第五章-食用菌菌种生产课件

第五章第五章 食用菌菌种生产食用菌菌种生产 第一节第一节 菌种概述菌种概述 第二节第二节 菌种生产设备菌种生产设备 第三节第三节 菌种培养基菌种培养基 第四节第四节 接种接种 第五节第五节 菌种培养与质量鉴定菌种培养与质量鉴定 第六节第六节 菌种保藏与复壮菌种保藏与复壮第一节第一节 菌种概述菌种概述一、一、菌种概念菌种概念二、二、菌种类型菌种类型三、三、菌种生产程序菌种生产程序一、菌种概念一、菌种概念菌种菌种担孢子或子囊孢子担孢子或子囊孢子野生野生扩大繁殖后的纯次生菌丝体扩大繁殖后的纯次生菌丝体栽培栽培来历来历野生菌驯化野生菌驯化原菌株改良原菌株改良生物技术创新生物技术创新优良优良菌株菌株扩大扩大繁殖繁殖用于用于生产生产实行纯培养实行纯培养不含任何杂菌不含任何杂菌基本基本要求要求二、菌种类型二、菌种类型一级菌种一级菌种一级菌种一级菌种一级菌种一级菌种级别级别按按保藏用种保藏用种实验用种实验用种生产用种生产用种目的目的状态：固体菌种、液体菌种状态：固体菌种、液体菌种（一）目的不同的菌种（一）目的不同的菌种1 1、保藏用种：指用于中、长期保持菌种、保藏用种：指用于中、长期保持菌种的生活力和原有性状的菌种。的生活力和原有性状的菌种。2 2、实验用种：供实验室进行科学试验、实验用种：供实验室进行科学试验、研究的菌种。研究的菌种。3 3、生产用种（商业菌种）：供食用菌大、生产用种（商业菌种）：供食用菌大面积栽培使用的菌种。面积栽培使用的菌种。（二）级别不同的菌种（二）级别不同的菌种1 1、一级种（母种）、一级种（母种）从大自然中用分离法首次得到的从大自然中用分离法首次得到的纯次生菌丝体纯次生菌丝体 概念概念概况概况培养环境培养环境 试管、斜面培养基试管、斜面培养基用途用途 再生母种再生母种扩大原种扩大原种保藏用种保藏用种菌丝弱而少、不可直接栽培菌丝弱而少、不可直接栽培特点特点2 2、二级种（原种）、二级种（原种）将母种扩大至粗放培养基上将母种扩大至粗放培养基上形成的菌种形成的菌种概念概念概况概况培养环境培养环境菌丝较多而壮、适应性较强菌丝较多而壮、适应性较强特点特点用途用途 扩大栽培种扩大栽培种 或直接出菇或直接出菇大口瓶、较粗放的大口瓶、较粗放的液体或固体培养基液体或固体培养基3、三级种（栽培种）、三级种（栽培种）将原种扩大至粗放培养基上将原种扩大至粗放培养基上形成的菌种形成的菌种概念概念概况概况培养环境培养环境菌丝多而壮、适应性强菌丝多而壮、适应性强特点特点用途用途栽培生产栽培生产菌种袋、较粗放的菌种袋、较粗放的液体或固体培养基液体或固体培养基食用菌生产总过程食用菌生产总过程母种母种栽培种栽培种栽培栽培原种原种子实体子实体（三）状态不同的菌种（三）状态不同的菌种用固体基质培养的菌种用固体基质培养的菌种1、固体、固体 菌种菌种概念概念特点特点设备、工艺简单设备、工艺简单菌龄长而不一菌龄长而不一发酵率较低发酵率较低用液体基质培养的菌种用液体基质培养的菌种2、液体、液体 菌种菌种概念概念特点特点设备、工艺较复杂设备、工艺较复杂菌龄短而一致菌龄短而一致发酵率高发酵率高易老化和自溶易老化和自溶生长势的区别液体菌种固体菌种三、菌种生产程序四大步骤制培养基 灭菌培养接种制种程序制种程序第二节第二节 主要生产设备主要生产设备一、一、制培养基设备制培养基设备二、二、灭菌设备灭菌设备三、三、接种设备接种设备四、四、培养设备培养设备五、五、保藏设备保藏设备六、六、菌种厂布局菌种厂布局一、制培养基设备一、制培养基设备（一）原料处理设备（一）原料处理设备切片粉碎两用机切片粉碎两用机切片粉碎两用机切片粉碎两用机铡铡草草机机粉粉碎碎机机拌料机装袋机装袋机（二）培养基分装设备（二）培养基分装设备装瓶机挖瓶机菌种袋颈圈菌种瓶二、灭菌设备二、灭菌设备高高压压锅锅外锅：装水外锅：装水内锅：装物（有壁管）内锅：装物（有壁管）锅盖锅盖安全阀安全阀排气阀排气阀压力表压力表常压灭菌常压灭菌常压密闭性好密闭性好要要求求1.接接 种种 箱箱用用法法清洁、放物品清洁、放物品 消毒消毒喷雾喷雾熏蒸熏蒸紫外灯紫外灯特特点点简易、利移动简易、利移动对人体低害对人体低害效果好、工效低效果好、工效低 三、接种设备三、接种设备（一）接种环境（一）接种环境观察窗观察窗紫外灯紫外灯 操作孔操作孔接种箱接种箱2.接种室接种室缓冲间：缓冲间：23m2接种间：接种间：56m2面积面积79m2高高2.22.5m要求要求 6个面平滑个面平滑两门错开、平拉式两门错开、平拉式顶装紫外灯顶装紫外灯清洁清洁物品放缓冲间物品放缓冲间消毒消毒 移物至接种间移物至接种间 喷消毒液喷消毒液 10min 后接种后接种消毒液清洁消毒液清洁 使用使用使一定工作区达到相对无菌、无尘状态的电器使一定工作区达到相对无菌、无尘状态的电器3.超净工作台超净工作台双人双人单单人人要求要求:前端为导热性好的金属材料前端为导热性好的金属材料枪枪匙匙钩钩铲铲镊镊耙耙针针环环接种接种4.接种工具接种工具固体菌种接种枪液体菌种接种枪四、菌种培养没备四、菌种培养没备1.培养箱培养箱培养少量菌种的恒温电器（培养少量菌种的恒温电器（2040）2.培养室培养室要求要求光线暗光线暗光线暗光线暗密闭好、通风性强密闭好、通风性强密闭好、通风性强密闭好、通风性强能升温、降温能升温、降温能升温、降温能升温、降温 有培养架有培养架有培养架有培养架贮贮藏藏室室远离污染源远离污染源低温（低温（48）干燥、通风、遮光干燥、通风、遮光 用前要严格消毒杀虫用前要严格消毒杀虫地面常撒石灰粉地面常撒石灰粉保藏原种、栽培种：保藏原种、栽培种：五、菌种保藏设备五、菌种保藏设备保藏母种：冰箱（保藏母种：冰箱（4）左右）左右六、液体发酵设备六、液体发酵设备七、菌种厂的布局七、菌种厂的布局根据菌种生产流程合理设置根据菌种生产流程合理设置仓库仓库配料室配料室灭菌室灭菌室接种室接种室培养室培养室办公室办公室栽培棚栽培棚门门口口晒料场晒料场第三节第三节 菌种培养基菌种培养基一、概述一、概述（一）（一）概念及要求概念及要求（二）（二）培养基的类型培养基的类型二、二、各级菌种的培养基各级菌种的培养基（一）（一）母种培养基母种培养基（二（二)原种、栽培种培养基原种、栽培种培养基三、三、培养基的灭菌培养基的灭菌一、培养基的概述一、培养基的概述（一）概念及要求（一）概念及要求概念概念人工配制的适于菌种生长人工配制的适于菌种生长的营养基质的营养基质要要求求营养种类、比例、水分、营养种类、比例、水分、pH适宜；适宜；保持无菌状态。保持无菌状态。（二）培养基的类型（二）培养基的类型 l l、按营养物质种类分类、按营养物质种类分类天然培养基天然培养基 常用的生物材料有马铃薯、常用的生物材料有马铃薯、胡萝卜、蚕蛹粉、豆芽汁、花生饼粉、玉米粉、胡萝卜、蚕蛹粉、豆芽汁、花生饼粉、玉米粉、酵母等。酵母等。合成培养基合成培养基 是指用已知成分和数量的化合是指用已知成分和数量的化合物配制而成的培养基。物配制而成的培养基。半合成培养基半合成培养基 利用天然物质作为碳、氮利用天然物质作为碳、氮源及维生素的来源另加一些无机盐类配制而成。源及维生素的来源另加一些无机盐类配制而成。2 2、按培养基的物理状态分类、按培养基的物理状态分类液体培养基液体培养基 不加琼脂，多用于生理生化方面研究不加琼脂，多用于生理生化方面研究,培养液体菌种等。培养液体菌种等。固体培养基固体培养基 凝固剂的量凝固剂的量,琼脂冬季为琼脂冬季为1.5%-2.0%,1.5%-2.0%,夏季夏季2.2%-2.3%2.2%-2.3%。半固体培养基半固体培养基 含有较少量琼脂含有较少量琼脂(0.2%-0.5%)(0.2%-0.5%)的培养基的培养基,使培养基未达使培养基未达到固态而呈粘稠状态。到固态而呈粘稠状态。粉状条状属天然植物多糖融点96以上凝点40以下冷水中不溶透明度好、粘着力强不被微生物分解利用特性二、各级菌种的培养基二、各级菌种的培养基（一）母种培养基（一）母种培养基1、通用配方、通用配方PDA马铃薯马铃薯200g、葡萄糖、葡萄糖20g琼脂琼脂1520g、水、水1000m1营营养液制作养液制作a a准备工作准备工作2 2、制作制作方法方法 b b称量、材料预处理称量、材料预处理按配方准确称量各营养物质。将马铃薯去皮、挖掉芽按配方准确称量各营养物质。将马铃薯去皮、挖掉芽眼后称量眼后称量200g200g，切成切成1cm1cm见方的小块。琼脂剪碎后用见方的小块。琼脂剪碎后用水浸泡。水浸泡。c c熬煮熬煮将切好的马铃薯块加适量水后放入电饭锅中，煮至酥而将切好的马铃薯块加适量水后放入电饭锅中，煮至酥而不烂。不烂。d d过滤、加可溶药物过滤、加可溶药物用双层沙布过滤，取滤汁，放在电饭锅中加入糖。用双层沙布过滤，取滤汁，放在电饭锅中加入糖。e e熬琼脂、定容熬琼脂、定容 在沸腾状态下加入琼脂，直到琼脂完全溶化为止，定容在沸腾状态下加入琼脂，直到琼脂完全溶化为止，定容至至1000ml1000ml。营养液分装营养液分装a a用注射器分装用注射器分装b b分装标准分装标准:分装量为试管长度的分装量为试管长度的1/41/41/51/5。注意培养基。注意培养基不能沾污试管口。不能沾污试管口。c c塞棉塞塞棉塞棉塞松紧适度，棉塞松紧适度，1/31/3在管外，在管外，2/32/3在管内。在管内。d d扎捆扎捆7-107-10支支试试管管捆捆在在一一起起，棉棉塞塞上上包包好好防防水水纸纸，直直立立放放入高压灭菌锅中。入高压灭菌锅中。灭菌处理灭菌处理 在在1.01.01.5 kg/cm1.5 kg/cm2 2压力下维持压力下维持20-30min20-30min。摆斜面摆斜面灭菌结束后锅盖开灭菌结束后锅盖开1/51/5的小缝，用余热烘干报纸和的小缝，用余热烘干报纸和棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的棉塞，然后摆斜面。斜面长是试管总长的1/21/2。（二）原种、栽培种培养基制作二）原种、栽培种培养基制作1 1、常见原种配方、常见原种配方木屑培养基配方木屑培养基配方细细木木屑屑80%80%，麸麸皮皮12%12%，玉玉米米面面1%1%，黄黄豆豆粉粉2%2%，过过磷磷酸酸钙钙1.5%1.5%，红红糖糖0.5%0.5%，尿尿素素0.4%0.4%，硫硫酸酸镁镁0.1%0.1%，石石灰灰1%1%，石石膏膏2%2%，料料：水水=1=1：1.0-1.21.0-1.2。此此配配方方适适合合香香菇菇、黑木耳、平菇原种生长，菌丝粗壮洁白。黑木耳、平菇原种生长，菌丝粗壮洁白。玉米芯培养基配方玉米芯培养基配方玉玉米米芯芯80%80%，麸麸皮皮14%14%，糖糖0.5%0.5%，过过磷磷酸酸钙钙1%1%，石石灰灰2%2%，尿尿素素0.5%0.5%，玉玉米米面面2%2%，料料：水水=1=1：1.4-1.51.4-1.5。此此配配方方适适合合于于培培养养平平菇菇原原种种，菌菌丝丝生生长长速速度度快快，且且菌菌丝丝粗状。粗状。玉米芯、木屑混合培养基配方玉米芯、木屑混合培养基配方玉玉米米芯芯42%42%，木木屑屑20%20%，豆豆秸秸20%20%，麸麸皮皮10%10%，过过磷磷酸酸钙钙1.5%1.5%，石石灰灰2%2%，石石膏膏1%1%，糖糖0.5%0.5%，玉玉米米面面3%3%，料料：水水1=11=1：1.4-1.51.4-1.5。此此配配方方适适合合于于培培养养平平菇菇原原种种。生生长长健健壮壮，也也可培养金针菇，滑子蘑原种。可培养金针菇，滑子蘑原种。软质木屑配方软质木屑配方椴椴木木屑屑75%75%（木木线线厂厂下下脚脚料料，颗颗粒粒较较大大），麸麸皮皮15%15%，玉玉米米面面5%5%，石石膏膏1.5%1.5%，石石灰灰1%1%，糖糖0.5%0.5%，过过磷磷酸酸钙钙1.5%1.5%，尿尿素素0.5%0.5%，料料，水水=1=1：1.21.2左左右右。适适用用于于金金针针菇菇，滑滑子子蘑蘑等等分解基质能力较弱的品种使用。分解基质能力较弱的品种使用。麦粒、木屑培养基配方麦粒、木屑培养基配方新新鲜鲜、优优质质小小麦麦80%80%，阔阔叶叶树树木木屑屑20%20%，木木屑屑：水水=1=1：1 1左左右右，拌拌木木屑屑用用煮煮小小麦麦水水，或或在在此此基基础础上上，加加入入总总量量0.5%0.5%的的过过磷磷酸酸钙钙，0.5%0.5%的的蔗蔗糖糖,1%,1%的的石石灰灰，在在麦麦粒粒煮煮好好后后连连同同木木屑拌入。屑拌入。玉米粒培养基配方玉米粒培养基配方优优质质新新鲜鲜玉玉米米100%100%，或或后后期期加加入入0.5%0.5%过过磷磷酸酸钙钙，0.5%0.5%的的糖糖,1%,1%的石灰。的石灰。玉玉米米粒粒培培养养基基制制作作的的原原种种，具具备备麦麦粒粒原原种种的的优优点点，后后劲劲更足，接种扩繁量更大。更足，接种扩繁量更大。2 2、原种培养基的制作方法、原种培养基的制作方法 谷粒培养基制作谷粒培养基制作按配方称量各营养物质按配方称量各营养物质 配配方方一一：优优质质新新鲜鲜小小麦麦65%65%，木木屑屑15%15%，棉棉籽籽壳壳15%15%，麸麸皮皮5%5%，石石膏膏1%1%，过过磷磷酸酸钙钙0.5%0.5%，糖糖0.5%0.5%，尿素，尿素0.5%0.5%谷粒浸泡吸水谷粒浸泡吸水冬季浸泡冬季浸泡24-4824-48小时，夏季加小时，夏季加1%1%石灰（以防石灰（以防变酸）浸泡变酸）浸泡2424小时，隔夜换水。小时，隔夜换水。煮沸、沥干捞出煮沸、沥干捞出泡好后，漂洗干净（去杂），煮至饱胀无白心，泡好后，漂洗干净（去杂），煮至饱胀无白心，切忌煮开花，沥干水分后捞出。切忌煮开花，沥干水分后捞出。拌料拌料用煮小麦水拌木屑、棉籽壳、麸皮，最后再一用煮小麦水拌木屑、棉籽壳、麸皮，最后再一起与麦粒拌匀。起与麦粒拌匀。装瓶装瓶a.a.装料量应为装料量应为1/31/3或或1/21/2罐头瓶，便于培养罐头瓶，便于培养时摇动基料促进丝均匀生长。时摇动基料促进丝均匀生长。b.b.擦净并封瓶口擦净并封瓶口封口塑料袋采用规格为封口塑料袋采用规格为13cm13cm13cm13cm0.004cm0.004cm高压聚丙稀袋，二层，高压聚丙稀袋，二层，里层在中央剪一里层在中央剪一3cm3cm宽菱形口。至少二个皮宽菱形口。至少二个皮套。套。装锅灭菌装锅灭菌高压灭菌于高压灭菌于126126左右维持左右维持2 2小时；常压灭菌于小时；常压灭菌于100100维持维持10-1210-12小时，夏季时间可酌情延长。小时，夏季时间可酌情延长。出锅出锅 、冷却、冷却冷却至冷却至3030以下待接种。以下待接种。木屑、玉米芯料培养基制作方法木屑、玉米芯料培养基制作方法 按配方称料。按配方称料。拌料：干混（将石膏和不溶于水的主料和辅拌料：干混（将石膏和不溶于水的主料和辅料混匀）；湿混（将石灰和溶于水的辅料制成料混匀）；湿混（将石灰和溶于水的辅料制成母液，加入所需水量稀释后拌料）。母液，加入所需水量稀释后拌料）。装瓶：闷装瓶：闷1-21-2个小时（夏季时间不宜过长）个小时（夏季时间不宜过长）待料充分吸足水后装瓶，装料至瓶肩，上紧下待料充分吸足水后装瓶，装料至瓶肩，上紧下松，压平料面，擦净瓶口，打松，压平料面，擦净瓶口，打1.5cm1.5cm粗接种孔至粗接种孔至瓶底瓶底封口。封口。灭菌：同谷料培养基制作灭菌：同谷料培养基制作出锅、冷却：同谷粒培养基制作出锅、冷却：同谷粒培养基制作(三三)栽培种制作栽培种制作制作方法基本同于原种制作。需要注意的是栽制作方法基本同于原种制作。需要注意的是栽培种培养基制作一般选用丰富的培养料，而且培种培养基制作一般选用丰富的培养料，而且含水量要较原种加大，更利于菌种快速吃料。含水量要较原种加大，更利于菌种快速吃料。容器可以用容器可以用500ml500ml罐头瓶，也可以用（罐头瓶，也可以用（17-17-1818）X X（30-3530-35）X X（0.04-0.050.04-0.05）cmcm低压聚乙烯低压聚乙烯袋。袋。栽培种的装袋三、培养基的灭菌（一）母种培养基的灭菌无菌检验约30条件下空白培养23天灭菌与摆斜面摆斜面摆斜面1kg/cm2(103kpa、121）2030min母基灭菌与摆斜面（二）原种、栽培种培养基的灭菌高压灭菌1.5kg/cm2（152kpa、128.1）灭菌12h 常压灭菌100灭菌10h左右再闷12h要求攻头、控中、保尾 四、四、液体菌种制作技术液体菌种制作技术 （一）液体菌种制作的原理（一）液体菌种制作的原理食用菌液体菌种制作是在发酵罐中，采用液体培食用菌液体菌种制作是在发酵罐中，采用液体培养基通入无菌空气并加以搅拌，增加培养基中溶养基通入无菌空气并加以搅拌，增加培养基中溶氧含量，提供食用菌菌体呼吸代谢所需要的氧气，氧含量，提供食用菌菌体呼吸代谢所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，获得大量的菌丝体或代并控制适宜的外界条件，获得大量的菌丝体或代谢产物。谢产物。（二）液体菌种制作的特点（二）液体菌种制作的特点1.1.原料来源广泛原料来源广泛2.2.菌丝体生长快速菌丝体生长快速3.3.生产周期短生产周期短食用菌深层发酵一般仅需食用菌深层发酵一般仅需2-7d2-7d就可获得大量的菌丝体，就可获得大量的菌丝体，而固体培养则需而固体培养则需30-60d30-60d。4.4.工厂化生产、无季节性工厂化生产、无季节性食用菌深层发酵是在发酵罐内、控制最佳条件来培菌食用菌深层发酵是在发酵罐内、控制最佳条件来培菌体的，不受季节性限制。体的，不受季节性限制。（三）液体菌种制作的用途（三）液体菌种制作的用途1 1、生产液体菌种、生产液体菌种食用菌经深层发酵食用菌经深层发酵2-7d2-7d的幼嫩菌丝体，可以的幼嫩菌丝体，可以用来作为食用菌栽培用的原种和栽培种。用来作为食用菌栽培用的原种和栽培种。2 2、制备药物或提取生化制品、制备药物或提取生化制品许多食用菌种类，其深层发酵培养的菌丝体许多食用菌种类，其深层发酵培养的菌丝体可作为提取药物成分或生化制品的材料。可作为提取药物成分或生化制品的材料。3 3、制作食品或畜禽饲料、制作食品或畜禽饲料（四）、液体菌种制作的主要设备（四）、液体菌种制作的主要设备 1.1.摇床摇床往复式播床：振荡方式为来回振荡往复式播床：振荡方式为来回振荡旋转式摇床：振荡方式为旋转旋转式摇床：振荡方式为旋转2.2.种子罐和发酵罐种子罐和发酵罐许多食用菌种类，其深层发酵培养的菌丝体可作为提取药许多食用菌种类，其深层发酵培养的菌丝体可作为提取药物成分或生化制品的材料。物成分或生化制品的材料。3.3.空气净化设备空气净化设备 4.4.培养基连续灭菌设备培养基连续灭菌设备 包括配料罐、连消塔、维持塔、喷淋冷却器等。包括配料罐、连消塔、维持塔、喷淋冷却器等。5 5供气设备供气设备 主要是蒸气锅炉及附属设备主要是蒸气锅炉及附属设备 第四节 菌种的接种一、无菌操作二、母种的接种(一）分离法1.组织分离2.孢子分离（二）转管法三、原种、栽培种的接种菌种分离菌种分离 将将有有价价值值的的子子实实体体的的局局部部组组织织、孢孢子子或或基基内内菌菌丝丝移移接接到到斜斜面面试试管管培培养养基基上上，获获得得纯纯培培养养菌菌丝丝的的操操作作称称为为菌菌种种分分离离。菌菌种种分分离离可可以以分分为为孢孢子子分离、组织分离和基内菌丝分离三种。分离、组织分离和基内菌丝分离三种。概念：菌种移至新培养基上的过程概念：菌种移至新培养基上的过程关键：无菌操作关键：无菌操作接种接种在严格消毒灭菌条件下进行的操作在严格消毒灭菌条件下进行的操作概念概念一、无菌操作一、无菌操作接种环境消毒灭菌接种环境消毒灭菌酒精棉球消毒双手酒精棉球消毒双手开启的管口、瓶口靠近灯焰开启的管口、瓶口靠近灯焰拔出的棉塞勿触及任何地方拔出的棉塞勿触及任何地方动作快，接种时间勿太长动作快，接种时间勿太长要点要点必必备备母种转管无菌操作程序：母种转管无菌操作程序：1.1.将接种用品及原始母种放入接种箱内。将接种用品及原始母种放入接种箱内。2.2.用菇保用菇保1 1号、气雾消毒盒（号、气雾消毒盒（2g/m32g/m3）或甲醛进行熏蒸，或甲醛进行熏蒸，时间要在时间要在3030分钟以上。分钟以上。3.3.手、台面、接种工具、试管用酒精棉球擦试消毒。手、台面、接种工具、试管用酒精棉球擦试消毒。4.4.点燃酒精灯，火焰灼烧接种镐至烧红后冷却，凡能点燃酒精灯，火焰灼烧接种镐至烧红后冷却，凡能伸进试管的杆部均过火灭菌。伸进试管的杆部均过火灭菌。5 5左手大拇指和其他四指并拢握住菌种管和左手大拇指和其他四指并拢握住菌种管和待接试管，斜面向上，并保持水平。待接试管，斜面向上，并保持水平。6 6右手小指、无名指及手掌拔掉棉塞，用火右手小指、无名指及手掌拔掉棉塞，用火焰灼烧试管口并不断搅动。焰灼烧试管口并不断搅动。7 7先弃去前端先弃去前端1cm1cm处，然后用接种镐快速移取黄处，然后用接种镐快速移取黄豆粒大小的菌种入待接试管斜面培养基中央。豆粒大小的菌种入待接试管斜面培养基中央。8 8灼烧试管口，并将棉塞在火焰上迅速过一下然后灼烧试管口，并将棉塞在火焰上迅速过一下然后塞上。塞上。9 9用接种镐挑持住母种管，另一只手换待接管，重用接种镐挑持住母种管，另一只手换待接管，重复上述操作。复上述操作。1010收拾台面。收拾台面。11.11.贴标签贴标签u特点特点简便，易成功简便，易成功保持原菌种性状保持原菌种性状重复多易退化重复多易退化不适于耳类不适于耳类1.1.组织分离组织分离：采用食用菌子实体或菌核、菌索：采用食用菌子实体或菌核、菌索的任何一部分组织培养成纯菌丝体的方法。的任何一部分组织培养成纯菌丝体的方法。组织组织PDAPDA次生菌丝次生菌丝培养培养（一）分离法（一）分离法根据分离材料的不同，组织分离法可分为子实体分离法、根据分离材料的不同，组织分离法可分为子实体分离法、菌核分离法以及菌索分离法。菌核分离法以及菌索分离法。（1 1）子实体分离法）子实体分离法 采用子实体的任何部分如菌盖、菌采用子实体的任何部分如菌盖、菌柄、菌褶、菌肉进行组织培养，从而形成纯菌丝体的方柄、菌褶、菌肉进行组织培养，从而形成纯菌丝体的方法。法。a a伞菌组织分离法伞菌组织分离法种菇的选择：种菇的选择：头潮菇、外观典型、大小适中、菌肉肥头潮菇、外观典型、大小适中、菌肉肥厚、颜色正常、尚未散孢，无病虫害、长至七八分熟的厚、颜色正常、尚未散孢，无病虫害、长至七八分熟的优质单朵菇做种菇。优质单朵菇做种菇。种菇消毒：切取菇体基部，用种菇消毒：切取菇体基部，用75%75%的酒精溶液浸泡的酒精溶液浸泡0.5-0.5-1min1min，再用无菌水冲洗，再用无菌水冲洗2-32-3次。次。切块接种：纵剖（撕）菇体，尖头镊取柄盖交界处绿切块接种：纵剖（撕）菇体，尖头镊取柄盖交界处绿豆粒大的组织放入新斜面中部豆粒大的组织放入新斜面中部培养纯化：适温下培养培养纯化：适温下培养2-42-4天，可看到组织块天，可看到组织块上长出白色绒毛状菌丝体，移接到新的培养上长出白色绒毛状菌丝体，移接到新的培养基上再经过基上再经过5-75-7天适温培养，长满试管后即为天适温培养，长满试管后即为纯菌丝体。纯菌丝体。出菇试验：将分离得到的试管种扩大繁殖，出菇试验：将分离得到的试管种扩大繁殖，并移接培养成原种、栽培种并移接培养成原种、栽培种,做出菇试验做出菇试验,选选出出菇好、产量高、质量好的，即可作栽培出出菇好、产量高、质量好的，即可作栽培生产用种。生产用种。b b胶质菌类组织分离法：胶质菌类组织分离法：一种方法是将耳片反复用无菌水冲洗，一种方法是将耳片反复用无菌水冲洗，切成切成0.5cm0.5cm，小块移入培养基，于，小块移入培养基，于2828下进行培养；下进行培养；另一种方法是剖取尚未展开耳片的耳另一种方法是剖取尚未展开耳片的耳基团内的组织块进行分离。基团内的组织块进行分离。（2 2）菌核分离法：一些药用菌如茯苓、猪苓、雷）菌核分离法：一些药用菌如茯苓、猪苓、雷丸都有菌核。进行组织分离时，采用含浆汁多的丸都有菌核。进行组织分离时，采用含浆汁多的菌核。在无菌的条件之下，将菌核剖开，于菌核菌核。在无菌的条件之下，将菌核剖开，于菌核的附近，剖取蚕豆大小的菌核组织块移入斜面培的附近，剖取蚕豆大小的菌核组织块移入斜面培养基上，在养基上，在26-3026-30下培养。下培养。（3 3）菌索分离法：从菌索中分离培养得到纯菌）菌索分离法：从菌索中分离培养得到纯菌丝体的方法。丝体的方法。.菌菌索索分分离离2 2、木腐菌基内菌丝分离、木腐菌基内菌丝分离把分离用菇木的部分或全部的表面在火焰上轻燎。把分离用菇木的部分或全部的表面在火焰上轻燎。取小刀在火焰上灭菌，对准菇木上菇柄（耳基）的着生取小刀在火焰上灭菌，对准菇木上菇柄（耳基）的着生位置切成两半。位置切成两半。确定欲分离菌丝在菇木上的位置，再次用火焰灭菌过的确定欲分离菌丝在菇木上的位置，再次用火焰灭菌过的小刀，在欲分离部位刻划数个井字。小刀，在欲分离部位刻划数个井字。用火焰灭过菌的接种钩，钩取一小块木屑（绿豆大小或用火焰灭过菌的接种钩，钩取一小块木屑（绿豆大小或更小）移接于斜面培养基。更小）移接于斜面培养基。接种后将试管置于接种后将试管置于25252727下培养，促使其恢复。近风下培养，促使其恢复。近风干的种木内菌丝常处于休眠状态。接种后，种木吸湿，干的种木内菌丝常处于休眠状态。接种后，种木吸湿，菌丝逐渐恢复生长。如果短期时间内分离物未曾发，则菌丝逐渐恢复生长。如果短期时间内分离物未曾发，则可保留至可保留至4 4周后，再断定分离是否成功。周后，再断定分离是否成功。3.3.孢子分离孢子分离(有性繁殖）有性繁殖）孢子分离主要是指利用子实体上产生的成熟有性孢子分离主要是指利用子实体上产生的成熟有性孢子分离培养获得纯菌种的方法。分为多孢分离孢子分离培养获得纯菌种的方法。分为多孢分离与单孢分离两种。与单孢分离两种。孢子孢子特点特点菌龄小菌龄小生命力强生命力强变异率高变异率高孢孢 子子分离法分离法难度较大难度较大单孢分离单孢分离多孢分离多孢分离较简易较简易多孢分离多孢分离概念概念使许多孢子在同一培养基上，使许多孢子在同一培养基上，萌发后自由交配成次生菌丝的方法萌发后自由交配成次生菌丝的方法步骤步骤种菇消毒种菇消毒采收孢子采收孢子 接种孢子接种孢子整菇插种法整菇插种法钩悬法钩悬法孢子印法孢子印法单孢分离单孢分离的菌落的菌落1.种菇消毒菌柄去2/3苞被有：75%酒精棉球擦0.25%新洁尔灭浸23min无菌纱布吸干表面水分无2.采收孢子整菇插种法种菇插在孢子收集器中使孢子散落于培养皿内的方法用前灭菌25、24h现孢子粉取出分离材料培养皿盖严钩悬法钩悬法生产上采集木耳、银耳的孢子常采用此法。生产上采集木耳、银耳的孢子常采用此法。25、24h现孢子粉取出分离材料孢子印法孢子印法 取成熟的伞菌或胶质的子实体，经表面消毒，切去菌柄，取成熟的伞菌或胶质的子实体，经表面消毒，切去菌柄，菌褶向下，放置于灭过菌的有色纸上（红、黑、蓝、白），菌褶向下，放置于灭过菌的有色纸上（红、黑、蓝、白），用通气钟罩上，静置一天（用通气钟罩上，静置一天（20-2420-24），孢子落在纸上，），孢子落在纸上，形成孢子印，再从中挑取少量孢子转入试管培养基上培养。形成孢子印，再从中挑取少量孢子转入试管培养基上培养。空中孢子捕捉法空中孢子捕捉法:伞菌的孢子大量弹射时，子实伞菌的孢子大量弹射时，子实体周围可以看到体周围可以看到“孢子云孢子云”，可以在其漂去的，可以在其漂去的上方倒放琼脂平板，使孢子附在其上，再盖上上方倒放琼脂平板，使孢子附在其上，再盖上盖，用塑料胶水纸封好培养，整个过程要快。盖，用塑料胶水纸封好培养，整个过程要快。褶上涂抹法褶上涂抹法:取成熟伞菌，切去菌柄基部，带入取成熟伞菌，切去菌柄基部，带入接种箱内，先表面消毒，用接种针插入两片菌接种箱内，先表面消毒，用接种针插入两片菌褶之间，轻轻抹过表面，然后用划线法涂抹于褶之间，轻轻抹过表面，然后用划线法涂抹于试管培养基上。试管培养基上。帖褶法帖褶法:取一小块成熟的菌褶或菌盖，用熔取一小块成熟的菌褶或菌盖，用熔化的琼脂或胶水、糨糊之类，帖附在试管化的琼脂或胶水、糨糊之类，帖附在试管斜面的正上方试管壁上或培养皿皿盖上，斜面的正上方试管壁上或培养皿皿盖上，经经6-126-12小时，待孢子落下后，立即把试管小时，待孢子落下后，立即把试管或培养皿中的培养基转到另一消毒过的空或培养皿中的培养基转到另一消毒过的空白试管或培养皿中进行培养。白试管或培养皿中进行培养。单孢分离单孢分离:从收集到的多孢子中将单个孢子分离从收集到的多孢子中将单个孢子分离出来，分别培养，作为育种的材料。出来，分别培养，作为育种的材料。1.1.涂抹法：用已沾湿无菌水的接种针，从孢子涂抹法：用已沾湿无菌水的接种针，从孢子印上沾取孢子，在无菌条件下，插入盛用无印上沾取孢子，在无菌条件下，插入盛用无菌水的小试管内振荡稀释成适宜浓度的孢子菌水的小试管内振荡稀释成适宜浓度的孢子悬浊液。随后无菌条件下划线培养。悬浊液。随后无菌条件下划线培养。2.2.梯度稀释点样法梯度稀释点样法:用同样的方法制成浓度较高用同样的方法制成浓度较高的孢子悬浊液。同时取灭菌过的空试管数根，的孢子悬浊液。同时取灭菌过的空试管数根，排序编号。按无菌操作规程获得一系列的不排序编号。按无菌操作规程获得一系列的不同浓度梯度的孢子悬浮液。再用毛细管在各同浓度梯度的孢子悬浮液。再用毛细管在各个梯度孢子液中取样培养，单孢萌发后菌丝个梯度孢子液中取样培养，单孢萌发后菌丝便长入小培养基块中，再将其转移到试管斜便长入小培养基块中，再将其转移到试管斜面上培养获得单孢培养物。面上培养获得单孢培养物。接种孢子用接种环蘸孢子液或孢子粉涂布于平板上（二）转管法注意种块勿太大原老种块勿再接入传代次数勿太多将母种移入新的过程概念过程接种环取绿豆粒大母种移入新斜面中部转管三、原种、栽培种的接种接原种用接种耙取蚕豆大母种放于瓶中料面上接栽培种用接种匙（镊、铲）取枣大原种放于袋的两端或瓶中料面上表面老菌丝及老种块勿接入栽培种接种第五节菌种培养与质量鉴定一、菌种培养（一）培养条件（二）技术环节二、菌种质量鉴定（一）母种质量鉴定（二）原种和栽培种质量鉴定(一)培养条件场所清洁空气清新光线暗空气湿度60%70%温度约25一、菌种培养（二）技术环节1.母种培养及时挑拣污染管分离的母种要纯化出菇试验使用控制菌龄（即将长满斜面）培养时间510天母种培养返回本节2.原种栽培种的培养培养时间：约30天勿堆放过挤,不宜多次翻倒及时挑拣污染瓶（袋）栽培种的菌袋缺氧时可刺孔增氧控制菌龄（菌丝长满后710天使用）刺孔点二、菌种质量的鉴定形态特征、生理特性、栽培性状、经济效益等鉴定项目菌种鉴定主要包括两个方面的内容：一方面要鉴定未知的菌种，从而避免菌种混乱带来得损失；另一方面鉴定已知菌种质量的好坏，从而选出优良品种，夺得食用菌的丰产。、一般从菌种的纯度、长势、颜色、菌龄、均匀度和出菇快慢等6个方面进行鉴定。（一）母种质量的鉴定 一般分离培养以及引进的母种，都应严格控制转管的次数，最多不要超过5次。同时要考虑其菌龄，随着培养时间的延长，菌龄越来越大，生活力随之降低，菌种老化。母种质量标准菌丝白、整齐、粗壮、有弹性、萌发快等1.外观好差丝干燥、收缩、自溶产生红褐色液体等退化母种好母种2.鉴定耐干湿性试验接入母种正常生长原种培养基含水量50%70%耐高温性试验仍正常生长适温培养7天3035锻炼24h再适温培养出菇试验栽培出菇快产量高品质好抗逆性强外观肉眼鉴定外观肉眼鉴定 肉眼观察包装是否合乎要求，棉塞有无松动，试管有无破损，有无病虫害等。外表菌丝洁白、粗壮、富有弹性、则生命力强。如有淡茶褐色的菌膜及子实体，只要接种时去除就可以用，若菌丝已干燥、收缩或菌丝体自溶产生大量红褐色液体，则表明生活力下降，不能作为菌种。菌丝生长速率测定 将所获的菌种，转接至PDA 培养皿中央,待菌丝生长蔓延时,用直径0.5cm的打孔器,经灭菌后打取边缘菌丝,连同培养基重新接入PDA 培养皿中央进行培养,每隔24小时,测定菌落直径,直至菌落覆盖全皿为止,从而计算出菌丝平均生长速度。显微镜检查显微镜检查 在载玻片上滴一滴蒸馏水，然后挑取少许菌丝置水滴上，让菌丝体充分展开，盖好玻片，在显微镜下观察。蘑菇菌丝体应粗壮，菌丝节较长，呈分枝状，说明是正常菌种，如果菌丝节很短，分枝很浓密，菌丝较纤细，生长缓慢，一般为不正常菌种。液体培养鉴定配制2糖水溶液，经常规灭菌消毒，挑取黄豆粒大的菌块，放入100毫升上述溶液中，置于25-28温度下培养3-7天后，若液面出现气泡，产生“油皮”，发生浑浊现象，说明菌种本身有杂菌；如果苗块下沉，或迟迟才长出很薄的菌丝层，则说明菌种生活力弱；如若液面四周的菌丝生长快，且浓白呈棉絮状，则表明菌种生命力强。菌种纯度测定 随机抽取经初步检测的菌种，挑取菌种不同部位菌丝连同培养基转接到PDA培养基的培养皿，每瓶菌种转接30-50点，25 培养，观察菌种萌发时有无杂菌和异常生长状况出现。吃料能力鉴定 将试管母种接入新鲜配制的装在试管中的粪草培养基中，置24下进行培养,5天后观察菌丝生长情况,如果菌种块能很快萌发,并迅速向培养料中生长伸展,则说明该品种的吃料能力强;如果菌种萌发后生长缓慢,迟迟不向四周和料层深处伸展,则表明该品种对培养料的适应能力差,是劣质菌种。菌种病毒病的检测（二）原种、栽培种质量的鉴定好的原种和栽培种的标准：标准：1、母种的转管次数 用转管次数4-5次以内的母种生产的原种和栽培种。2、菌龄 一般适用菌的原种和栽培种，在20左右可保存3个月，超过上述菌龄的菌种就已经老化，不应用于生产。3、原种和栽培种的外观要求（1）菌丝生长健壮，绒状菌丝多，生长整齐。（2）菌丝已长满培养基，银耳的菌种还要求在培养基上分化出子实体原基。（3）菌丝色泽洁白或符合该菌的颜色（4）菌种瓶内无杂色出现和杂菌污染（6）菌种培养基不能干缩与瓶壁分开4 4、常见优质原种和栽培种的优良性状、常见优质原种和栽培种的优良性状（1）平菇菌丝粗壮，浓白，密集，爬壁力强，菌柱断面菌丝浓白，清香，无异味，发菌快，为优质菌的性状。（2）猴头 菌丝洁白，细绒毛状，紧贴培养基放射状生长，程星芒状或点片状，后期在培养基上产生珊瑚状子实体原基，培养基的颜色常变为淡棕褐色。（3）金针菇 菌丝洁白，较粗壮，密集，长绒毛状，外观似细粉状，培养基后期菌种表面易产生菇蕾。（4）香菇 菌丝洁白，绵毛状，后期见光后易分泌出酱油色的液体，呈褐色，有时表面产生小菇蕾。（5）木耳 菌丝洁白，密集，棉绒状，短而整齐，全瓶发育均匀，有时瓶壁间出现淡褐色、褐色、浅黑色的梅花状胶质即子实体原基。（6）银耳 银耳菌丝与香灰菌丝按比例混合培养。羽毛状菌丝生长健壮，成束分布，黑疤多，分布均匀，无其他杂斑。同时银耳菌丝吃料较深，瓶内有发白的棉毛团或耳片。（7）草菇 菌丝呈透明状，白色或黄白色，分布均匀，常有大量的红褐色的后垣孢子堆。（8）双孢蘑菇 菌丝灰白带微蓝，密集，细绒状，气生菌丝少，贴生菌丝的培养基内呈细绒状分布，发菌均匀，有特有的双孢蘑菇的香味。（9）灵芝 菌丝白色，密集，以接种点为中心，呈辐射状向四周生长，接种点菌丝常呈蛋黄白色，菌丝贴生于培养基表面，易形成菌膜。（10）滑菇 菌丝洁白，密集，棉絮状，上下分布均匀，用手指按菌种柱有弹性，菌柱的断面呈白色或橙黄色，颜色均匀一致，用手捏碎成大块而不是粉末。菌种种类品种名称菌种级别代时生产厂家接种日期用于生产产生原基黄水污染第六节菌种保藏与复壮一、菌种保藏（一）保藏目的及原理（二）常用保藏法（三）保藏注意二、菌种复壮(一）菌种的衰退（二）复壮方法（三）防衰措施一、菌种保藏（一）保藏目的及原理目的原理创造不利于菌种生长的一切条件，使其代谢处于休眠状态。使菌种不生长不死亡不污染不降低或不丧失其优良性以尽量延长使用时间低温干燥无氧缺营养不利条件（二）常用保藏法以母种形式保藏特点简便保藏时间短易污染及退化不适于草菇等菌类1.斜面低温法斜面菌种置，46冰箱中（36个月）返回本节2.矿油保藏法无菌检验注入种管淹没斜面约1cm矿油处理灭菌：152kpa、30min去水：4050烘至无色透明口堵胶塞用时转管再转管3.自然基质保藏法麸皮保藏法：麸皮保藏法：称取一定量的麸皮加水或营养液后拌称取一定量的麸皮加水或营养液后拌匀即可使用。水、麸皮装入试管，高压灭菌后接入菌匀即可使用。水、麸皮装入试管，高压灭菌后接入菌种，放在适温下培养。菌丝体发育好后，将试管放入种，放在适温下培养。菌丝体发育好后，将试管放入干燥室温下进行干燥。干燥后放在干燥室温下进行干燥。干燥后放在2020以下干燥处保以下干燥处保藏，可保藏藏，可保藏3 35 5年时间。年时间。麦粒保藏法：麦粒保藏法：取优质取优质小麦，淘洗后浸入小麦，淘洗后浸入2020水中泡水中泡5 5小时，稍加晾干，装管。装入量以管长的小时，稍加晾干，装管。装入量以管长的1 14 4到到1 13 3为宜，灭菌，趁热摇散，冷却后接入菌丝体，适温培为宜，灭菌，趁热摇散，冷却后接入菌丝体，适温培养至大多数麦粒上出现稀疏菌丝时终止培养。置于养至大多数麦粒上出现稀疏菌丝时终止培养。置于2525以下干燥处，可保藏以下干燥处，可保藏1 12 2年。年。防衰老保藏时间长转接后生长旺易污染，灭菌要彻底特点4.菌丝球保藏法：将菌种接入马铃薯培养液中，每将菌种接入马铃薯培养液中，每250250毫升三角瓶毫升三角瓶装装6060毫升培养液，振荡培养或每天摇动毫升培养液，振荡培养或每天摇动510510次，培次，培养养5757天，然后将形成的菌丝球移入装有天，然后将形成的菌丝球移入装有5 5毫升无菌毫升无菌生理盐水的试管中，每管约移入生理盐水的试管中，每管约移入4545个菌丝球，塞个菌丝球，塞上棉塞，用蜡封好管口，置低温下，可保藏上棉塞，用蜡封好管口，置低温下，可保藏1 1年。年。5.滤纸保藏法将蘑菇孢子吸附在滤纸条上，干燥后放入冰将蘑菇孢子吸附在滤纸条上，干燥后放入冰箱进行保藏，由于该保藏是有性的孢子，一般不箱进行保藏，由于该保藏是有性的孢子，一般不用于生产中，主要是起到保藏种质资源的作用及用于生产中，主要是起到保藏种质资源的作用及菌种的选育，用该方法已保藏蘑菇菌种达菌种的选育，用该方法已保藏蘑菇菌种达1010年以年以上上,孢子成活率约为孢子成活率约为50-80%50-80%之间。之间。6.6.真空冷冻干燥保藏法真空冷冻干燥保藏法真空冷冻干燥简称冻干。这种方法是将菌种同真空冷冻干燥简称冻干。这种方法是将菌种同时处于低温、干燥和缺氧的条件下，使菌种的代谢时处于低温、干燥和缺氧的条件下，使菌种的代谢活动相对静止。方法是：将要保藏的菌种或悬浮液，活动相对静止。方法是：将要保藏的菌种或悬浮液，装在安装在安瓿瓿瓶里，骤然冷却，立即抽真空，使其升华瓶里，骤然冷却，立即抽真空，使其升华脱水而干燥，在熔封后，置于低温或是室温下保藏。脱水而干燥，在熔封后，置于低温或是室温下保藏。7.7.液氮超低温保藏法液氮超低温保藏法液氮超低温保种是把菌种装在含有冷冻保护剂的液氮超低温保种是把菌种装在含有冷冻保护剂的安瓿瓶内，将该安瓿瓶放入液氮安瓿瓶内，将该安瓿瓶放入液氮(-196)(-196)中进行保藏中进行保藏,由于菌丝体处于由于菌丝体处于-196,-196,其代谢降低到完全停止的状其代谢降低到完全停止的状态。所以不需定期移植。从理论上讲，菌丝体可以无态。所以不需定期移植。从理论上讲，菌丝体可以无限期地存活。限期地存活。（）菌种制备菌种在（）菌种制备菌种在PDAPDA培养基平板上于培养基平板上于22-2422-24下培养下培养10-1510-15天天,菌丝体充分生长后菌丝体充分生长后,用打孔器用打孔器(直径直径2-2-4mm)4mm)打成小孔打成小孔,或用接种针把菌丝培养物切成或用接种针把菌丝培养物切成24mm 24mm 长方形小块。长方形小块。（）安瓿管的制备把直径（）安瓿管的制备把直径4-6mm 4-6mm 的聚乙烯塑料管的聚乙烯塑料管（也可用饮料吸管）截成小段做成安瓿管。每节大约（也可用饮料吸管）截成小段做成安瓿管。每节大约60mm60mm长长,一头用热合机封好。然后用牛皮纸包装进行一头用热合机封好。然后用牛皮纸包装进行121121下高压灭菌下高压灭菌3030分钟。分钟。（）保护剂10%的甘油水溶液进行121下高压灭菌30分钟可作为冷冻保护剂。用量为每安瓿瓶上留有5-10mm的空间,用无菌注射器从管底注入,以防产生气泡。随后，且无菌接种针从安瓿管口放入5-8块菌种块，热合封好安瓿。用记号笔在发瓿管外写上标签，最后在桌上用一定的力按压，以检查安瓿是否渗漏。（）液氮保藏把已做好的安瓿菌种管放入具有孔洞的小塑料瓶中（在塑料瓶的底部放一块铁片，使塑料瓶连同安瓿管能一起沉入液氮罐中），盖好瓶盖，在瓶盖上连接一条细绳并作记号，以便提出所需的菌种。把装有安瓿管的塑料瓶吊在液氮罐口上，使安瓿管缓慢地降温，大约30分钟后,把 按瓿管浸入液氮中进行长期保存。（）恢复培养如果拟取用液氮保存的菌种，可将（）恢复培养如果拟取用液氮保存的菌种，可将安瓿管取出后立即放入安瓿管取出后立即放入35-4035-40的温水中迅速解冻的温水中迅速解冻,为了防止污染为了防止污染,用用75%75%酒精洗安瓿管表面酒精洗安瓿管表面,表面干燥后表面干燥后,用火焰烧过的剪刀在安瓿的一端剪开用火焰烧过的剪刀在安瓿的一端剪开,用无菌接种针用无菌接种针把菌块移接至把菌块移接至PDAPDA培养基上培养基上,置置22-2422-24培养。培养。（三）保藏注意u用保种培养基u及时保藏（菌丝占斜面2/3）u最好换胶塞u用时活化u严防棉塞受潮二、菌种的复壮概念 确保或恢复菌种优良性能的措施（一）菌种的衰退形态改变、生长慢、出菇迟、抗逆性差、产量及质量下降表现根源内因 菌种的遗传物质发生了负变外因 传代过多，条件不适宜菌种发生退化的原因（）菌种混杂在菌种继代培养过程中，不同品种间（）菌种混杂在菌种继代培养过程中，不同品种间交叉感染，导致不同品种的菌丝体混杂在一起，菌丝交叉感染，导致不同品种的菌丝体混杂在一起，菌丝生长发生变异，导致原有品种生产性状的改变，常常生长发生变异，导致原有品种生产性状的改变，常常表现出产量下降、质量变劣等表现出产量下降、质量变劣等（）有害突变的发生（）有害突变的发生（）病毒的感染（）病毒的感染 菌种感染病毒后，病毒不仅会随着菌菌种感染病毒后，病毒不仅会随着菌丝体的扩大繁殖而增加，而且会通过带毒孢子传染下丝体的扩大繁殖而增加，而且会通过带毒孢子传染下一代。当菌种携带一定浓度的病毒粒子，在栽培中都一代。当菌种携带一定浓度的病毒粒子，在栽培中都会表现出明显减产，菇质量下降等退化现象。会表现出明显减产，菇质量下降等退化现象。（二）复壮法1.繁殖交替法2.经常改变培养条件3.转管时只取尖端菌丝组织分离母种孢子分离再生母种栽培子实体(三）防止退化措施（1）防止菌种间的混杂（2）减少扩接（3）防止基因突变 低温保藏菌种，一般宜在0-4。（4）分离纯化（5）菌种复壮（6）活化移植（7）更新养分（8）创造菌种生长良好营养条件和外界环境（9）防止病毒感染 本章主要内容1.菌种类型（母种、原种、栽培种的作用）2.高压锅、接种箱、接种室的构造及使用3.培养基（PDA、颗粒培养基的配制方法）4.接种（无菌操作、各级菌种的接种法）5.菌种保藏（目的与原理、3种方法）6.菌种复壮（简易复壮法、防衰措施）1.设计菌种厂的依据是什么？2.怎样防止菌种的衰退？3.怎样判断菌种的衰退？4.自然基质保藏法是怎样进行的？有何优缺点？1.黄毅.食用菌栽培.北京：高等教育出社，19982.中国食用菌菌种网http:/作业题1.栽培时为何不用母种作菌种？2.母种扩成原种的目的是什么？3.怎样使用接种箱？4.菌种的基本要求是什么？思考、讨论题课外学习资源本章参考资料1.中国食用菌杂志.云南：中国食用菌编辑部2004.16，2005.162.杨新美.食用菌栽培学.第6章.北京：中国农业出版社，19963.张金霞.食用菌生产技术.第48章.北京：中国标准出版社，19994.黄毅.食用菌栽培.第二版.上册.第4章.北京：高等教育出版社，19985.张松.食用菌学.第6章.广州：华南理工大学出版社，20006.中国食用菌菌种网http:/7.中国食用菌信息网http:/