生物药物的质量管理与控制课件

第二章第二章 生物药物的质量管理与生物药物的质量管理与 控制控制思考题思考题:1.1.生物药物与化学药物相比生物药物与化学药物相比,有哪些特性有哪些特性?2.2.国家制定国家制定GMP,GCPGMP,GCP的意义何在的意义何在?其内容包括其内容包括 哪些哪些?3.3.生物药物常用的定量方法有哪些？生物药物常用的定量方法有哪些？4.4.简述生物药物开发中的主要程序。简述生物药物开发中的主要程序。药物是用于预防疾病、治疗人的疾病，有目的地调节人药物是用于预防疾病、治疗人的疾病，有目的地调节人的生理功能，并规定有适应证和用法、用量的物质。因的生理功能，并规定有适应证和用法、用量的物质。因此药物必须要到达一定的此药物必须要到达一定的 质量标准要求，确保病人用药质量标准要求，确保病人用药的平安有效。生物药物与一般的化学药物有较大的区别，的平安有效。生物药物与一般的化学药物有较大的区别，如：生物药物大多数为大分子药物、相对分子质量不是如：生物药物大多数为大分子药物、相对分子质量不是 定值、稳定性差等，故其质量控制和对它有效成分的检定值、稳定性差等，故其质量控制和对它有效成分的检测有它自己的特征。测有它自己的特征。如：需做热源质检查、过敏实验、异常毒性等实验。如：需做热源质检查、过敏实验、异常毒性等实验。对有效成分的检测除了一般的化学方法外，还要对制对有效成分的检测除了一般的化学方法外，还要对制品的特异性生理效应或专一生化反响拟定其生物活性品的特异性生理效应或专一生化反响拟定其生物活性的检测。定量的方法也与化学药物有所不同。的检测。定量的方法也与化学药物有所不同。第一节第一节 生物药物质量的评价生物药物质量的评价 一、生物药物质量检验的程序与方法一、生物药物质量检验的程序与方法 根本程序：根本程序：取样取样鉴别鉴别检查检查含量测定含量测定写出检验报告写出检验报告 1 1、取样：、取样：2 2、药物的鉴别试验：、药物的鉴别试验：3 3、药物的杂质检查：、药物的杂质检查：4 4、药物的平安性检查：、药物的平安性检查：5 5、药物含量效价测定：、药物含量效价测定：6 6、检验报告的书写：、检验报告的书写：取样量取样量 设样品总件数为设样品总件数为X X当当x3x3时，时，每件取样；每件取样；当当x300 x300时，按随机取样；时，按随机取样；当当x300 x300时，按随机取样时，按随机取样 取样：科学性、真实性与代表性取样：科学性、真实性与代表性取样：科学性、真实性与代表性取样：科学性、真实性与代表性 性状性状性状性状DescriptionDescriptionDescriptionDescription 1.1.1.1.外观：状态，颜色，形状等；外观：状态，颜色，形状等；外观：状态，颜色，形状等；外观：状态，颜色，形状等；2 2 2 2、臭、味：气味，味道；、臭、味：气味，味道；、臭、味：气味，味道；、臭、味：气味，味道；3 3 3 3、稳定性：、稳定性：、稳定性：、稳定性：4 4 4 4、溶解度等物理常数。、溶解度等物理常数。、溶解度等物理常数。、溶解度等物理常数。例：苯甲酸 性状 本品为白色有丝光的鳞片或针状结晶或结晶性粉 末；质轻；无臭或微臭；在热空气中微有挥发性；水溶液 显酸性反响。本品在乙醇、氯仿或乙醚中易溶，在沸水中溶解，在水 中微溶。熔点 本品的熔点附录 C为121124.5。鉴别鉴别鉴别鉴别IdentificationIdentificationIdentificationIdentification 药物的鉴别是利用其分子构造所表现的特殊化学行为或光药物的鉴别是利用其分子构造所表现的特殊化学行为或光药物的鉴别是利用其分子构造所表现的特殊化学行为或光药物的鉴别是利用其分子构造所表现的特殊化学行为或光谱、色谱特征，来判断药品的真伪。谱、色谱特征，来判断药品的真伪。谱、色谱特征，来判断药品的真伪。谱、色谱特征，来判断药品的真伪。专属性专属性专属性专属性 再现性再现性再现性再现性 灵敏度灵敏度灵敏度灵敏度 方法方法方法方法 例：苯甲酸鉴别 1取本品约，加4%氢氧化钠溶液15ml，振摇，滤过，滤液中加三氯化铁试液2滴，即生成赭色沉淀。2本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集 图)一致杂质检查杂质检查纯度要求即药物的杂质检查，亦称限度检查、纯度检查纯度要求即药物的杂质检查，亦称限度检查、纯度检查Detection of ImpuritiesDetection of Impurities一般杂质：水、酸碱物等；一般杂质：水、酸碱物等；特殊杂质：副产物特殊杂质：副产物 毒性毒性毒性毒性 无菌无菌无菌无菌 热原热原热原热原 降压物等降压物等降压物等降压物等 平安性检查平安性检查热原的去除：热原主要是肠科杆菌科所产生的细胞内毒素，热原的去除：热原主要是肠科杆菌科所产生的细胞内毒素，在细菌生长或细胞溶解时会释放出来，主要是细胞壁成份在细菌生长或细胞溶解时会释放出来，主要是细胞壁成份脂多糖，其性质相当稳定，即使经高压灭菌也不失活。脂多糖，其性质相当稳定，即使经高压灭菌也不失活。注射用药必须无热原。注射用药必须无热原。从蛋白质溶液中除去内毒素比较困难，最好的方法是防止从蛋白质溶液中除去内毒素比较困难，最好的方法是防止产生热原，整个生产过程要在无菌条件下进展，所有层析产生热原，整个生产过程要在无菌条件下进展，所有层析介质在使用前都要先除去热原，在介质在使用前都要先除去热原，在2828下进展操作。洗下进展操作。洗脱液需先经过无菌处理，流出的蛋白质溶液也应无菌处理，脱液需先经过无菌处理，流出的蛋白质溶液也应无菌处理，即经过即经过0.2m0.2m滤膜过滤。滤膜过滤。脂多糖带负电，可以用阴离子交换层析法去除；是疏水的，脂多糖带负电，可以用阴离子交换层析法去除；是疏水的，也可以用疏水层析法。也可以用疏水层析法。类别截留截留颗粒大小粒大小截留的主要物截留的主要物质过滤介介质粗粗滤 2m 2m酵母、霉菌、酵母、霉菌、动物物细胞、胞、植物植物细胞、固形物等胞、固形物等滤纸、滤布、布、纤维多孔陶瓷、多孔陶瓷、烧结金属等金属等微微滤0.20.22m2m细菌、灰菌、灰尘等等微微滤膜、微孔陶膜、微孔陶瓷瓷超超滤20200.2m0.2m病毒、生物大分子等病毒、生物大分子等超超滤膜膜反渗反渗透透 20 20生物小分子、生物小分子、盐、离子、离子 反渗透膜反渗透膜含量测定含量测定AssayAssay药物在通过鉴别无误、检查合格的根底上，进展有效成分药物在通过鉴别无误、检查合格的根底上，进展有效成分含量测定。含量测定。判断药物的质量是否符合要求，必须全面考虑鉴别、检查判断药物的质量是否符合要求，必须全面考虑鉴别、检查与含量测定三者的检验结果应符合规定，否那么该药品为与含量测定三者的检验结果应符合规定，否那么该药品为不合格品。不合格品。原始记录原始记录原始记录原始记录 供试品名称、批号、数量、来源送检或抽检单位、取供试品名称、批号、数量、来源送检或抽检单位、取供试品名称、批号、数量、来源送检或抽检单位、取供试品名称、批号、数量、来源送检或抽检单位、取样方法、包装情况、外观性状、检验目的、检验依据、收样方法、包装情况、外观性状、检验目的、检验依据、收样方法、包装情况、外观性状、检验目的、检验依据、收样方法、包装情况、外观性状、检验目的、检验依据、收到日期、报告日期等逐一写清楚。在检验过程中应将观察到日期、报告日期等逐一写清楚。在检验过程中应将观察到日期、报告日期等逐一写清楚。在检验过程中应将观察到日期、报告日期等逐一写清楚。在检验过程中应将观察到的现象、到的现象、到的现象、到的现象、操作步骤、检验数据、结果、结论、处理意操作步骤、检验数据、结果、结论、处理意操作步骤、检验数据、结果、结论、处理意操作步骤、检验数据、结果、结论、处理意见等完整书写，不得涂改。见等完整书写，不得涂改。见等完整书写，不得涂改。见等完整书写，不得涂改。涂改方式：划一条细线，在右上角写正确数字，并盖章签名。涂改方式：划一条细线，在右上角写正确数字，并盖章签名。例例 9.6543-8.1270 1.5272例例0.1031例例消耗消耗22.31ml张杰张杰张杰张杰张杰张杰 含量测定含量测定 碘液碘液9.84259.63470.2078符合规定符合规定例例检验报告书检验报告书(省略上半页省略上半页)检验工程检验工程 检验标准检验标准 检验结果检验结果 检验结论检验结论性状性状 应白色粉末应白色粉末 白色粉末白色粉末 符合规定符合规定鉴别鉴别 应生成黑色应生成黑色 生成黑色生成黑色 符合规定符合规定检查检查溶液颜色溶液颜色 0.07 =0.02 符合规定符合规定炽灼残渣炽灼残渣 0.1%0.03%符合规定符合规定含量含量 99.0 99.8%符合规定符合规定结论结论 本品经检验符合中国药典本品经检验符合中国药典2000年版规定年版规定负责人负责人 李力李力 复核人复核人 罗红罗红 检验人检验人 张杰张杰二、药物的二、药物的ADME A表示吸收表示吸收absorption；D表示分布表示分布distribution；M表示代谢表示代谢metabolism；E表示排泄表示排泄excretion。吸收吸收 消化道内吸收：口腔；消化道内吸收：口腔；消化道内吸收：口腔；消化道内吸收：口腔；胃肠道胃肠道胃肠道胃肠道 消化道外吸收：肌肉、静脉、皮下；消化道外吸收：肌肉、静脉、皮下；消化道外吸收：肌肉、静脉、皮下；消化道外吸收：肌肉、静脉、皮下；皮肤；皮肤；皮肤；皮肤；鼻粘膜鼻粘膜鼻粘膜鼻粘膜图图3-4，典型时量曲线图，典型时量曲线图MTC最小中毒浓度最小中毒浓度 MEC最小有效浓度最小有效浓度第二节第二节 药物质量的标准药物质量的标准 为了控制药品质量，对药品生产、储存、供给及使为了控制药品质量，对药品生产、储存、供给及使用各个环节应有一个统一的质量标准要求，以便执法部门用各个环节应有一个统一的质量标准要求，以便执法部门定期进展监控，使药品质量的监管工作有法可依。药品的定期进展监控，使药品质量的监管工作有法可依。药品的质量标准是药品生产和管理的依据，并具有法定的约束力。质量标准是药品生产和管理的依据，并具有法定的约束力。药品质量标准体系药品质量标准体系 一、定义：一、定义：一、定义：一、定义：对药品质量、规格及检验方法所作的技术规定。对药品质量、规格及检验方法所作的技术规定。对药品质量、规格及检验方法所作的技术规定。对药品质量、规格及检验方法所作的技术规定。二、类别二、类别：1 1 1 1、法定药品质量标准：、法定药品质量标准：、法定药品质量标准：、法定药品质量标准：中国药典中国药典中国药典中国药典 中华人民共和国药品监视管理局标准中华人民共和国药品监视管理局标准中华人民共和国药品监视管理局标准中华人民共和国药品监视管理局标准 2 2 2 2、临床研究用药品质量标准、临床研究用药品质量标准、临床研究用药品质量标准、临床研究用药品质量标准 3 3 3 3、暂行或试行药品标准、暂行或试行药品标准、暂行或试行药品标准、暂行或试行药品标准 4 4 4 4、企业标准、企业标准、企业标准、企业标准三、主要内容三、主要内容主要内容主要内容名名名名 称称称称含量含量含量含量 贮藏贮藏贮藏贮藏 检查检查检查检查 鉴别鉴别鉴别鉴别 性性性性 状状状状药典的内容药典的内容药典药典(pharmacopoeia)(pharmacopoeia)：是一个国家记载药品规格、标准：是一个国家记载药品规格、标准的法典。由国家组织的药典委员会编写，并由政府公布实的法典。由国家组织的药典委员会编写，并由政府公布实施，具有法律的约束力。施，具有法律的约束力。药典中收载药效确切、副作用小、质量较稳定的常用药物药典中收载药效确切、副作用小、质量较稳定的常用药物及其制剂，规定其质量标准、制备要求、鉴别、杂质检查及其制剂，规定其质量标准、制备要求、鉴别、杂质检查与含量测定等，作为药品生产、检验、供给与使用的依据。与含量测定等，作为药品生产、检验、供给与使用的依据。药典药典药典是国家关于药品标准的法典，是国家管药典是国家关于药品标准的法典，是国家管药典是国家关于药品标准的法典，是国家管药典是国家关于药品标准的法典，是国家管理药品生产与质量的依据，具有法律约束力理药品生产与质量的依据，具有法律约束力理药品生产与质量的依据，具有法律约束力理药品生产与质量的依据，具有法律约束力。沿革沿革 建建国国以以来来，先先后后出出版版了了九九版版药药典典，1953、1963、1977、1985、1990、1995、2000、2005和和2021年年版版药药典典，现现行行使使用用的的是是中中国国药典药典 2021年版年版。其其英英文文名名称称是是 Chinese Pharmacopiea，缩写为缩写为2021。组成组成19531953和和19631963年版：一册；年版：一册；1977-20001977-2000年版：二册：年版：二册：一部中药材、中成药；一部中药材、中成药；二部生化药品、化学药品、生物制品。二部生化药品、化学药品、生物制品。20052005年版为三册：一部：中药；年版为三册：一部：中药；二部：化学药；二部：化学药；三部：生物制品三部：生物制品 内容内容 1 1 凡例、凡例、2 2 正文、正文、3 3 附录附录 4 4 索引索引 .凡例凡例General NoticeGeneral Notice是解释和使用是解释和使用?中国药典中国药典?正确进展质量检定的根本原那么，并把与正文附录及正确进展质量检定的根本原那么，并把与正文附录及 质量检定有关的共性的问题加以规定，防止在全书质量检定有关的共性的问题加以规定，防止在全书 中重复说明。中重复说明。凡例中有关规定同样具有法定约束力。凡例中有关规定同样具有法定约束力。温度以摄氏度温度以摄氏度表示表示水浴温度水浴温度 除另有规定外，均指除另有规定外，均指9898 100100；热水热水 系指系指70708080微温或温水微温或温水 系指系指40405050室温室温 系指系指10103030冷水冷水 系指系指2 21010冰浴冰浴 系指约系指约00放冷放冷 系指放冷至室温系指放冷至室温 .正文正文MonographysMonographys 是药典的主要内容，为所收载药品或制剂的质量标准。是药典的主要内容，为所收载药品或制剂的质量标准。内容：名称、性状、物化常数、鉴别、检查和含量测定等。内容：名称、性状、物化常数、鉴别、检查和含量测定等。.附录附录AppendixAppendix 包括制剂通那么、通用检测方法包括制剂通那么、通用检测方法和指导原那么。记载了制剂和指导原那么。记载了制剂 通那么、生物制品通那么、一般通那么、生物制品通那么、一般杂质检查方法、一般鉴别试杂质检查方法、一般鉴别试 验、有关物理常数测定法、试剂验、有关物理常数测定法、试剂配制法及光谱法、色谱配制法及光谱法、色谱 法等内容。法等内容。.索引索引IndexIndex 中文索引汉语拼音索引和英文名称索引。中文索引汉语拼音索引和英文名称索引。中国药典配套使用的相关书籍：中国药典配套使用的相关书籍：?临床用药须知临床用药须知?药品红外光谱集药品红外光谱集?中药彩色图集中药彩色图集?中药薄层彩色图集中药薄层彩色图集?中国药品通用名中国药品通用名?一个国家的药典在一定程度上反映了这个国家药品生产、一个国家的药典在一定程度上反映了这个国家药品生产、医疗和科学技术的水平。医疗和科学技术的水平。我国最早的药典是唐显庆我国最早的药典是唐显庆4 4年年(公元公元659659年年)公布的公布的?新修本新修本草草?人又称人又称?唐本草唐本草?，是世界上最早的一部全国性药，是世界上最早的一部全国性药典。典。?太平惠民和剂局方太平惠民和剂局方?是我国第一部官方公布的成方标准。是我国第一部官方公布的成方标准。药典在一定程度上反映一个国家的医药水平药典在一定程度上反映一个国家的医药水平 时间收载品种时间收载品种20212021年年 4615 4615种种20052005年年 3210 3210种种20002000年年 2691 2691种种19951995年年 2375 2375种种19901990年年 1751 1751种种19851985年年 1489 1489种种19771977年年 1925 1925种种19631963年年 1310 1310种种19531953年年 531 531种种药典与药品标准药典与药品标准中国中国1 1、国家药典：、国家药典：国家药典的内容一般分为凡例、正文、附录三大国家药典的内容一般分为凡例、正文、附录三大局部。局部。2 2、部颁药品标准：、部颁药品标准：部颁药品标准的性质与药典一样，也具有法律的部颁药品标准的性质与药典一样，也具有法律的约束力。新批准的药物符合其质量标准，经过两年约束力。新批准的药物符合其质量标准，经过两年试行期后，方可直接转为部颁标准。试行期后，方可直接转为部颁标准。3 3、地方药品标准：、地方药品标准：药典与部颁药品标准所收载的品种，往往不能完全药典与部颁药品标准所收载的品种，往往不能完全 满足各地区对药品生产、销售、使用和管理的需要。因满足各地区对药品生产、销售、使用和管理的需要。因此，对药典以外的某地区的常用药品、制剂的标准和规此，对药典以外的某地区的常用药品、制剂的标准和规格，常制订地区性的标准。格，常制订地区性的标准。国内生产药品的质量检验一般遵守以国内生产药品的质量检验一般遵守以上三级质量标准，进口药品、仿制国外上三级质量标准，进口药品、仿制国外药品等需要按照国外药典标准进展检验。药品等需要按照国外药典标准进展检验。其它国家药典其它国家药典 世界上大约有世界上大约有3838个国家有自己的药典，此外还有国际和区个国家有自己的药典，此外还有国际和区域性药典。这些药典无疑对世界医药科学技术交流和国际域性药典。这些药典无疑对世界医药科学技术交流和国际贸易有极大促进作用。现对主要药典加以介绍：贸易有极大促进作用。现对主要药典加以介绍：美国药典美国药典 简称，简称，现行版为现行版为XXXX版版(2003(2003年年)。英国药典英国药典 简称，现行版为简称，现行版为20022002年版。年版。日本药局方日本药局方 简称，现行版为第简称，现行版为第改正版改正版(2001(2001年年)。欧洲药典欧洲药典 简称，现行版为第简称，现行版为第版版(2001(2001年年)。国际药典国际药典 简称简称PhPhIntInt，世界卫生组织，世界卫生组织WHOWHO为了统一为了统一世界各国药品的质量标准和质量控制的方法而编纂的。修世界各国药品的质量标准和质量控制的方法而编纂的。修订中的国际药典为第三版，共分订中的国际药典为第三版，共分5 5卷出版，第卷出版，第1 1卷卷19791979年出年出版，第版，第2 2卷卷19811981年出版，第年出版，第3 3卷卷19881988年出版。年出版。?国际药典国际药典?对各国无法律约束力，仅供各国编纂药典时作对各国无法律约束力，仅供各国编纂药典时作为参考标准。为参考标准。根据生物药物的性质和特征，它出用于根据生物药物的性质和特征，它出用于临床治疗和诊断之外，还用于安康人群的临床治疗和诊断之外，还用于安康人群的预防接种。许多基因工程药物，特别是细预防接种。许多基因工程药物，特别是细胞因子药物都可参与人体机能的精细调节。胞因子药物都可参与人体机能的精细调节。在极其微量的情况下就可以产生显著的效在极其微量的情况下就可以产生显著的效应，任何性质和数量的偏差都可能贻误病应，任何性质和数量的偏差都可能贻误病情，甚至造成严重的危害。因此，在药品情，甚至造成严重的危害。因此，在药品的研制、生产、供给以及临床使用过程中的研制、生产、供给以及临床使用过程中必须的生物药物及其产品进展严格的全面必须的生物药物及其产品进展严格的全面质量控制和科学管理。质量控制和科学管理。第三节第三节 生物药物的科学管理生物药物的科学管理一、药品生产质量管理标准GMPGMP是GoodManufacturingPractice的简称，即药品生产质量管理标准。(一一)显著特点：显著特点：1 1、药品与人的安康、疾病和生命有直接的关系，因此在、药品与人的安康、疾病和生命有直接的关系，因此在生产和使用过程中，不允许有生产和使用过程中，不允许有“万一万一 的错误。的错误。2 2、药品从本质来说，、药品从本质来说，对机体是一种异物，因此在使用对机体是一种异物，因此在使用方法上必须给予极大的关注。方法上必须给予极大的关注。3、药品是用于疾病的预防和治疗为目的，多数是给病人使用的，同正常人比较病人身体较弱，抵抗力不强，对药品的质量要求较高。4、药品质量在多数情况下，不能通过外观进展判断，这种属性决定了药品生产以至使用，必须加强质量上的管理。(二二)GMP)GMP总要求：所有医药工业生产，在投产前，对生产总要求：所有医药工业生产，在投产前，对生产过程必须规定明确，所有必要设备必须经过检验，所有人过程必须规定明确，所有必要设备必须经过检验，所有人员必须经过适当培训，要求符合规定的厂房建筑及装备，员必须经过适当培训，要求符合规定的厂房建筑及装备，使用合格原料，采用经过批准的生产方法，而且还必需具使用合格原料，采用经过批准的生产方法，而且还必需具有符合条件的仓储及运输设施。有符合条件的仓储及运输设施。1、所有操作方法均应明文规定，且知道到达预期果。2、提供一切必要的装备，包括：经过培训在适宜人员；适宜的设备及维修效劳；正确的材料、容器签；经过批准的方法；适宜的储存及运输。3、操作方法应书写成文，用词简洁明了。4、操作人员经常培训，能正确操作。三三 GMP GMP的三大要素：的三大要素：1 1、人为产生的错误减小到最低；、人为产生的错误减小到最低；2 2、防止对医药品的污染和低质量医药品的产生；、防止对医药品的污染和低质量医药品的产生；3 3、保证产品高质量的系统设计。、保证产品高质量的系统设计。1985 1985年年7 7月月1 1日，我国公布了日，我国公布了?药品管理法药品管理法?，根据，根据其规律，我国自其规律，我国自19881988年开场实施了年开场实施了?药品生产管理药品生产管理标准标准?制度。根据规定，自制度。根据规定，自19981998年年7 7月月1 1日起，我国日起，我国未取得药品未取得药品GMPGMP的企业，管理部门不与受理生产新的企业，管理部门不与受理生产新药的申请；不批准药品的仿制、新药技术的转让药的申请；不批准药品的仿制、新药技术的转让和进口药品的分包装；未取得药品和进口药品的分包装；未取得药品GMPGMP认证的新开认证的新开办药品生产企业不发给其药品生产企业许可证。办药品生产企业不发给其药品生产企业许可证。二、药品平安试验标准二、药品平安试验标准GLPGLP GLPGLP是是Good Laboratory PracticeGood Laboratory Practice的简称，即药品平安试的简称，即药品平安试验标准，亦称药物非临床研究质量管理标准。验标准，亦称药物非临床研究质量管理标准。主要内容是在规定试验条件下，进展药效、毒性动物试验主要内容是在规定试验条件下，进展药效、毒性动物试验的准那么：对急性，亚急性，慢性毒性试验，生殖试验，的准那么：对急性，亚急性，慢性毒性试验，生殖试验，致癌，致畸，致突变以及其它毒性试验等临床前平安试验致癌，致畸，致突变以及其它毒性试验等临床前平安试验作出规定，是保证药品平安有效的法规。作出规定，是保证药品平安有效的法规。三、药物临床试验管理标准三、药物临床试验管理标准GCPGCP GCPGCP是是Good Clinical PracticeGood Clinical Practice的简称，即药物临床试验的简称，即药物临床试验管理标准。管理标准。药品临床试验是指在任何人体病人或安康的志愿者药品临床试验是指在任何人体病人或安康的志愿者进展的药品系统性研究，以证实或提醒试验用药品的作进展的药品系统性研究，以证实或提醒试验用药品的作用及不良反响等。用及不良反响等。制定制定GCPGCP的目的：保证临床试验过程标准，结果科学可靠，的目的：保证临床试验过程标准，结果科学可靠，保证受试者的权益并保障其平安。保证受试者的权益并保障其平安。制药工艺：从发现-药物上市发现临床前临床毒理注册生产GLPGCPGMP化学药物化学药物化学药物化学药物生物药物生物药物生物药物生物药物中药中药中药中药剂型开发剂型开发剂型开发剂型开发过程开发过程开发过程开发过程开发工业制药工业制药工业制药工业制药工业制药工业制药工业制药工业制药技术开发技术开发技术开发技术开发技术开发技术开发技术开发技术开发GLP药物非临床研究质量管理规范GCP 药物临床试验质量管理规范GMP 药品生产质量管理规范第四节第四节 生物药物常用的定量分析法生物药物常用的定量分析法1 1、酶法：、酶法：通常包括两种类型：一种是酶活力测定法，另一种是通常包括两种类型：一种是酶活力测定法，另一种是 酶分析法；酶分析法；2 2、电泳法：、电泳法：在电解质溶液中，带电粒子或离子在电场作用下，以在电解质溶液中，带电粒子或离子在电场作用下，以 不同的速率向其所带电荷相反的方向迁移，基于溶质不同的速率向其所带电荷相反的方向迁移，基于溶质 在电场中的迁移速率不同，到达别离的目的在电场中的迁移速率不同，到达别离的目的酶分析法酶分析法终点测定法：终点测定法：原理：先借助酶反响使被测物质定量地进展转变，原理：先借助酶反响使被测物质定量地进展转变，然后在转化完成后，测定底物、产物或辅酶物质然后在转化完成后，测定底物、产物或辅酶物质第二底物等的变化量，从而计算出被测物的实第二底物等的变化量，从而计算出被测物的实际含量或浓度的一种分析方法。际含量或浓度的一种分析方法。条件：条件：酶的底物特异性酶的底物特异性反响平衡反响平衡反响液中酶的用量反响液中酶的用量反响产物抑制反响产物抑制 几种检定重组蛋白纯度方法的比较几种检定重组蛋白纯度方法的比较几种检定重组蛋白纯度方法的比较几种检定重组蛋白纯度方法的比较特性特性特性特性 HPLC SDS-PAGE HPLC SDS-PAGE、IEF CEIEF CE别离机制别离机制别离机制别离机制 极性、非极性分配，极性、非极性分配，极性、非极性分配，极性、非极性分配，电荷、等电电荷、等电电荷、等电电荷、等电点点点点 电荷等电荷等电荷等电荷等 分子大小、离子交换分子大小、离子交换分子大小、离子交换分子大小、离子交换 分析所需时间分析所需时间分析所需时间分析所需时间 10 10120min 120min 几小时几小时几小时几小时 101030min30min 分辨力分辨力分辨力分辨力 好好好好 好好好好 好好好好样品体积样品体积样品体积样品体积 10 1050ul 150ul 150ul 50ul 1 150nl 50nl 灵敏度范围灵敏度范围灵敏度范围灵敏度范围 ng ng ug ngug ngug ug pg pg 定量准确性定量准确性定量准确性定量准确性 +分析方式分析方式分析方式分析方式 紫外、荧光、折射紫外、荧光、折射紫外、荧光、折射紫外、荧光、折射 紫外可紫外可紫外可紫外可见、荧光见、荧光见、荧光见、荧光 同同同同HPLCHPLC 电化学、放射性电化学、放射性电化学、放射性电化学、放射性 银染、放射银染、放射银染、放射银染、放射自显影自显影自显影自显影仪器价格仪器价格仪器价格仪器价格 中高中高中高中高 低低低低 中高中高中高中高日常消耗日常消耗日常消耗日常消耗 低低低低 高高高高 低低低低自动化自动化自动化自动化 中高中高中高中高 低低低低 中高中高中高中高人力操作人力操作人力操作人力操作 低低低低 高高高高 低低低低制备级制备级制备级制备级 中中中中 中中中中 微量级制备微量级制备微量级制备微量级制备收集样品收集样品收集样品收集样品 可以可以可以可以 可以可以可以可以 较困难较困难较困难较困难电泳法电泳法electrophoresiselectrophoresis在电解质溶液中，带电粒子或离子在电场作用下以不在电解质溶液中，带电粒子或离子在电场作用下以不同的速率向其所带电宿相反方向迁移的现象称为电同的速率向其所带电宿相反方向迁移的现象称为电泳，电泳别离是基于溶质在电场中的迁移速度不同而泳，电泳别离是基于溶质在电场中的迁移速度不同而进展的分析方法。进展的分析方法。各种生物大分子在一定各种生物大分子在一定pHpH条件下，可以解离成带电荷条件下，可以解离成带电荷的离子，在电场中会向相反的电极移动。在分析核酸、的离子，在电场中会向相反的电极移动。在分析核酸、蛋白质等大分子物质时，电泳是个非常有效的手段。蛋白质等大分子物质时，电泳是个非常有效的手段。根据电泳的别离特点，电泳法包括自由界面电泳、区根据电泳的别离特点，电泳法包括自由界面电泳、区带电泳和高效毛细管电泳等。带电泳和高效毛细管电泳等。根据所用支持物的不同分为纸电泳、醋酸纤维素薄膜根据所用支持物的不同分为纸电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、电泳、PAGEPAGE、SDSSDSPAGE PAGE、琼脂糖凝胶电泳等。、琼脂糖凝胶电泳等。自由界面电泳：在一根自由界面电泳：在一根U U形管的溶液中，同种分子形管的溶液中，同种分子的构型及电荷情况根本一致，在电场的影响下，它们的构型及电荷情况根本一致，在电场的影响下，它们逐渐密集而与其它电泳迁移率不同的物质之间形成明逐渐密集而与其它电泳迁移率不同的物质之间形成明显界面。显界面。区带电泳：在电泳过程中，应用各种不同的惰性支区带电泳：在电泳过程中，应用各种不同的惰性支持介质，在电场作用下，使具有不同泳动速度的组持介质，在电场作用下，使具有不同泳动速度的组分形成各自区带的电泳。如纸电泳、醋酸纤维素薄分形成各自区带的电泳。如纸电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、聚丙稀酰胺凝胶电泳等等。膜电泳、聚丙稀酰胺凝胶电泳等等。高效毛细管电泳高效毛细管电泳HPCEHPCE：在一根内径为：在一根内径为50m50m的毛细管中，在高压电场下进展样品别离分析的一种的毛细管中，在高压电场下进展样品别离分析的一种新型电泳技术。新型电泳技术。常用电泳法的类型及其应用常用电泳法的类型及其应用 纸电泳法：纸电泳法是用滤纸为支持载体的一种电纸电泳法：纸电泳法是用滤纸为支持载体的一种电泳方法，如核苷酸，具有共轭双键的嘌呤或嘧啶碱基，在泳方法，如核苷酸，具有共轭双键的嘌呤或嘧啶碱基，在一定的一定的pHpH条件下，具有强的紫外吸收，电泳后在紫外灯下条件下，具有强的紫外吸收，电泳后在紫外灯下显示紫色，定位、剪下相应的部位，进展洗脱，在特定波显示紫色，定位、剪下相应的部位，进展洗脱，在特定波长下测定长下测定A A，按其吸收系数可计算核苷酸的含量。，按其吸收系数可计算核苷酸的含量。醋酸纤维素薄膜电泳法：用醋酸纤维素薄膜作为支醋酸纤维素薄膜电泳法：用醋酸纤维素薄膜作为支持载体的一种电泳方法，已应用于血清蛋白、脂蛋持载体的一种电泳方法，已应用于血清蛋白、脂蛋白等的别离和定量测定。白等的别离和定量测定。PAGE法：以人工合成的聚丙烯酰胺凝胶作为惰性支法：以人工合成的聚丙烯酰胺凝胶作为惰性支持载体的电泳方法。其别离效果主要取决于分子所带持载体的电泳方法。其别离效果主要取决于分子所带电荷与分子大小的比例，也取决于与分子量大小有关电荷与分子大小的比例，也取决于与分子量大小有关的分子筛效应。按电泳槽和凝胶层中的缓冲液体系的分子筛效应。按电泳槽和凝胶层中的缓冲液体系pH和凝胶孔径大小是否一致分为连续体系和非连续体系。和凝胶孔径大小是否一致分为连续体系和非连续体系。SDSPAGE：根据大多数蛋白都能与阳离子外表活：根据大多数蛋白都能与阳离子外表活性剂性剂SDS按重量比结合成复合物，使蛋白质分子所带按重量比结合成复合物，使蛋白质分子所带地负电荷远远超过天然蛋白分子的负电荷，消除了不地负电荷远远超过天然蛋白分子的负电荷，消除了不同蛋白分子的电荷效应，使蛋白分子相对迁移率的大同蛋白分子的电荷效应，使蛋白分子相对迁移率的大小完全取决于亚基分子量的上下，从分子量的标小完全取决于亚基分子量的上下，从分子量的标准蛋白的对数荷相对迁移率所作标准曲线中求出供试准蛋白的对数荷相对迁移率所作标准曲线中求出供试品的分子量。品的分子量。琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳琼脂糖是琼脂糖是D D和和L L半乳糖残基通过半乳糖残基通过1 31 3和和1 41 4糖苷键交替构成的线状聚合物。糖苷键交替构成的线状聚合物。L L半乳糖残基在半乳糖残基在3 3和和6 6位之间位之间形成脱水连接。琼脂糖链形成螺旋纤维，后者再聚形成脱水连接。琼脂糖链形成螺旋纤维，后者再聚合成半径合成半径202030nm30nm的超螺旋构造。琼脂糖凝胶可构成一个直径的超螺旋构造。琼脂糖凝胶可构成一个直径从从50nm50nm到到略大于略大于200nm200nm的三维筛孔的通道。的三维筛孔的通道。琼脂糖凝胶电泳可以在很窄的范围内获得高纯度的某种琼脂糖凝胶电泳可以在很窄的范围内获得高纯度的某种DNADNA片段，或是大小相近的片段，或是大小相近的DNADNA片段。片段。核酸在溶液中由于它们有磷酸基团而带负电荷，在电场中核酸在溶液中由于它们有磷酸基团而带负电荷，在电场中向正极移动。在凝胶电泳中，向正极移动。在凝胶电泳中，DNADNA分子的迁移速度与分子量分子的迁移速度与分子量的对数值成反比关系。的对数值成反比关系。垂直板电垂直板电 泳装置泳装置加样加样样品迁样品迁移方向移方向电泳方向电泳方向混合样品混合样品 电泳电泳带孔胶带孔胶大分子大分子 按分子按分子大小别离大小别离电泳过程中分子迁移的规律，小分子走在前头，大分电泳过程中分子迁移的规律，小分子走在前头，大分子滞后。电泳凝胶相当于凝胶过滤中的一个带孔胶粒。子滞后。电泳凝胶相当于凝胶过滤中的一个带孔胶粒。电泳电泳缓冲液缓冲液 加在槽中的经加在槽中的经SDS处理的样品处理的样品夹在两块玻璃夹在两块玻璃板之间的凝胶板之间的凝胶 电泳电泳缓冲液缓冲液电源电源电泳后的凝胶经考马斯亮篮染色、脱色后的凝胶照片电泳后的凝胶经考马斯亮篮染色、脱色后的凝胶照片标准蛋白分子量标准蛋白分子量在一定的凝胶浓度下，在一定的凝胶浓度下，多肽链分子量的对数与多肽链分子量的对数与多肽链的相对迁移率成多肽链的相对迁移率成线性关系，所以可以通线性关系，所以可以通过标准曲线求未知多肽过标准曲线求未知多肽链分子量链分子量。未未知知蛋蛋白白3 3、理化检测法：、理化检测法：包括重量分析法、滴定分析法、分光光度法、高效液相包括重量分析法、滴定分析法、分光光度法、高效液相 色谱法等。色谱法等。4 4、生物检定法：、生物检定法：利用药物的生物体的作用以测定其效价和生物活性的一利用药物的生物体的作用以测定其效价和生物活性的一中方法。其应用范围包括如下几项：中方法。其应用范围包括如下几项：生物检定法生物检定法 生物检定法以药物的药理作用为根底，生物统计为工生物检定法以药物的药理作用为根底，生物统计为工具，运用特定的实验设计，利用药物对生物体具，运用特定的实验设计，利用药物对生物体(整体动物、整体动物、离体组织、微生物等离体组织、微生物等)的作用以测定其效价或生物活性，的作用以测定其效价或生物活性，它通过供试品与相应的标准品或对照品在一定条件下比较它通过供试品与相应的标准品或对照品在一定条件下比较产生特定生物反响的剂量比例，来测得供试品的效价。产生特定生物反响的剂量比例，来测得供试品的效价。生物检定法的应用范围如下：生物检定法的应用范围如下：(1)(1)药物的效价测定：对一些采用理化方法不能测定含药物的效价测定：对一些采用理化方法不能测定含量或理化测定不能反映临床生物活性的药物可用生物量或理化测定不能反映临床生物活性的药物可用生物检定法来测定。中国药典收载了胰岛素、肝素、绒毛检定法来测定。中国药典收载了胰岛素、肝素、绒毛膜促性腺激素等。膜促性腺激素等。(2)(2)微量生理活性物质的测定：一些神经介质、激素等微量生理活性物质的测定：一些神经介质、激素等 微量生物活性物质，由于其很强的生理活性，在体内微量生物活性物质，由于其很强的生理活性，在体内 的浓度很低，加上体液中各种物质的干扰，很难用理的浓度很低，加上体液中各种物质的干扰，很难用理 化方法测定；而不少活性物质的生物测定法由于灵敏化方法测定；而不少活性物质的生物测定法由于灵敏 度高、专一性强，对供试品稍作处理即可直接测定。度高、专一性强，对供试品稍作处理即可直接测定。(3)(3)某些有害杂质的限度检查：如内毒素等致热物质和某些有害杂质的限度检查：如内毒素等致热物质和 生化制剂中降压物质的限度检查等。生化制剂中降压物质的限度检查等。