分光光度法同时测定维生素C和维生素E课件

中级化学实验（中级化学实验（）江苏大学化学化工学院江苏大学化学化工学院教材：中级化学实验（雷群芳主编）教材：中级化学实验（雷群芳主编）中级化学实验（）江苏大学化学化工学1实验一实验一分光光度法同时测定分光光度法同时测定维生素维生素C和和维生素维生素E一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理三、仪器与试剂三、仪器与试剂四、实验步骤四、实验步骤五、数据记录及处理五、数据记录及处理六、思考题六、思考题实验一 分光光度法同时测定维生素C和维生素E一、实验目的2一、实验目的一、实验目的（1）掌握）掌握UT-1800紫外紫外-可见分光度计的使用。可见分光度计的使用。（2）学会在紫外光谱区同时测定双组分体系）学会在紫外光谱区同时测定双组分体系-维生素维生素C和维生素和维生素E。一、实验目的（1）掌握UT-1800紫外-可见分光度计的使3二、实验原理二、实验原理 维维生生素素C（抗抗坏坏血血酸酸）和和维维生生素素E（生生育育酚酚）起起抗抗氧氧剂剂作作用用，即即它它们们在在一一定定时时间间内内能能防防止止油油酯酯变变酪酪。两两者者结结合合在在一一起起比比单单独独使使用用的的效效果果更更佳佳，因因为为它它们们在在抗抗氧氧剂剂性性能能方方面面是是“协协同同的的”。因因此此，它它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。抗抗坏坏血血酸酸是是水水溶溶性性的的，生生育育酚酚是是酯酯溶溶性性的的，但但它它们们都都能能溶溶于于无无水水乙乙醇，因此，能用在同一溶液中测定双组分的原理来测定它们。醇，因此，能用在同一溶液中测定双组分的原理来测定它们。二、实验原理 维生素C（抗坏血酸）和维生素E（生育酚4三、试剂和仪器三、试剂和仪器 试剂：试剂：抗坏血酸：称抗坏血酸：称0.0132g抗坏血酸，溶于无水乙醇中，并用无水抗坏血酸，溶于无水乙醇中，并用无水乙醇定容于乙醇定容于1000mL（7.5010-5mol/L）；生育酚：称）；生育酚：称0.0488g生育酚生育酚溶于无水乙醇中，并用无水乙醇定容于溶于无水乙醇中，并用无水乙醇定容于1000mL（1.1310-4mol/L）；）；无水乙醇。无水乙醇。仪器：仪器：UT-1800紫外紫外-可见分光光度计；石英比色皿可见分光光度计；石英比色皿2只；只；50mL容量瓶容量瓶9只，；只，；10mL吸量管吸量管2只。只。三、试剂和仪器 试剂：抗坏血酸：称0.0132g抗坏血酸，溶5四、实验步骤四、实验步骤1.配制标准溶液配制标准溶液（1）分别取抗坏血酸贮备液）分别取抗坏血酸贮备液4.00、6.00、8.00、10.00mL于于4只只50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。（2）分别取生育酚贮备液）分别取生育酚贮备液4.00、6.00、8.00、10.00mL于于4只只50mL容容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。2.绘制吸收光谱绘制吸收光谱以无水乙醇为参比，在以无水乙醇为参比，在320220nm范围测绘出抗坏血酸和生育酚的范围测绘出抗坏血酸和生育酚的吸收光谱，并确定吸收光谱，并确定1和和2。四、实验步骤1.配制标准溶液 64.未知液的测定未知液的测定取取未未知知液液5.00mL于于50mL容容量量瓶瓶中中，用用无无水水乙乙醇醇稀稀释释至至刻刻度度，摇摇匀。在匀。在1和和2分别测其吸光度。分别测其吸光度。3.绘制标准曲线绘制标准曲线以以无无水水乙乙醇醇为为参参比比，在在波波长长1和和2，分分别别测测定定步步骤骤1配配制制的的8个标准溶液的吸光度。个标准溶液的吸光度。4.未知液的测定3.绘制标准曲线7五、数据记录与处理五、数据记录与处理1.绘制抗坏血酸和生育酚的吸收光谱，确定绘制抗坏血酸和生育酚的吸收光谱，确定1和和22.分分 别别 绘绘 制制 抗抗 坏坏 血血 酸酸 和和 生生 育育 酚酚 在在 1和和 2时时的的4条条标标准准曲曲线线，求求出出4条条直直线线的的斜斜率率，即即 x1、y1、x2、y2。3.计算未知液中抗坏血酸和生育酚的浓度。计算未知液中抗坏血酸和生育酚的浓度。五、数据记录与处理绘制抗坏血酸和生育酚的吸收光谱，确定1和89求解联立方程组就能得出各组分的含量求解联立方程组就能得出各组分的含量.A2=x2bcxy2bcy返回节返回节休息 A1=x1bcxy1bcy9求解联立方程组就能得出各组分的含量.A2=x2b9六、思考题六、思考题1.写写出出抗抗坏坏血血酸酸和和生生育育酚酚的的结结构构式式，并并解解释释一一个个是是“水水溶溶性性”，一个是，一个是“酯溶性酯溶性”的原因。的原因。2.2.使使用用本本方方法法测测定定抗抗坏坏血血酸酸和和生生育育酚酚是是否否灵灵敏敏？解解释释其其原原因。因。六、思考题写出抗坏血酸和生育酚的结构式，并解释一个是“水溶性10实验二实验二 萃取分光光度法测定萃取分光光度法测定阴离子表面活性剂的浓度阴离子表面活性剂的浓度一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理三、仪器与试剂三、仪器与试剂四、实验步骤四、实验步骤五、数据记录及处理五、数据记录及处理六、注意事项六、注意事项实验二 萃取分光光度法测定一、实验目的11一、实验目的一、实验目的（1）熟悉分光光度计的使用方法和分光光度定量方法。）熟悉分光光度计的使用方法和分光光度定量方法。（2）学习萃取分光光度法测定阴离子表面活性剂的原理。）学习萃取分光光度法测定阴离子表面活性剂的原理。（3）了解分光光度分析中常见的干扰以及提高测定选择性的方法。）了解分光光度分析中常见的干扰以及提高测定选择性的方法。一、实验目的（1）熟悉分光光度计的使用方法和分光光度定量方法12二、实验原理二、实验原理 二二乙乙二二胺胺合合铜铜分分子子体体积积较较小小，电电荷荷密密度度较较大大，疏疏水水性性较较小小，因因而而该该阳阳离离子子配配合合物物与与水水体体中中的的小小体体积积阴阴离离子子形形成成离离子子对对化化合合物物的的能能力力较较小小，它它只只能能将将分分子子体体积积较较大大的的长长链链阴阴离离子子表表面面活活性性剂剂定定量量萃萃取取入入有有机机相相中中，因因而而受受到到的的干干扰扰大大大大减减小小。但但由由于于该该配配合合物物不不含含有有离离域域键键，其其与与阴阴离离子子表表面面活活性性剂剂形形成成的的离离子子对对化化合合物物摩摩尔尔吸吸光光系系数数很很小小，测定的灵敏度较小。测定的灵敏度较小。二、实验原理 二乙二胺合铜分子体积较小，电荷密度较大，疏水13为为了了克克服服这这一一缺缺点点，本本实实验验用用二二乙乙二二胺胺合合铜铜将将阴阴离离子子表表面面活活性性剂剂萃萃取取入入有有机机相相后后，在在有有机机相相（三三氯氯甲甲烷烷）中中加加入入1-（2-吡吡啶啶偶偶氮氮）-2-萘萘酚酚（PAN）试试剂剂作作为为显显色色剂剂，该该试试剂剂能能与与铜铜离离子子形形成成更更稳稳定定的的且且摩摩尔尔吸吸光光系系数数较较大大的的黄黄色色配配合合物物，在在三三氯氯甲甲烷烷液液中中该该PAN-Cu配配合合物物的的=4.1104，max=560nm，因因而而方方法法的的灵灵敏敏度度也也大大为为提提高高。由由于于铜铜离离子子的的浓浓度度与与阴阴离离子子表表面面活活性性的的浓浓度度存存在在定定量量关关系系，因因而而测测得得了了铜铜的的浓浓度也即间接测定了阴离子表面活性剂的浓度。度也即间接测定了阴离子表面活性剂的浓度。为了克服这一缺点，本实验用二乙二胺合铜将阴离子表面14三、仪器与试剂三、仪器与试剂仪仪器器：分分光光光光度度计计；250mL分分液液漏漏斗斗；200mL量量筒筒；移移液液管管；分分析析天平；离心机。天平；离心机。试试剂剂：阴阴离离子子表表面面活活性性剂剂标标准准溶溶液液（1000mgL-1十十二二烷烷基基苯苯磺磺酸酸钠钠标标准准储储备备液液）；二二乙乙二二胺胺合合铜铜试试剂剂：称称取取62.3g硫硫酸酸铜铜晶晶体体和和49.6g硫硫酸酸铵铵溶溶解解于于蒸蒸馏馏水水中中，加加入入45.1g(50mL)乙乙二二胺胺,然然后后用用蒸蒸馏馏水水稀稀释释至至1L，该该试试剂剂可可以以稳稳定定数数个个月月；1-（2-吡吡啶啶偶偶氮氮）-2-萘萘酚酚（PAN，AR）。）。三、仪器与试剂仪器：分光光度计；250mL分液漏斗；200m15四、实验步骤四、实验步骤（1）被测试样溶液的配制被测试样溶液的配制 用用量量筒筒量量取取150mL含含有有阴阴离离子子表表面面活活性性剂剂的的水水样样，置置于于250mL分分液液漏漏斗斗中中，将将水水样样的的pH调调至至59。加加入入10mL乙乙二二胺胺合合铜铜剂剂及及20mL三三氯氯甲甲烷烷，振振荡荡约约1min，在在分分液液漏漏斗斗中中静静置置，直直至至有有机机相相与与水水分分离离。吸吸取取约约13mL的的三三氯氯甲甲烷烷层层至至15mL的的离离心心管管中中，盖盖上上盖盖后后，2500rmin-1的的转转速速下下，离离心心分分离离5min，用用移移液液管管吸吸取取10mL上上层层清清液液于于20mL比比色色管管中中（注注意意溶溶液液必必须须澄澄清清）。离离心心管管中中残残留留的的水水珠珠可可用用吸吸水水纸纸擦擦干干。在在比比色色管管中中加加入入1mLPAN试试剂剂，盖盖上上比比色色管管塞塞子子后后，振振荡荡，然然后后将将显显色色后后的的溶溶液液用用1cm比比色色皿皿在在560nm下下测测定定吸吸光光度度，参参比比液液用用10：1的的三三氯甲烷乙醇混合液。氯甲烷乙醇混合液。四、实验步骤（1）被测试样溶液的配制 用量筒量取1516（2 2）标准曲线的制作）标准曲线的制作 取取1.00mL1000mgL-1的的LAS标准储备液置于标准储备液置于100mL容量瓶中。容量瓶中。用蒸馏水稀释至刻度，得用蒸馏水稀释至刻度，得10mgL-1LAS标准溶液。分别吸取标准溶液。分别吸取4.00mL、8.00mL、12.00mL、16.00mL、20.00mL该标准溶液于该标准溶液于100mL容量瓶中，得容量瓶中，得0.4mgL-1、0.8mgL-1、1.2mgL-1、1.6mgL-1、2.0mgL-1LAS标准溶液。分别将上述标准溶液置于标准溶液。分别将上述标准溶液置于250mL分液漏分液漏斗中，并用斗中，并用50mL蒸馏水洗涤各容量瓶，与分液漏斗中的标准溶液蒸馏水洗涤各容量瓶，与分液漏斗中的标准溶液合并，按上述水样测定同样方法进行分析测定。合并，按上述水样测定同样方法进行分析测定。（2）标准曲线的制作 取1.00 mL1000 mg17（3 3）空白值的测定）空白值的测定 用用150mL蒸蒸馏馏水水代代替替水水样样，按按步步骤骤12同同样样方方法法测测定定空空白白值值。空空白白值的吸光度值应在值的吸光度值应在0.0000.001之间。之间。（4 4）样品的测定）样品的测定将将样样品品的的吸吸光光度度值值减减去去空空白白值值后后，所所得得的的吸吸光光度度值值与与标标准准曲曲线线对对照，照，计算水样中阴离子表面活性剂的浓度。计算水样中阴离子表面活性剂的浓度。（3）空白值的测定 用150mL蒸馏水代替水样，18五、五、数据处理数据处理 测测得得标标准准溶溶液液的的吸吸光光度度后后，以以吸吸光光度度对对LAS浓浓度度作作标标准准曲曲线线。同同时时测测定定被被测测试试样样溶溶液液的的吸吸光光度度。从从标标准准曲曲线线上上查查出出待待测测试试液液LAS的的浓度，再计算出原试液中浓度，再计算出原试液中LAS浓度。浓度。五、数据处理 测得标准溶液的吸光度后，以吸光度对LAS浓19六、注意事项六、注意事项1.注意吸量管的使用，准确吸取标准溶液和试液的体积；注意吸量管的使用，准确吸取标准溶液和试液的体积；2.启开仪器的电源开关，调波长选择钮至所需波长处；启开仪器的电源开关，调波长选择钮至所需波长处；3.要注意保护比色皿的光玻璃面；要注意保护比色皿的光玻璃面；4.用用待待测测液液将将吸吸收收池池洗洗涤涤3次次，然然后后用用擦擦镜镜纸纸轻轻轻轻擦擦干干净净吸吸收收池池外外表表。测测量量时时注注意意将将盛盛放放待待测测液液与与空空白白试试液液的的吸吸收收池池须须方方向向一一致放入吸收池架，吸收池架应恰好在凹槽位置；致放入吸收池架，吸收池架应恰好在凹槽位置；5.测测量量完完毕毕，必必须须及及时时切切断断电电源源，开开关关放放在在“关关”。吸吸收收池池用用蒸蒸馏水洗干净，登记使用情况，盖好防护罩。馏水洗干净，登记使用情况，盖好防护罩。六、注意事项注意吸量管的使用，准确吸取标准溶液和试液的体积；20