疟疾镜检课件

疟原虫镜检技术疟原虫镜检技术疟原虫镜检技术1 1一、显微镜镜检用于疟疾诊断一、显微镜镜检用于疟疾诊断显微镜镜检仍是目前广泛应用的疟疾诊断显微镜镜检仍是目前广泛应用的疟疾诊断技术技术(金标准）金标准）主要优点主要优点-特异高特异高-能区分虫种能区分虫种-能分期能分期-能计数能计数-1小时内能完成诊断程序小时内能完成诊断程序一、显微镜镜检用于疟疾诊断显微镜镜检仍是目前广泛应用的疟疾2 21.1.所需设备所需设备（1 1）载玻片）载玻片）载玻片）载玻片（2 2）采血针）采血针）采血针）采血针（3 3）玻片盒玻片盒玻片盒玻片盒（4 4）7575乙醇棉球乙醇棉球乙醇棉球乙醇棉球（5 5）铅笔铅笔铅笔铅笔（6 6）登记表登记表登记表登记表 二、血片制作及染色二、血片制作及染色1.所需设备二、血片制作及染色3 3 2血片制作血片制作（1 1）取血部位）取血部位）取血部位）取血部位采血部位有指尖、耳垂、婴儿可在足跟取血采血部位有指尖、耳垂、婴儿可在足跟取血采血部位有指尖、耳垂、婴儿可在足跟取血采血部位有指尖、耳垂、婴儿可在足跟取血（2 2）涂制血膜涂制血膜涂制血膜涂制血膜 厚血膜的涂制：厚血膜的涂制：厚血膜的涂制：厚血膜的涂制：用推片的左下角刮取血液用推片的左下角刮取血液4-5l4-5l（约火柴头大小），（约火柴头大小），将血滴涂于载片的中央偏右，将血滴涂于载片的中央偏右，由里向外划圈涂成直径为由里向外划圈涂成直径为0.8-10.8-1厘米的厚薄均匀的圆厘米的厚薄均匀的圆形厚血膜。形厚血膜。2血片制作用推片的左下角刮取血液4-5l（约火柴头4 4用棉球抹净角上的血渍，用棉球抹净角上的血渍，再刮取血液再刮取血液1.5l1.5l约约1/41/4火柴头大小火柴头大小)，将推片的，将推片的一端置于血滴之前，当血一端置于血滴之前，当血液在载玻片与推片之间向液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约两侧扩展至约2cm2cm宽时，宽时，使两玻片保持使两玻片保持25-3525-35角，角，从右向左迅速向前推成舌从右向左迅速向前推成舌状薄血膜，长约状薄血膜，长约2.5CM2.5CM。（一）薄血膜的涂制：（一）薄血膜的涂制：（一）薄血膜的涂制：5 5（3 3）厚薄血膜的位置：）厚薄血膜的位置：）厚薄血膜的位置：）厚薄血膜的位置：每张载玻片上分别做每张载玻片上分别做每张载玻片上分别做每张载玻片上分别做1 1 1 1个薄血膜，个薄血膜，个薄血膜，个薄血膜，1 1 1 1个厚血膜。标个厚血膜。标个厚血膜。标个厚血膜。标准血膜的位置如下图所示。准血膜的位置如下图所示。准血膜的位置如下图所示。准血膜的位置如下图所示。（4 4）血膜的编号）血膜的编号）血膜的编号）血膜的编号制成血片后，待薄血膜干后用铅笔将代号或个人制成血片后，待薄血膜干后用铅笔将代号或个人制成血片后，待薄血膜干后用铅笔将代号或个人制成血片后，待薄血膜干后用铅笔将代号或个人编号写于血膜基部，编号要与登记本及结果报告编号写于血膜基部，编号要与登记本及结果报告编号写于血膜基部，编号要与登记本及结果报告编号写于血膜基部，编号要与登记本及结果报告单上的编号相一致，以防差错。单上的编号相一致，以防差错。单上的编号相一致，以防差错。单上的编号相一致，以防差错。（3）厚薄血膜的位置：6 6标准血膜示意图标准血膜示意图标准血膜示意图7 7（二）血片的染色（二）血片的染色1 1薄血膜的固定薄血膜的固定薄血膜的固定薄血膜的固定血片完全干燥后才可染色血片完全干燥后才可染色血片完全干燥后才可染色血片完全干燥后才可染色固定的方法：固定的方法：固定的方法：固定的方法：将涂片的血膜面向上，厚血膜在上端，略倾斜放将涂片的血膜面向上，厚血膜在上端，略倾斜放将涂片的血膜面向上，厚血膜在上端，略倾斜放将涂片的血膜面向上，厚血膜在上端，略倾斜放置，干后用小玻棒蘸甲醇在薄血膜上轻轻抹过以固置，干后用小玻棒蘸甲醇在薄血膜上轻轻抹过以固置，干后用小玻棒蘸甲醇在薄血膜上轻轻抹过以固置，干后用小玻棒蘸甲醇在薄血膜上轻轻抹过以固定薄血膜。定薄血膜。定薄血膜。定薄血膜。（注意：厚血膜不能固定注意：厚血膜不能固定注意：厚血膜不能固定注意：厚血膜不能固定）（二）血片的染色8 82 2 染色用水和冲洗用水配制染色用水和冲洗用水配制染色用水和冲洗用水配制染色用水和冲洗用水配制常常常常用用用用中中中中性性性性的的的的蒸蒸蒸蒸馏馏馏馏水水水水或或或或经经经经煮煮煮煮沸沸沸沸过过过过滤滤滤滤的的的的冷冷冷冷开开开开水水水水。用用用用pH7.0pH7.0pH7.2pH7.2的的的的缓缓缓缓冲冲冲冲液液液液效效效效果果果果最最最最佳佳佳佳。在在在在没没没没有有有有蒸蒸蒸蒸馏馏馏馏水水水水的的的的情情情情况况况况下下下下，也也也也可用井水、河水、泉水或雨水。为了使血膜着色较好。可用井水、河水、泉水或雨水。为了使血膜着色较好。可用井水、河水、泉水或雨水。为了使血膜着色较好。可用井水、河水、泉水或雨水。为了使血膜着色较好。（1 1）两种贮备液的配制：）两种贮备液的配制：）两种贮备液的配制：）两种贮备液的配制：贮备液贮备液贮备液贮备液I1/15MI1/15M磷酸氢二钠（磷酸氢二钠（磷酸氢二钠（磷酸氢二钠（NaNa2 2HPOHPO4 4）溶液）溶液）溶液）溶液NaNa2 2HPOHPO449.5g9.5g蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水1000ml1000ml贮备液贮备液贮备液贮备液1/15M1/15M磷酸二氢钾磷酸二氢钾磷酸二氢钾磷酸二氢钾（KHKH2 2POPO44）溶液）溶液）溶液）溶液KHKH2 2POPO4 49.07g9.07g蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水1000ml1000ml2染色用水和冲洗用水配制9 9（2 2）缓冲液的配制）缓冲液的配制）缓冲液的配制）缓冲液的配制PHM/15NaPHM/15Na2 2HPOHPO4 4M/15KHM/15KH2 2POPO4 4DWDW(ml)(ml)(ml)(ml)(ml)(ml)6.849519006.849519007.063379007.063379007.168329007.168329007.273279007.273279007.481199007.48119900加缓冲液的加缓冲液的加缓冲液的加缓冲液的PHPH可用试纸或可用试纸或可用试纸或可用试纸或0.02%0.02%酚红液测定酚红液测定酚红液测定酚红液测定。亦可用亦可用亦可用亦可用PH7.0PH7.0中性蒸馏水稀释染剂中性蒸馏水稀释染剂中性蒸馏水稀释染剂中性蒸馏水稀释染剂（2）缓冲液的配制1010（1 1）配制吉姆萨（）配制吉姆萨（）配制吉姆萨（）配制吉姆萨（GiemsaGiemsa）染液：）染液：）染液：）染液：吉姆萨粉吉姆萨粉吉姆萨粉吉姆萨粉10g10g 甲醇甲醇甲醇甲醇500ml500ml 甘油甘油甘油甘油500ml500ml 将将将将吉吉吉吉姆姆姆姆萨萨萨萨粉粉粉粉置置置置于于于于研研研研钵钵钵钵中中中中，加加加加入入入入少少少少量量量量甘甘甘甘油油油油充充充充分分分分研研研研磨磨磨磨，然然然然后后后后边边边边加加加加边边边边磨磨磨磨，至至至至甘甘甘甘油油油油加加加加完完完完为为为为止止止止，倒倒倒倒入入入入500ml500ml有有有有塞塞塞塞玻玻玻玻璃璃璃璃瓶瓶瓶瓶中中中中。在在在在研研研研钵钵钵钵中中中中加加加加入入入入少少少少量量量量甲甲甲甲醇醇醇醇洗洗洗洗涤涤涤涤掉掉掉掉剩剩剩剩余余余余部部部部分分分分并并并并倒倒倒倒入入入入瓶瓶瓶瓶内内内内，重重重重复复复复数数数数次次次次，一一一一并并并并倒倒倒倒入入入入瓶瓶瓶瓶中中中中，至至至至研研研研钵钵钵钵中中中中甘甘甘甘油油油油洗洗洗洗净净净净为为为为止止止止。塞塞塞塞紧紧紧紧瓶瓶瓶瓶塞塞塞塞，充充充充分分分分摇摇摇摇匀匀匀匀，在在在在室室室室温温温温下下下下放放放放置置置置3-53-5天天天天，每每每每天天天天摇摇摇摇动动动动，即即即即可可可可使使使使用用用用。放放放放置置置置时间越长染色效果愈佳。时间越长染色效果愈佳。时间越长染色效果愈佳。时间越长染色效果愈佳。（1）配制吉姆萨（Giemsa）染液：1111（2 2）染色方法：染色方法：染色方法：染色方法：A.A.常规染色常规染色常规染色常规染色 用用用用PH7.0-7.2PH7.0-7.2缓缓缓缓冲冲冲冲液液液液或或或或蒸蒸蒸蒸馏馏馏馏水水水水将将将将吉吉吉吉氏氏氏氏原原原原液液液液与与与与缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液1 1：2020稀释。稀释。稀释。稀释。分分分分别别别别加加加加数数数数滴滴滴滴经经经经稀稀稀稀释释释释吉吉吉吉氏氏氏氏染染染染液液液液于于于于厚厚厚厚、薄薄薄薄血血血血膜膜膜膜，染染染染色色色色25-3025-30分分分分钟钟钟钟后后后后，用用用用中中中中性性性性蒸蒸蒸蒸馏馏馏馏水水水水轻轻轻轻轻轻轻轻将将将将片片片片上上上上的的的的染染染染液液液液冲冲冲冲去去去去，（冲冲冲冲洗洗洗洗时时时时勿勿勿勿用用用用水水水水直直直直接接接接对对对对准准准准厚厚厚厚血血血血膜膜膜膜，以免血膜脱落以免血膜脱落以免血膜脱落以免血膜脱落）凉干后镜检。）凉干后镜检。）凉干后镜检。）凉干后镜检。（2）染色方法：1212BB.快速吉氏染色快速吉氏染色快速吉氏染色快速吉氏染色在每毫升缓冲液中加吉氏原液在每毫升缓冲液中加吉氏原液在每毫升缓冲液中加吉氏原液在每毫升缓冲液中加吉氏原液3 3滴，（滴，（滴，（滴，（10-10-15%15%吉氏染液）分别加数滴于厚、薄血膜上，吉氏染液）分别加数滴于厚、薄血膜上，吉氏染液）分别加数滴于厚、薄血膜上，吉氏染液）分别加数滴于厚、薄血膜上，染色染色染色染色5 5分钟，用流水轻轻冲洗干净，凉干后镜分钟，用流水轻轻冲洗干净，凉干后镜分钟，用流水轻轻冲洗干净，凉干后镜分钟，用流水轻轻冲洗干净，凉干后镜检。检。检。检。1313瑞氏（瑞氏（瑞氏（瑞氏（WrightWright）染液）染液）染液）染液:（1）染液配制：）染液配制：瑞氏染剂粉瑞氏染剂粉瑞氏染剂粉瑞氏染剂粉0.10.5g0.10.5g甘油甘油甘油甘油3ml3ml纯甲醇纯甲醇纯甲醇纯甲醇97ml97ml将瑞氏染剂粉置于研钵内，加入甘油将瑞氏染剂粉置于研钵内，加入甘油将瑞氏染剂粉置于研钵内，加入甘油将瑞氏染剂粉置于研钵内，加入甘油充分研磨后，然后加入少量甲醇碾磨后倒充分研磨后，然后加入少量甲醇碾磨后倒充分研磨后，然后加入少量甲醇碾磨后倒充分研磨后，然后加入少量甲醇碾磨后倒入有玻塞瓶中，再分次用甲醇冲洗碾钵中入有玻塞瓶中，再分次用甲醇冲洗碾钵中入有玻塞瓶中，再分次用甲醇冲洗碾钵中入有玻塞瓶中，再分次用甲醇冲洗碾钵中的瑞氏染粉甘油液，倒入瓶中，直至洗完。的瑞氏染粉甘油液，倒入瓶中，直至洗完。的瑞氏染粉甘油液，倒入瓶中，直至洗完。的瑞氏染粉甘油液，倒入瓶中，直至洗完。充分摇匀，一般放置一二星期后，再过滤充分摇匀，一般放置一二星期后，再过滤充分摇匀，一般放置一二星期后，再过滤充分摇匀，一般放置一二星期后，再过滤应用（保存时间愈久，染色力愈佳）。应用（保存时间愈久，染色力愈佳）。应用（保存时间愈久，染色力愈佳）。应用（保存时间愈久，染色力愈佳）。急用时，放置急用时，放置急用时，放置急用时，放置2424小时后过滤也可使用。小时后过滤也可使用。小时后过滤也可使用。小时后过滤也可使用。瑞氏（Wright）染液:1414（2 2）染色方法：）染色方法：）染色方法：）染色方法：先先先先用用用用腊腊腊腊笔笔笔笔在在在在厚厚厚厚薄薄薄薄血血血血膜膜膜膜间间间间画画画画一一一一界界界界线线线线，滴滴滴滴2-32-3滴滴滴滴蒸蒸蒸蒸馏馏馏馏水水水水于于于于厚厚厚厚血血血血膜膜膜膜上上上上溶溶溶溶血血血血,弃弃弃弃残残残残液液液液。（小小小小心心心心勿勿勿勿使使使使蒸蒸蒸蒸馏水超出腊笔线而触及薄血膜馏水超出腊笔线而触及薄血膜馏水超出腊笔线而触及薄血膜馏水超出腊笔线而触及薄血膜）。）。）。）。在在在在薄薄薄薄血血血血膜膜膜膜上上上上滴滴滴滴瑞瑞瑞瑞氏氏氏氏染染染染液液液液5-85-8滴滴滴滴，再再再再加加加加与与与与染染染染液液液液等等等等量量量量的的的的蒸蒸蒸蒸馏馏馏馏水水水水，与与与与染染染染液液液液混混混混合合合合均均均均匀匀匀匀后后后后用用用用玻玻玻玻棒棒棒棒引引引引至至至至厚厚厚厚血血血血膜膜膜膜上上上上，厚厚厚厚薄薄薄薄血血血血膜膜膜膜同同同同时时时时染染染染色色色色5-85-8分分分分钟钟钟钟后后后后，用用用用清清清清水轻轻冲洗数秒钟，待干后镜检。水轻轻冲洗数秒钟，待干后镜检。水轻轻冲洗数秒钟，待干后镜检。水轻轻冲洗数秒钟，待干后镜检。（2）染色方法：15153.染色质量染色质量染色较好的血片，肉眼看上去呈淡紫红色（不染色较好的血片，肉眼看上去呈淡紫红色（不应该出现蓝应该出现蓝绿色或红色）；绿色或红色）；镜检红细胞呈淡红色，嗜酸性细胞的颗粒呈鲜镜检红细胞呈淡红色，嗜酸性细胞的颗粒呈鲜红色，淋巴细胞及疟原虫的胞浆呈蓝色或淡蓝红色，淋巴细胞及疟原虫的胞浆呈蓝色或淡蓝色，白细胞的核呈紫蓝色；色，白细胞的核呈紫蓝色；疟原虫的核呈红色，疟色素清晰可见，在显微疟原虫的核呈红色，疟色素清晰可见，在显微镜下仅有小量染液沉淀。镜下仅有小量染液沉淀。3.染色质量染色较好的血片，肉眼看上去呈淡紫红色（不应该出16164.影响血膜染色的因素影响血膜染色的因素 血血血血膜膜膜膜染染染染色色色色好好好好坏坏坏坏，除除除除与与与与玻玻玻玻片片片片的的的的清清清清洁洁洁洁、血血血血膜膜膜膜制制制制作作作作技技技技术等有关外，尚与下列因素有关：术等有关外，尚与下列因素有关：术等有关外，尚与下列因素有关：术等有关外，尚与下列因素有关：(1)(1)试剂和溶剂的质量：试剂和溶剂的质量：试剂和溶剂的质量：试剂和溶剂的质量：染料、甲醇和甘油如不染料、甲醇和甘油如不染料、甲醇和甘油如不染料、甲醇和甘油如不纯，常使所配的染液偏酸或偏碱，从而影响纯，常使所配的染液偏酸或偏碱，从而影响纯，常使所配的染液偏酸或偏碱，从而影响纯，常使所配的染液偏酸或偏碱，从而影响血膜的染色。血膜的染色。血膜的染色。血膜的染色。(2)(2)染液的新旧：染液的新旧：染液的新旧：染液的新旧：新配制的染液，因色素尚未充新配制的染液，因色素尚未充新配制的染液，因色素尚未充新配制的染液，因色素尚未充分溶解，一般染色力弱，且常带碱性。染液分溶解，一般染色力弱，且常带碱性。染液分溶解，一般染色力弱，且常带碱性。染液分溶解，一般染色力弱，且常带碱性。染液放置较久，染色力逐渐增加，尤以吉氏染液放置较久，染色力逐渐增加，尤以吉氏染液放置较久，染色力逐渐增加，尤以吉氏染液放置较久，染色力逐渐增加，尤以吉氏染液为甚。通常在染液配制为甚。通常在染液配制为甚。通常在染液配制为甚。通常在染液配制1-21-2周后才使用周后才使用周后才使用周后才使用。4.影响血膜染色的因素1717(3)(3)染液的稀释浓度：染液的稀释浓度：染液的稀释浓度：染液的稀释浓度：染液浓度高，则着色快而深，各种细胞着色染液浓度高，则着色快而深，各种细胞着色染液浓度高，则着色快而深，各种细胞着色染液浓度高，则着色快而深，各种细胞着色粗糙、薛氏点等粗大显著，但颜色偏碱；使粗糙、薛氏点等粗大显著，但颜色偏碱；使粗糙、薛氏点等粗大显著，但颜色偏碱；使粗糙、薛氏点等粗大显著，但颜色偏碱；使用用用用染液浓度低，染色时间长，则着色慢，颜色染液浓度低，染色时间长，则着色慢，颜色染液浓度低，染色时间长，则着色慢，颜色染液浓度低，染色时间长，则着色慢，颜色偏酸，各种细胞内部结构着色均匀、细致。偏酸，各种细胞内部结构着色均匀、细致。偏酸，各种细胞内部结构着色均匀、细致。偏酸，各种细胞内部结构着色均匀、细致。(4)(4)染色时间与温度：染色时间与温度：染色时间与温度：染色时间与温度：染色时间长，化学反应染色时间长，化学反应染色时间长，化学反应染色时间长，化学反应充分完成，染色效果好，反之则染色效果差。充分完成，染色效果好，反之则染色效果差。充分完成，染色效果好，反之则染色效果差。充分完成，染色效果好，反之则染色效果差。疟疾镜检课件1818用水过酸用水过酸用水过酸用水过酸可致受染可致受染可致受染可致受染RBCRBC上的点彩染不出来，上的点彩染不出来，上的点彩染不出来，上的点彩染不出来，用水过碱，用水过碱，用水过碱，用水过碱，则使薄血膜上的则使薄血膜上的则使薄血膜上的则使薄血膜上的RBCRBC染成灰蓝色，染成灰蓝色，染成灰蓝色，染成灰蓝色，致使致使致使致使R R的胞浆难以辨论。的胞浆难以辨论。的胞浆难以辨论。的胞浆难以辨论。因此，当染色结果发生偏蓝（碱）或偏红（酸）因此，当染色结果发生偏蓝（碱）或偏红（酸）因此，当染色结果发生偏蓝（碱）或偏红（酸）因此，当染色结果发生偏蓝（碱）或偏红（酸）时，可用酸碱度与之相反的缓冲液冲洗血膜，时，可用酸碱度与之相反的缓冲液冲洗血膜，时，可用酸碱度与之相反的缓冲液冲洗血膜，时，可用酸碱度与之相反的缓冲液冲洗血膜，予以调整。予以调整。予以调整。予以调整。(5)稀释和冲洗用水：稀释和冲洗用水：用水过酸可致受染RBC上的点彩染不出来，(5)稀释和冲洗用水1919疟疾镜检课件2020 血血片片染染色色好好坏坏除除了了与与玻玻片片是是否否清清洁洁，血血片片制制作作质质量量好好坏坏等等有有关关外外，还还受受到到以下几个因素的影响：以下几个因素的影响：（1）染染料料溶溶剂剂的的质质量量染染料料、甲甲醇醇和和甘甘油油如如果果不不纯纯，常常使使配配制制的的染染液液偏偏酸酸或或偏偏碱碱而而影影响响染染色色效效果果。因因此此必必须须用用分分析析纯纯的的甲甲醇醇和和中中性性甘甘油油，而而且且在在配配制制时时所所用用的的器器具具必必须须干干净净而无水份。而无水份。血片染色好坏除了与玻片是否清洁，血片制作质量好坏2121（2 2）染染染染液液液液的的的的新新新新旧旧旧旧 新新新新配配配配制制制制的的的的染染染染液液液液因因因因色色色色素素素素尚尚尚尚未未未未充充充充分分分分溶溶溶溶解解解解，染染染染色色色色力力力力较较较较弱弱弱弱且且且且常常常常有有有有沉沉沉沉渣渣渣渣。染染染染液液液液存存存存放放放放时时时时间间间间越越越越久久久久，染染染染色色色色力力力力越越越越强强强强。通通通通常常常常在在在在染染染染液液液液配配配配制制制制1212周周周周后后后后才才才才使使使使用用用用，盛盛盛盛装装装装染染染染液液液液的的的的瓶瓶瓶瓶子子子子应应应应加加加加塞塞塞塞盖盖盖盖密密密密。以以以以防防防防吸吸吸吸潮潮潮潮而而而而影影影影响染液质量。响染液质量。响染液质量。响染液质量。（3 3）染染染染液液液液稀稀稀稀释释释释后后后后使使使使用用用用时时时时间间间间 染染染染液液液液的的的的主主主主要要要要成成成成份份份份是是是是美美美美蓝蓝蓝蓝、伊伊伊伊红红红红和和和和由由由由美美美美蓝蓝蓝蓝氧氧氧氧化化化化产产产产生生生生的的的的天天天天青青青青，三三三三者者者者能能能能在在在在酒酒酒酒精精精精溶溶溶溶液液液液中中中中溶溶溶溶解解解解，但但但但在在在在水水水水溶溶溶溶液液液液中中中中伊伊伊伊红红红红遇遇遇遇到到到到美美美美蓝蓝蓝蓝和和和和天天天天青青青青即即即即产产产产生生生生沉沉沉沉淀淀淀淀。因因因因此此此此，必必必必须须须须在在在在稀稀稀稀释释释释染染染染液液液液当当当当时时时时使使使使用用用用，一般在半小时内染色力最强。一般在半小时内染色力最强。一般在半小时内染色力最强。一般在半小时内染色力最强。（2）染液的新旧新配制的染液因色素尚未充分溶解，染色2222（4）染液的稀释浓度与染色时间）染液的稀释浓度与染色时间 染液的浓染液的浓度高其着色就快而深，染色时间相对缩短，疟度高其着色就快而深，染色时间相对缩短，疟原虫寄生红细胞的薛氏点粗大显著，但颜色常原虫寄生红细胞的薛氏点粗大显著，但颜色常偏蓝；染液浓度过低则染色时间相对长一些，偏蓝；染液浓度过低则染色时间相对长一些，颜色偏酸红，薛氏点不明显或消失。颜色偏酸红，薛氏点不明显或消失。（5）稀释和冲洗用水：稀释和冲洗用水：为使厚、薄血膜着色为使厚、薄血膜着色较好，应使稀释的染液呈中性或稍偏碱性，故较好，应使稀释的染液呈中性或稍偏碱性，故应用应用pH7.0pH7.2的水稀释。当染色太蓝，可的水稀释。当染色太蓝，可用用pH较低的缓冲水冲洗；如染色太红，则用较低的缓冲水冲洗；如染色太红，则用pH较高的缓冲液冲洗；如染色太深，可延长冲较高的缓冲液冲洗；如染色太深，可延长冲洗时间，予以校正。洗时间，予以校正。疟疾镜检课件2323薄血膜中常见的血液成分薄血膜中常见的血液成分中性白细胞酸性球血小板大单核球淋巴球红血球薄血膜中常见的血液成分中性白细胞酸性球血小板大单核球淋巴球红2424（三）（三）厚薄血膜的优缺点及其适用范围厚薄血膜的优缺点及其适用范围薄血膜薄血膜用血量约为2l，涂制成2cm宽4cm长面积的薄血膜。由于在制备过程中，血片通常经甲醇固定，使红细胞及其内疟原虫的形态保持完整，便于疟原虫虫种的鉴定。惟由于用血量少，为保证检测的敏感性，常耗时较多，似不适用于大规模调查。即使在医院的化验室，由于要求在短时间内作出诊断，因而极有可能出现漏诊。（三）厚薄血膜的优缺点及其适用范围2525厚血膜厚血膜用血量约为10l20l。涂制成直径1cm的厚血膜由于在制备过程中红细胞已溶解，疟原虫在形态上仍可分辨，但胞浆和胞核不可避免地形成一定程度的固缩。受影响较大的有大滋养体、裂殖体的形态。在镜检厚血膜时，一般门诊须检查2001000个油镜视野（相当于0.52.5l血量），才能确保镜检的敏感性和可重复性。通常的敏感性可达约1020个原虫/l血。由于厚血膜与薄血膜相比血量大，须查范围小，节省时间，阳性检出率较高。厚血膜能查出疟原虫数是薄血膜的1525倍。所以，我们推荐疟疾诊断应以检查厚血膜为主。在普查时均应查完整个厚血膜，未查见疟原虫则判为阴性。厚血膜2626混合感染的鉴别1、容易鉴别的混合感染、容易鉴别的混合感染1 1）同一血膜中发现间日疟各期原虫和恶性疟雌雄配子体。）同一血膜中发现间日疟各期原虫和恶性疟雌雄配子体。2 2）同一血膜中发现大量纤细的恶性疟环状体，并混有少量）同一血膜中发现大量纤细的恶性疟环状体，并混有少量间日疟原虫。间日疟原虫。2 2、不易鉴别的混合感染不易鉴别的混合感染1 1）间日疟各期原虫和粗环的恶性疟环状体。）间日疟各期原虫和粗环的恶性疟环状体。2 2）仅有间日疟和恶性疟的环状体。）仅有间日疟和恶性疟的环状体。3 3 分子生物学方法应用于疟原虫分型分子生物学方法应用于疟原虫分型1 1）提高检出：对镜检漏诊病人提高检出：对镜检漏诊病人 敏感性达敏感性达5 5个原虫个原虫/100uL/100uL血血2 2）确定四种疟原虫，做复核鉴定确定四种疟原虫，做复核鉴定混合感染的鉴别1、容易鉴别的混合感染2727 三、三、厚血膜的疟原虫计数厚血膜的疟原虫计数根根据据预预先先测测定定的的白白细细胞胞数数目目计计算算出出每每微微升升血血液液中中疟疟原原虫虫的的数数目目。在在制制作作厚厚血血膜膜的的同同时时，使使用用CoulterCoulter计计数数器器或或血血球球计计确确定定每每微微升升血血液液中中的的白白细细胞胞数数。然然后后镜镜检检厚厚血血膜膜，计计数数同同一一视视野野中中的的疟疟原原虫虫数数和和白白细细胞胞数数，直直到到所所计计数数的的白白细细胞胞数数达达到到确确定定的的数数值值为为止止(如如果果疟疟原原虫虫密密度度较较高高，计计数数100100200200个个白白细细胞胞即即可可，但但在在疟疟原原虫虫密密度度很很低低时时，计数白细胞数需达计数白细胞数需达10001000个个)。用下式算出疟原虫密度：用下式算出疟原虫密度：疟原虫数疟原虫数/白细胞数白细胞数白细胞数白细胞数/l/l血血=疟原虫数疟原虫数/l/l血。血。如如果果无无法法进进行行白白细细胞胞计计数数，则则可可按按常常规规估估计计白白细细胞胞数数。国国外外最最常采用的数值是常采用的数值是80008000白细胞白细胞/l/l血血,国内常用国内常用60006000白细胞白细胞/l/l血。血。三、厚血膜的疟原虫计数2828谢谢大家2929