细菌生长的物质，而选择性地允许另外一些细菌的生长。如肠道致病菌选择培养基：,SS,培养基，抗生素培养基,厌氧培养基,庖肉培养基,实验内容,一，革兰氏染色（操作）,二，细菌接种,平板划线法（操作）,斜面培养基接种法（操作）,半固体培养基接种法,/,穿刺接种法（操作）,液体培养基接种法（操作）,一，平板划线法（操作）,实验步骤（平板划线法）,不要说话，严格无菌操作,灼烧接种环后要冷却,取一环葡萄球菌或大肠杆菌,划线时用腕力，不要使接种环嵌入琼脂,各个分区要分明,在培养皿底部贴标签,倒置培养以防止结晶水冲散细菌,二，斜面培养基接种法（操作）,斜面接种时的无菌操作,(1),接种灭菌,(2),开启棉塞,(3),管口灭菌,(4),挑起菌苔,(5),接种,(6),塞好棉塞,实验步骤（斜面接种法）,用左手握住菌种管（葡萄球菌或大肠杆菌）和斜面培养基管，右手持接种环。,用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌。,用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取用来接种的菌苔。,伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线。,接种完成之后，用火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，置于,37,培养。,三，半固体培养基接种法,/,穿刺接种法（操作）,穿刺接种法,实验步骤（穿刺接种法）,用左手握住菌种管（大肠杆菌或痢疾杆菌）和半固体培养管，右手持接种针。,用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌几次。,用接种针伸入菌种管内，挑取用来接种的菌苔。,垂直刺入半固体中心，至近管底部，然后沿穿刺线退出。,塞回棉塞，接种针重新灭菌。接种完毕，于,37,培养,1824h,，观察生长情况。,四，液体培养基接种法（操作）,实验步骤（液体培养基接种法）,用灭菌接种环挑取用来接种的菌苔。,菌种管：葡萄球菌,/,大肠埃希菌,/,痢疾杆菌,在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌均匀得散落在液体培养基中。,
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