粪便检验-(keyonh)课件

粪粪 便便 检检 验验 第八组第八组粪便检查主要用于协助诊断消化道疾病：粪便检查主要用于协助诊断消化道疾病：1 1、肠道感染性疾病；、肠道感染性疾病；2 2、肠道寄生虫感染；、肠道寄生虫感染；3 3、消化道出血鉴别与肿瘤筛检；、消化道出血鉴别与肿瘤筛检；4 4、了解胃肠道消化、吸收功能；、了解胃肠道消化、吸收功能；5 5、黄疸的鉴别诊断。、黄疸的鉴别诊断。粪便成分主要有：粪便成分主要有：1 1、未被消化的食物残渣；、未被消化的食物残渣；2 2、已被消化但未被吸收的食糜；、已被消化但未被吸收的食糜；3 3、消化道分泌物；、消化道分泌物；4 4、分解产物；、分解产物；5 5、肠壁脱落的上皮细胞；、肠壁脱落的上皮细胞；6 6、细菌，如大肠埃希氏菌、肠球菌、细菌，如大肠埃希氏菌、肠球菌 和一些过路菌；和一些过路菌；第一节第一节 标本采集和处理标本采集和处理 一、标本容器一、标本容器 盛盛标标本本的的容容器器应应清清洁洁、干干燥燥、有有盖盖、无无吸吸水水和和渗渗漏漏。细细菌菌学学检检查查，粪粪便便标标本本应应采采集集于灭菌、有盖的容器内。于灭菌、有盖的容器内。二、标本采集二、标本采集标本新鲜，盛器清洁、干燥。标本新鲜，盛器清洁、干燥。选取有病理意义的标本，多点取样。选取有病理意义的标本，多点取样。及及时时检检测测，标标本本采采集集后后于于1 1小小时时内内检检测测 完毕。完毕。寄生虫检测应多次取样，并注意取样方式。寄生虫检测应多次取样，并注意取样方式。阿米巴滋养体等原虫检测，应及时、保温送阿米巴滋养体等原虫检测，应及时、保温送 检。检。粪便隐血检测应于试验前素食三天，并禁服粪便隐血检测应于试验前素食三天，并禁服 铁剂、及维生素。铁剂、及维生素。第二节第二节 理学检查理学检查 1 1、粪便量、粪便量2 2、粪便外观粪便外观 颜色颜色：正常人粪便呈黄褐色，婴：正常人粪便呈黄褐色，婴 儿粪便呈黄绿色或金黄色糊状。儿粪便呈黄绿色或金黄色糊状。常见颜色的改变见下表：常见颜色的改变见下表：颜色颜色生理性况生理性况病理性况病理性况黄褐色黄褐色金黄色金黄色 灰白色灰白色绿色绿色 红色红色酱色酱色黑色黑色成人正常颜色成人正常颜色哺乳儿正常颜色，食物哺乳儿正常颜色，食物中有较多奶类，服用山中有较多奶类，服用山道年、大黄等药物道年、大黄等药物服用钡剂后服用钡剂后食用大量含叶绿素蔬菜食用大量含叶绿素蔬菜食用大量红色食物后食用大量红色食物后饮食大量咖啡、可可、饮食大量咖啡、可可、巧克力等食物巧克力等食物服用活性炭、铁剂、饿服用活性炭、铁剂、饿剂、中药或猪血等剂、中药或猪血等存在未经改变的胆红存在未经改变的胆红素素 胆汁减少或缺如，脂胆汁减少或缺如，脂肪过量存在肪过量存在乳儿消化不良乳儿消化不良下消化道出血下消化道出血阿米巴痢疾阿米巴痢疾上消化道出血上消化道出血性性状状：正正常常人人粪粪便便为为成成形形软软便便，婴婴儿儿为为糊糊状状便便。病病理理状状态态时时，粪粪便便性性状状可可发发生生改变。改变。（1 1）稀糊状或稀汁样便稀糊状或稀汁样便：常因细菌肠毒：常因细菌肠毒素、内源性促分泌物质、致泻物质等物质刺素、内源性促分泌物质、致泻物质等物质刺激肠道，导致肠蠕动亢进或肠液分泌增多所激肠道，导致肠蠕动亢进或肠液分泌增多所致。多见于各种感染和非感染性腹泻，尤其致。多见于各种感染和非感染性腹泻，尤其是急性胃肠炎。是急性胃肠炎。（2 2）脓性及脓血便脓性及脓血便：常见于下消化道病：常见于下消化道病变、各种肠炎、痢疾、急性血吸虫病，结肠变、各种肠炎、痢疾、急性血吸虫病，结肠或直肠癌，慢性溃疡性结肠炎、肠结核。或直肠癌，慢性溃疡性结肠炎、肠结核。（3 3）米苷样便米苷样便：呈白色陶米水样，多见：呈白色陶米水样，多见于霍乱、副霍乱，为白色淘米水样。于霍乱、副霍乱，为白色淘米水样。（4 4）柏柏油油样样便便：因因上上消消化化道道出出血血所所致致，隐隐血试验强阳性。血试验强阳性。（5 5）白白陶陶土土样样便便：主主要要见见于于阻阻塞塞性性黄黄疸疸及及钡餐造影术后。钡餐造影术后。（6 6）鲜血便鲜血便：见于直肠息肉，结肠癌、肛：见于直肠息肉，结肠癌、肛裂、痔疮。裂、痔疮。（7 7）胨状便胨状便：见于慢性菌痢及过敏性肠炎。：见于慢性菌痢及过敏性肠炎。（8）黏黏液液便便：粘粘液液混混匀匀于于粪粪便便中中，见见于于小小肠肠病病变变；粘粘液液非非混混匀匀于于粪粪便便中中且且较较集集中中，见见于于大大肠肠病病变变；粘粘液液粘粘附附于于粪粪便便表表面面，常常见见于于直直肠肠炎炎；透透明明胶胶冻冻样样粘粘液液附附于于粪粪便便表表面面时时，见见于于粘粘液液性性肠肠炎炎、痉痉孪孪性性便便秘秘、情绪激动等。情绪激动等。3 3、寄生虫虫体、寄生虫虫体 粪粪便便中中如如有有虫虫体体较较大大的的肠肠道道寄寄生生虫虫蠕蠕虫虫，如如蛔蛔虫虫、蛲蛲虫虫、绦绦虫虫等等或或其其片片段段，肉肉眼可见。钩虫虫体需筛洗粪便后才见。眼可见。钩虫虫体需筛洗粪便后才见。4 4、气味、气味 粪粪便便的的臭臭味味与与进进食食的的种种类类，疾疾病病的的性性质有关。质有关。病病理理情情况况：粪粪便便恶恶臭臭一一般般见见于于慢慢性性肠肠炎炎、胰胰腺腺疾疾病病、消消化化道道大大出出血血、结结肠肠或或直直肠肠癌癌；粪粪便便鱼鱼腥腥臭臭味味见见于于阿阿米米巴巴性性肠肠炎炎；粪便酸臭味见于消化、吸收不良。粪便酸臭味见于消化、吸收不良。第三节第三节 显微镜检查及其临床意显微镜检查及其临床意义义 显显微微镜镜检检查查内内容容主主要要包包括括寄寄生生虫虫虫虫卵卵、原原虫、细胞、真菌、结晶、食物残渣等。虫、细胞、真菌、结晶、食物残渣等。（二）粪便中各有形成分的形态和意义（二）粪便中各有形成分的形态和意义 1 1、细胞细胞1 1）红细胞：正常粪便无红细胞。上消化）红细胞：正常粪便无红细胞。上消化道出血时，红细胞被破坏，粪便中难以见到。道出血时，红细胞被破坏，粪便中难以见到。下消化道炎症或出血时可出现数量不等的红下消化道炎症或出血时可出现数量不等的红细胞，如痢疾、溃疡性结肠炎、结肠癌、直细胞，如痢疾、溃疡性结肠炎、结肠癌、直肠息肉、痔疮、急性血吸虫病等。肠息肉、痔疮、急性血吸虫病等。消化道疾病时由于炎病损伤出血，白消化道疾病时由于炎病损伤出血，白细胞、红细胞同时存在。细胞、红细胞同时存在。细菌性痢疾时红细胞少于白细胞，多细菌性痢疾时红细胞少于白细胞，多分散存在且形态正常；分散存在且形态正常；阿米巴痢疾者红细胞多于白细胞，多阿米巴痢疾者红细胞多于白细胞，多粘连成堆存在并有残碎现象。粘连成堆存在并有残碎现象。2 2）白细胞白细胞（脓细胞）（脓细胞）粪便中的白细粪便中的白细胞常见中性粒细胞。病理情况下，中性粒胞常见中性粒细胞。病理情况下，中性粒细胞呈灰白色，胞体肿胀、坏死、破碎、细胞呈灰白色，胞体肿胀、坏死、破碎、结构不完整，胞质内充满细小的颗粒，核结构不完整，胞质内充满细小的颗粒，核不清楚的中性粒细胞，常成堆出现，此时不清楚的中性粒细胞，常成堆出现，此时称为称为“脓细胞脓细胞”正常粪便，无或偶见白细胞。正常粪便，无或偶见白细胞。结肠炎，白细胞分散存在，一般少于结肠炎，白细胞分散存在，一般少于1515个个/HFPHFP；细菌性痢疾、溃疡性结肠炎时，可见大量细菌性痢疾、溃疡性结肠炎时，可见大量的白细胞或成堆出现的脓细胞以及吞有异物的白细胞或成堆出现的脓细胞以及吞有异物的小吞噬细胞；的小吞噬细胞；肠易激综合症、肠道寄生虫病时可见较多肠易激综合症、肠道寄生虫病时可见较多的嗜酸性粒细胞，可伴有夏科的嗜酸性粒细胞，可伴有夏科-莱登结晶。莱登结晶。3 3）巨噬细胞巨噬细胞：常随脓细胞出现于急性菌痢：常随脓细胞出现于急性菌痢的粪便中，溃疡性结肠炎时，亦可偶见。的粪便中，溃疡性结肠炎时，亦可偶见。4 4）肠黏膜上皮细胞：见于结肠炎症、伪膜）肠黏膜上皮细胞：见于结肠炎症、伪膜性肠炎。性肠炎。5 5）肿瘤细胞：乙状结肠癌、直肠癌病人的）肿瘤细胞：乙状结肠癌、直肠癌病人的血性粪便，及时涂片染色（瑞氏或血性粪便，及时涂片染色（瑞氏或HEHE染色）可染色）可找到成堆体积大，形态异常的肿瘤细胞。找到成堆体积大，形态异常的肿瘤细胞。2 2、寄生虫卵、原虫、滴虫、寄生虫卵、原虫、滴虫寄生虫卵：粪便中检查寄生虫卵是诊断肠寄生虫卵：粪便中检查寄生虫卵是诊断肠道寄生虫感染的最常用的指标。道寄生虫感染的最常用的指标。粪便中常见的寄生虫卵有：蛔虫卵、钩虫粪便中常见的寄生虫卵有：蛔虫卵、钩虫卵、鞭虫卵、蛲虫卵、华枝睾吸虫卵、血吸卵、鞭虫卵、蛲虫卵、华枝睾吸虫卵、血吸虫卵、姜片虫卵和带绦虫卵等。虫卵、姜片虫卵和带绦虫卵等。原虫和滴原虫和滴虫：肠寄生原虫包括阿米巴原虫、隐孢子虫、虫：肠寄生原虫包括阿米巴原虫、隐孢子虫、鞭毛虫、纤毛虫和人芽囊原虫等。鞭毛虫、纤毛虫和人芽囊原虫等。3 3、结晶、结晶粪便中检出夏科粪便中检出夏科-雷登结晶，主要见于阿米巴痢雷登结晶，主要见于阿米巴痢疾、钩虫病以及过敏性肠炎，并同时见到嗜酸性粒疾、钩虫病以及过敏性肠炎，并同时见到嗜酸性粒细胞。细胞。4 4、食物残渣、食物残渣 在正常粪便中，食物残渣均系已充分消化后的在正常粪便中，食物残渣均系已充分消化后的无定形细小颗粒。未经充分消化的食物残渣，常见无定形细小颗粒。未经充分消化的食物残渣，常见的有以下几种：的有以下几种：脂肪小滴脂肪小滴淀粉颗粒淀粉颗粒肌肉纤维肌肉纤维结缔组织结缔组织植物纤维及植物细胞植物纤维及植物细胞第四节第四节 化学检查及其临床意义化学检查及其临床意义一、隐血试验一、隐血试验 概概念念：隐隐血血是是指指上上消消化化道道有有少少量量出出血血时时（每每日日出出血血量量少少于于5 5mlml），而而且且红红细细胞胞因因被被消消化化分分解解,肉肉眼眼不不见见粪粪便便改改变变颜颜色色，并并且且粪粪便便涂涂片片显显微微检检查查未未能能检检出出红红细细胞胞。而需用其他间接方法才能证实的出血。而需用其他间接方法才能证实的出血。隐血试验的方法有化学法和免疫法两隐血试验的方法有化学法和免疫法两种种 。1 1、化学法隐血试验（、化学法隐血试验（OBTOBT）试验原理：血红蛋白中含铁血红素具有过试验原理：血红蛋白中含铁血红素具有过氧化物酶的活性，能分解过氧化物，催化氧化物酶的活性，能分解过氧化物，催化色原物质而呈色，呈色的深浅反映了血红色原物质而呈色，呈色的深浅反映了血红蛋白的含量，即出血量的多少。蛋白的含量，即出血量的多少。常用方法：主要有邻联甲苯胺法，联苯胺常用方法：主要有邻联甲苯胺法，联苯胺法，匹拉米洞法，愈创木酯法等。法，匹拉米洞法，愈创木酯法等。假阳性假阳性情况：如外源性干扰；情况：如外源性干扰；假阴性假阴性情况：如外源性与内源性干扰情况：如外源性与内源性干扰 联苯胺法联苯胺法【原原 理理】于粪便内加入易被氧化的物质（联苯胺等）及放氧的于粪便内加入易被氧化的物质（联苯胺等）及放氧的物质（物质（H H2 2O O2 2）,经粪便内血经粪便内血液的作用（血色素中的铁卟啉环有过氧化酶作用）分解过氧液的作用（血色素中的铁卟啉环有过氧化酶作用）分解过氧化氢放出化氢放出O O2 2-，使联苯胺被氧化而致颜色。，使联苯胺被氧化而致颜色。【检查方法、结果及优缺点检查方法、结果及优缺点】1.1.方法方法 联苯胺法联苯胺法 无色孔雀绿法无色孔雀绿法 单克隆抗体单克隆抗体OBOB试验试验 取联苯胺粉少许置于玻片上，滴加冰醋酸取联苯胺粉少许置于玻片上，滴加冰醋酸 2-32-3滴，再加滴，再加3%H3%H2 2O O2 2 2 2滴，取粪便少许与滴，取粪便少许与 以上试剂混匀，观察结果以上试剂混匀，观察结果。2.2.结果结果 2 2分钟兰色分钟兰色 （+）1 1分钟兰色分钟兰色 （+）1/21/2分钟兰色分钟兰色 （+）立即兰色立即兰色 （+）2 2分钟以上兰色分钟以上兰色 （-）2 2、免疫法隐血试验、免疫法隐血试验原理：该试验所有的抗体可分为两类，一原理：该试验所有的抗体可分为两类，一种为抗人血红蛋白抗体，另一种为抗人红种为抗人血红蛋白抗体，另一种为抗人红细胞基质抗体。细胞基质抗体。常用方法有免疫单扩法、对流免疫电泳、常用方法有免疫单扩法、对流免疫电泳、免疫扩散法、酶联免疫吸附试验、反向间免疫扩散法、酶联免疫吸附试验、反向间接血凝法等。接血凝法等。免疫法不必控制饮食，且敏感性和特异免疫法不必控制饮食，且敏感性和特异 性都高于化学法。性都高于化学法。假阳性情况：高灵敏度可造成假阳性，假阳性情况：高灵敏度可造成假阳性，故不宜用于日常筛检。故不宜用于日常筛检。假阴性情况：主要检测下消化道出血，假阴性情况：主要检测下消化道出血，以及带现象。以及带现象。临床意义：粪便隐血试验主要用于消化道临床意义：粪便隐血试验主要用于消化道出血、消化道肿瘤的筛检和鉴别。出血、消化道肿瘤的筛检和鉴别。隐血阳性：隐血阳性：1 1、见于消化道出血、药物致胃粘膜损伤见于消化道出血、药物致胃粘膜损伤（如服用阿司匹林、糖皮质激素）、肠结核、（如服用阿司匹林、糖皮质激素）、肠结核、克罗思病、胃病（胃溃疡、胃炎）、溃疡性克罗思病、胃病（胃溃疡、胃炎）、溃疡性结肠炎、结肠息肉、钩虫病及肾病综合症出结肠炎、结肠息肉、钩虫病及肾病综合症出血热、消化道恶性肿瘤等。血热、消化道恶性肿瘤等。2 2、消化性溃疡与肿瘤出血的鉴别：隐、消化性溃疡与肿瘤出血的鉴别：隐血试验对消化道溃疡的阳性诊断率为血试验对消化道溃疡的阳性诊断率为40-40-7070，呈间断性阳性；而消化道恶性肿瘤，呈间断性阳性；而消化道恶性肿瘤诊断阳性率可达诊断阳性率可达9595，且呈持续性阳性。，且呈持续性阳性。第五节第五节 粪便的细菌学检查粪便的细菌学检查正常人的正常人的肠道中栖居大量的不同种道中栖居大量的不同种类的微生物，的微生物，组成人成人类健康极健康极为重要的体内微生重要的体内微生态环境境参与参与营养、消化、养、消化、吸收及清吸收及清洁肠道，道，维护健康的作用。健康的作用。腹泻因病原菌或病毒在在腹泻因病原菌或病毒在在肠道繁殖引道繁殖引发，引起，引起 腹泻腹泻细菌种菌种类多。多。本本实验主要介主要介绍疑疑为沙沙门菌或志菌或志贺菌属感染者菌属感染者 或或带菌者的菌者的粪便便标本（或直本（或直肠拭子）中致病菌拭子）中致病菌 的分离和的分离和鉴定。定。由于由于肠道中存在大道中存在大肠埃希菌等很多条件致病菌，其与埃希菌等很多条件致病菌，其与肠道道致病菌的主要区致病菌的主要区别之一是：大多数条件致病菌可分解乳之一是：大多数条件致病菌可分解乳糖，而糖，而绝大多数大多数肠道致病菌道致病菌则不分解乳糖。不分解乳糖。分离分离肠道致病菌多用含乳糖的弱道致病菌多用含乳糖的弱选择性性鉴别培养液（如麦培养液（如麦康康凯琼脂等）以及脂等）以及对大大肠埃希菌等条件致病菌有埃希菌等条件致病菌有较强抑抑制作用、而又有利于制作用、而又有利于肠道某些致病菌（如沙道某些致病菌（如沙门菌及志菌及志贺菌属）生菌属）生长繁殖的繁殖的强选择性性鉴别培养液。培养液。粪便便标本常本常见的病原菌：的病原菌：G菌：葡萄球菌属、白色假菌：葡萄球菌属、白色假丝酵母菌、酵母菌、艰难梭菌、梭菌、结核分枝杆菌、蜡核分枝杆菌、蜡样芽芽孢杆杆菌菌G菌：志菌：志贺菌、沙菌、沙门菌、致病性大菌、致病性大肠埃埃希菌、霍乱弧菌、希菌、霍乱弧菌、亲水气水气单胞菌、胞菌、类志志贺邻单胞菌、弯曲菌、小胞菌、弯曲菌、小肠结肠炎耶炎耶尔森菌森菌 试剂与器材菌株：菌株：伤寒沙寒沙门菌菌 培养基：麦康培养基：麦康凯和和SSSS琼脂平板脂平板 各种生化反各种生化反应培养液及革培养液及革兰氏染液等氏染液等试剂（可参（可参见微生物的自微生物的自动分析及附分析及附录）沙沙门菌多价菌多价“O”O”（A-FA-F组）及）及单价价“O”O”诊断血清、断血清、“H”H”因子因子诊断血清断血清 标本的采集 由于由于粪便中便中细菌种菌种类很多，故很多，故应根据根据检查目的的不目的的不同同选择适宜的培养液或用适当方法适宜的培养液或用适当方法处理，尽可能理，尽可能地抑制地抑制杂菌，以利于病原菌的菌，以利于病原菌的检出。出。不能不能认为粪便中便中细菌含量多，菌含量多，粪便便标本的采集就无本的采集就无须无菌操作。无菌操作。粪便便标本的采集也本的采集也应遵循无菌操作遵循无菌操作的原的原则。若便器或。若便器或标本容器不本容器不洁而而污染了染了变形杆形杆菌，就可能影响病原菌的分离菌，就可能影响病原菌的分离检出，甚至把出，甚至把污染染菌菌误报，造成，造成误诊。标本的采集采采样的的时期期应合适。疑似痢疾患者合适。疑似痢疾患者应在在发病初期、用病初期、用药前采取前采取标本。本。粪便便标本采集本采集时应挑取无尿液挑取无尿液污染的有染的有脓血、黏液部分的血、黏液部分的粪便便23g（液状（液状粪便可挑取絮状便可挑取絮状物），盛于无菌容器内送物），盛于无菌容器内送检。在无法在无法获得得粪便便时，可采用直，可采用直肠拭子，即用拭子，即用灭菌棉拭子菌棉拭子经0.9%氯化化钠溶液或增菌培养液湿溶液或增菌培养液湿润后，插入肛后，插入肛门内内)45cm处，轻轻转动一圈后取出，插入无菌一圈后取出，插入无菌试管管（Cary Blair系系统运送管）或保存液中送运送管）或保存液中送检；疑似疑似伤寒患者寒患者应在在发病病23周内采集周内采集粪便便标本。本。标本的采集在无法在无法获得得粪便便时，可采用直，可采用直肠拭子，即用拭子，即用灭菌棉拭子菌棉拭子经0.9%氯化化钠溶液或增菌培养液湿溶液或增菌培养液湿润后，插入肛后，插入肛门内内)45cm处，轻轻转动一圈后取出，插入无菌一圈后取出，插入无菌试管管（Cary Blair，卡，卡布系布系统运送管）或保存液中送运送管）或保存液中送检；应采集可疑采集可疑粪便，如立即患者粘液便，如立即患者粘液脓血便、霍乱患者血便、霍乱患者的米泔水的米泔水样便等。以便等。以为换乱患者，硬乱患者，硬质碱性蛋白碱性蛋白胨水水中。中。除除婴幼儿外，不推荐用棉拭子做常幼儿外，不推荐用棉拭子做常规病原菌培养。病原菌培养。粪便便标本如不能立即送本如不能立即送检，可将，可将标本放入甘油本放入甘油盐水保存水保存液中，或保存于冰箱内（勿超液中，或保存于冰箱内（勿超过2小小时）。）。粪便标本的细菌学检验程序粪便标本或肛拭子道标本涂片增菌培养直接分离报告革兰染色；动力学观察与制动试验（KIA、MIU）初步报告需氧培养GN增菌液或亚硒酸增菌液碱性蛋白胨TCBS平板或其它碱性平板分离SS平板MAC平板EMB平板副溶血性弧菌选择平板菌落形态生化反应菌落形态、生化反应、抗血清凝集药敏菌落形态、生化反应、抗血清凝集药敏步骤与方法革革兰氏染色氏染色志志贺菌与沙菌与沙门菌：急性腹泻患者的菌：急性腹泻患者的粪便便标本划本划线接种于接种于SS平板平板和和MAC平板。平板。慢性腹泻患者志慢性腹泻患者志贺菌或携菌或携带者者应接种接种GN增菌液，沙增菌液，沙门菌接种菌接种亚硒酸硒酸盐增菌液，再增菌液，再转种种SS平板与平板与MAC平板，平板，观察小的、透明察小的、透明或半透明、无色或浅黄色的可以菌落生或半透明、无色或浅黄色的可以菌落生长，有，有时SS平板可平板可见中心黑色菌落（中心黑色菌落（H2S）。）。挑挑选三个可疑菌落分三个可疑菌落分别接种三支接种三支KIA、MIU培养基，培养基，观察察结果。果。挑取菌落挑取菌落进行革行革兰氏染色，氏染色，观察察细菌形菌形态、排列。、排列。采用采用伤寒沙寒沙门菌菌诊断血清断血清进行血清学行血清学鉴定。定。步骤与方法生化反生化反应鉴定第定第2日日观察平板上有无可疑菌落，用接种察平板上有无可疑菌落，用接种针于上述平板中挑于上述平板中挑取取单个可疑菌落（无色、半透明、光滑、个可疑菌落（无色、半透明、光滑、较小）小）23个，分个，分别接种至接种至23管双糖培养液内，置管双糖培养液内，置37培养培养1824h。第。第3日日观察察细菌生菌生长情况，情况，根据表根据表102初步初步鉴定定细菌种菌种类，然后取双糖培养液上，然后取双糖培养液上 的菌落的菌落进行系行系列生化列生化鉴定。定。表表 不同不同肠道道细菌在双糖培养液培养菌在双糖培养液培养结果（教学果（教学实验模模拟标本的本的结果）果）序号序号 上上层（乳糖）（乳糖）下下层（葡萄糖）（葡萄糖）动力力 可能可能结果果 1 +有有 大大肠埃希菌埃希菌 2 +有有 伤寒沙寒沙门菌菌 3 +无无 痢疾志痢疾志贺菌菌 步骤与方法血清学最血清学最终鉴定根据双糖培养液及系列生化反定根据双糖培养液及系列生化反应结果判断，果判断，最后利用血清学最后利用血清学实验对细菌菌进行最后的确定。行最后的确定。如果初步如果初步鉴定定结果果为沙沙门菌属，菌属，则取双糖培养液斜面上菌取双糖培养液斜面上菌苔与沙苔与沙门菌多价菌多价“O”（A-F组）诊断血清作玻片凝集断血清作玻片凝集实验，如凝集即，如凝集即为沙沙门菌属，然后分菌属，然后分别与与A-F组的的单价价“O”诊断血清作玻片凝集断血清作玻片凝集实验定定组，最后以，最后以H因子因子诊断断血清作玻片凝集血清作玻片凝集实验以定型（种），必要以定型（种），必要时可用因子可用因子诊断血清定型。断血清定型。如果根据双糖培养液及系列生化反如果根据双糖培养液及系列生化反应结果判断，初步果判断，初步鉴定定结果果为志志贺菌属，菌属，则取菌苔与志取菌苔与志贺菌属多价菌属多价诊断血清作断血清作玻片凝集玻片凝集实验以定以定组，必要，必要时可用因子可用因子诊断血清定种或断血清定种或型。型。步骤与方法若若为较典型的沙典型的沙门菌生化反菌生化反应，但与，但与A-F组多价多价“O”诊断血清又不断血清又不发生凝集反生凝集反应，应考考虑可能可能为有有VI抗原的沙抗原的沙门菌，可将菌制成菌，可将菌制成悬液以液以100加加热30分分钟以除去以除去VI抗原后，再做血清学抗原后，再做血清学鉴定。定。如如为较典型的志典型的志贺菌生化反菌生化反应又不与其多价又不与其多价诊断血断血清清发生凝集，生凝集，则可用同可用同样方法加方法加热1001小小时以以破坏其破坏其K抗原，再做玻片凝集反抗原，再做玻片凝集反应鉴定之。定之。在在细菌的血清菌的血清鉴定中，最常使用的方法是凝集反定中，最常使用的方法是凝集反应，其基本原理是其基本原理是细菌菌为颗粒性抗原，当与相粒性抗原，当与相应的抗的抗体混合体混合时，在一定，在一定浓度的度的电解解质条件下，可出条件下，可出现肉眼可肉眼可见的凝集的凝集现象。象。步骤与方法取一取一洁净载玻片，用玻片，用记号笔划两个号笔划两个11.5cm的的圆圈。圈。取取1：5或或1：10诊断血清一接种断血清一接种环置于玻片左置于玻片左侧圈内，在圈内，在右右侧圈内放一接种圈内放一接种环0.9%氯化化钠作作为对照。如天气炎照。如天气炎热，环境温度高，境温度高，则应适当多取血清及适当多取血清及0.9%氯化化钠，以防，以防试剂短短时间内干涸，影响内干涸，影响结果的果的观察。察。用接种用接种环取待取待鉴定的新定的新鲜细菌少菌少许，分，分别研磨乳化于研磨乳化于诊断断血清及血清及0.9%氯化化钠内使之均匀混合。旋内使之均匀混合。旋转摇动玻片数次，玻片数次，13分分钟后后观察察结果。果。按上述操作方法，依次分按上述操作方法，依次分别做做A-E多价血清定属，特异性多价血清定属，特异性O因子血清定群，因子血清定群，H因子血清定型（或种）。因子血清定型（或种）。结果阴性：阴性：对对照照侧侧及及实验侧实验侧均匀混均匀混浊浊不出不出现现凝凝集。集。阳性：阳性：盐盐水水对对照照侧侧呈呈现现均匀混均匀混浊浊，实验侧实验侧明明显显凝集。凝集。自凝：自凝：对对照照侧侧及及实验侧实验侧均出均出现现凝集。凝集。步骤与方法取一取一洁净载玻片，用玻片，用记号笔划两个号笔划两个11.5cm的的圆圈。圈。取取1：5或或1：10诊断血清一接种断血清一接种环置于玻片左置于玻片左侧圈内，在右圈内，在右侧圈内放一接种圈内放一接种环0.9%氯化化钠作作为对照。如天气炎照。如天气炎热，环境温度高，境温度高，则应适当多取血清及适当多取血清及0.9%氯化化钠，以防，以防试剂短短时间内干涸，影响内干涸，影响结果的果的观察。察。用接种用接种环取待取待鉴定的新定的新鲜细菌少菌少许，分，分别研磨乳化于研磨乳化于诊断血断血清及清及0.9%氯化化钠内使之均匀混合。旋内使之均匀混合。旋转摇动玻片数次，玻片数次，13分分钟后后观察察结果。果。按上述操作方法，依次分按上述操作方法，依次分别做做A-E多价血清定属，特异性多价血清定属，特异性O因子血清定群，因子血清定群，H因子血清定型（或种）因子血清定型（或种）见p119。p经常不断地学习,你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量pStudyConstantly,AndYouWillKnowEverything.TheMoreYouKnow,TheMorePowerfulYouWillBe写在最后Thank You在别人的演说中思考，在自己的故事里成长Thinking In Other PeopleS Speeches，Growing Up In Your Own Story讲师：XXXXXX XX年XX月XX日