杂质检查课件

第三章第三章 药物的杂质检查药物的杂质检查基本要求基本要求第二节第二节 一般杂质的检查方法一般杂质的检查方法第三节第三节 特殊杂质的检查方法特殊杂质的检查方法返回主目录返回主目录第一节第一节 概述概述举列举列基本要求基本要求 一一、掌掌握握杂杂质质的的来来源源、分分类类、杂杂质质限限量量的的概概 念和计算，。念和计算，。二、熟悉特殊杂质检查的方法和原理。二、熟悉特殊杂质检查的方法和原理。三、了解热分析在药物分析中的应用。三、了解热分析在药物分析中的应用。返 回一、药物的纯度要求一、药物的纯度要求1 1药物纯度的药物纯度的概念概念：药物的纯度是指药物的纯洁程度。药物的纯度是指药物的纯洁程度。药药物物中中的的杂杂质质是是影影响响药药物物纯纯度度的的主主要要因因素素，杂杂质质检检查查也也称称纯纯度检查。度检查。药药物物中中所所含含杂杂质质超超过过质质量量标标准准规规定定的的纯纯度度要要求求，有有可可能能使使药药物物的的外外观观性性状状、物物理理常常数数发发生生变变化化，甚甚至至会会影影响响药药物物的的稳稳定定性性，使使活性降低、毒副作用增加。活性降低、毒副作用增加。例例：青青霉霉素素在在生生产产过过程程中中可可能能引引入入过过敏敏性性杂杂质质，可可导导致致过过敏敏性性休休克，甚至造成心衰死亡。克，甚至造成心衰死亡。第一节第一节 概述概述 2、药物纯度的、药物纯度的要求要求是不断提高的：是不断提高的：例如：度冷丁例如：度冷丁1948年收入年收入BP，1970年经年经GC 分离鉴定出两种无效异构体（分离鉴定出两种无效异构体（）和）和 （），有时高达），有时高达20%30%。再如：再如：ASA(阿司匹林阿司匹林)中除了中除了SA(水杨酸水杨酸)外，外，还存在乙酰水酸酐、乙酰水杨酰、乙酰还存在乙酰水酸酐、乙酰水杨酰、乙酰 水杨酸等水杨酸等SA的衍生物，具有致敏作用。的衍生物，具有致敏作用。3、药物纯度的、药物纯度的评价评价：应把药物的外观性状、理化常数、杂质检查、应把药物的外观性状、理化常数、杂质检查、含量测定等方面作为一个有联系的整体来综合含量测定等方面作为一个有联系的整体来综合评价。评价。药品中的杂质能否得到合理、有效地控制，药品中的杂质能否得到合理、有效地控制，直接关系到药品质量可控性和安全性，直接关系到药品质量可控性和安全性，在药物在药物研究与开发过程中，对杂质的研究备受重视。研究与开发过程中，对杂质的研究备受重视。4、化学试剂的纯度与临床用药的纯度不能相互、化学试剂的纯度与临床用药的纯度不能相互混淆，药用规格与试剂规格是不一样的。混淆，药用规格与试剂规格是不一样的。化学试剂化学试剂不考虑杂质的生理作用，其杂质限量只不考虑杂质的生理作用，其杂质限量只 是从可能引起的化学变化对使用的影响是从可能引起的化学变化对使用的影响 来限定的，对试剂的使用范围和使用目来限定的，对试剂的使用范围和使用目 的加以规定，不考虑杂质对生物体的生的加以规定，不考虑杂质对生物体的生 理作用及毒副作用；理作用及毒副作用；药物纯度主要从用药安全、有效和对药物稳定性 等方面考虑。例：BaSO4 化学试剂规格对可溶性钡盐不做检查，药 用规格的硫酸钡要做酸溶性钡盐、重金属、砷盐等检查，如果存在可溶性钡盐会导致 医疗事故。化学试剂是不能代替药品来使用的二、杂质的来源二、杂质的来源 了解药物中的杂质的来源，可有针对性的制定出检查的项目和了解药物中的杂质的来源，可有针对性的制定出检查的项目和方法。药物中杂质主要来源有两个：方法。药物中杂质主要来源有两个：一是一是由生产中引入；由生产中引入；二是二是在储藏过程中受外界条件的影响，引起药物理化性质发生变化在储藏过程中受外界条件的影响，引起药物理化性质发生变化而产生。而产生。（一）（一）生产过程生产过程中引入的杂质中引入的杂质主要指药物（主要指药物（1 1）所用原料不纯而引入其他物质；）所用原料不纯而引入其他物质；（2 2）在合成过程中，未反应的原料、中间体）在合成过程中，未反应的原料、中间体 和副产物；和副产物；（3 3）在制作过程中加入一些试剂、溶剂等而）在制作过程中加入一些试剂、溶剂等而 在精制时未完全除净。在精制时未完全除净。例如例如：药用：药用NaClNaCl的的BrBr-、I I-、SOSO4 42-2-、K K+、CaCa2+2+、MgMg2+2+、FeFe3+3+ASA ASA中的中的SASA；地西泮中的去甲安定；吗啡中的罂粟碱地西泮中的去甲安定；吗啡中的罂粟碱再如再如制剂中生成的杂质：制剂中生成的杂质：ASAASA片、栓剂中片、栓剂中SASA的检查；盐酸普鲁的检查；盐酸普鲁 卡因注射液中对氨基苯甲酸和二乙氨卡因注射液中对氨基苯甲酸和二乙氨 基乙醇的检查。基乙醇的检查。生产过程中生产过程中残留有机溶剂、酸性或碱性杂质的检查。残留有机溶剂、酸性或碱性杂质的检查。药物中无效、低效药物中无效、低效异构体异构体或或晶型晶型的检查的检查 例如：无味氯霉素存在例如：无味氯霉素存在A A、B B晶型，其中晶型，其中B B为有效，为有效，A A为低效。为低效。苯甲咪唑有苯甲咪唑有A A，B B，C C三种晶型；三种晶型；20%20%；40%40%60%60%；90%90%（二）（二）贮藏过程贮藏过程引入的杂质引入的杂质 主要指外界条件的变化或微生物的作用可能发生的水解、氧化、主要指外界条件的变化或微生物的作用可能发生的水解、氧化、异构化、晶型转化、聚合等变化，而产生的有关杂质。异构化、晶型转化、聚合等变化，而产生的有关杂质。如：如：ASAASA水解生成水解生成SASA和醋酸；阿托品水解生成莨菪醇和莨菪酸和醋酸；阿托品水解生成莨菪醇和莨菪酸 麻醉乙醚氧化为醛和有毒的过氧化物。麻醉乙醚氧化为醛和有毒的过氧化物。三、药物杂质的分类三、药物杂质的分类 按杂质的来源分为一般杂质和特殊杂质；1 1、一般杂质是指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮、一般杂质是指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮 藏过程中容易引入的杂质，它们含量高低与生产工艺水平密切藏过程中容易引入的杂质，它们含量高低与生产工艺水平密切相关，所以也称信号杂质；相关，所以也称信号杂质；ChPChP附录中规定了一般杂质的检查项目的检查方法附录中规定了一般杂质的检查项目的检查方法2、特殊杂质、特殊杂质是指在个别药物的生产和贮藏过程是指在个别药物的生产和贮藏过程 引入的杂质。又称为有关物质，引入的杂质。又称为有关物质，这类杂质这类杂质 随药物的不同而不同。随药物的不同而不同。例：乙酰水杨酸引入例：乙酰水杨酸引入水杨酸水杨酸 甲硝唑引入甲硝唑引入2-甲基甲基-5-硝基咪唑硝基咪唑 按照来源的不同还可将杂质分为工艺杂质（包括合成未反应完全的反应物及试剂、中间体、副产物等）、降解产物、从反应物及试剂中混入的其他外来杂质等。按照其毒性分类，杂质又可分为毒性杂质（重金属、砷盐）和信号杂质（一般无毒，但其含量的多少可反映出药物的纯度情况。如果药物中信号杂质含量过多，提示该药的生产工艺或生产控制有问题。如氯化物、硫酸盐等）按化学类别和特性分为：无机杂质、有机杂质、残留溶剂。无机杂质 可能来源于生产过程，一般是已知和 确定的。由于许多无机杂质直接影响 药品的稳定性，并可反映生产工艺本 身的情况，了解药品中无机杂质的情 况对评价药品生产工艺的状况有重要 意义。有机杂质 主要包括合成中未反应的原料、中 间体、副产品、降解产物等。有机杂质分特定杂质 非特定杂质特定杂质指在质量标准中分别规定了明确的限 度，并单独进行控制的杂质；特定杂质包括结构已知和结构未知的杂质非特定杂质指在质量标准中未单独列出，而仅 采用一个通用的限度进行控制的一 系列杂质，其在药品中出现的种类 与概率并不固定。如重金属都以铅 限度来控制四、杂质的限量四、杂质的限量 1 1杂质限量的杂质限量的概念概念 药物中所含杂质的药物中所含杂质的最大允许量最大允许量，叫做杂质限量。通常，叫做杂质限量。通常 用百分之几或百万分之几（用百分之几或百万分之几（ppmppm）来表示。来表示。药物中杂质限量的控制方法有两种药物中杂质限量的控制方法有两种（1 1）一种是限量检查一种是限量检查 （2 2）一种是对杂质定量测定）一种是对杂质定量测定 限量检查法：通常不要求测定其准确含量，只需检查 是否超过限量。具体操作方法：对照法（多数采用）比较法 灵敏法对照法：取一定量供试品 -同条件下处理，比较结果 被检杂质标准采用该法须注意平行原则，结果才有可比性（条件一致）灵敏度法：供试品溶液中进入一定量试剂，在一定 反应条件下，不得有正反应出现，从而 判断供试品中所含杂质是否符合杂质限 量。例：乳酸中草酸、酒石酸等杂质检查，在检查条件 下不得出现浑浊。P100比较法：取供试品一定量，测定待检杂质的参数（如吸光 度等）与规定限量比较，不得更大。例：维生素B2中感光黄素（此杂质溶于三氯甲烷），维生 素B2在三氯甲烷中不溶，在400nm下测定A,不得超过 0.016.2 2杂质限量的杂质限量的计算计算 杂质限量的杂质限量的计算公式计算公式：杂质限量杂质限量=杂质的最大允许量杂质的最大允许量供试品的量供试品的量100%100%=标准液浓度标准液浓度体积体积供试品的量供试品的量100%100%L L（%）=CV/S100%=CV/S100%例例1对乙酰基酚中的氯化物的检查：对乙酰基酚中的氯化物的检查：已知：已知：S=2.0g25/100；C=10g/ml；V=5.0ml求：求：L=？解：解：L=CV/S100%=105.0/2.010625/100100%=0.01%例例2 2葡萄糖中重金属的检查：葡萄糖中重金属的检查：已知：已知：S=4.0gS=4.0g；C=10g/mlC=10g/ml；L=510L=510-6-6 求：求：V=V=？解：解：V=LS/C V=LS/C =510 =510-6-64.0/10104.0/1010-6-6=2.0(ml)=2.0(ml)例例3葡萄糖中砷盐的检查：葡萄糖中砷盐的检查：已知：已知：V=2.0ml；C=1g/ml；L=0.0004%求：求：S=？解：解：S=CV/L =110-62.0/410-6=0.5(g)例例4 4磷酸可待因中吗啡的检查：磷酸可待因中吗啡的检查：已知：已知：V=5.0mlV=5.0ml；C=0.02 mg/mlC=0.02 mg/ml；S=0.1gS=0.1g 求：求：L=L=？解：解：L=CV/S=5.00.02/0.11000 100%L=CV/S=5.00.02/0.11000 100%=0.1%=0.1%注意点注意点 单位一致单位一致 稀释倍数稀释倍数 表示方法（表示方法（%，PPPPM M）返 回第二节 杂质的检查方法 检查药物中存在的微量杂质，首要的问题就是选择一个专属性强的方法，使药物对其所含微量杂质的检测不产生干扰 药物中杂质的检查主要是依据药物与杂质在物理性质或化学性质上的差异来进行。物理性质差异：指药物与杂质在外观性状、分配或吸附以 及对光的吸收等性质差别；化学性质差异：指药物与杂质对某一化学反应的差别，一 般是杂质与试剂反应，而药物不反应。一、杂质的研究规范 制药企业应该按照经国家药品监督管理部门依法审查批准的规定工艺和规定原辅料进行药品的生产，如果变更生产工艺或原辅料，并因此而带进新的杂质，则需对原质量标准进行修订，并依法向有关药品监督管理部门申报批准。在新药的研发中，应该对新药中的杂质进行化学和安全性研究。杂质控制要合理地确定杂质检查项目与限度，合理地选择杂质检查方法。（一）有机杂质在药品质量标准中的项目名称 1、以杂质的化学名称作为项目名称 当被检查的杂质是已知化合物时(特定杂质)，就以该化合物的化学名称作为质量标准的项目名称；2、以某类杂质的总称作为项目名称 当杂质不能明确为单一物质而又为某一类物质时，则以这类物质总称作为项目名称。3、以检测方法作为项目名称 当被检查杂质的结构未知，亦不属于具体的类别时，可用“吸光度”等，与检查方法相应的名称作为项目名称。（二）杂质检查项目的确定 杂质检查项目的确定要有针对性。药品标准中杂质检查项目应包括药物在质量研究和稳定性考察中检出的，并在批量生产中出现的杂质和降解产物。（三）杂质限度的确定 杂质限量的确定要合理，在确保用药安全有效的前提下，应考虑到生产的可行性及比与比之间的正常波动；药品本身的稳定性可根据原料每日剂量来制订质控限度 杂质限度制定时考虑的因素：杂质及含一定量杂质的药品的毒理学研究结果给药途径每日剂量治疗周期给药人群杂质药理学可能的研究结果原料药的来源在保证安全有效的前提下，药品生产企业对生产高质量药品所需成本和消费者对药品价格的承受力，等 对于创新药物，杂质限度确定的依据主要是已进行的临床前安全性研究中获得的结果，通常是要求用于临床试验的样品杂质不得超过用于临床前安全性研究的样品；对于仿制药物，可根据已有的标准制订相应的杂质限度；对于其他新药，可参照创新药物或仿制药物的要求进行。（四）杂质检查方法的选择与验证检测方法包括：化学法 光谱法 色谱法等 因药物结构及杂质的不同采用不同的检测方法。有机杂质的检测方法多采用色谱法，特别是HPLC法。对检测方法的要求：专属、灵敏。二、杂质的常用检查方法 P104 第三节第三节 一般杂质的检查方法一般杂质的检查方法 在原料药及其制剂的生产过程中，常用到酸、在原料药及其制剂的生产过程中，常用到酸、碱、反应试剂、催化剂等，引入碱、反应试剂、催化剂等，引入无机杂质无机杂质。这些杂。这些杂质的产生重要与生产工艺过程有关，可反映生产工质的产生重要与生产工艺过程有关，可反映生产工艺情况，并直接影响药品的稳定性。艺情况，并直接影响药品的稳定性。检查无机杂质对评价药品生产工艺的状况有重检查无机杂质对评价药品生产工艺的状况有重要意义。要意义。一、氯化物的检查一、氯化物的检查 1原理原理：是利用氯化物在硝酸性溶液中与硝酸银试液：是利用氯化物在硝酸性溶液中与硝酸银试液 作用，生成氯化银的白色浑浊液，与一定量作用，生成氯化银的白色浑浊液，与一定量 标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银 混浊液比较，以判断混浊液比较，以判断 供试品中氯化物是否超供试品中氯化物是否超 过限量。过限量。Cl-+Ag+AgCl（白）（白）2 2条件：条件：ClCl-0.05mg 0.05mg0.08mg/50ml,0.08mg/50ml,即相当于标准即相当于标准 氯化钠溶液氯化钠溶液5 5mlml8ml8ml。酸度酸度 稀硝酸稀硝酸1010ml/50mlml/50ml。温度温度 30 304040 3 3干扰的排除干扰的排除 （1 1）供试品液混浊：可用含）供试品液混浊：可用含硝酸硝酸的蒸馏水洗净氯纸中的蒸馏水洗净氯纸中 氯化物后过滤来消除混浊对氯化氯化物后过滤来消除混浊对氯化 物检查的干扰。物检查的干扰。（2 2）供试品有色：）供试品有色：可采用可采用内消色法内消色法，按中国药典附录规定的方法处理。，按中国药典附录规定的方法处理。供试品供试品+AgNO3放置放置1010minmin澄清溶液澄清溶液+标准标准NaClNaCl+水水对照溶液对照溶液供试品供试品+AgNO3+水水供试品溶液供试品溶液暗处放置暗处放置5 5minmin后比后比较较。二、硫酸盐检查法二、硫酸盐检查法 1 1原理原理 是利用是利用SOSO4 42-2-在盐酸酸性溶液中与氯化钡试液作用，在盐酸酸性溶液中与氯化钡试液作用，生成硫酸钡的白色浑浊液，与一定量标准硫酸钾溶液生成硫酸钡的白色浑浊液，与一定量标准硫酸钾溶液 在相同条件下生成的硫酸钡浑浊液比较，以判断供试在相同条件下生成的硫酸钡浑浊液比较，以判断供试 品中硫酸盐是否超过限量品中硫酸盐是否超过限量。2 2条件条件：SOSO4 42-2-0.1mg 0.1mg0.5mg/50ml,0.5mg/50ml,即相当于标准即相当于标准 硫酸钾溶液硫酸钾溶液1 15 5mlml。酸酸 度度 稀盐酸稀盐酸2 2ml/50mlml/50ml。3 3干扰的排除干扰的排除 供试品有色：可采用内消色法。供试品有色：可采用内消色法。三、铁盐检查法三、铁盐检查法 （一）硫氰酸盐法（一）硫氰酸盐法 1 1原理原理 FeFe3+3+6SCN+6SCN-Fe(SCN)Fe(SCN)6-6-3-3-红色红色 2 2条件条件：FeFe3+3+0.01mg 0.01mg0.05mg/50ml,0.05mg/50ml,即相当于标准铁即相当于标准铁 溶液溶液1 15 5mlml。酸酸 度度 稀盐酸稀盐酸4 4ml/50mlml/50ml。HCl 3 3干扰的排除干扰的排除 （1 1）当有当有FeFe2+2+存在时，加氧化剂过硫酸铵氧化存在时，加氧化剂过硫酸铵氧化FeFe2+2+成成FeFe3+3+。（2 2）当供试液管与对照溶液管色调不一致，或所呈硫氰酸铁的当供试液管与对照溶液管色调不一致，或所呈硫氰酸铁的 颜色较浅不便比较时，可分别移入分液漏斗中，加正丁醇颜色较浅不便比较时，可分别移入分液漏斗中，加正丁醇 或异戊醇提取，分别取提取液比色。因或异戊醇提取，分别取提取液比色。因硫氰酸铁离子在正硫氰酸铁离子在正丁醇等溶剂中丁醇等溶剂中 溶解度大，故能增加颜色深度，且能排除某些干扰物溶解度大，故能增加颜色深度，且能排除某些干扰物质的影响。质的影响。(二）巯基醋酸法二）巯基醋酸法 1.原理原理 巯基醋酸还原巯基醋酸还原Fe3+为为Fe2+，在氨碱性试液中与在氨碱性试液中与Fe 2+作用生成红色配位离子。作用生成红色配位离子。2Fe3+2HSCH2COOH 2Fe2+SCH2COOH+2H+SCH2COOH Fe2+2HSCH2COOH Fe(SCH2COOH)2 +H+Fe(SCH2COOH)2 Fe(SCH2COOH)2 2-+2H2O 2OH-2.2.说明说明 在加巯基醋酸溶液前，在加巯基醋酸溶液前，先加先加枸橼酸溶液，使其与铁离枸橼酸溶液，使其与铁离 形成配位离子，以免在氨碱性溶液中产生氢氧化铁沉形成配位离子，以免在氨碱性溶液中产生氢氧化铁沉 淀。（此法灵敏度比较高，但试剂较贵）淀。（此法灵敏度比较高，但试剂较贵）四、重金属检查法四、重金属检查法 重金属影响药物稳定性和安全性重金属影响药物稳定性和安全性 重金属是指在实验室条件下与硫代乙酰胺或重金属是指在实验室条件下与硫代乙酰胺或S S2-2-作用显作用显色的金属杂质色的金属杂质.如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等，由于药品生产过程中遇到如银、铅、汞、铜、镉、锡、锑、铋等，由于药品生产过程中遇到铅铅的机会比较多，铅在体内容易积蓄中毒，故检查时以铅作为代表的机会比较多，铅在体内容易积蓄中毒，故检查时以铅作为代表,以铅的限量表示重金属限度以铅的限量表示重金属限度.（实验条件主要指溶液的（实验条件主要指溶液的P PH H，因为，因为溶液的溶液的PH直接影响重金属与显色直接影响重金属与显色剂反应是否完全，从而影响测定的准确度）剂反应是否完全，从而影响测定的准确度）中国药典（中国药典（20201010年版）重金属的检查法规定了年版）重金属的检查法规定了三种三种方法方法 第一法第一法为硫代乙酰胺法；为硫代乙酰胺法；第二法第二法是将供试品在是将供试品在500600炽灼破坏后，再按第一法检查；炽灼破坏后，再按第一法检查；第三法第三法是检查能溶入碱溶液，而不溶于酸溶液的药物，在碱性条是检查能溶入碱溶液，而不溶于酸溶液的药物，在碱性条 件下用件下用硫化钠硫化钠作显色剂；作显色剂；第一法硫代乙酰胺法第一法硫代乙酰胺法1 1、原理、原理 CHCH3 3CSNHCSNH2 2+H+H2 2O CHO CH3 3CONHCONH2 2+H+H2 2S S 合格合格 H H2 2S +PbS +Pb2+2+PbS PbS +2H+2H+2 2条件条件：PbPb2+2+10g10g20g/27ml,20g/27ml,相当于标准铅溶液相当于标准铅溶液1 12 2mlml。酸酸 度度 pH 3.0pH 3.03.5.3.5.合格合格 3 3干扰的排除干扰的排除 (1)(1)供试品有色：可采用外消色法消除干扰。供试品有色：可采用外消色法消除干扰。(2)(2)供试品有微量供试品有微量FeFe3+3+:在弱酸性溶液中氧化硫化氢析在弱酸性溶液中氧化硫化氢析 出硫，产生混浊影响比色，可出硫，产生混浊影响比色，可 加加VcVc或盐酸羟胺使或盐酸羟胺使FeFe3+3+氧化成氧化成 Fe Fe2+2+离子再检查。离子再检查。其他两种方法见其他两种方法见P P122122 五、砷盐检查法五、砷盐检查法 中国药典采用中国药典采用古蔡法古蔡法和二乙基二硫代氨基甲酸银和二乙基二硫代氨基甲酸银法（法（Ag-DDCAg-DDC）检查药物中的微量的砷盐。检查药物中的微量的砷盐。（一）古蔡法一）古蔡法Gutzeit)Gutzeit)(BP也采用此法）也采用此法）1.原理原理 As3+3Zn+3H+3Zn2+AsH3 AsO33-+3Zn+9H+3Zn2+3H2O+AsH3 AsO43-+4Zn+11H+4Zn2+4H2O+AsH3 AsH3 +3HgBr2 3HBr+As(HgBr)3(棕色棕色)2As(HgBr)3 +AsH3 3 AsH(HgBr)2 (黄色黄色)As(HgBr)3 +AsH3 3HBr+As2Hg3 (棕黑色棕黑色)2.装置与试剂作用装置与试剂作用 (1)(1)验砷仪验砷仪 砷化氢发生瓶砷化氢发生瓶;中空磨口塞中空磨口塞;导气管导气管 (2)(2)试剂的作用试剂的作用 合格合格 KI-SnClKI-SnCl2 2的作用：交替还原作用；首先将的作用：交替还原作用；首先将AsO43-还还 原成原成AsO33-，生成的碘再被还原成碘离子。生成的碘再被还原成碘离子。即即:将五价砷还原成三价砷将五价砷还原成三价砷(五价砷与氢反应较慢五价砷与氢反应较慢)AsO43-+2I-+2H+AsO33-+I2 +H2O AsO43-+Sn2+2H+AsO33-+Sn4+H2O I2 +Sn2+2I-+Sn4+4I-+Zn2+ZnI42-由于碘离子的存在由于碘离子的存在,与锌离子形成配合物与锌离子形成配合物,有利于有利于 AsH3 气体生成气体生成.ZnZn粒粒与与氯化亚锡氯化亚锡作用，在其面上形成作用，在其面上形成Zn-SnZn-Sn齐，起极齐，起极化作用化作用,从而使氢气均匀而连续地发生从而使氢气均匀而连续地发生.极化极化:当电流通过电解池或电池时当电流通过电解池或电池时,使电极电位改变并使电极电位改变并产生一反电动势的现象产生一反电动势的现象.1、Pb(AC)Pb(AC)2 2棉太紧影响砷化氢气体通过；太松，硫化棉太紧影响砷化氢气体通过；太松，硫化氢也通过起不到作用。氢也通过起不到作用。2 2、硫化氢来源：锌及供试品中可能含有少量硫化物，、硫化氢来源：锌及供试品中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中产生硫化氢气体在酸性溶液中产生硫化氢气体 Pb(AC)Pb(AC)2 2棉棉的作用：的作用：是消除供试品可能含有的少量的硫化物。是消除供试品可能含有的少量的硫化物。S S2-2-+2H+2H+H H2 2S S H H2 2S+HgBrS+HgBr2 2 2HBr +HgS 2HBr +HgS（汞斑）汞斑）H H2 2S +Pb(AC)S +Pb(AC)2 2 PbS +2HAC PbS +2HAC 3.干扰的排除干扰的排除 （1）供试品为）供试品为S2-,SO32-,S2O32-等等:因在酸中生成因在酸中生成H2S,SO2,与与 HgBr HgBr作用生成作用生成HgSHgS或或HgHg，干扰砷斑检查。用硝酸氧化成硫干扰砷斑检查。用硝酸氧化成硫 酸盐可消除。酸盐可消除。（2）供试品为）供试品为Fe3+能消耗能消耗KI，SnCl2 应测定条件，先可加足应测定条件，先可加足 量量KI。（3）含锑药物）含锑药物 锑盐被还原为锑盐被还原为SbH3与与HgBr2试纸作用，产生灰色试纸作用，产生灰色 锑斑，干扰砷斑的检查，可改用锑斑，干扰砷斑的检查，可改用Betterdorff法。法。白田道夫法原理：白田道夫法原理：As3SnCl2HClAsSnCl4H 棕褐色的胶态砷棕褐色的胶态砷（二）（二）Ag-DDCAg-DDC法法(二乙基二硫代氨基甲酸银，二乙基二硫代氨基甲酸银，USPUSP采用此法采用此法)1.1.原理原理：是利用砷化氢与：是利用砷化氢与Ag-DDCAg-DDC吡啶溶液吡啶溶液作用，使作用，使Ag-DDCAg-DDC中的中的 银还原为红色胶态银，以银还原为红色胶态银，以Ag-DDCAg-DDC溶液为空白，于溶液为空白，于510510nmnm 的波长处，测定吸收度，供试品溶液的吸收度不得大的波长处，测定吸收度，供试品溶液的吸收度不得大 于标准砷溶液的吸收度。于标准砷溶液的吸收度。2.2.试剂的作用试剂的作用：同古蔡法。：同古蔡法。六、溶液颜色检查法六、溶液颜色检查法 溶液颜色检查法是控制药物中有色杂质量的方法。中国药典溶液颜色检查法是控制药物中有色杂质量的方法。中国药典 （20201010年版）收载有三种方法：年版）收载有三种方法：K K2 2CrCr2 2O O7 7 黄、绿黄、绿 1.1.标准比色液进行比较的方法标准比色液进行比较的方法 标准比色液标准比色液 CoClCoCl2 2 橙黄橙黄,橙红橙红 2.2.分光光度法分光光度法 CuSOCuSO4 4 蓝色蓝色 3.3.色差计法色差计法 通过测定供试品与标准比色液或水之间的色差值通过测定供试品与标准比色液或水之间的色差值用分光光度法注意事项用分光光度法注意事项1 1、药品溶液有色时，杂质检查测定波、药品溶液有色时，杂质检查测定波长的选择长的选择2 2、溶剂的选择、溶剂的选择七、易炭化物检查法七、易炭化物检查法 是检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量是检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂有机杂质质。这类杂质多数结构未知，用硫酸呈色的方法简单控制其含量。这类杂质多数结构未知，用硫酸呈色的方法简单控制其含量.常常采用与标准采用与标准 比色液比色的方法进行检查。比色液比色的方法进行检查。标准比色液为标准比色液为CoCl2,K2Cr2O7,CuSO4注意事项：注意事项：1 1、供试品为固体，应先研成细粉。如需加热才能溶解时，可将供供试品为固体，应先研成细粉。如需加热才能溶解时，可将供 试品与硫酸混合均匀，加热溶解后，放冷至室温，再转移置比试品与硫酸混合均匀，加热溶解后，放冷至室温，再转移置比 色管中。色管中。2 2、操作时，应严格控制硫酸浓度、反应温度及时间。因易炭化合、操作时，应严格控制硫酸浓度、反应温度及时间。因易炭化合 物与硫酸呈现的颜色与上述因素有关。物与硫酸呈现的颜色与上述因素有关。是检查药物中的微量不溶性杂质。常采用与浊是检查药物中的微量不溶性杂质。常采用与浊 度标度标准液比浊的方法进行检查。浊准液比浊的方法进行检查。浊 度标准液制备原理：度标准液制备原理：(CH2)6N4 +6H2O 6HCHO +4NH3 HCHO +H2N-NH2 H2C=N-NH2 +H2O 甲醛腙白色混浊甲醛腙白色混浊 不同级号浊度标准液不同级号浊度标准液 级 号 0.5 1 2 3 4浊度标准原液（ml）2.5 5.0 10.0 30.0 50.0水 （ml）97.5 95.0 90.0 70.0 50.0八、溶液澄清度检查法八、溶液澄清度检查法1 1、标准浊度溶液的影响因素、标准浊度溶液的影响因素温度：在低温（温度：在低温（11）反应不能进行，不产生沉淀；高）反应不能进行，不产生沉淀；高 温温形成的浊度稍低。因此，药典规定反应温度为形成的浊度稍低。因此，药典规定反应温度为251251放置时间：硫酸肼溶液配制后，应放置放置时间：硫酸肼溶液配制后，应放置4-64-6小时，然后再小时，然后再与乌洛托品反应。溶液不放置，制得的标准浊度溶液浑浊与乌洛托品反应。溶液不放置，制得的标准浊度溶液浑浊不稳定。不稳定。湿度：各地的相对湿度不同，而试剂的含水量可直接影响湿度：各地的相对湿度不同，而试剂的含水量可直接影响溶液的浓度。因此，试剂应先经硅胶干燥剂干燥溶液的浓度。因此，试剂应先经硅胶干燥剂干燥24h24h后使用后使用为佳。为佳。储存期：应置凉处避光储存。按规定储存期使用，浊度无储存期：应置凉处避光储存。按规定储存期使用，浊度无明显变化。明显变化。2 2、对于带乳浊色供试液的澄清度检查，不能用本法。应该用、对于带乳浊色供试液的澄清度检查，不能用本法。应该用氯化钠与硝酸银产生的浑浊度比较。氯化钠与硝酸银产生的浑浊度比较。注意事项注意事项浑浊程度分五级浑浊程度分五级:澄清、轻微浑浊、微澄清、轻微浑浊、微 浊、浑浊、浊、浑浊、重度浑浊重度浑浊澄清系指供试品溶液的澄清度相同于所用的溶剂澄清系指供试品溶液的澄清度相同于所用的溶剂或未超过或未超过0.50.5号标准浊度溶液。号标准浊度溶液。判断标准判断标准补充：1、中国药典还规定“注射液中不溶性微粒检查法”。它与“澄清度”检查的概念是不同的应予注意。2、微粒系指注射液可移动的不溶性外来物质。这些微粒进入血管能引起血管肉芽肿，静脉炎，血栓及血小板减少，对心肌、肝、肾等亦有损害。九、炽灼残渣检查法九、炽灼残渣检查法(residue on ignition)BP称称硫酸灰分硫酸灰分（sulphated ash)是检查有机药物中混入的各种无机杂质。常采用是检查有机药物中混入的各种无机杂质。常采用 重量方法进行检查。重量方法进行检查。残渣及坩埚重残渣及坩埚重 坩埚重坩埚重 残渣残渣%=100%=100%供试品重供试品重注意事项注意事项1 1、动植物生药经灼烧后的灰烬称为灰分，它是生药药、动植物生药经灼烧后的灰烬称为灰分，它是生药药 品的正常成分。品的正常成分。2 2、不含金属元素组成的有机药品经灼烧后，所留的残、不含金属元素组成的有机药品经灼烧后，所留的残渣称炽灼残渣渣称炽灼残渣加硫酸并灼烧至加硫酸并灼烧至700-800700-800后，所得的硫酸盐又称硫酸后，所得的硫酸盐又称硫酸沿灰分。沿灰分。3 3、氢氟酸对瓷坩埚有腐蚀性，故含氟的药品应置于白、氢氟酸对瓷坩埚有腐蚀性，故含氟的药品应置于白金坩埚中灼烧。金坩埚中灼烧。4 4、加热时，必须小心，先用小火加热，以免供试品溅、加热时，必须小心，先用小火加热，以免供试品溅出；切不可直接大火加热坩埚底部，否则易引起暴沸出；切不可直接大火加热坩埚底部，否则易引起暴沸或燃烧。或燃烧。5 5、自高温炉取出坩埚时，应先将坩埚预热（打、自高温炉取出坩埚时，应先将坩埚预热（打开炉门），再与坩埚接触，避免热坩埚聚遇开炉门），再与坩埚接触，避免热坩埚聚遇冷而破裂。冷而破裂。6 6、有机药品的灼烧可以一定量的已恒重的纯沙、有机药品的灼烧可以一定量的已恒重的纯沙或混以乙醇、甘油，以分散药品增大与氧接或混以乙醇、甘油，以分散药品增大与氧接触的面，使灰化完全。触的面，使灰化完全。7 7、坩埚置高温炉内灼烧前，务必蒸发除尽硫酸，、坩埚置高温炉内灼烧前，务必蒸发除尽硫酸，以免硫酸蒸汽腐蚀炉膛，造成漏电事故。以免硫酸蒸汽腐蚀炉膛，造成漏电事故。8 8、可采用蓝墨水与三氯化铁溶液混合液涂写烘、可采用蓝墨水与三氯化铁溶液混合液涂写烘烤，供瓷坩埚编号。烤，供瓷坩埚编号。注意事项注意事项十、干燥失重检查法十、干燥失重检查法 主要检查药物中的主要检查药物中的水分水分及其他及其他挥发性的物质挥发性的物质。？常采用重量方法进行检查。？常采用重量方法进行检查。常用的方法有三种：常用的方法有三种：（一）常压恒温干燥法（一）常压恒温干燥法（二）干燥剂干燥法（注意常用（二）干燥剂干燥法（注意常用干燥剂干燥剂P127）（三）（三）减压干燥法减压干燥法 热重分析法热重分析法 热分析法（热分析法（thermo analysis)差示热分析差示热分析 差示扫描量热法差示扫描量热法 1.1.热重分析法（热重分析法（thermogravimetric analysis,TGA)在程序升温下，测量物质的质量与温度的关系，研究物质在在程序升温下，测量物质的质量与温度的关系，研究物质在 加热同时失重的情况下，所发生的质的变化，常用于药物稳定加热同时失重的情况下，所发生的质的变化，常用于药物稳定 性的研究；贵重和易氧化药物的干燥失重测定。性的研究；贵重和易氧化药物的干燥失重测定。2.2.差示热分析（差示热分析（differentialtherml analysis,DTA)是在程序升温下，测量被测物质和参比物之间的温差与温是在程序升温下，测量被测物质和参比物之间的温差与温 度关系的一种技术。参比物是一种惰性物质，在加热过程中度关系的一种技术。参比物是一种惰性物质，在加热过程中 不发生相变和化学变化。因此温差不发生相变和化学变化。因此温差(T)T)只与被测物质的量质只与被测物质的量质 变化有关。变化有关。T=0 T=0 被测物未发生吸热或放热反应被测物未发生吸热或放热反应;T=-T=-为为 吸热峰吸热峰;T=+T=+为放热峰为放热峰.测药的溶点测药的溶点 DTADTA在药物分析中应用在药物分析中应用 尖峰为物理变化尖峰为物理变化 药物定性分析药物定性分析 宽峰为化学变化宽峰为化学变化 估测药物的纯度估测药物的纯度 3 3.差示扫描量热法差示扫描量热法(differential scanning calorimetry,DSC)是在程序升温下，测量维持样品和参比物的温度相同，系统是在程序升温下，测量维持样品和参比物的温度相同，系统 所需供给样品随温差变化的能量的一种技术。所需供给样品随温差变化的能量的一种技术。DSCDSC与与DTADTA的的不同之不同之 处处是记录方式不同，是记录系统供给的能量，吸热供给能量；放是记录方式不同，是记录系统供给的能量，吸热供给能量；放 热减少供给的能量。在药物分析中应用与热减少供给的能量。在药物分析中应用与DTADTA相同。相同。DSC-TGDSC-TG常联合常联合 用。用。十一、水分测定十一、水分测定中国药典中国药典收载方法收载方法 卡尔卡尔.费休法、甲苯法费休法、甲苯法测定物：药物中的结晶水、吸附水、游离水测定物：药物中的结晶水、吸附水、游离水原理：原理：碘将二氧化硫氧化成三氧化硫时，碘将二氧化硫氧化成三氧化硫时，需要一定量的水参与反应，根据消需要一定量的水参与反应，根据消 耗碘的量测定水分（耗碘的量测定水分（P P127127）费休试液组成：水：碘：二氧化硫：甲醇：吡啶费休试液组成：水：碘：二氧化硫：甲醇：吡啶提问：提问：1 1、甲醇、吡啶的作用？、甲醇、吡啶的作用？2 2、为什么上述两试剂需是无水的？、为什么上述两试剂需是无水的？例：注射用青霉素钠水分测定 精密称取本品0.7540g，置干燥具塞玻璃瓶中，加无水甲醇5ml，充分振摇后，用费休试液滴至溶液由浅黄色变成红棕色，消耗用费休试液2.15ml；另取无水甲醇5ml，同法测定，消耗用费休试液0.15ml，求青霉素钠的含水量（已知每1ml费休试液相当于3.52mg水）。解：供试品中含水量%=（A-B)F/W100%=（2.15-0.15）3.15/0.75401000100%=0.93%注意：（1）费休法不适用于测定氧化剂、还原剂、以及能与试 液生成水的化合物的测定，如：铬酸盐、过氧化物、硫代硫酸盐、硫化物、碱性氧化物以及含氧弱酸盐 等的测定；一些羰基化合物如活泼的醛、酮可于试 剂中的甲醇作用，生成缩醛和水，干扰测定。（2）费休试液的F值应在4.0mg/ml上下为宜，F值降至 3.0mg/ml以下时，测定终点不敏锐，不宜再用。（3）整个操作应迅速，且不宜再阴雨或空气湿度太大时 进行。十二、有机溶剂残留量测定法十二、有机溶剂残留量测定法ChP(2010)主要检查药物在生产过程中引入的有害的有机溶剂主要检查药物在生产过程中引入的有害的有机溶剂(如苯、氯如苯、氯 仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、环氧乙烷、二氧六环等）仿、二氯甲烷、吡啶、甲苯、环氧乙烷、二氧六环等）。常采用常采用 气相色谱法方法进行检查。常用的方法有二种：气相色谱法方法进行检查。常用的方法有二种：直接进样法和直接进样法和 顶空进样法（试用于挥发性大的样品测定）。顶空进样法（试用于挥发性大的样品测定）。色谱色谱系统性系统性试验的试验的要求要求：(1)(1)N N1000;(2)1000;(2)用内标法测定时，要求用内标法测定时，要求R R1.5;(3)1.5;(3)外标法测外标法测 定时，待测物的峰面积的定时，待测物的峰面积的RSDRSD10%10%。残留有机溶剂测定的方法和限量残留有机溶剂测定的方法和限量 20102010版药典对残留溶剂的控制种类和版药典对残留溶剂的控制种类和限度进行了较大的修订限度进行了较大的修订,溶剂残留量的种类溶剂残留量的种类与限度与人用药品注册技术范围的国际协与限度与人用药品注册技术范围的国际协调会一致调会一致.按有机溶剂毒性的程度分为三类按有机溶剂毒性的程度分为三类:一类有机溶媒毒性较大一类有机溶媒毒性较大,具有致癌作用并具有致癌作用并对环境有害对环境有害,应尽量避免使用应尽量避免使用;二类有机溶二类有机溶媒对人有一定毒性媒对人有一定毒性,尽量少用尽量少用;三类有机溶三类有机溶媒对人的健康危险性较小媒对人的健康危险性较小,推荐使用推荐使用.P.P129129返 回补充：元素状态的硒对人体无毒性，但硒化合物（二氧化硒）对人体剧毒。因此，对于有可能引入硒的一些药物须对残留硒进行限量检查。第四节第四节 特殊杂质的检查方法特殊杂质的检查方法 一、一、特殊杂质的研究规范 药物中特殊杂质的研究是药物质量控制的重要部分，该研究可以为药物的工艺研究、质量研究、稳定性研究、药理毒理及临床研究提供重要信息，对特殊杂质研究直接体现创新药物的研究水平。通过对有关物质的定性研究，可以获得有关物质的结构信息，分析其形成过程，合成时可设法避免该杂质的形成，或经纯化使之降至可接受的水平，或储藏过程中控制好条件。二、利用药物和杂质在物理性质上的差二、利用药物和杂质在物理性质上的差（一）臭味及挥发性质的差异一）臭味及挥发性质的差异 利用药物中存在的杂质具有特殊臭味，可以从臭味判断利用药物中存在的杂质具有特殊臭味，可以从臭味判断 例：例：黄凡士林中异性有机物检查：本品黄凡士林中异性有机物检查：本品2.0g,直火加热无直火加热无 辛味。辛味。（二）颜色差异二）颜色差异 例：例：磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的检查：取本品磺胺嘧啶中有色偶氮苯化合物的检查：取本品 2.0g，加加NaOH试液试液10ml，加水加水25ml，与黄色与黄色 3号比色液比，号比色液比，不得更深不得更深。（三）溶解行为的差异（三）溶解行为的差异 利用药物可溶于水或有机溶剂、酸、碱中，而杂利用药物可溶于水或有机溶剂、酸、碱中，而杂质不溶；反之杂质可溶而药物不溶。质不溶；反之杂质可溶而药物不溶。例例：吡哌酸中碱中不溶物吡哌酸甲酯（：吡哌酸中碱中不溶物吡哌酸甲酯（I I）和（和（IIII）检查检查 （四）旋光性质的差异（四）旋光性质的差异 例：例：硫酸阿托品中莨菪碱的检查：硫酸阿托品中莨菪碱的检查：本品溶液本品溶液(50(50mg/ml)mg/ml)-0.4-0.4 （五）对光吸收性质的差异（五）对光吸收性质的差异 1.1.紫外分光光度法：紫外分光光度法：例例:地蒽酚中二羟基蒽醌的检查地蒽酚中二羟基蒽醌的检查 再如：苯丙醇中苯丙酮的检查：可利用供试液的吸收度再如：苯丙醇中苯丙酮的检查：可利用供试液的吸收度 比来控制杂质比来控制杂质;纯品苯丙醇纯品苯丙醇A A247nm247nm/A/A258nm258nm=0.59;=0.59;99.5%99.5%时时A A247nm247nm/A/A258nm258nm=0.79;=0.79;因此规定供试品因此规定供试品A A247nm247nm/A/A258nm258nm 0.79;0.79;即所含苯丙酮即所含苯丙酮0.5%.0.5%.2.2.原子吸收分光光度法：原子吸收分光光度法：是通过测定药物中所含待测元素原子是通过测定药物中所含待测元素原子,吸收发自吸收发自光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待测元素的光源的该元素特定波长的程度，以求出药物中待测元素的 含量。含量。限量检查时：对照品液限量检查时：对照品液=供试品供试品+限量限量-a a 供试品液供试品液=-=-b b 符合规定符合规定时时 b b(a-b);b(a-b);b(a-b)(a-b)不合格不合格。3 3。红外分光光度法：。红外分光光度法：主要用于药物中无效或低效主要用于药物中无效或低效晶型检查晶型检查，如甲苯咪唑中，如甲苯咪唑中 A A晶型检查晶型检查 A A 晶型晶型 C C 晶型晶型 在在640640cmcm-1 -1 有强吸收有强吸收 吸收很弱吸收很弱 在在662662cmcm-1 -1 吸收很弱吸收很弱 有强吸收有强吸收 662 662cmcm-1-1 640 640cmcm-1 -1 662662cmcm-1-1 640 640cmcm-1-1 供试品供试品+10%+10%A A晶型晶型 D D2 2 D D1 1 供试品供试品 D D2 2 D D1 1 10%10%R=DR=D1 1/D/D2 2 R=D R=D1 1/D/D2 2 4.4.荧光分析法荧光分析法 3,4-3,4-二去氢利血平二去氢利血平 利血平中氧化产物检查：利血平利血平中氧化产物检查：利血平(无荧光无荧光)()(I)(I)(黄绿色荧光黄绿色荧光)3,4,5,6-3,4,5,6-四去氢利血平四去氢利血平 (II)(II)(蓝色荧光蓝色荧光)(六六)吸附或分配性的差异吸附或分配性的差异 1.1.薄层色谱法薄层色谱法(TLC)TLC)有关物质有关物质 (1)(1)杂质对照品法杂质对照品法 例如例如:盐酸左旋咪唑中检查盐酸左旋咪唑中检查 硅胶硅胶G G 2,3-2,3-二氢二氢-6-6-苯基咪唑苯基咪唑2,1-2,1-bb噻唑盐噻唑盐 苯苯:甲醇甲醇:冰冰HACHAC 样品样品 对照品对照品。注意：此法必须首先确认供试品中存在的待检杂质是什么？并具备该杂质对照品。如具备上述条件，用该法检查十分可靠。因为对照品与杂质系同一物质，且检查条件完全一致。如不能确认供试品中存在的待检杂质是什么？选用可能存在的某种物质作为杂质对照品 当药物存在的杂质未完全确认或待检杂质不止一种时，可根据药物合成路线，化学性质等推断可能存在的杂质，并且能获得该物质的对照品，即可采用此法。应用此法需注意杂质斑应用此法需注意杂质斑点与对照品应具有可比性。点与对照品应具有可比性。(2)(2)供试品溶液自身稀释法供试品溶液自身稀释法检查物为检查物为:结构不确定结构不确定;或无杂质对照品的或无杂质对照品的 情况情况注意注意:该法限于杂质斑点的颜色与主成分斑点的该法限于杂质斑点的颜色与主成分斑点的颜色相同或相近的情况下使用颜色相同或相近的情况下使用.(3)3)高低浓度对比品法高低浓度对比品法(对照药物法对照药物法)例如例如:盐酸异丙嗪中有关物质的检查盐酸异丙嗪中有关物质的检查 硅胶硅胶G G 有有多个杂质多个杂质而且而且结构不清结构不清 样品样品1010mg/ml;mg/ml;对照品对照品(1)0.15mg/ml (1)0.15mg/ml 己烷己烷:丙酮丙酮:乙胺乙胺 (2)0.05 (2)0.05mg/mlmg/ml 样品液样品液 对对(1)(2)(1)(2)供试液杂质斑点供试液杂质斑点不多于不多于3 3个个;杂质斑点与对照杂质斑点与对照(1)1)的主斑点比的主斑点比 较较,不得更深不得更深;如有一点超过如有一点超过,应不深于对照液应不深于对照液(2)(2)的主斑点的主斑点.2.2.纸层析法纸层析法(PC)PC)常用于常用于极性大极性大的药物的分离、分析，如地高辛中的的药物的分离、分析，如地高辛中的有关杂质的检查。有关杂质的检查。3.3.高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)HPLC)（1 1）峰面积归一化法峰面积归一化法：L%=AL%=Ai i/(A/(Ai i+A+A主主）100%100%例如：利巴韦林中有关杂质的检查：例如：利巴韦林中有关杂质的检查：对照品液对照品液(5(5g/ml)g/ml)进样进样1010l,l,调灵敏度，使主峰达满调灵敏度，使主峰达满 量程的量程的20%20%25%25%样品液样品液(0.4(0.4mg/ml)mg/ml)进样进样1010l,l,杂质杂质AAi i(A(Ai i+A+A主主）的的1.0%1.0%（2 2）不加校正因子主成分对照法不加校正因子主成分对照法 对照品液为供试品的稀释液进样测得对照品液为供试品的稀释液进样测得A A主主 供试品液进样测得供试品液进样测得AAi i 其其A Ai i A A主主即为合格即为合格.例如例如:甲硝唑中甲硝唑中2-2-甲基甲基-5-5-硝基咪唑硝基咪唑:对照品液对照品液(0.01(0.01mg/ml)mg/ml)进样进样2020l,l,调灵敏度，使主峰达调灵敏度，使主峰达10%10%30%30%样品液样品液(0.14(0.14mg/ml)mg/ml)进样进样2020l,l,杂质杂质AAi iA A主主的的1.0%.1.0%.（3 3）内标法加校正因子内标法加校正因子测定供试品中杂质的含量测定供试品中杂质的含量 对照品对照品+内标内标 进样求校正因子（进样求校正因子（f)=(Af)=(As s/C/Cs s)/(A)/(AR R/C/CR R)供试品供试品+内标内标 进样求进样求A AX X.A.AS S,则杂质浓度则杂质浓度C CX X=f =f A AX X/(A/(AS S/C/CS S)4.4.气相色谱法气相色谱法(GC)GC)主要用于药物中主要用于药物中挥发性的杂质挥发性的杂质检查，其检查方检查，其检查方 法与法与HPLCHPLC法相同。法相同。三、利用药物和杂质在化学性上的差异三、利用药物和杂质在化学性上的差异（一）酸碱性的差异（一）酸碱性的差异 1.1.规定消耗滴定液体积规定消耗滴定液体积 例如己酸羟孕酮中正己酐、对甲苯磺酸检查：例如己酸羟孕酮中正己酐、对甲苯磺酸检查：(NaOH 0.02mol/L)NaOH 0.02mol/L)取本品取本品0.200.20g+g+中性乙醇中性乙醇+溴麝香草酚蓝溴麝香草酚蓝 微蓝色微蓝色0.50ml0.50ml 2.2.pHpH法法 例如乙琥胺中例如乙琥胺中2-2-甲基甲基-2-2-乙基丁二酸检查：乙基丁二酸检查：0.010.01g/ml pH3.0g/ml pH3.04.5.4.5.3.3.指示剂法指示剂法 例如苯巴比妥中苯基丙二酰脲检查：其水溶液不得使甲基橙显红例如苯巴比妥中苯基丙二酰脲检查：其水溶液不得使甲基橙显红 色。色。（二）氧化还原性的差异（二）氧化还原性的差异 例如：例如：NaCl中中I-和和Br-检查检查EOCl/2Cl-=+1.3595V EOBr/2Br-=+1.065V EOI/2I-=+0.5345V,因此因此+NaNO2+H2SO4+淀粉显蓝色淀粉显蓝色 再例如：盐酸吗啡中阿朴吗啡的检查：后者可被碘氧化生成水溶性再例如：盐酸吗啡中阿朴吗啡的检查：后者可被碘氧化生成水溶性 绿色化绿色化 合物。因此合物。因此ChP规定：本品规定：本品50mg+4mlH2O+1dI2+5ml乙醚乙醚 乙醚层不得显红色；水层不得显绿色。乙醚层不得显红色；水层不得显绿色。（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀（三）杂质与一定试剂反应产生沉淀 例一、间苯二酚中邻苯二酚检查：后者例一、间苯二酚中邻苯二酚检查：后者+Pb(Ac)2 白色白色 ChP规定：本品规定：本品0.5g+10mlH2O+2d稀醋酸稀醋酸+0.5ml Pb(Ac)2 不得发生混浊，即为合格。不得发生混浊，即为合格。例二、硝酸毛果芸香碱中其他生物的检查：后者例二、硝酸毛果芸香碱中其他生物的检查：后者+氨水氨水+K2Cr2O7 ChP规定：本品规定：本品0.2g+20mlH2O两份；两份；I份份+数滴氨试液；另数滴氨试液；另 1份份+数滴数滴K2Cr2O7试液试液，均不得发生混浊。，均不得