艾滋病检测原理和技术规范课件

艾滋病检测原理和技术规范艾滋病检测原理和技术规范课件艾滋病检测原理和技术规范艾滋病检测原理和技术规范艾滋病检测原理和技术规范 艾滋病病毒艾滋病病毒感染后，可严重破坏人体的免疫系统，使人体丧感染后，可严重破坏人体的免疫系统，使人体丧失抵御各种疾病的能力，失抵御各种疾病的能力，有利于各种病原体的侵入，有利于各种病原体的侵入，从而导致各从而导致各种严重的、难以治愈的机会性感染或肿瘤，最终导致死亡，病死种严重的、难以治愈的机会性感染或肿瘤，最终导致死亡，病死率可达率可达100100。2024/7/224艾滋病检测原理和技术规范HIV-1 MHIV-1 M组组HIV-1 OHIV-1 O组组HIV-2HIV-2喀麦隆、加蓬喀麦隆、加蓬HIV型型别和和亚型的型的分分类进化与地区分布：化与地区分布：西非、印度西非、印度HIVHIV2024/7/225艾滋病检测原理和技术规范基因基因亚型与感染途径的关系型与感染途径的关系2024/7/226艾滋病检测原理和技术规范艾滋病从感染到艾滋病从感染到发病的一般病的一般过程程2024/7/227艾滋病检测原理和技术规范二、艾滋病二、艾滋病检测的原理及方法的原理及方法2024/7/228艾滋病检测原理和技术规范各种各种检测技技术为艾滋病防治工作艾滋病防治工作提供广泛的技提供广泛的技术支持平台支持平台2024/7/229艾滋病检测原理和技术规范艾滋病艾滋病实验诊断方法断方法2024/7/2210艾滋病检测原理和技术规范各种各种诊断断试剂特性特性2024/7/2211艾滋病检测原理和技术规范硒硒标法法金金标法法HIV抗体筛查试验抗体筛查试验2024/7/2212艾滋病检测原理和技术规范明胶明胶颗粒凝集粒凝集试验（Particle agglutination testParticle agglutination test，PAPA）2024/7/2213艾滋病检测原理和技术规范PAPA的操作和结果判断的操作和结果判断2024/7/2214艾滋病检测原理和技术规范5 5 450/630nm下测定OD值混匀，加盖，37温育 洗板3 3 加入底物第二次特异性结合第二次特异性结合4 4 加入终止液1 1 加入样品 洗板2 2 加入酶标记物 加盖，37温育 加盖，37温育第一次特异性结合第一次特异性结合酶联免疫分析免疫分析ELISA（双抗原夹心、两步法）2024/7/2215艾滋病检测原理和技术规范快速法可否快速法可否单独使用？独使用？n 全国艾滋病检测技术规范全国艾滋病检测技术规范（20042004版）：将版）：将PAPA、dot-dot-EIAEIA、胶体硒法纳入快速检测规范方法，因此可以使用。、胶体硒法纳入快速检测规范方法，因此可以使用。n 有研究指出：有研究指出：n 任何一种快速试剂可以筛查出任何一种快速试剂可以筛查出99%99%以上的阴性样本；以上的阴性样本；n 两种快速试剂均为阳性时，可以筛查出两种快速试剂均为阳性时，可以筛查出98%98%以上的阳性以上的阳性样本；样本；n 两种快速试剂结果不一致时，可用两种快速试剂结果不一致时，可用ELISAELISA复检；复检；n 单独使用或两种同时使用时，特异性差别无显著意义。单独使用或两种同时使用时，特异性差别无显著意义。2024/7/2216艾滋病检测原理和技术规范 针对各种病毒蛋白的特异抗体针对各种病毒蛋白的特异抗体针对各种病毒蛋白的特异抗体针对各种病毒蛋白的特异抗体 区分区分区分区分ELISAELISAELISAELISA真阳性与假阳性真阳性与假阳性真阳性与假阳性真阳性与假阳性 检测检测检测检测HIV-1HIV-1HIV-1HIV-1和和和和HIV-2HIV-2HIV-2HIV-2HIV抗体确证试验抗体确证试验Western Blot 免疫印迹法免疫印迹法2024/7/2217艾滋病检测原理和技术规范HIV的主要基因及其的主要基因及其产物物 （HIVHIV标志物）标志物）标志物）标志物）2024/7/2218艾滋病检测原理和技术规范ss-RNAss-RNA2024/7/2219艾滋病检测原理和技术规范全自动免疫印迹仪全自动免疫印迹仪2024/7/2220艾滋病检测原理和技术规范HIVHIV抗体阳性诊断标准：抗体阳性诊断标准：2 2条条env env（gp160/gp120+gp41gp160/gp120+gp41）1 1条条env+p24env+p24p55p66p31p51gp120gp160gp41p17p24膜蛋白膜蛋白（env）核蛋白核蛋白（gag）逆转录酶逆转录酶（pol）2024/7/2221艾滋病检测原理和技术规范筛查试验：诊断出阴性样本，诊断出阴性样本，诊断出阴性样本，诊断出阴性样本，并为阳性并为阳性并为阳性并为阳性/可疑样本排除非特异条带。可疑样本排除非特异条带。可疑样本排除非特异条带。可疑样本排除非特异条带。复复检1 1（试剂A）：）：对阳性对阳性对阳性对阳性/可疑样本排除操作误差。可疑样本排除操作误差。可疑样本排除操作误差。可疑样本排除操作误差。复复检2 2（试剂B）：）：对阳性对阳性对阳性对阳性/可疑样本排除试剂误差。可疑样本排除试剂误差。可疑样本排除试剂误差。可疑样本排除试剂误差。确确证试验：诊断出阳性样本。诊断出阳性样本。诊断出阳性样本。诊断出阳性样本。筛查试验和确和确证试验的作用的作用2024/7/2222艾滋病检测原理和技术规范HIV/AIDSHIV/AIDS 诊断标准诊断标准诊断标准诊断标准 （GBGB 16000-1995 16000-1995 16000-1995 16000-1995）2024/7/2223艾滋病检测原理和技术规范2024/7/2224艾滋病检测原理和技术规范HIV！HIV？HIV感染母感染母亲所生所生婴儿：儿：分分别于于1212个月、个月、1818个月追踪个月追踪检测阴性者阴性者为阴性，阴性，1818个月仍阳性者个月仍阳性者为阳性。阳性。2024/7/2225艾滋病检测原理和技术规范三、艾滋病三、艾滋病检测技技术规范范2024/7/2226艾滋病检测原理和技术规范主要内容：主要内容：样品采集和处理样品采集和处理样品采集和处理样品采集和处理 检测方法检测方法检测方法检测方法 （HIVHIVHIVHIV抗体、病毒核酸、抗体、病毒核酸、抗体、病毒核酸、抗体、病毒核酸、病毒载量、病毒载量、病毒载量、病毒载量、CD4CD4CD4CD4、HIVHIVHIVHIV抗原检测）抗原检测）抗原检测）抗原检测）安全防护、职业暴露安全防护、职业暴露安全防护、职业暴露安全防护、职业暴露 质量管理质量管理质量管理质量管理 （质量保证、质量控制、质量评价）（质量保证、质量控制、质量评价）（质量保证、质量控制、质量评价）（质量保证、质量控制、质量评价）实验室质量考评实验室质量考评实验室质量考评实验室质量考评 HIVHIVHIVHIV诊断试剂质量评估诊断试剂质量评估诊断试剂质量评估诊断试剂质量评估2024/7/2227艾滋病检测原理和技术规范筛查试验筛查试验（试剂（试剂A A）阳性可疑阳性可疑均阴性均阴性均阴性均阴性均阳性均阳性阴阴阴阴 性性性性重复检测（试剂重复检测（试剂A+BA+B）阴阴阴阴 性性性性阳阳 性性确证试验确证试验筛查实验室筛查实验室筛查实验室筛查实验室一阴一阳一阴一阳确证实验室确证实验室确证实验室确证实验室复核检测复核检测（试剂（试剂A/B/CA/B/C）阳性可疑阳性可疑阴阴阴阴 性性性性筛查报告筛查报告（阴性）（阴性）确认报告确认报告（阴性）（阴性）确认报告确认报告确认报告确认报告（阳性）（阳性）（阳性）（阳性）2024/7/2228艾滋病检测原理和技术规范HIV抗体抗体检测结果果处理理规范范2024/7/2229艾滋病检测原理和技术规范HIVHIV待确证样品待确证样品待确证样品待确证样品HIVHIV阳性确证报告原件阳性确证报告原件阳性确证报告原件阳性确证报告原件感染者感染者感染者感染者确认报告原件确认报告原件确认报告原件确认报告原件确认报告复印件备案确认报告复印件备案确认报告复印件备案确认报告复印件备案筛查实验室所在单位筛查实验室所在单位筛查实验室所在单位筛查实验室所在单位筛查实验室所在单位筛查实验室所在单位筛查实验室所在单位筛查实验室所在单位确证实验室确证实验室确证实验室确证实验室筛查实验室筛查实验室筛查实验室筛查实验室艾滋病艾滋病样本确本确证、报告流程：告流程：2024/7/2230艾滋病检测原理和技术规范认真填写各类表格（最好能打印），及时上报。认真填写各类表格（最好能打印），及时上报。2024/7/2231艾滋病检测原理和技术规范各筛查实验室每月各筛查实验室每月5日前上报上月检测数据：日前上报上月检测数据：2024/7/2232艾滋病检测原理和技术规范四、艾滋病四、艾滋病检测的的质量控制量控制2024/7/2233艾滋病检测原理和技术规范 行政支持行政支持行政支持行政支持 重视、投入、理解重视、投入、理解重视、投入、理解重视、投入、理解 实验室规范化建设实验室规范化建设实验室规范化建设实验室规范化建设 规范、制度、程序规范、制度、程序规范、制度、程序规范、制度、程序 人员要求人员要求人员要求人员要求 资质条件、培训和轮训资质条件、培训和轮训资质条件、培训和轮训资质条件、培训和轮训质量保证（质量保证（质量保证（质量保证（QAQA）质量控制（质量控制（质量控制（质量控制（QCQC）室内质控室内质控室内质控室内质控 质控图的建立和应用质控图的建立和应用质控图的建立和应用质控图的建立和应用 检验期间核查检验期间核查检验期间核查检验期间核查 试剂对照、外部质控品对照、平行双样试剂对照、外部质控品对照、平行双样试剂对照、外部质控品对照、平行双样试剂对照、外部质控品对照、平行双样 结果关联性（不同方法、不同实验室结果、人群特征等）结果关联性（不同方法、不同实验室结果、人群特征等）结果关联性（不同方法、不同实验室结果、人群特征等）结果关联性（不同方法、不同实验室结果、人群特征等）可实时校验：样品、试剂、仪器、操作等环节。可实时校验：样品、试剂、仪器、操作等环节。质量评价（质量评价（质量评价（质量评价（EQAEQA）实验室室间质量考评实验室室间质量考评实验室室间质量考评实验室室间质量考评2024/7/2234艾滋病检测原理和技术规范 建立各项规章制度和建立各项规章制度和建立各项规章制度和建立各项规章制度和操作程序，定期检查；操作程序，定期检查；操作程序，定期检查；操作程序，定期检查；人员定期接受培训和人员定期接受培训和人员定期接受培训和人员定期接受培训和复训，培养良好的业复训，培养良好的业复训，培养良好的业复训，培养良好的业务素质；务素质；务素质；务素质；对HIV实验室的室的1010项基本要求基本要求2024/7/2235艾滋病检测原理和技术规范 仪器设备运作正常，定期检定和校准，妥善维护；仪器设备运作正常，定期检定和校准，妥善维护；仪器设备运作正常，定期检定和校准，妥善维护；仪器设备运作正常，定期检定和校准，妥善维护；样品流转有序，记录详细，保存规范；样品流转有序，记录详细，保存规范；样品流转有序，记录详细，保存规范；样品流转有序，记录详细，保存规范；采用合格试剂，经常核查试剂质量，正确保存和使用；采用合格试剂，经常核查试剂质量，正确保存和使用；采用合格试剂，经常核查试剂质量，正确保存和使用；采用合格试剂，经常核查试剂质量，正确保存和使用；环境条件符合要求，有监控有记录；环境条件符合要求，有监控有记录；环境条件符合要求，有监控有记录；环境条件符合要求，有监控有记录；严格按照规范和试剂说明书操作；严格按照规范和试剂说明书操作；严格按照规范和试剂说明书操作；严格按照规范和试剂说明书操作；建立各类质量记录表格，资料保存完整，溯源性强；建立各类质量记录表格，资料保存完整，溯源性强；建立各类质量记录表格，资料保存完整，溯源性强；建立各类质量记录表格，资料保存完整，溯源性强；坚持开展室内质控，参加室间比对和能力验证；坚持开展室内质控，参加室间比对和能力验证；坚持开展室内质控，参加室间比对和能力验证；坚持开展室内质控，参加室间比对和能力验证；安全防护、废物处理措施落实，建立人员健康监护档案。安全防护、废物处理措施落实，建立人员健康监护档案。安全防护、废物处理措施落实，建立人员健康监护档案。安全防护、废物处理措施落实，建立人员健康监护档案。2024/7/2236艾滋病检测原理和技术规范 每个实验室必须配备至少每个实验室必须配备至少每个实验室必须配备至少每个实验室必须配备至少2 2 2 2种不同原理种不同原理种不同原理种不同原理/不同厂家的试剂，不同厂家的试剂，不同厂家的试剂，不同厂家的试剂，其中一种必须是其中一种必须是其中一种必须是其中一种必须是ELISAELISAELISAELISA（第三代、双抗原夹心、两步法）。第三代、双抗原夹心、两步法）。第三代、双抗原夹心、两步法）。第三代、双抗原夹心、两步法）。第一次筛查试验推荐使用高敏感性的第一次筛查试验推荐使用高敏感性的第一次筛查试验推荐使用高敏感性的第一次筛查试验推荐使用高敏感性的ELISAELISAELISAELISA法，快速法可用法，快速法可用法，快速法可用法，快速法可用于应急试验或复核试验。于应急试验或复核试验。于应急试验或复核试验。于应急试验或复核试验。按政府招标目录采购，保存供应商的资质证明文件，试剂按政府招标目录采购，保存供应商的资质证明文件，试剂按政府招标目录采购，保存供应商的资质证明文件，试剂按政府招标目录采购，保存供应商的资质证明文件，试剂批批检报告。批批检报告。批批检报告。批批检报告。登记试剂采购和使用情况，注意保存条件并实行监控。登记试剂采购和使用情况，注意保存条件并实行监控。登记试剂采购和使用情况，注意保存条件并实行监控。登记试剂采购和使用情况，注意保存条件并实行监控。试剂和样品应分开存放，过期试剂必须及时处理。试剂和样品应分开存放，过期试剂必须及时处理。试剂和样品应分开存放，过期试剂必须及时处理。试剂和样品应分开存放，过期试剂必须及时处理。不同品牌、不同批号的试剂不能混用（包括阳性对照）。不同品牌、不同批号的试剂不能混用（包括阳性对照）。不同品牌、不同批号的试剂不能混用（包括阳性对照）。不同品牌、不同批号的试剂不能混用（包括阳性对照）。使用使用诊断断试剂注意事注意事项2024/7/2237艾滋病检测原理和技术规范 严格按照说明书操作和判断。严格按照说明书操作和判断。严格按照说明书操作和判断。严格按照说明书操作和判断。实验室环境条件（温度、湿度）的控制。实验室环境条件（温度、湿度）的控制。实验室环境条件（温度、湿度）的控制。实验室环境条件（温度、湿度）的控制。试剂使用前室温平衡的重要性。试剂使用前室温平衡的重要性。试剂使用前室温平衡的重要性。试剂使用前室温平衡的重要性。正确使用恒温设备（校准温度、放置方式、放置位置）。正确使用恒温设备（校准温度、放置方式、放置位置）。正确使用恒温设备（校准温度、放置方式、放置位置）。正确使用恒温设备（校准温度、放置方式、放置位置）。固定样品排列方式，固定对照品位置。固定样品排列方式，固定对照品位置。固定样品排列方式，固定对照品位置。固定样品排列方式，固定对照品位置。统一加样的方式方法（加样器使用习惯、样品加样顺序）。统一加样的方式方法（加样器使用习惯、样品加样顺序）。统一加样的方式方法（加样器使用习惯、样品加样顺序）。统一加样的方式方法（加样器使用习惯、样品加样顺序）。加样过程避免污染（气溶胶、加样器移动路线）。加样过程避免污染（气溶胶、加样器移动路线）。加样过程避免污染（气溶胶、加样器移动路线）。加样过程避免污染（气溶胶、加样器移动路线）。按加样顺序加入各种试剂，加入质控对照前必须摇匀。按加样顺序加入各种试剂，加入质控对照前必须摇匀。按加样顺序加入各种试剂，加入质控对照前必须摇匀。按加样顺序加入各种试剂，加入质控对照前必须摇匀。严格控制反应温度和时间。严格控制反应温度和时间。严格控制反应温度和时间。严格控制反应温度和时间。实验操作注意事操作注意事项2024/7/2238艾滋病检测原理和技术规范 每次实验必须设立内部质控对照和外部质控对照。每次实验必须设立内部质控对照和外部质控对照。每次实验必须设立内部质控对照和外部质控对照。每次实验必须设立内部质控对照和外部质控对照。内内内内部部部部对对对对照照照照质质质质控控控控血血血血清清清清必必必必须须须须使使使使用用用用同同同同批批批批号号号号试试试试剂剂剂剂盒盒盒盒内内内内提提提提供供供供的的的的阳阳阳阳性性性性和和和和阴阴阴阴性性性性对对对对照照照照血血血血清清清清，其其其其数数数数量量量量和和和和结结结结果果果果控控控控制制制制范范范范围围围围，按按按按该该该该试试试试剂剂剂剂盒盒盒盒说说说说明明明明书的要求设立和判定。书的要求设立和判定。书的要求设立和判定。书的要求设立和判定。设设设设立立立立内内内内部部部部质质质质控控控控对对对对照照照照可可可可以以以以有有有有效效效效监监监监控控控控该该该该试试试试剂剂剂剂盒盒盒盒的的的的检检检检测测测测能能能能力力力力和和和和操作过程的正确性。操作过程的正确性。操作过程的正确性。操作过程的正确性。外外外外部部部部对对对对照照照照质质质质控控控控血血血血清清清清包包包包括括括括强强强强阳阳阳阳性性性性、弱弱弱弱阳阳阳阳性性性性和和和和阴阴阴阴性性性性对对对对照照照照血血血血清清清清（由由由由权权权权威威威威检检检检验验验验质质质质控控控控机机机机构构构构供供供供应应应应的的的的定定定定值值值值产产产产品品品品），但但但但通通通通常常常常可可可可以以以以只只只只设设设设一个弱阳性对照。一个弱阳性对照。一个弱阳性对照。一个弱阳性对照。使使使使用用用用外外外外部部部部质质质质控控控控对对对对照照照照制制制制作作作作质质质质控控控控图图图图，可可可可有有有有效效效效监监监监控控控控检检检检测测测测的的的的重重重重复复复复性和稳定性、以及试剂盒的批间或孔间差异。性和稳定性、以及试剂盒的批间或孔间差异。性和稳定性、以及试剂盒的批间或孔间差异。性和稳定性、以及试剂盒的批间或孔间差异。室内室内质控注意事控注意事项2024/7/2239