中药制剂的理化鉴别技术课件

第三章 中药制剂的鉴别目的：检定制剂的真实性第三章中药制剂的鉴别目的：检定制剂的真实性第三章 中药制剂的理化鉴别 第一节第一节第一节第一节 必备必备必备必备知识知识知识知识 第二节第二节第二节第二节 一般一般一般一般化学反应法化学反应法化学反应法化学反应法 第三节第三节第三节第三节 升华升华升华升华鉴别法鉴别法鉴别法鉴别法 第四节第四节第四节第四节 荧光荧光荧光荧光鉴别法鉴别法鉴别法鉴别法 第五节第五节第五节第五节 薄层薄层薄层薄层色谱鉴别法色谱鉴别法色谱鉴别法色谱鉴别法 第六节第六节第六节第六节 气相气相气相气相色谱鉴别法色谱鉴别法色谱鉴别法色谱鉴别法 第七节第七节第七节第七节 高效高效高效高效液相色谱鉴别法液相色谱鉴别法液相色谱鉴别法液相色谱鉴别法第三章中药制剂的理化鉴别第一节第一节 必备知识必备知识一、理化鉴别的意义一、理化鉴别的意义 中中药药制制剂剂的的理理化化鉴鉴别别是是利利用用其其药药味味(原原料料药药)中中的的某某种种或或某某类类指指标标性性成成分分的的理理化化性性质质，通通过过化化学学分分析析方方法法和和仪仪器器分分析析方方法法，检检测测有有关关成成分分在在制制剂剂中中是是否否存存在在，进进而而对对所所含含药药味味与与处处方方的的一一致致性性做做出出判判断断，达到达到鉴定药品真伪鉴定药品真伪之目的。之目的。药药品品真真实实性性的的检检定定是是药药品品质质量量控控制制的的重重要要内内容容，是是评评价价药药品品质质量量的的重重要要依依据据。如如果果药药品品缺缺乏乏真真实性，则可判定为不合格药品，并以假药论处。实性，则可判定为不合格药品，并以假药论处。第一节必备知识二、理化鉴别的特点二、理化鉴别的特点 理化鉴别是以制剂药味中的指标性成分（主要为有效成分或特征性成分）为检测对象，故可以更加客观深刻地评价药品的真实性。对于液体制剂或其它不含原料药粉的制剂，理化鉴别则显得为重要。二、理化鉴别的特点理化鉴别是以制剂药味中的三、理化鉴别的方法三、理化鉴别的方法一般化学鉴别法微量升华法荧光鉴别法分光光度法（UV；IR）薄层色谱法（TLC）气相色谱法（GC）高效液相色谱法（HPLC）其中色谱法尤其是薄层色谱法得到广泛的应用，这主要是由于色谱法具有分离分析双重功能从而大大提高了鉴别工作的灵敏度和专属性，并成为今后中药制剂鉴别的发展方向。三、理化鉴别的方法一般化学鉴别法其中色谱法尤其是薄层色谱法得 中国药典中国药典（20052005）新增中成药）新增中成药（116116种）鉴别方法种）鉴别方法鉴别鉴别方法方法方法方法 应应用品种用品种用品种用品种说说 明明明明薄薄薄薄层层色色色色谱谱114114应用最多的鉴别方法应用最多的鉴别方法应用最多的鉴别方法应用最多的鉴别方法高效液相色高效液相色高效液相色高效液相色谱谱4 4 气相色气相色气相色气相色谱谱3 3主要主要主要主要鉴别鉴别挥发挥发性性性性成分成分成分成分分光光度法分光光度法分光光度法分光光度法0 0一般化学反一般化学反一般化学反一般化学反应应法法法法2 2荧荧光光光光鉴别鉴别法法法法0 0微量升微量升微量升微量升华华法法法法0 0显显微微微微鉴别鉴别法法法法2929适用于含适用于含适用于含适用于含药药粉的粉的粉的粉的剂剂型型型型中国药典（2005）新增中成药（116种）鉴别方法鉴中成药的显微鉴别中成药的显微鉴别n n中药制剂的显微鉴别中药制剂的显微鉴别 利用显微镜来观察中药制剂中原药材的组织碎片、细胞或内含物等特征，从而鉴别制剂的处方组成。n n 凡以药材粉碎成细粉后直接制成制剂或添加有部分药材粉末的制剂，由于其在制作过程中原药材的显微特征仍保留到制剂中去，因此均可用显微定性鉴别法进行鉴别。中成药的显微鉴别中药制剂的显微鉴别第二节 一般化学反应法（General Chemical ReactionGeneral Chemical Reaction）一、原理 颜色 检测试剂+指标性成分 沉淀 气体 显色反应 沉淀反应第二节一般化学反应法（GeneralChemic二特点 1.一般化学反应法具有操作简便，适用性较强等特点。2.其否定功能往往强于肯定功能,专属性较差。3.易发生假阳性或假阴性反应二特点假阳性或假阴性反应克服方法如下：对样品进行预处理，除去干扰性成分，富集被检成分。选用专属性较强的检测试剂。必要时做阳性或阴性对照试验加以验证，保证其专属性和灵敏度。假阳性或假阴性反应克服方法如下：三、常用的一般化学反应三、常用的一般化学反应 主要用于制剂中主要用于制剂中生物碱、黄酮类、蒽醌类、生物碱、黄酮类、蒽醌类、皂苷、香豆素、萜类以及各种矿物类成分皂苷、香豆素、萜类以及各种矿物类成分的鉴别。的鉴别。（一）生物碱（一）生物碱 1.1.碘化铋钾反应碘化铋钾反应 ：红棕色：红棕色 2.2.碘化汞钾反应碘化汞钾反应 ：类白色：类白色 3.3.硅钨酸反应硅钨酸反应 ：白色：白色 4.4.苦味酸反应苦味酸反应 ：黄色结晶性：黄色结晶性 需在需在酸性条件酸性条件下进行。注意事先下进行。注意事先排除其它排除其它成分成分的干扰的干扰。少数生物碱不与上述通用沉淀试剂少数生物碱不与上述通用沉淀试剂反应反应，而具有专属性较强的其它反应。而具有专属性较强的其它反应。而具有专属性较强的其它反应。而具有专属性较强的其它反应。三、常用的一般化学反应主要用于制剂中生物（二）黄酮类化合物（二）黄酮类化合物 检识反应：盐酸镁粉反应，呈紫红色。例：大山楂丸（山楂）抗骨增生丸（淫羊藿）参茸保胎丸（黄芩）（三）蒽醌类化合物 碱液反应：阳性反应呈红色，加酸 红色褪去呈黄色。例：大黄流浸膏。（二）黄酮类化合物检识反应：盐酸镁粉反应，呈紫红色（四）皂苷（四）皂苷 常用的定性鉴别反应有：常用的定性鉴别反应有：泡沫反应泡沫反应 样品水溶液振摇后，产生持久样品水溶液振摇后，产生持久性泡沫。性泡沫。醋酐醋酐浓硫酸反应浓硫酸反应 甾体皂苷呈现污绿色，甾体皂苷呈现污绿色，三萜皂苷呈现红、红紫色。三萜皂苷呈现红、红紫色。浓硫酸反应浓硫酸反应 呈现红、红紫色。呈现红、红紫色。三氯化锑或五氯化锑反应三氯化锑或五氯化锑反应 氯仿液呈紫氯仿液呈紫兰色。兰色。氯仿氯仿浓硫酸反应浓硫酸反应 氯仿层出现红色或兰氯仿层出现红色或兰色，并具绿色荧光。色，并具绿色荧光。例：地奥心血康胶囊（黄山药和穿山龙薯例：地奥心血康胶囊（黄山药和穿山龙薯蓣的提取物）、养心定悸膏（甘草、红参、麦冬）。蓣的提取物）、养心定悸膏（甘草、红参、麦冬）。（四）皂苷常用的定性鉴别反应有：（五）香豆素、内酯类和酚类（五）香豆素、内酯类和酚类常用的检识反应有：常用的检识反应有：氯亚氨基氯亚氨基-2-2，6-6-二氯醌二氯醌-四硼酸钠反应四硼酸钠反应（GibbsGibbs反应）反应），呈现蓝色。，呈现蓝色。异羟肟酸铁反应异羟肟酸铁反应 呈红色。呈红色。应用品种有：养阴清肺膏（牡丹皮）、前列应用品种有：养阴清肺膏（牡丹皮）、前列舒丸（牡丹皮）等。舒丸（牡丹皮）等。（五）香豆素、内酯类和酚类常用的检识反应有：（六）挥发性成分 香草醛浓硫酸反应：呈红、红紫色。应用品种主要有：万应锭（冰片）牛黄解毒片（冰片）养心定悸膏（桂枝、生姜）等（六）挥发性成分（七）矿物药（七）矿物药朱砂、石膏、雄黄等为中成药中常见的矿药。朱砂、石膏、雄黄等为中成药中常见的矿药。1.1.朱砂（主含朱砂（主含HgSHgS）：铜片反应铜片反应。例：天王补心丹等中成药中朱砂的鉴定。例：天王补心丹等中成药中朱砂的鉴定。2.2.石膏、牡蛎、海螵蛸等石膏、牡蛎、海螵蛸等 富含富含钙盐钙盐，主要采用，主要采用草酸铵反应草酸铵反应 。CaSOCaSO4 4 4 4+(NH+(NH4 4 4 4)2 2 2 2C C2 2 2 2O O4 4 4 4CaCCaC2 2 2 2O O4 4 4 4（白）（白）+(NH+(NH4 4 4 4)2 2 2 2SOSO4 4 4 4 CaCCaC2 2 2 2O O4 4 4 4溶于盐酸，难溶于醋酸溶于盐酸，难溶于醋酸。CaCCaC2 2 2 2O O4 4 4 4+2HClCaCl+2HClCaCl2 2 2 2+H+H2 2 2 2C C2 2 2 2O O4 4 4 4 止咳桔红口服液（石膏）、安胃片（海螵蛸）、止咳桔红口服液（石膏）、安胃片（海螵蛸）、龙牡壮骨颗粒（牡蛎、龙骨、乳酸钙、葡萄糖酸钙等）龙牡壮骨颗粒（牡蛎、龙骨、乳酸钙、葡萄糖酸钙等）（七）矿物药朱砂、石膏、雄黄等为中成药中常见的矿药。3.雄黄（主含As2S2）（1 1）氯化钡沉淀法（检出硫）氯化钡沉淀法（检出硫）AsAsAsAs2 2 2 2S S S S2 2 2 2+KClO+KClO+KClO+KClO3 3 3 3+4HNO+4HNO+4HNO+4HNO3 3 3 3 2K2K2K2K3 3 3 3AsOAsOAsOAsO3 3 3 3+H+H+H+H2 2 2 2SOSOSOSO4 4 4 4+Cl+Cl+Cl+Cl2 2 2 2+4NO+4NO+4NO+4NO H H H H2 2 2 2SOSOSOSO4 4 4 4+BaCl+BaCl+BaCl+BaCl2 2 2 2 BaSOBaSOBaSOBaSO4 4 4 4（白）（白）（白）（白）牙痛一粒丸牙痛一粒丸 （2 2）硫化氢反应（检出砷）硫化氢反应（检出砷）2As2As2As2As2 2 2 2S S S S2 2 2 2+7O+7O+7O+7O2 2 2 2 2As 2As 2As 2As2 2 2 2O O O O3 3 3 3+4SO+4SO+4SO+4SO2 2 2 2 As As As As2 2 2 2O O O O3 3 3 3+3H+3H+3H+3H2 2 2 2O 2HO 2HO 2HO 2H3 3 3 3AsOAsOAsOAsO3 3 3 3 2H 2H 2H 2H3 3 3 3AsOAsOAsOAsO3 3 3 3+3H+3H+3H+3H2 2 2 2S AsS AsS AsS As2 2 2 2S S S S3 3 3 3(黄黄)+6H+6H+6H+6H2 2 2 2O O O O AsAsAsAs2 2 2 2S S S S3 3 3 3在盐酸中析出黄色沉淀，并溶于碳酸铵中在盐酸中析出黄色沉淀，并溶于碳酸铵中 4As4As4As4As2 2 2 2S S S S3 3 3 3+12(NH+12(NH+12(NH+12(NH4 4 4 4)2 2 2 2COCOCOCO3 3 3 3 4(NH4(NH4(NH4(NH4 4 4 4)3 3 3 3AsOAsOAsOAsO3 3 3 3+4(NH+4(NH+4(NH+4(NH4 4 4 4)3AsS)3AsS)3AsS)3AsS3 3 3 3+12CO+12CO+12CO+12CO2 2 2 2 小儿惊风散等。小儿惊风散等。o3.雄黄（主含As2S2）o（八）动物药（八）动物药含有 茚三酮反应 正反应呈红紫色 例如：龟龄集（鹿茸、海马、等）参茸保胎丸（阿胶、鹿茸）等。蛋白质氨基酸（八）动物药蛋白质三、操作方法三、操作方法（1）供试液的制备（见前述）（2）操作方式 大多为试管反应，或在检测试纸上、或在蒸发皿（坩埚）中进行反应 三、操作方法（1）供试液的制备（见前述）五、结果判断 将反应现象或结果与药品标准对照，若一致则符合规定。若不一致则判定为不符合规定。五、结果判断六、注意事项六、注意事项 试管反应一般使用210cm试管，取供试液12ml。加入检测试液时，试管应稍倾斜，试液应沿试管内壁逐滴加入，滴管下口不得触及内壁。加入反应试液后一般需振摇试管，使之与供试液混匀。振摇时应缓缓摇摆振摇，不得上下振摇，手指不允许堵塞试管口，若需层反应，则不得振摇试管。六、注意事项试管反应一般使用210cm试管，取供试液1 一般需在白色背景下观察反应所产生的颜色或沉淀，若沉淀为白色或类白色则需在黑色背景下观察。如果反应需加热，一般在水浴中加热。用试管夹夹持试管，内容物不得超过容积的2/3，试管应倾斜45度，试管口不得闭塞，并不得朝向人。加热有机溶液绝对不允许使用明火热源。如果反应需无水条件，必须保持试管、蒸发皿等容器的干燥，例如醋酐浓硫酸反应。一般需在白色背景下观察反应所产生的颜色或沉淀，若沉淀为七、应用实例七、应用实例1.千柏鼻炎片2 小儿清热止咳口服液3.茴香橘核丸4.地奥心血康胶囊5.养阴清肺膏6.安胃片7.天王补心丹8.牙痛一粒丸9.中风回春片七、应用实例1.千柏鼻炎片6.安胃片 实例实例 牛黄解毒片中大黄、黄芩牛黄解毒片中大黄、黄芩的的 定性鉴别定性鉴别反应反应 取本品6片(去包衣)，研细，加乙醇10ml，温热10分钟，过滤，滤液作如下反应：(1)取滤液5ml，加镁粉少量与盐酸0.5ml，加热，即显红色。（黄芩中有大量黄酮）(2)另取滤液4ml，加氢氧化钠试液，显红色，再加30过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸或酸性时，红色变为黄色。（大黄中含有羟基蒽醌）实例牛黄解毒片中大黄、黄芩的第三节 升华鉴别法一、原理一、原理 本法是利用某些成分的升华性，在一定温度下将其从制剂中升华分离出来，并以升华物所具有的某些理化性质作为制剂鉴别的依据。二、特点二、特点 简便、实用、专属性亦较好。第三节升华鉴别法一、原理三、操作方法三、操作方法 微量升华法、坩埚法、蒸发皿法三、操作方法微量升华鉴别法的操作要点微量升华鉴别法的操作要点螺丝帽处理螺丝帽处理新螺丝帽上下两面需用砂纸磨平，酒精清洗新螺丝帽上下两面需用砂纸磨平，酒精清洗后晾干使用。后晾干使用。填装药粉填装药粉粉末用量一般粉末用量一般约约0.5g0.5g，一般装至金属圈高度，一般装至金属圈高度2/32/3处，金属圈外沿要干净。处，金属圈外沿要干净。加热升华加热升华应应缓缓加热缓缓加热，温度不宜高，温度控制可通过，温度不宜高，温度控制可通过调整酒精灯火焰与石棉网间距来实现。调整酒精灯火焰与石棉网间距来实现。去火待冷去火待冷待载玻片完全冷却后方可取下，可在载玻片待载玻片完全冷却后方可取下，可在载玻片上滴加上滴加少量水降温少量水降温，促使升华物凝集析出。，促使升华物凝集析出。微量升华鉴别法的操作要点螺丝帽处理新螺丝帽上下两面需用砂纸磨六味地黄丸中冰片升华物六味地黄丸中冰片升华物显微镜下观六味地黄丸中冰片升华物香草醛浓硫酸显色六味地黄丸中冰片升华物六味地黄丸中冰片升华物显微镜下观六味地 四、注意事项四、注意事项 升华时应缓缓加热，温度过高，易使药粉焦化，在载玻片上产生焦油状物，影响对升华物的观察或检识。温度的控制可通过调整酒精灯火焰与石棉板的间距来实现。样品粉末用量一般约0.5g，过少不易产生足够量的升华物。可在载玻片上滴加少量水降温，促使升华物凝集析出。无金属片，可用载玻片代替。四、注意事项五、应用实例（P62）(一)万应锭的鉴别（二）小儿惊风散的鉴别（三）新清宁片中大黄的鉴别（四）明目地黄丸的鉴别五、应用实例（P62）(一)万应锭的鉴别第四节 荧光鉴别法一、原理一、原理 荧光鉴别法是利用制剂中某些成分，如黄酮类、蒽醌类、香豆素类等在可见光或紫外光照射下能产生一定颜色荧光的性质，对中药制剂进行鉴别。有的成分本身不具荧光性，但加酸、碱处理后，或经其它化学方法处理后也可产生荧光供鉴别用。第四节荧光鉴别法一、原理二特点二特点 简便、灵敏、具有一定的专属性。例如：大黄 显棕色至棕红色荧光 土大黄 显亮蓝色荧光区分二特点区分三、操作方法三、操作方法 取中成药的提取液点加于滤纸上或加入蒸发皿中，置紫外光灯（365nm）下约10cm处观察所产生的荧光。必要时可在供试品上加酸、碱或其它试剂，再观察荧光及其变化。三、操作方法四、注意事项四、注意事项 荧光强度较弱，故一般需在暗室中观察荧光。供试液一般用毛细管吸取，少量多次点加在滤纸上，使斑点集中且具有一定浓度。紫外光对人的眼睛和皮肤有损伤，操作者应避免与紫外光较长时间接触。四、注意事项五、应用实例（五、应用实例（P64P64）（一）安胃片（二）板蓝根茶（三）复方鸡血藤膏五、应用实例（P64）第五节 薄层色谱鉴别法（Thin Layer Chromatography TLCThin Layer Chromatography TLC）一、原理一、原理 基于相同物质在同一的色谱条件下，表现出相同的色谱行为这一基本规律，在同一块薄层板上点加供试品和对照物，在相同条件下展开，显色检出色谱斑点后，将所得供试品与对照物的色谱图进行对比分析，从而对药品进行定性鉴别。第五节薄层色谱鉴别法（ThinLayerChr中药制剂的理化鉴别技术课件二、特点二、特点（一）简便、快速、易普及，具有分离和分析双重功能，且采用共薄层对照分析法，故专属性较强。（二）系统适用性试验(05版药典新增)1.检测灵敏度2.分离度3.重复性二、特点1.1.检测灵敏度检测灵敏度 主要用于限量检查。采用供试品溶液和对照品溶液与稀释若干倍（10倍）的对照品溶液在规定的色谱条件下，于同一块薄层板上点样、展开、检视，后者应显示清晰的斑点。1.检测灵敏度2.2.分离度分离度 用于鉴别时，对照品溶液与供试品溶液中相应的主斑点，应显示两个清晰分离的斑点。用于限量检查和含量测定时，要求定量峰与相邻峰之间有较好的分离度，除另有规定外，分离度应大于1.0。2.分离度 分离度（R）的计算公式为：R=2(d2-d1)/(W1+W2）式中 d1为相邻两峰中后一峰与原点的距离；d2为相邻两峰中前一峰与原点的距离；W1 及W2为相邻两峰各自的峰宽；ABW1W2d1d2ABW1W2d1d23.3.重复性重复性 主要用于含量测定。即同一供试品溶液在同一块薄层板上平行点样的待测成分的峰面积测量值的相相对对标标准准偏偏差差(RSD)(RSD)应不不大大于于3.0%3.0%；需显色后测量的相对标准偏差应不大于5.0%。3.重复性相对标准偏差相对标准偏差(RSD)标准偏差：标准偏差：相对标准偏差相对标准偏差(RSD)RSD=Sx 100%相对标准偏差(RSD)标准偏差：相对标准偏差(RSD)RSD（三）对照物的设置 对照物的设置有四种方式：对照物的设置有四种方式：设置一种或数种对照品设置一种或数种对照品 设置对照提取物设置对照提取物 设置一种或数种对照药材设置一种或数种对照药材 同同时时设设置置对对照照品品和和对对照照药药材材(“双双双双对照对照对照对照”)可可有有效效地地检检出出药药品品是是否否使使用用了了假假冒药材冒药材.对照物对照物对照品对照品对照品对照品对照提取物对照提取物对照提取物对照提取物对照药材对照药材对照药材对照药材（三）对照物的设置对照物对照品对照提取物对照药材（四）TLC已广泛用于中药材及其制剂的检验，成为中药鉴别的重要方法和鲜明特色。（五）中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法，少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝色谱法。薄层色谱法可用于药品的鉴别、杂质检查和含量测定。（四）TLC已广泛用于中药材及其制剂的检验，成为中药鉴别的重三、影响薄层色谱鉴别的主要因素三、影响薄层色谱鉴别的主要因素 供试液的净化程度 吸附剂的性能和薄层板的质量 点样（原点）的质量 展开剂的组成和饱和情况 对照品的纯度 展开的距离 相对湿度和温度三、影响薄层色谱鉴别的主要因素四、仪器与材料（一）薄层板（一）薄层板（一）薄层板（一）薄层板 1.1.市售薄层板市售薄层板（亦称预制薄层板）（亦称预制薄层板）除除另另有有规规定定外外，一一般般要要求求使使用用市市售售薄薄层层板。板。普通薄层板高效薄层板硅胶薄层板硅胶GF254薄层板聚酰胺薄层板氧化铝薄层板市售薄层板常用四、仪器与材料（一）薄层板普通薄层板硅胶薄层板市售薄层板常用2.2.自制薄层板自制薄层板 除 另 有 规 定 外，玻 板 可 用 10cm10cm、10cm15cm、20cm10cm、20cm20cm不同规格的，最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254等。其颗粒大小，一般要求直径为1040m。G：表示熟石膏（CaSO4）F：表示荧光 H：表示不含粘合剂2.自制薄层板薄层板的选择：薄层板的选择：硅胶G板（可加0.30.5%的CMC-Na）：多用氧化铝板 常用于生物碱类药物聚酰胺板 常用于黄酮类及酚类药物纤维素板 常用于氨基酸类药物薄层板的选择：硅胶G板（可加0.30.5%的CMC-Na）（二）点样器材（二）点样器材 为了增强药品定性鉴别的可比性，中国药典规定采用定量点样。最常用的是微升毛细管（定容毛细管），为了提高点样效率和质量，还可用点样辅助设备，如点样支架、半自动或自动点样器。全自动点样仪微升毛细管手动点样仪手动点样仪（二）点样器材全自动点样仪微升毛细管手动点样仪（三）展开容器（三）展开容器 应使用专用的展开缸，展开缸有水平式及直立式两种类型。上行展开一般使用直立展开缸，它又分为平底式和双槽式，双槽展开缸具有节省溶剂、便于预平衡、可控制展开箱内的湿度等优点。展开缸盖子应能密闭，体积应与薄层板大小相适应。不能用生物标本缸等其它玻璃器皿作为展开缸，否则影响展开质量。（三）展开容器（四）显色（检视）装置展开后的薄层板，一般需采用相应的显色（检视）方法使板上的被检成分斑点显色。喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀雾状喷出；浸渍显色可用专用玻璃器皿或适宜的展开缸做为浸渍槽；蒸气熏蒸显色可在双槽展开缸或大小适宜的干燥器中进行；荧光检视装置为装有可见光、254nm及365nm紫外光源和相应滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍照图像用，暗箱内光源应有足够的光照度。（四）显色（检视）装置荧光显色荧光显色五、操作方法五、操作方法 一般操作步骤：薄层板制备（制板）点样展开显色与检视（一）薄层板制备（一）薄层板制备 1.1.市售薄层板市售薄层板 临用前一般应在活化分钟。聚酰胺薄膜不需活化。110活化，放干燥器中备用。五、操作方法 2.2.自制薄层板自制薄层板 1 1份份固固定定相相和和3 3份份水水（或或0.20.20.50.5羧羧甲甲基基纤纤维维素素钠钠水水溶溶液液）在在研研钵钵中中向向同同一一方方向向研研磨磨混混合合，去去除除表表面面的的气气泡泡后后，在在玻玻璃璃板板上上进进行行涂涂布布，取取下下涂涂好好薄薄层层的的玻玻璃璃板板，置置水水平平台台上上室室温温下下晾晾干干后后，在在110110烘烘3030分分钟钟活活化化，立立即即置置干干燥燥器器中中备备用用。薄薄层层板板一一般般要要求求新新鲜鲜制制备备，当当天天使使用。用。使使用用前前应应在在反反射射光光及及透透射射光光下下检检查查其其质质量量，若若板板面不均匀、不平整或有麻点、有泡、有破损及污染等情面不均匀、不平整或有麻点、有泡、有破损及污染等情 况，应弃去不用。况，应弃去不用。2.自制薄层板（二）点样（二）点样 1.供试品溶液的制备 2.原点的点加 原点基线距板底边原点基线距板底边1015mm1015mm 原点直径一般不大于原点直径一般不大于3mm3mm 原点间距离一般不少于原点间距离一般不少于8mm8mm 毛毛细细管管接接触触点点样样时时应应少少量量多多次次点点加加，才才能能保保证证原原点点小小而而圆圆。还还需需注注意意勿勿损损伤伤薄薄层层表表面面，点点加加条条带带原点时应注意条带的均匀性，原点时应注意条带的均匀性，（二）点样（三）展开（三）展开 1、一般采用上行一次展开上行一次展开。2、展开剂液面距原点5mm5mm为宜 3、一般上行展开展开815cm815cm 4 4、展开前进行预平衡展开前进行预平衡-饱和饱和 密闭，保持密闭，保持15301530分钟分钟 5 5、展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用。、展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用。6 6、将将薄薄层层板板与与展展开开缸缸进进行行预预平平衡衡，可可得得到到重重现现的的色谱图。色谱图。（三）展开 （四）显色与检视（四）显色与检视 1、颜色较深：日光下检视 2、无色或浅色：多用喷雾法或浸渍法显色剂显色 3、荧光物质：紫外灯（365nm）4、蒸气熏蒸（如碘蒸气、氨蒸气）显色 5、无色有紫外吸收且不产生荧光的成分：可用荧光淬灭法荧光淬灭法显色。即在含有荧光剂的硅胶板（如硅胶GF254板），在紫外光灯（254nm）下观察板面上该成分形成的荧光淬灭色谱。（四）显色与检视四、注意事项（四、注意事项（P74）1、薄层板：优质平板玻璃制备2、展开剂：新鲜溶剂配制3、多元展开剂：小体积溶剂宜使用移液管量取4、加有改性剂的薄层板：应细细体会，摸索出最佳加水量和研磨时间。四、注意事项（P74）1、薄层板：优质平板玻璃制备五、记录五、记录薄层色谱图象可采用摄像设备拍照，以光学照片或电子图象的形式保存。也可以用扫描仪记录相应的色谱图。薄层色谱数码相机成像系统五、记录薄层色谱数码六、结果判断六、结果判断供试品色谱中，在与对照品、对照药材或对照提取物色谱的相应的位置上，显相同颜色或荧光的斑点，则判断为符合规定。六、结果判断七、应用实例七、应用实例（一）六味地黄丸中牡丹皮的鉴别1.丹皮酚 25.六味地黄丸七、应用实例1.丹皮酚实例实例-首乌丸薄层色谱鉴别首乌丸薄层色谱鉴别提取方法：甲醇提取薄层板：硅胶G+0.5%NaOH展开剂：甲苯-乙酸乙酯-甲酸（15:2:1）检测波长：365nm1 大黄素2 大黄素甲醚3-4 何首乌对照药材5-6 首乌丸 1 2 3 4 5 6实例-首乌丸薄层色谱鉴别1大黄素1第六节第六节 紫外紫外-可见光谱鉴别法可见光谱鉴别法(UV)(UV)一、原理一、原理一、原理一、原理 某些中药或中成药经适当处理后，所得紫外吸收光谱是由其各组分的特征吸收叠加而成的。若将中药制剂作为一个特定的整体，在一定测试条件下，只要各药味及其成分的组成与含量相对稳定，则其紫外吸收光谱具有一定的特征性和重现性，可以用于定性鉴别。第六节紫外-可见光谱鉴别法(UV)一、原理两组分的加和紫外吸收光谱两组分的加和紫外吸收光谱二、特点二、特点二、特点二、特点分光光度鉴别法简便、灵敏、易普及。但由于紫外光谱分辨率较低，图谱简单，某些不同的样品可能给出极其相似的光谱图，使其在实际工作中受到一定的限制。如果对样品进行前处理，除去干扰成分，则可有效地提高该法的专属性。中国药典仅有少数中成药品种收载了分光光度鉴别法，例如，木香槟榔丸等。中国药典规定以最大吸收波长（max）做为鉴别参数。样品吸收峰波长应在该品种项下规定的波长2nm以内。复方丹参片紫外谱线组图二、特点复方丹参片紫外谱线组图三、操作方法（三、操作方法（三、操作方法（三、操作方法（P77 P77 P77 P77 自学）自学）自学）自学）四、注意事项（四、注意事项（四、注意事项（四、注意事项（P77 P77 P77 P77 自学）自学）自学）自学）五、结果判断五、结果判断五、结果判断五、结果判断 将供试品最大吸收波长和药品标准的规定进行比较，二者如果一致，则判定为符合规定。三、操作方法（P77自学）六、应用实例六、应用实例 木香槟榔丸 处方：木香、槟榔、枳壳、陈皮、青皮（醋炒）、香附（醋制）、三棱（醋制）、莪术（醋制）取本品粉末4g，置蒸馏瓶中，加水10ml，使供试品湿润后，水蒸汽蒸馏，收集馏液约100ml，照紫外分光光度法（中国药典附录V A）测定，在253nm波长处有最大吸收。（检出挥发性成分）中药制剂的理化鉴别技术课件 第七节第七节 气相色谱鉴别法气相色谱鉴别法(Gas Chromatography GC)一、原理一、原理一、原理一、原理 在一定的色谱条件下，相同的物质应具有相同的色谱特性（分配系数）和色谱行为（保留值）。因此，在同一色谱条件下，将供试品溶液和对照品溶液分别注入气相色谱仪，对二者的气相色谱图进行比对，根据供试品是否给出与对照品保留时间相同的色谱峰，从而对样品作出定性分析。这种方法可称为保留时间比较法，中国药典即采用此法对某些中成药进行真伪鉴别。保留时间（tR）系指从进样开始，到该组分色谱峰顶点的时间间隔。第七节气相色谱鉴别法在一定的色谱条件下，相同的二、特点二、特点二、特点二、特点 气相色谱法具有高分辨率，高灵敏度、快速、准确等特点，尤其适合分析制剂中的挥发性成分，如麝香酮、薄荷醇、冰片、水杨酸甲酯等。一般情况下气相色谱不适合分析蒸汽压较低的也即挥发性较小的成分，因此该法在实际工作中具有一定的局限性。三、操作方法（自学）三、操作方法（自学）三、操作方法（自学）三、操作方法（自学）四、注意事项（自学）四、注意事项（自学）四、注意事项（自学）四、注意事项（自学）气 相 色 谱 仪二、特点三、操作方法（自学）气相色谱五、结果判断五、结果判断比较供试品与对照品色谱图，供试品呈现与对照品保留时间相同的色谱带，则判断为符合药品标准规定。所谓保留时间相同是指基本相同，彼此相差百分之几秒是允许的。五、结果判断六、应用实例六、应用实例六、应用实例六、应用实例（一）少林风湿跌打膏（一）少林风湿跌打膏（二）安宫牛黄丸中麝香的鉴别（二）安宫牛黄丸中麝香的鉴别-麝香酮安宫牛黄丸六、应用实例-麝香酮安宫牛黄丸第八节第八节 高效液相色谱鉴别法高效液相色谱鉴别法（High Performance Liquid Chromatography HPLC)一、原理一、原理一、原理一、原理 高效液相色谱法鉴别在原理和操作上与气相色谱鉴别法有许多相似之处。中国药典采用保留时间比较法，即在相同的色谱条件下，比较样品和对照品的色谱峰的保留时间（tR）是否一致，从而对被检成分（药味）的存在情况做出判断。例如，六味地黄丸中芍药苷和四君子丸中甘草酸的鉴别。六味地黄丸中芍药苷的高效液相色谱图(a.芍药苷)A.芍药苷对 照品 B.六味地黄丸供试品标准品第八节高效液相色谱鉴别法一、原理二、特点二、特点 高效液相色谱法不受样品挥发性的限制，固定相、流动相的选择范围较宽，检测手段多样，加之高效快速，微量，自动化程度高等特点，所以在药物分析工作中比气相色谱法应用更为广泛，在中药制剂鉴别中的应用也日益增多。不过，目前在中药制剂质量标准中，一般很少单独使用该法做鉴别，而是多与含量测定结合进行。二、特点 三、操作方法三、操作方法三、操作方法三、操作方法 四、注意事项四、注意事项四、注意事项四、注意事项 五、应用实例五、应用实例五、应用实例五、应用实例 （一）龙 牡 壮 骨 颗 粒 中 维 生 素 D2鉴 别（P82）（二）百令胶囊的鉴别（05版新增内容）本品系由发酵虫草菌粉（CS-C-Q80）制成。采用高效液相色谱法鉴别其中的核苷类成分。三、操作方法核苷类成分的鉴别：核苷类成分的鉴别：样品先用乙醚脱脂，再用0.5磷酸溶液超声波提取制成核苷供试液。用反相高效液相色谱法测定，以乙腈为流动相A，以0.04mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相B，梯度洗脱，供试品色谱应呈现与对照药材色谱保留时间相同的六个主色谱峰，与腺苷、尿苷对照品保留时间相同的色谱峰。时间（分钟）流动相A（）流动相B（）015 0 100 1545 015 10085核苷类成分的鉴别：腺苷尿苷25214356对照药材样品40腺苷尿苷25214356对照药材样品40高效液相高效液相色谱鉴别法色谱鉴别法 气相气相色谱鉴别法色谱鉴别法高效液相色谱鉴别法气相色谱鉴别法谢谢谢谢