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微生物应用技术微生物应用技术学习情景三学习情景三 培养微生物、测定其生长培养微生物、测定其生长微生物应用技术学习情景三 主要内容主要内容任务任务1 1 测定微生物生长测定微生物生长 任务任务2 理化因素对微生物生理化因素对微生物生长的影响长的影响1 12 2任务任务3 微生物的分离和纯培微生物的分离和纯培养技术养技术3 3学习情景三学习情景三 培养微生物、测定其生长培养微生物、测定其生长主要内容任务1 测定微生物生长 任务2 理化因素对微生任任务务2 理化因素对微生物生长理化因素对微生物生长的影响的影响 学习情景三学习情景三 培养微生物、测定其生长培养微生物、测定其生长任务2 理化因素对微生物生长的影响 学习情景三 培 在任何一种生物的生存环境中都存在着很多在任何一种生物的生存环境中都存在着很多生态因子,这些因子的性质、特性和强度各不相生态因子,这些因子的性质、特性和强度各不相同,它们彼此之间相互联系、相互促进、相互制同,它们彼此之间相互联系、相互促进、相互制约,构成了多种多样的生存环境。约,构成了多种多样的生存环境。任务提出任务提出任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 在任何一种生物的生存环境中都存在着很多生态因子,这些 通过对生物因子和非生物因子的学习,掌握通过对生物因子和非生物因子的学习,掌握光照、温度、湿度、氧气和水份等对微生物生光照、温度、湿度、氧气和水份等对微生物生长的影响。长的影响。任务分析任务分析任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 通过对生物因子和非生物因子的学习,掌握光照、温度、湿一、生态因子生态因子生态因子对生物的生长、发育有影响的环境要素,如光照、温度、湿度、氧气和水份等。1.生态因子的概念2.生态因子的分类l生物因子:生物因子:生物之间的关系,如竞争、捕食、寄生、共生、互生和拮抗等;l非生物因子:非生物因子:包括光、湿度、渗透压和营养因素等。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 一、生态因子生态因子对生物的生长、发育有影响的环境要素一、生物因子u共生关系u互生关系u拮抗关系u竞争关系u捕食关系u寄生关系 任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 生物间的相互关系有:生物间的相互关系有:不同种类或微生物与不同种类或微生物与其他生物在一个限定其他生物在一个限定的空间内,之间互为的空间内,之间互为环境,相互影响,既环境,相互影响,既有相互依赖又有相互有相互依赖又有相互排斥关系排斥关系。一、生物因子共生关系任务2 理化因素对微生物生长的影响 一、生物因子(一)共生关系两种生物共同生活在一起,相互依赖,不能独立生存,这种关系称为共生关系,其特征是具有共生体。例如:地衣中的藻类(提供有机物和氧气)和霉菌(提供水分、无机营养和保护作用)。图1 叶状地衣 图2 叶状地衣(南极石耳)任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 一、生物因子(一)共生关系两种生物共同生活在一起,相互依赖一、生物因子(二)互生关系 两种可以单独生活的生物,当它们生活在一起时,一方为另一方提供有利的生活条件或双方互为有利。“可分可合,合比分好”。举例:纤维素分解菌与好氧性自生固氮菌在土壤中互生;氧化塘系统-利用细菌和藻类的互生关系处理污水的系统。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 一、生物因子(二)互生关系 两种可以单独生活的生物,当一、生物因子(三)拮抗关系 指一种微生物在其生命活动过程中,产生某种代谢产物或改变环境条件,从而抑制另一种(或一类)微生物的生长繁殖,甚至杀死其他微生物的现象。举例:在制造泡菜过程中,乳酸杆菌与其他微生物的关系;青霉菌与革兰氏阳性菌的拮抗关系。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 一、生物因子(三)拮抗关系 指一种微生物在其生命活动一、生物因子四、捕食关系 又称猎食,一般指一种大型的生物直接捕捉、吞食另一种小型生物以满足其营养需要的相互关系。举例:在废水生物处理系统中,原生动物捕食细菌、真菌和藻类。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 一、生物因子四、捕食关系 又称猎食,一般指一种大型的一、生物因子(五)寄生关系 指一种小型生物生活在另一种较大型生物的体内或体表,从中摄取营养得以生长繁殖,同时使后者蒙受损害甚至被杀死的现象。前者称为寄生物,后者称为寄主或宿主。举例:噬菌体寄生于细菌;任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 一、生物因子(五)寄生关系 指一种小型生物生活在另一一、生物因子(六)竞争关系 当两种微生物对某种生态因子有相同的要求时,就会发生争先摄取该种因子,以满足生长代谢需要的现象,这种关系称为竞争关系。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 一、生物因子(六)竞争关系 当两种微生物对某种生态二、非生物因子u温度u水分u辐射upH值u氧气u化学因子 任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 内容 因子出现异常,微生因子出现异常,微生物的生命活动会受到物的生命活动会受到影响,甚至发生变异影响,甚至发生变异或死亡。或死亡。二、非生物因子温度任务2 理化因素对微生物生长的影响 内二、非生物因子(一)温度任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 通过影响微生物膜的液晶结构、酶和蛋白质的合成和活性等影响微生物的生命活动 二、非生物因子(一)温度任务2 理化因素对微生物生长的影响(二)非生物因子(一)温度1.微生物生长的适宜温度 微生物的生长温度范围为:微生物的生长温度范围为:1095根据最适生长温度不同,可将微生物分为三类:l嗜冷微生物:-1020l嗜温微生物:2537l嗜热微生物:高于4050温度下生长任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 (二)非生物因子(一)温度根据最适生长温度不同,可将微生物微生物的生长温度类型微生物的生长温度类型 微生物类型微生物类型 生长温度范围生长温度范围 分布区域分布区域最低最低 最适最适 最高最高嗜冷微生嗜冷微生物物专性嗜冷型专性嗜冷型-12-125 5151515152020 地球两极地球两极兼性嗜冷型兼性嗜冷型-5-50 01010202025253030海洋、冷泉、冷藏海洋、冷泉、冷藏食品食品嗜温微生嗜温微生物物 室温型室温型10 10 2020 20 20353540 40 4545 腐生环境腐生环境 体温型体温型35 35 4040 寄生环境寄生环境 嗜热微生物嗜热微生物25 25 454550 50 60607 79595温泉、堆肥、土壤温泉、堆肥、土壤任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 微生物的生长温度类型 微生物类型 生长温度范围(二)非生物因子(一)温度1.微生物生长的适宜温度 微生物的生长温度范围为:微生物的生长温度范围为:1095根据最适生长温度不同,可将微生物分为三类:l嗜冷微生物:-1020l嗜温微生物:2537l嗜热微生物:高于4050温度下生长任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 (二)非生物因子(一)温度根据最适生长温度不同,可将微生物(二)非生物因子2.2.温度温度对微生物的影响对微生物的影响 A:低温对微生物的影响B:高温对微生物的影响任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响(二)非生物因子2.温度对微生物的影响 任务2 理化因素对(二)非生物因子2.2.温度温度对微生物的影响对微生物的影响 A:低温对微生物的影响低温对微生物的影响:减弱微生物的活力,并可使得其处于休眠状态。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 冷冻和反复交替融化,造成微生物的死亡(冰晶的形成损伤细胞膜、冰晶的融化造成细胞的脱水),尤其幼龄微生物。应用:干燥、低温速冻来长期(数年)保存微生物菌种,在4下保存菌种。(二)非生物因子2.温度对微生物的影响 低温对微生物的影响:(二)非生物因子2.2.温度温度对微生物的影响对微生物的影响 B:高温对微生物的影响任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 杀灭微生物,使得蛋白质凝固。微生物含水率越高易于被杀灭(湿热的穿透能力强)。芽孢的含水率约40,在100,加热12h无法将其灭活。高温杀死微生物有两个指标。致死温度,在一定时间内杀死微生物所需的最低温度;致死时间,在某一温度下杀死微生物所需的最短时间。(二)非生物因子2.温度对微生物的影响 任务2 理化因素对B:高温对微生物的影响防腐防腐:利用某种理化因素抑制微生物生长繁殖,达到防止食品等发生变质的措施,无选择性。抑菌而非杀灭作用。措施:低温、缺氧、干燥、高渗、高酸度的环境或添加防腐剂等。无菌无菌:指没有活菌没有活菌没有活菌没有活菌。无菌操作是防止微生物进入其他物品中的操作技术。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 除菌:除菌:利用过滤等方法除去液体或空气中存在的微生物。B:高温对微生物的影响防腐:利用某种理化因素抑制微生物生长繁B:高温对微生物的影响:高温对微生物的影响灭菌:灭菌:采用强烈的理化因素使物体内外部的一切微一切微生物生物永远丧失其生长繁殖能力的措施,称为灭菌。消毒:消毒:采用较温和的理化因素,仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌。无菌:无菌:指没有活菌没有活菌没有活菌没有活菌。无菌操作是防止微生物进入其他物品中的操作技术。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 B:高温对微生物的影响灭菌:采用强烈的理化因素使物体内外部的杀菌、消毒、防腐的比较杀菌、消毒、防腐的比较比较项目比较项目灭菌灭菌 消消 毒毒 防防 腐腐 化疗化疗处理因素处理因素强理、化因素强理、化因素 理、化因素理、化因素理、化因素理、化因素化学治疗剂化学治疗剂处理对象处理对象任何物体内外任何物体内外生物体表、生物体表、酒、乳等酒、乳等有机质物有机质物体内外体内外宿主体内宿主体内微生微生物类型物类型一切微生物一切微生物有关病原菌有关病原菌 一切微生物一切微生物有关病原菌有关病原菌对微生对微生物作用物作用彻底杀灭彻底杀灭杀死或抑制杀死或抑制 抑制或杀死抑制或杀死抑制或杀死抑制或杀死实例实例加压蒸汽灭菌,加压蒸汽灭菌,辐射灭菌辐射灭菌化学杀菌剂化学杀菌剂70707575酒酒精消毒,巴精消毒,巴氏消毒法氏消毒法冷藏、干燥、冷藏、干燥、糖渍、盐腌、糖渍、盐腌、缺氧、化学防缺氧、化学防腐剂腐剂抗生素、磺抗生素、磺胺药胺药任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 杀菌、消毒、防腐的比较比较项目灭菌 消 毒 防 腐(二)非生物因子2.2.温度温度对微生物的影响对微生物的影响 B:高温对微生物的影响(1 1)干热法)干热法 两种:干热灭菌法、灼烧法。(2 2)湿热法)湿热法 巴氏消毒法、煮沸消毒法、间歇灭菌法、高温加压蒸汽灭菌法、高温瞬时灭菌法、连续加压灭菌法。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响(二)非生物因子2.温度对微生物的影响(1)干热法任务2 在相同条件下在相同条件下,湿热灭菌的效果优于干热灭菌。湿热灭菌的效果优于干热灭菌。原因:原因:水蒸汽比热空气穿透力强水蒸汽比热空气穿透力强,能有效地杀死微生物。,能有效地杀死微生物。干热和湿热空气穿透力的比较干热和湿热空气穿透力的比较水蒸汽存在潜热水蒸汽存在潜热,当蒸汽液化为水时可放出大量热量,当蒸汽液化为水时可放出大量热量,迅速提高灭菌物品的温度,缩短灭菌时间。迅速提高灭菌物品的温度,缩短灭菌时间。蛋白质的含水量与其凝固温度成反比蛋白质的含水量与其凝固温度成反比,湿热比干热易湿热比干热易使蛋白质凝固。使蛋白质凝固。加热方式加热方式温度温度加热时间加热时间h h 透过布的层数及其温度透过布的层数及其温度 20 20层层 40 40层层 100 100层层 干热干热 130 130140140 4 4 86 86 72 72 70 70以下以下 湿热湿热 105 105 4 4 101 101 101 101 101 101任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 在相同条件下,湿热灭菌的效果优于干热灭菌。原因:加热方式温度 蛋白质含水量与其凝固温度的关系蛋白质含水量与其凝固温度的关系蛋白质含蛋白质含水量水量(%)(%)蛋白质凝固蛋白质凝固温度温度/灭菌时间灭菌时间/min/min蛋白质含蛋白质含水量水量(%)(%)蛋白质凝固蛋白质凝固温度温度/灭菌时间灭菌时间/min/min5050565630306 6145145303025257474808030300 01601601701703030干热与湿热空气对不同细菌的致死时间比较干热与湿热空气对不同细菌的致死时间比较 加热方式加热方式干热干热90909090,相对湿度相对湿度加热方式加热方式干热干热90909090,相对湿度相对湿度细菌种类细菌种类20208080细菌种类细菌种类 20 208080白喉帮杆菌白喉帮杆菌 24h 24h 2h 2h 2min 2min伤寒杆菌伤寒杆菌 3h 3h 2h 2h2min2min痢疾杆菌痢疾杆菌 3h 3h 2h 2h 2min 2min 葡萄球菌葡萄球菌 8h 8h 3h 3h2min2min任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 蛋白质含水量与其凝固温度的关系蛋白质含水量(%)蛋白物理法(1)干热法干热灭菌法灭菌方法:1501700C下维持12h。适宜对象:金属制品、清洁玻璃器皿(培养皿、移液管)等。火焰灭菌法适宜对象:接种环、接种针、棉塞等。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 物理法任务2 理化因素对微生物生长的影响(2)湿热法高压蒸汽灭菌法原理原理:高温高压使蛋白质变性高温高压使蛋白质变性灭菌方法:灭菌方法:0.105MPa0.105MPa,1211210C,15-30min15-30min适合对象适合对象:培养基培养基任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响(2)湿热法任务2 理化因素对微生物生长的影响 间歇灭菌法灭菌方法:100,蒸煮1560min 37,24h 100,蒸煮1560min 反复三次适宜对象:含芽孢的微生物任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 间歇灭菌法任务2 理化因素对微生物生长的影响 高温瞬时灭菌法灭菌方法:135140,保持515s处理对象:牛奶、饮料。巴氏消毒法灭菌方法:6085摄氏度处理15s30min。处理对象:牛奶、饮料。低温维持消毒法(低温维持消毒法(LTHLTH):):6363摄氏度保持摄氏度保持30min30min高温瞬时消毒法(高温瞬时消毒法(HTSTHTST):75:75摄氏度维持摄氏度维持15s15s具体方法具体方法任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 高温瞬时灭菌法低温维持消毒法(LTH):63摄氏度保持30煮沸消毒法n n灭菌方法:灭菌方法:100100,处理处理15min15min。n n处理对象处理对象:饮用水。:饮用水。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 煮沸消毒法任务2 理化因素对微生物生长的影响 连续加压蒸汽灭菌法连续加压蒸汽灭菌法 发酵行业称发酵行业称“连消法连消法”应用范围:应用范围:发酵厂的大批培养基灭菌。发酵厂的大批培养基灭菌。操作:操作:培养基在管道的流动过程中快速升温、维持和培养基在管道的流动过程中快速升温、维持和冷却,然后流进发酵罐。冷却,然后流进发酵罐。条件:条件:135135140140,5,515s15s典型的培养基的连续灭菌的流程典型的培养基的连续灭菌的流程任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 连续加压蒸汽灭菌法典型的培养基的连续灭菌的流程任务2 理应用应用:保存原料。食品、饲料、蔬菜、谷类、皮张和药材和食品发酵工业原料。保藏菌种。生产、科研中用真空冷冻干燥法保藏细菌、病毒、立克次氏体。贮藏食品。烘干、晒干、熏干等。(二)水分(二)水分原理:干燥会使微生物代谢活动停止,使其处于休眠状态。严重时会引起细胞脱水,蛋白质变性,进而导致死亡。抵抗力:醋酸菌很快死亡;酵母菌可保存数月;产荚膜的细菌不产生荚膜的细;细菌的芽孢、酵母菌的子囊孢子、霉菌的有性孢子或厚壁孢子的抗干燥能力更大。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 应用:保存原料。食品、饲料、蔬菜、谷类、皮张和药材和食品发二、非生物因子(三)辐射辐射:能量通过空间传播或传递的一种物理现象。可见光 紫外线任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 电磁辐射:能量借助于波动传播者;微粒辐射:借助于原子及亚原子粒子的高速行动传递者 电磁辐射 微粒辐射3.-射线和-射线4.微波5.超声波二、非生物因子(三)辐射辐射:能量通过空间传播或传递的一种 1.可见光:波长在400nm800nm的电磁辐射波功能:进行光合作用细菌的能源。二、二、非生物因子非生物因子(三)辐射应用:强的可见光或可见光连续长时间照射(有氧存在)可使利用化能进行新陈代谢的微微生物致死。特点:特点:可见光对真菌的作用主要在孢子的形成可见光对真菌的作用主要在孢子的形成阶段,而不是在生长阶段。阶段,而不是在生长阶段。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 1.可见光:波长在400nm800nm的电磁辐射波二、2.紫外线灭菌紫外线灭菌紫外线紫外线紫外线紫外线:波长在波长在波长在波长在150nm390nm150nm390nm的电磁辐射波。的电磁辐射波。的电磁辐射波。的电磁辐射波。一一一一般般般般细细细细菌菌菌菌在在在在紫紫紫紫外外外外线线线线下下下下照照照照射射射射5min即即即即能能能能被被被被杀杀杀杀死死死死,芽芽芽芽孢孢孢孢则则则则需需需需10min10min。紫外线波长在紫外线波长在紫外线波长在紫外线波长在265nm266nm左右者杀菌力最强左右者杀菌力最强左右者杀菌力最强左右者杀菌力最强 核核核核酸酸酸酸对对对对紫紫紫紫外外外外线线线线的的的的吸吸吸吸收收收收高高高高峰峰峰峰在在在在265nm266nm 265nm266nm,紫紫紫紫外外外外线线线线对对对对核核核核酸有特异性作用。酸有特异性作用。酸有特异性作用。酸有特异性作用。提问:提问:提问:提问:杀菌机理?杀菌机理?杀菌机理?杀菌机理?任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 二、非生物因子二、非生物因子 2.紫外线灭菌紫外线:波长在150nm390nm的电磁辐射(2)紫外线的应用)紫外线的应用空气消毒表面消毒诱变育种(1 1)紫外线杀菌的机理)紫外线杀菌的机理干扰干扰DNADNA复制:复制:诱导诱导DNADNA形成胸腺嘧啶二聚体,阻止合成。形成胸腺嘧啶二聚体,阻止合成。使空气中的使空气中的O O2 2变成变成O O3 3,使使H H2 2O O氧化生成氧化生成H H2 2O O2 2,由由O O3 3和和H H2 2O O2 2发挥杀发挥杀菌作用。菌作用。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 要求:要求:每每1015m2安装安装30W灯管灯管1支,照支,照射射30分钟。分钟。特点特点:对污染物体表面消毒,距离不宜超:对污染物体表面消毒,距离不宜超过过lm;消毒有效区为灯管周围;消毒有效区为灯管周围1.52m范范围,照射围,照射30分钟。分钟。直射紫外线对眼睛和皮肤有刺激作用。直射紫外线对眼睛和皮肤有刺激作用。(2)紫外线的应用(1)紫外线杀菌的机理任务2 理化因素对(3)紫外灯)紫外灯(低压水银灯低压水银灯低压水银灯低压水银灯)杀杀杀杀菌的光源菌的光源菌的光源菌的光源254nm的紫外光的紫外光的紫外光的紫外光缺点缺点穿透性很弱穿透性很弱甚至于不能透过普通玻璃甚至于不能透过普通玻璃甚至于不能透过普通玻璃甚至于不能透过普通玻璃,因此只作为因此只作为因此只作为因此只作为容器的表面杀菌容器的表面杀菌容器的表面杀菌容器的表面杀菌,或,或,或,或无菌室中的空气杀无菌室中的空气杀无菌室中的空气杀无菌室中的空气杀菌菌菌菌。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响(3)紫外灯(低压水银灯)杀菌的光源任务2 理化因素对微生实验室使用实验室使用实验室使用实验室使用紫紫外外灯灯任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 实验室使用紫外灯任务2 理化因素对微生物生长的影响 3.3.电离辐射电离辐射 X-射线和射线和-射线均能使被照射的物品产生电离作用。射线均能使被照射的物品产生电离作用。缺点:缺点:辐射灭菌投资较大,需要专门技术人员操作管理。辐射灭菌投资较大,需要专门技术人员操作管理。适用范围适用范围:不耐热的生物制品、中药材、塑料制品、水:不耐热的生物制品、中药材、塑料制品、水果、蔬菜及食品保藏前的灭菌处理。果、蔬菜及食品保藏前的灭菌处理。机制:机制:电离辐射引起水分解,产生游离的氢离子,进电离辐射引起水分解,产生游离的氢离子,进而与溶解氧生成过氧化氢等强氧化剂,使酶蛋白而与溶解氧生成过氧化氢等强氧化剂,使酶蛋白-SH基基氧化,从而导致细胞的各种病理变化。氧化,从而导致细胞的各种病理变化。特点:特点:高能电磁波,具有光波短、穿透力强、低剂量照射高能电磁波,具有光波短、穿透力强、低剂量照射可能有促进微生物生长的作用或使微生物发生突变,高剂可能有促进微生物生长的作用或使微生物发生突变,高剂量照射则会使微生物死亡。量照射则会使微生物死亡。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 二、非生物因子二、非生物因子3.电离辐射 缺点:辐射灭菌投资较大,需要专门技术人员操作管5.超声波超声波指频率在指频率在20000Hz以上的声波。以上的声波。作用原理:作用原理:在超声波作用下,细胞内含物受到强烈振荡,在超声波作用下,细胞内含物受到强烈振荡,胶体发生絮状沉淀,凝胶液化或乳化,失去活性,同时溶液胶体发生絮状沉淀,凝胶液化或乳化,失去活性,同时溶液受超声波作用产生空化作用,液体中形成的空穴崩溃,引起受超声波作用产生空化作用,液体中形成的空穴崩溃,引起压力变化使细胞破裂,原生质溢出而死亡。压力变化使细胞破裂,原生质溢出而死亡。特点特点:几乎所有微生物细胞都能被超声波破坏,只是敏几乎所有微生物细胞都能被超声波破坏,只是敏感程度有所不同。杆菌比球菌易被杀死,病毒和噬菌体感程度有所不同。杆菌比球菌易被杀死,病毒和噬菌体较难被破坏。较难被破坏。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 二、非生物因子二、非生物因子5.超声波作用原理:在超声波作用下,细胞内含物受到强烈振荡,二、非生物因子(四)pH值不同微生物的生长pH存在最高、最适与最低三个数值。各大类微生物生长繁殖所需pH不同。极限pH值范围为0.511,大多数微生物生活在59的pH值范围内。细菌适宜6.57.5,霉菌、酵母菌适宜46,放线菌适宜于78。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 作用机制:作用机制:改变细胞表面电性和电荷密度、影响生物酶的活性、改变营养物的电性和存在状态。二、非生物因子(四)pH值不同微生物的生长pH存在最高、最适不同微生物对环境不同微生物对环境pHpH适应的范围不同适应的范围不同 微微 生生 物物 pH pH 最低最低 最适最适 最高最高氧化硫杆菌氧化硫杆菌 l.0 l.02.0 2.0 2.82.84.0 4.0 6.06.0嗜酸乳杆菌嗜酸乳杆菌4.04.04.64.65.8 5.8 6.66.6 6.8 6.8大豆根瘤菌大豆根瘤菌4.24.26.8 6.8 7.07.0 11.0 11.0褐球固氮菌褐球固氮菌 4.5 4.57.4 7.4 7.67.6 9.0 9.0亚硝酸细菌亚硝酸细菌 7.0 7.07.8 7.8 8.68.6 9.4 9.4 放线菌放线菌 5.0 5.07.0 7.0 8.08.0 10.0 10.0 酵母菌酵母菌 3.0 3.05.0 5.0 6.06.0 8.0 8.0 黑曲霉黑曲霉 1.5 1.55.0 5.0 6.06.0 9.0 9.0任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 不同微生物对环境pH适应的范围不同 微 生 物 p 说明:说明:不同的微生物最适生长的不同的微生物最适生长的pHpH值不同。值不同。微生物在基质中生长,能改变基质氢离子浓度。微生物在基质中生长,能改变基质氢离子浓度。乳酸菌乳酸菌葡萄糖葡萄糖乳酸乳酸pHpH下降下降基质被酸化。基质被酸化。尿素细菌尿素细菌尿素尿素氨氨pHpH上升上升基质被碱化。基质被碱化。肺炎克氏杆菌肺炎克氏杆菌葡萄糖产酸葡萄糖产酸基质基质pHpH降至降至5.05.0葡萄葡萄糖耗尽糖耗尽菌体分解酸性产物菌体分解酸性产物生成生成C0C02 2或或H H2 20 0pHpH又回升到又回升到7.07.0。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 说明:任务2 理化因素对微生物生长的影响 同一种微生物在不同生长阶段和不同生理生化过同一种微生物在不同生长阶段和不同生理生化过程中,要求的程中,要求的pHpH不同。不同。黑曲霉黑曲霉:pH23,发酵蔗糖,产柠檬酸为主,发酵蔗糖,产柠檬酸为主;pH中性,产中性,产草酸多。草酸多。酵母菌酵母菌:pH4.55.0,发酵产物乙醇,不产甘油和醋酸;,发酵产物乙醇,不产甘油和醋酸;pH高于高于8.0,发酵产物有乙醇、甘油和醋酸。,发酵产物有乙醇、甘油和醋酸。同一种微生物因培养液的同一种微生物因培养液的pH不同,积累不同的代谢产物。不同,积累不同的代谢产物。在不同的发酵阶段,微生物对在不同的发酵阶段,微生物对pH的要求有差异。的要求有差异。丙酮丁醇梭菌丙酮丁醇梭菌:pH5.57.0,菌体生长繁殖。,菌体生长繁殖。pH4.35.3,丙酮和丁醇发酵。,丙酮和丁醇发酵。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 同一种微生物在不同生长阶段和不同生理生化过程中,要求的pH二、非生物因子(五)氧气1.专性好氧微生物 2.兼性厌氧微生物(兼性好氧微生物)3.微好氧微生物4.耐氧微生物 5.专性厌氧微生物(严格厌氧微生物)任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 二、非生物因子(五)氧气1.专性好氧微生物 任务2 理化因专性好氧菌专性好氧菌特点:特点:不能通过发酵作用产生能量,在缺氧不能通过发酵作用产生能量,在缺氧的环境中完全不能生长。的环境中完全不能生长。培养方式:培养方式:通气或振荡培养。通气或振荡培养。微生物种类:微生物种类:大多数细菌、放线菌、霉菌、原生动物大多数细菌、放线菌、霉菌、原生动物和微型后生动物和微型后生动物。二、非生物因子(五)氧气任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 专性好氧菌培养方式:通气或振荡培养。微生物种类:大多数细菌兼性厌氧菌兼性厌氧菌:也称兼性好氧菌也称兼性好氧菌特点:特点:有氧和无氧都可生长有氧和无氧都可生长 有氧时:有氧呼吸有氧时:有氧呼吸 无氧时:酵解或无氧呼吸,其产物也各不相同。无氧时:酵解或无氧呼吸,其产物也各不相同。二、非生物因子(五)氧气任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 微生物种类:微生物种类:酵母菌和细菌酵母菌和细菌谷氨酸发酵谷氨酸发酵:通气量充足:产谷氨酸通气量充足:产谷氨酸通气量不足:产乳酸或琥珀酸。通气量不足:产乳酸或琥珀酸。兼性厌氧菌:也称兼性好氧菌二、非生物因子(五)氧气任务2 微好氧菌微好氧菌 生活在较低的氧分压生活在较低的氧分压(0.01(0.010.03Pa0.03Pa正常大气中氧分压为正常大气中氧分压为0.2Pa)0.2Pa)下。下。二、非生物因子(五)氧气任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 微生物种类:微生物种类:霍乱弧菌霍乱弧菌微好氧菌二、非生物因子(五)氧气任务2 理化因素对微生物耐氧菌耐氧菌 不能利用氧气,但氧气的存在对它们无不能利用氧气,但氧气的存在对它们无害。无呼吸链,只能通过酵解获取能量害。无呼吸链,只能通过酵解获取能量.二、非生物因子(五)氧气任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 微生物种类:微生物种类:多数乳酸菌,乳链球菌和乳酸杆菌。多数乳酸菌,乳链球菌和乳酸杆菌。耐氧菌 二、非生物因子(五)氧气任务2 理化因素对微生厌氧菌厌氧菌 不能利用氧气,氧气的存在对它们有毒害作用,不能利用氧气,氧气的存在对它们有毒害作用,即使短时接触空气,生长也会被抑制甚至致死。即使短时接触空气,生长也会被抑制甚至致死。培养厌氧性微生物时,要将环境中的氧气除掉。培养厌氧性微生物时,要将环境中的氧气除掉。二、非生物因子(五)氧气任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 微生物种类:微生物种类:梭菌属、双歧杆菌属和消化球菌属等。梭菌属、双歧杆菌属和消化球菌属等。特点:特点:生命活动所需要的能量是通过发酵、无氧呼吸等提生命活动所需要的能量是通过发酵、无氧呼吸等提供的。供的。厌氧菌二、非生物因子(五)氧气任务2 理化因素对微生物生 微生物与氧的关系微生物与氧的关系微生物类型微生物类型最适生长的最适生长的O O2 2体体积分数积分数微生物类型微生物类型最适生长的最适生长的O O2 2体积分数体积分数专性好氧专性好氧微生物微生物等于或大于等于或大于20%20%兼性厌氧微兼性厌氧微生物生物有氧或无氧有氧或无氧微好氧微好氧微生物微生物2%2%10%10%厌氧性微生厌氧性微生物物不需要氧、有不需要氧、有氧时死亡氧时死亡耐氧性耐氧性微生物微生物2%2%以下以下二、非生物因子(五)氧气任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 微生物与氧的关系微生物类型最适生长的O2体积分数微生物类型二 非生物因子(六)化学因子化学因子有重金属类、酚类、醇类、酸类、碱类、醛类、氧化剂、卤素及化合物、表面活性剂、染料等。化学物质抑菌或杀菌,主要是造成微生物大分子结构变化,包括损伤细胞壁,使蛋白质变性失活、诱发核酸改变等。化学物质处于不同浓度时,对微生物的影响不同。任务任务2 2 理化因素对微生物生长的影响理化因素对微生物生长的影响 二 非生物因子(六)化学因子化学因子有重金属类、酚类、醇类、某些化学杀菌剂的应用某些化学杀菌剂的应用 类 型型名称及使用名称及使用浓度度作作 用用 机机 制制应 用用 范范 围重金属重金属盐0.050.050.1%0.1%升汞升汞2 24%4%红汞(红药水)红汞(红药水)蛋白蛋白质变性性非金属物品,器皿非金属物品,器皿皮肤、粘膜、小皮肤、粘膜、小创伤酚酚类3 35%5%石炭酸石炭酸2%2%煤酚皂煤酚皂(来来苏儿)儿)蛋白蛋白质变性,性,损伤细胞膜胞膜地面、家具、器皿地面、家具、器皿皮肤皮肤醇醇类707075%75%乙醇乙醇蛋白蛋白变性性皮肤、器械皮肤、器械醛类0.50.510%10%甲甲醛蛋白蛋白质变性性物品消毒、接种室熏蒸物品消毒、接种室熏蒸氧化氧化剂0.1%KMnO0.1%KMnO4 41%1%3%3%过氧化氧化氢0.10.10.5%0.5%过氧乙酸过氧乙酸蛋白蛋白质变性性蛋白蛋白质变性性芽芽孢、病毒、真菌、病毒、真菌皮肤、尿道、水果蔬菜皮肤、尿道、水果蔬菜创伤、溃疡、口腔粘、口腔粘膜皮肤、餐具、器械膜皮肤、餐具、器械卤素及其化素及其化合物合物0.20.20.5mg/L0.5mg/L氯气气101020%20%漂白粉漂白粉0.50.51%1%漂白粉漂白粉2.5%2.5%碘酒碘酒破坏破坏细胞膜、胞膜、酶酶、蛋白、蛋白质破坏破坏细胞膜、胞膜、酶酶、蛋白、蛋白质破坏破坏细胞膜、胞膜、酶酶、蛋白、蛋白质蛋白蛋白质变性性饮水、游泳池水水、游泳池水地面、地面、厕所所饮水、空气、体表水、空气、体表皮肤皮肤表面活性表面活性剂0.050.050.1%0.1%新新洁尔尔灭破坏膜及蛋白破坏膜及蛋白质皮肤、黏膜、手皮肤、黏膜、手术器械器械染料染料2 24%4%龙胆紫胆紫蛋白蛋白质变性性皮肤、皮肤、伤口口 某些化学杀菌剂的应用 类 型名称及使用浓度作 用 机 制任务任务3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术 任务3 微生物的分离和纯培养技术 通过理论知识学习,了解纯培养的方法,通过理论知识学习,了解纯培养的方法,学会把特定的微生物从自然界混杂存在的状学会把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的纯培养技术。态中分离、纯化出来的纯培养技术。任务分析任务分析 通过理论知识学习,了解纯培养的方法,学会把特定的微生物采用无菌技术的原因采用无菌技术的原因1.1.体外培养细胞缺乏抗感染能力,防止污染是决定体外培养细胞缺乏抗感染能力,防止污染是决定分离培养成功或失败的首要条件。分离培养成功或失败的首要条件。2.2.实验者粗心大意,技术操作不规范,即便使用设实验者粗心大意,技术操作不规范,即便使用设备完善的实验室,也会导致污染。备完善的实验室,也会导致污染。一、无菌技术一、无菌技术 无菌技术无菌技术 将微生物分离、转接及培养时将微生物分离、转接及培养时防止被其他微生物污染的技术防止被其他微生物污染的技术任务实施的相关专业知识任务实施的相关专业知识采用无菌技术的原因一、无菌技术 无菌技术 将微生物分离、转无菌技术的内容无菌技术的内容:任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术2.接种操作接种操作1.微生物培养的常用器具及其灭菌微生物培养的常用器具及其灭菌无菌技术的内容:任务3 微生物的分离和纯培养技术2.一、无菌技术一、无菌技术1.1.对使用的器具及培养基的灭菌对使用的器具及培养基的灭菌 所使用的器具、设备仪器所使用的器具、设备仪器(试管、吸管、三角试管、吸管、三角瓶、培养皿、发酵罐等瓶、培养皿、发酵罐等)进行严格的灭菌进行严格的灭菌培养微生物的各种培养基必须灭菌。培养微生物的各种培养基必须灭菌。灭菌后要做无菌检查。灭菌后要做无菌检查。任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术一、无菌技术所使用的器具、设备仪器(试管、吸管、三角瓶、培一、无菌技术一、无菌技术 2.2.接种操作接种操作 在火焰的无菌区操作;将接种工具或耐热器具灼烧。在火焰的无菌区操作;将接种工具或耐热器具灼烧。用无菌箱、超净工作台或无菌室进行操作。使用前可用用无菌箱、超净工作台或无菌室进行操作。使用前可用甲醛熏蒸空间及紫外线灭菌处理。甲醛熏蒸空间及紫外线灭菌处理。操作人员穿工作服,带口罩、帽子及换鞋。操作人员穿工作服,带口罩、帽子及换鞋。用用75酒精擦洗双手和超净工作台台面。酒精擦洗双手和超净工作台台面。好氧培养时,要通过滤的无菌空气。好氧培养时,要通过滤的无菌空气。试管和三角烧瓶的口端加上棉塞、硅胶塞、多层纱布试管和三角烧瓶的口端加上棉塞、硅胶塞、多层纱布任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术一、无菌技术 在火焰的无菌区操作;将接种工具或耐热器具灼任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术任务3 微生物的分离和纯培养技术获得纯培养的方法:获得纯培养的方法:用固体培养基分离纯培养用固体培养基分离纯培养用液体培养基分离纯培养用液体培养基分离纯培养单细胞单细胞(单孢子单孢子)分离、分离、选择培养分离选择培养分离二元培养物等。二元培养物等。任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术获得纯培养的方法:任务3 微生物的分离和纯培养技术二、二、用固体培养基分离纯培养用固体培养基分离纯培养 不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征,可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌,以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落,采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术二、用固体培养基分离纯培养大多数细菌、酵母菌,以及许多真菌平板:即培养平板的简称,指熔化的固体培养基倒入无菌平皿,冷却凝固后,盛有固体培养基的平皿。将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。琼脂固体培养基平板琼脂固体培养基平板:最常用的分离、培养微最常用的分离、培养微生物的固体培养基。生物的固体培养基。固体培养基:固体培养基:用琼脂或其他凝胶物质固化的培养基,每个孤立的话微生物体生长、繁殖形成菌落,形成的菌落便于移植。二、二、用固体培养基分离纯培养用固体培养基分离纯培养任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术平板:即培养平板的简称,指熔化的固体培养基倒入无菌平皿,冷却微生物的分离培养技术的用途:微生物的分离培养技术的用途:从自然界中筛选有用的微生物。从自然界中筛选有用的微生物。在生产中挑选优良菌种。在生产中挑选优良菌种。对被污染的菌种进行纯化。对被污染的菌种进行纯化。纯培养技术包括两个基本步骤:纯培养技术包括两个基本步骤:从自然环境中分离培养对象;从自然环境中分离培养对象;在以培养对象为唯一生物种类的隔离环在以培养对象为唯一生物种类的隔离环境中培养、增殖,获得这一生物种类的细境中培养、增殖,获得这一生物种类的细胞群体。胞群体。任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术微生物的分离培养技术的用途:纯培养技术包括两个基本步骤:任务二、二、用固体培养基分离纯培养用固体培养基分离纯培养也称微生物的分离培养技术 自然界中微生物一般是多种菌种混合生长的。要想自然界中微生物一般是多种菌种混合生长的。要想研究某一种微生物,必须把混杂的微生物类群分离开,研究某一种微生物,必须把混杂的微生物类群分离开,以得到只含有一种微生物的纯培养物。以得到只含有一种微生物的纯培养物。微生物的纯培养微生物的纯培养是在实验室条件下由一个细胞或一种是在实验室条件下由一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代细胞群繁殖得到的后代,也称也称纯种微生物,纯种微生物,其培养过其培养过程称之为程称之为纯培养。纯培养。纯培养物:纯培养物:只含有一种微生物的培养物。只含有一种微生物的培养物。分离目的分离目的 得到纯种微生物得到纯种微生物任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术二、用固体培养基分离纯培养也称微生物的分离培养技术 待分离的样品待分离的样品无菌水无菌水稀释稀释(1:10,1:100,(1:10,1:100,1:1000)1:1000)取少许不同稀释液取少许不同稀释液熔化并熔化并冷至冷至5050琼脂培养基混合琼脂培养基混合摇匀摇匀倾入倾入灭菌培养皿中灭菌培养皿中凝固凝固保温培养保温培养单个单个菌落菌落纯种微生物纯种微生物缺点:缺点:1.易造成敏感菌死亡。易造成敏感菌死亡。2.严格好氧菌被固定严格好氧菌被固定在琼脂中间因缺乏氧气而影响生在琼脂中间因缺乏氧气而影响生长。长。1.1.稀释倒平板法稀释倒平板法任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术待分离的样品无菌水稀释(1:10,1:100,缺点:1.易定量菌液定量菌液样品稀释样品稀释取一定稀释度菌液取一定稀释度菌液菌液和培养基混匀菌液和培养基混匀的的培养基培养基倒平板倒平板结果结果培养培养任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术定量菌液样品稀释取一定稀释度菌液菌液和培养基混匀的培养稀释倒平板法稀释倒平板法任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术稀释倒平板法任务3 微生物的分离和纯培养技术2.涂布平板法样品样品稀释稀释涂布涂布培养培养单菌落单菌落倒平板倒平板样品稀释样品稀释取定量样液取定量样液玻璃刮棒玻璃刮棒涂布涂布涂布过程涂布过程培养结果培养结果任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术2.涂布平板法样品稀释涂布培养单菌落倒平板样品稀释取稀释后用平板分离细菌单菌落稀释后用平板分离细菌单菌落任务任务3 3 微生物的分离和纯培养技术微生物的分离和纯培养技术稀释后用平板分离细菌单菌落任务3 微生物的分离和纯培养技
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