细菌的生理生化反应培训课件

生化反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别生化反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。一些在形态和其它方面不易区别的微生物。糖酵解试验糖酵解试验 过氧化氢酶试验过氧化氢酶试验淀粉水解试验淀粉水解试验 V-PV-P试验试验甲基红（甲基红（Methyl RedMethyl Red）试验试验靛基质（靛基质（ImdoleImdole）试验试验枸椽酸盐试验：枸椽酸盐试验：尿素酶（尿素酶（UreaseUrease）试验试验硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验三糖铁（三糖铁（TSITSI）琼脂试验琼脂试验动力试验动力试验APIAPI系列系列VITEKVITEK全自动化微生物鉴定系统全自动化微生物鉴定系统7/16/20241细菌的生理生化反应 原理原理：细菌含有发酵糖（醇、苷）的酶分解糖类产酸、产：细菌含有发酵糖（醇、苷）的酶分解糖类产酸、产气、或仅产酸。气、或仅产酸。培养基培养基：含有：含有0.5%0.5%-1%-1%的糖（醇、苷）的液体、半固体、的糖（醇、苷）的液体、半固体、固体、或微量生化管。固体、或微量生化管。方法方法：纯菌种接种培养基，要求的温度，数小时至两周，纯菌种接种培养基，要求的温度，数小时至两周，微量管注意保持湿润，以免干燥。微量管注意保持湿润，以免干燥。结果结果：能分解糖（醇、苷）类产酸时，培养基中的指示剂：能分解糖（醇、苷）类产酸时，培养基中的指示剂呈酸性反应。若能产气时，培养基可出现开裂气泡等现象呈酸性反应。若能产气时，培养基可出现开裂气泡等现象 意义意义：肠杆菌科尤为重要：肠杆菌科尤为重要7/16/20242细菌的生理生化反应 根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发酵培养基中加入为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂指示剂溴甲酚紫溴甲酚紫（即（即B.C.PB.C.P指示剂，其指示剂，其pHpH在在5.25.2以下呈黄色，以下呈黄色，pHpH在在6.86.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气，可在发酵培养基中放入倒置判断。是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管杜氏小管观观察。察。7/16/20243细菌的生理生化反应 方法方法：取糖发酵管培养基，此时培养基应呈澄清、紫色，倒取糖发酵管培养基，此时培养基应呈澄清、紫色，倒立小管内无气泡，接种细菌后置立小管内无气泡，接种细菌后置3737温箱培养温箱培养18182424小时，小时，观察结果。观察结果。结果结果：1 1、确定细菌是否生长、确定细菌是否生长2 2、产酸，则培养基指示剂（溴甲酚紫）变为黄色，以、产酸，则培养基指示剂（溴甲酚紫）变为黄色，以“+”“+”表示。表示。3 3、产酸又产气，则培养基除变黄外，在倒置的小管中有气、产酸又产气，则培养基除变黄外，在倒置的小管中有气泡，用泡，用“”表示。表示。4 4、不发酵糖类，培养基仍为紫色，小管内无气泡，以、不发酵糖类，培养基仍为紫色，小管内无气泡，以“-“-”表示。表示。7/16/20244细菌的生理生化反应大肠杆菌大肠杆菌 伤寒杆菌伤寒杆菌 副伤寒杆菌副伤寒杆菌葡萄糖葡萄糖+乳糖乳糖-7/16/20245细菌的生理生化反应葡萄糖：葡萄糖：+-麦芽糖：麦芽糖：-+7/16/20246细菌的生理生化反应甘露醇：甘露醇：+-鼠李糖：鼠李糖：-+7/16/20247细菌的生理生化反应 原理原理：细菌分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，：细菌分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；可以进行无氧降解的，称为发酵型；不分解葡萄称为氧化型；可以进行无氧降解的，称为发酵型；不分解葡萄糖的称为产碱型糖的称为产碱型 培养基培养基：HLHL二氏培养基二氏培养基 方法方法：待测菌同时接种两只：待测菌同时接种两只HLHL培养基，其中一只滴加无菌培养基，其中一只滴加无菌的液体石蜡，高度不少于的液体石蜡，高度不少于1 1cmcm，3535培养培养4848h h或更长或更长 结果结果：两只均无变化为产碱型；两只均产酸为发酵型；仅：两只均无变化为产碱型；两只均产酸为发酵型；仅不加石蜡的产酸为氧化型不加石蜡的产酸为氧化型 意义意义：肠杆菌科与非发酵菌的鉴别；葡萄球菌与微球菌的：肠杆菌科与非发酵菌的鉴别；葡萄球菌与微球菌的鉴别，前者为发酵型，后者为氧化型鉴别，前者为发酵型，后者为氧化型7/16/20248细菌的生理生化反应 原理原理：有的细菌可以产生：有的细菌可以产生半乳糖苷酶，分解邻半乳糖苷酶，分解邻-硝基酚硝基酚-半乳糖苷生成黄色的邻半乳糖苷生成黄色的邻-硝基酚硝基酚 方法方法：从：从KIAKIA上取菌，于上取菌，于0.250.25MLML无菌生理盐水中制菌悬液，无菌生理盐水中制菌悬液，加甲苯一滴，使酶释放。加甲苯一滴，使酶释放。37 37 水浴水浴5 5min,min,加加0.250.25mlONPGmlONPG试剂，试剂，水浴水浴2020min-3hmin-3h观察结果观察结果 结果结果：呈现黄色为阳性，一般：呈现黄色为阳性，一般20-3020-30minmin内显色内显色 意义意义：迅速及迟缓发酵乳糖的细菌为阳性，不发酵乳糖的：迅速及迟缓发酵乳糖的细菌为阳性，不发酵乳糖的细菌为阴性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴细菌为阴性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴 注意注意：该试验不一定与分解乳糖相一致，决定于细菌产生：该试验不一定与分解乳糖相一致，决定于细菌产生的酶及其活性的酶及其活性7/16/20249细菌的生理生化反应 原理原理：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，后者：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，后者与培养基中的枸橼酸铁的二价铁离子反应生成黑色化合物，与培养基中的枸橼酸铁的二价铁离子反应生成黑色化合物，使培养基呈黑色使培养基呈黑色 方法方法：将待测菌接种于七叶苷培养基，培养后观察结果：将待测菌接种于七叶苷培养基，培养后观察结果 结果结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性：培养基变黑为阳性，不变为阴性 意义意义：D D群链球菌与其他链球菌的区别，群链球菌与其他链球菌的区别，前者为阳性；肺炎克雷伯、阴沟肠杆菌多前者为阳性；肺炎克雷伯、阴沟肠杆菌多阳性阳性+-7/16/202410细菌的生理生化反应 原理原理：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后者进一步生成甲酸、乙酸、乳：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后者进一步生成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的酸等，使培养基的PHPH降至降至4.54.5以下，加入甲基红试剂后显红色即阳性。若以下，加入甲基红试剂后显红色即阳性。若产酸量少，或进一步转化为其他物质，则培养基的产酸量少，或进一步转化为其他物质，则培养基的PHPH仍在仍在6.26.2以上，加入以上，加入甲基红试剂后显黄色，为阴性甲基红试剂后显黄色，为阴性 培养基：培养基：葡萄糖蛋白胨水葡萄糖蛋白胨水 方法方法：待测菌接种于培养基，：待测菌接种于培养基，2-42-4天后，天后，加入甲基红试剂，观察结果加入甲基红试剂，观察结果 结果结果：呈现红色为阳性，橘红色为弱阳：呈现红色为阳性，橘红色为弱阳 性，黄色为阴性性，黄色为阴性 意义意义：大肠、沙门、志贺、变形、枸橼酸：大肠、沙门、志贺、变形、枸橼酸 杆菌、等为阳性；肠杆菌属、哈夫尼亚菌属为阴性杆菌、等为阳性；肠杆菌属、哈夫尼亚菌属为阴性7/16/202411细菌的生理生化反应 原理原理：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后者脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后者脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境中被氧化为二乙酰，进而与培养基中蛋白胨内精酰甲基甲醇在碱性环境中被氧化为二乙酰，进而与培养基中蛋白胨内精氨酸中的胍基作用，生成红色化合物，即为氨酸中的胍基作用，生成红色化合物，即为V-PV-P试验阳性。试验阳性。奈酚可加速奈酚可加速此反应此反应 培养基：培养基：葡萄糖蛋白胨水葡萄糖蛋白胨水 方法方法：待测菌接种于培养基，：待测菌接种于培养基，35 35 48h 48h，加入甲液（加入甲液（6%6%奈酚酒精溶液）奈酚酒精溶液）和乙液（和乙液（40%40%KOHKOH溶液）溶液）结果结果：2020minmin内出现红色为阳性，如内出现红色为阳性，如 无红色，且于无红色，且于35 35 4h4h 后仍如故即为后仍如故即为 阴性阴性 意义意义：本试验常与甲基红一起试验，前者阳性则后者多阴性：本试验常与甲基红一起试验，前者阳性则后者多阴性7/16/202412细菌的生理生化反应 原理原理：某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸产生吲哚，：某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸产生吲哚，当加入吲哚试剂当加入吲哚试剂-柯氏试剂（对二氨基苯甲醛）后则形成红色的玫瑰吲哚柯氏试剂（对二氨基苯甲醛）后则形成红色的玫瑰吲哚 培养基：培养基：蛋白胨水蛋白胨水 方法方法：待测菌接种于培养基，：待测菌接种于培养基，35 35 培养培养 24-48 24-48小时，沿试管壁缓慢加入吲哚试剂小时，沿试管壁缓慢加入吲哚试剂 结果结果：于两者接触面出现红色为阳性，无：于两者接触面出现红色为阳性，无 色为阴性色为阴性 意义意义：肠杆菌科细菌的鉴定；大肠杆菌、产酸克雷伯为阳性：肠杆菌科细菌的鉴定；大肠杆菌、产酸克雷伯为阳性 试剂试剂：柯氏试剂（对二氨基苯甲醛）与欧氏试剂的区别：前者含戊醇，：柯氏试剂（对二氨基苯甲醛）与欧氏试剂的区别：前者含戊醇，后者含酒精，都含浓盐酸，前者主要成分为后者后者含酒精，都含浓盐酸，前者主要成分为后者1010倍，后者灵敏度更高倍，后者灵敏度更高玫瑰红色玫瑰红色7/16/202413细菌的生理生化反应 原理原理：细菌产生明胶酶，能使明胶分解为氨基酸，从：细菌产生明胶酶，能使明胶分解为氨基酸，从而失去凝固力，半固体变为液体而失去凝固力，半固体变为液体 方法方法：待测菌接种于明胶培养基，：待测菌接种于明胶培养基，22 22 培养培养7 7天。若天。若用用35 35 孵育，因明胶在此温度下自行液化，故在观察前孵育，因明胶在此温度下自行液化，故在观察前先置先置4 4 冰箱冰箱3030minmin再观察再观察 结果结果：培养基呈液化状态为阳性：培养基呈液化状态为阳性 意义意义：多数假单胞菌能液化明胶，肠杆菌科细菌如：多数假单胞菌能液化明胶，肠杆菌科细菌如：沙雷菌、变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶沙雷菌、变形杆菌、阴沟杆菌等可液化明胶7/16/202414细菌的生理生化反应 原理原理：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸，产生硫化：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸，产生硫化氢，后者遇亚铁离子或铅则形成黑褐色的沉淀。氢，后者遇亚铁离子或铅则形成黑褐色的沉淀。培养基培养基：醋酸铅培养基：醋酸铅培养基 方法方法：待测菌接种于醋酸铅培养基，：待测菌接种于醋酸铅培养基，35 35 培养培养24-4824-48小时观察结果小时观察结果 结果结果：培养基变黑为阳性，不变为：培养基变黑为阳性，不变为 阴性阴性 意义意义：沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆：沙门菌属、爱德华菌属、亚利桑那菌属、枸橼酸杆菌属、变形杆菌属、腐败假单胞菌为阳性菌属、变形杆菌属、腐败假单胞菌为阳性7/16/202415细菌的生理生化反应 原理原理：某些细菌具有尿素分解酶，能分：某些细菌具有尿素分解酶，能分解尿素产生大量的氨，使培养基呈碱性解尿素产生大量的氨，使培养基呈碱性 培养基：培养基：尿素培养基尿素培养基 方法方法：待测菌接种于培养基，：待测菌接种于培养基，35 35 培培养养18-2418-24小时观察结果小时观察结果 结果结果：培养基呈碱性，使酚红指示剂变：培养基呈碱性，使酚红指示剂变红为阳性，不变为阴性红为阳性，不变为阴性 意义意义：变形杆菌、摩根氏、雷氏普罗维：变形杆菌、摩根氏、雷氏普罗维登氏、克雷伯氏为阳性登氏、克雷伯氏为阳性1 未接种2 尿素酶阳性3 尿素酶阴性7/16/202416细菌的生理生化反应 原理原理：某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸：某些细菌可产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基形成苯丙酮酸，加入三氯化铁试剂后产生绿色反脱去氨基形成苯丙酮酸，加入三氯化铁试剂后产生绿色反应应 培养基培养基：苯丙氨酸琼脂培养基：苯丙氨酸琼脂培养基 方法方法：待测菌接种于培养基，：待测菌接种于培养基，35 35 培养培养18-2418-24小时，小时，加加10%10%三氯化铁试剂三氯化铁试剂3-43-4滴，观察结果滴，观察结果 结果结果：肠杆菌科变形杆菌、普罗维登氏菌、摩根氏菌：肠杆菌科变形杆菌、普罗维登氏菌、摩根氏菌阳性阳性7/16/202417细菌的生理生化反应 原理原理：具有氨基酸脱羧酶的细菌，能分解氨基酸使其：具有氨基酸脱羧酶的细菌，能分解氨基酸使其脱羧生成胺和二氧化碳，使培养基变碱，使指示剂显色脱羧生成胺和二氧化碳，使培养基变碱，使指示剂显色 培养基培养基：氨基酸脱羧酶培养基和氨基酸对照培养基：氨基酸脱羧酶培养基和氨基酸对照培养基 方法方法：待测菌接种于培养基，并加入无菌液体石蜡，：待测菌接种于培养基，并加入无菌液体石蜡，35 35 培养培养18-2418-24小时观察结果小时观察结果 结果结果：对照管应呈黄色，测定管呈紫色，（指示剂为：对照管应呈黄色，测定管呈紫色，（指示剂为溴甲酚紫）测定管呈黄色为阴性；若对照管呈紫色则试验溴甲酚紫）测定管呈黄色为阴性；若对照管呈紫色则试验无意义无意义 意义意义：肠杆菌科细菌的鉴定：肠杆菌科细菌的鉴定7/16/202418细菌的生理生化反应 原理原理：某些细菌能以枸橼酸盐为唯一碳源，可在枸橼酸盐：某些细菌能以枸橼酸盐为唯一碳源，可在枸橼酸盐培养基上生长，分解枸橼酸盐，使培养基变碱培养基上生长，分解枸橼酸盐，使培养基变碱 培养基：培养基：枸橼酸盐培养基枸橼酸盐培养基 方法方法：待测菌接种于培养基：待测菌接种于培养基35 35 培养培养18-2418-24小时，观察结果小时，观察结果 结果结果：培养基中的溴麝香草酚兰：培养基中的溴麝香草酚兰 指示剂由淡绿色变为深蓝色为阳性，指示剂由淡绿色变为深蓝色为阳性，不变色为阴性不变色为阴性 意义意义：克雷伯菌属、沙门菌属常为阳性：克雷伯菌属、沙门菌属常为阳性7/16/202419细菌的生理生化反应 原理原理：有的细菌可利用丙二酸盐为唯一碳源，将其分解生：有的细菌可利用丙二酸盐为唯一碳源，将其分解生成碳酸钠，使培养基变碱成碳酸钠，使培养基变碱 试剂：试剂：1%1%盐酸四甲基对苯二胺或盐酸四甲基对苯二胺或1%1%盐酸二甲基对苯二胺盐酸二甲基对苯二胺 方法方法：待测菌接种于培养基：待测菌接种于培养基35 35 培养培养18-2418-24小时，观察结小时，观察结果果 结果结果：培养基由淡绿变为深蓝为阳性，无变化则为阴性：培养基由淡绿变为深蓝为阳性，无变化则为阴性 意义意义：肠杆菌科属间鉴别：肠杆菌科属间鉴别7/16/202420细菌的生理生化反应 原理原理：细胞色素氧化酶是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸：细胞色素氧化酶是细胞色素呼吸酶系统的最终呼吸酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素酶。具有氧化酶的细菌，首先使细胞色素C C氧化，再由氧化型氧化，再由氧化型细胞色素细胞色素C C使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物使对苯二胺氧化，生成有色的醌类化合物 培养基：培养基：丙二酸盐培养基丙二酸盐培养基 方法方法：菌落法、滤纸法、试剂纸片法。前二者浪费试剂，：菌落法、滤纸法、试剂纸片法。前二者浪费试剂，后者节省后者节省 结果结果：1010秒内呈深紫红色为阳性秒内呈深紫红色为阳性 意义意义：肠杆菌科细菌与假单胞菌的区别，前者阴性，后者：肠杆菌科细菌与假单胞菌的区别，前者阴性，后者多阳性奈瑟菌属、莫拉菌属也为阳性多阳性奈瑟菌属、莫拉菌属也为阳性7/16/202421细菌的生理生化反应 原理原理：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和：具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢生成水和氧，出现气泡氧，出现气泡 试剂试剂：3%3%过氧化氢溶液过氧化氢溶液 方法方法：取菌置于洁净的试管或玻片上，然：取菌置于洁净的试管或玻片上，然 后滴加后滴加3%3%过氧化氢数滴，观察结果过氧化氢数滴，观察结果 结果结果：出现大量气泡的为阳性，不产生气：出现大量气泡的为阳性，不产生气 泡的为阴性泡的为阴性 意义意义：用于革兰氏阳性球菌的鉴别，葡萄：用于革兰氏阳性球菌的鉴别，葡萄 球菌和微球菌为阳性，链球菌和肠球菌为球菌和微球菌为阳性，链球菌和肠球菌为 阴性，肠球菌多假阳性阴性，肠球菌多假阳性7/16/202422细菌的生理生化反应 原理原理：硝酸盐还原成亚硝酸盐和氨，氨再转化为氨基酸和：硝酸盐还原成亚硝酸盐和氨，氨再转化为氨基酸和其他含氮化合物；硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸系统中的其他含氮化合物；硝酸盐或亚硝酸盐代替氧作为呼吸系统中的终末受氢体。有的细菌能使硝酸盐还原成亚硝酸盐，有的能使终末受氢体。有的细菌能使硝酸盐还原成亚硝酸盐，有的能使其还原为亚硝酸盐和离子铵，有的能使其还原为氮其还原为亚硝酸盐和离子铵，有的能使其还原为氮 培养基培养基：硝酸盐培养基：硝酸盐培养基 方法方法：待测菌接种于培养基，：待测菌接种于培养基，35 35 培养培养18-2418-24小时，将甲小时，将甲乙液分别加入培养基，立即观察结果乙液分别加入培养基，立即观察结果 结果结果：出现红色为阳性：出现红色为阳性7/16/202423细菌的生理生化反应 意义意义：肠杆菌科为阳性；铜绿、嗜麦芽能：肠杆菌科为阳性；铜绿、嗜麦芽能产生氮气；链球菌肠球菌阴性，葡萄球菌阳性产生氮气；链球菌肠球菌阴性，葡萄球菌阳性 注意注意：若加入试剂后无反应，可能是：若加入试剂后无反应，可能是硝硝酸盐没有被还原，试验阴性酸盐没有被还原，试验阴性硝酸盐被还原为硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而致假阴性，此时要加入少氨和氮等其他产物而致假阴性，此时要加入少许锌粉，若出现红色则为阴性，不产生红色则许锌粉，若出现红色则为阴性，不产生红色则为假阴性，实际为阳性为假阴性，实际为阳性没有颜色变化：没有颜色变化：加入少量锌粉加入少量锌粉 变红阴性（硝酸盐未被还原）变红阴性（硝酸盐未被还原）不变阳性（亚硝酸盐已经分解成氨和氮）不变阳性（亚硝酸盐已经分解成氨和氮）7/16/202424细菌的生理生化反应 原理原理：G G+菌的细胞壁在稀碱溶液中易于破裂，释放出未断裂的菌的细胞壁在稀碱溶液中易于破裂，释放出未断裂的DNADNA螺旋，使氢氧化钾菌悬液呈现粘性，可用接种环搅拌后拉出粘丝螺旋，使氢氧化钾菌悬液呈现粘性，可用接种环搅拌后拉出粘丝来，而来，而 G G+菌在稀碱溶液中没有上述变化。菌在稀碱溶液中没有上述变化。方法方法：取：取1 1滴滴 40 40g/L KOH g/L KOH 水溶液（应新鲜配制）于洁净玻片上，水溶液（应新鲜配制）于洁净玻片上，取新鲜菌落少许，与取新鲜菌落少许，与 KOH KOH 水溶液搅拌混匀，并每隔几秒钟上提接种水溶液搅拌混匀，并每隔几秒钟上提接种环，观察能否拉出粘丝。环，观察能否拉出粘丝。结果结果：用接种环拉出粘丝者为阳性，仍为混悬液者为阴性。：用接种环拉出粘丝者为阳性，仍为混悬液者为阴性。应用应用：主要用于：主要用于 G G-菌菌与易脱色的与易脱色的 G G+菌的鉴别。大多数菌的鉴别。大多数 G G-菌菌于于5 5-10s-10s内出现阳性反应，有的则需内出现阳性反应，有的则需3030-45s-45s，假单胞菌、无色杆菌、黄假单胞菌、无色杆菌、黄杆菌、产碱杆菌、莫拉菌等大多数在杆菌、产碱杆菌、莫拉菌等大多数在1010s s内呈阳性，不动杆菌、莫拉内呈阳性，不动杆菌、莫拉菌反应较慢，大多数菌株在菌反应较慢，大多数菌株在6060s s内出现阳性，而内出现阳性，而 G G+菌在菌在6060s s以后仍以后仍为阴性。为阴性。7/16/202425细菌的生理生化反应 某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖某些细菌可以产生分解淀粉的酶，把淀粉水解为麦芽糖或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。或葡萄糖。淀粉水解后，遇碘不再变蓝色。7/16/202426细菌的生理生化反应 原理原理：某些细菌产生：某些细菌产生DNADNA酶，可使长链酶，可使长链DNADNA水解，后者水解，后者可被酸沉淀，长链可被酸沉淀，长链DNADNA水解后形成的寡核苷酸链则溶于酸，水解后形成的寡核苷酸链则溶于酸，所以在平板上加入酸后会在菌落周围形成透明环所以在平板上加入酸后会在菌落周围形成透明环 培养基培养基：0.2%0.2%DNADNA琼脂平板琼脂平板 方法方法：点种被测菌于上述平板，：点种被测菌于上述平板，35 35 培养培养18-2418-24小时；小时；用用1 1mol/Lmol/L盐酸覆盖平板，观察结果盐酸覆盖平板，观察结果 结果结果：菌落周围出现透明环为阳性：菌落周围出现透明环为阳性 意义意义：金黄色葡萄球菌、沙雷氏菌、变形杆菌阳性：金黄色葡萄球菌、沙雷氏菌、变形杆菌阳性7/16/202427细菌的生理生化反应 原理原理：致病性葡萄球菌；结合凝固酶、游离凝固酶；：致病性葡萄球菌；结合凝固酶、游离凝固酶；纤维蛋白原变为纤维蛋白使血浆凝固纤维蛋白原变为纤维蛋白使血浆凝固 方法方法：1 1 玻片法检测结合凝固酶玻片法检测结合凝固酶 兔血浆兔血浆 2 2 试管法检测游离凝固酶试管法检测游离凝固酶 0.5 0.5mlml兔血浆兔血浆 37 37 水浴水浴3-43-4 结果结果：玻片法中有明显颗粒样凝集而盐水对照无凝：玻片法中有明显颗粒样凝集而盐水对照无凝集为阳性；试管法以血浆凝固为阳性集为阳性；试管法以血浆凝固为阳性 意义意义：致病性葡萄球菌；金黄色葡萄球菌多阳性：致病性葡萄球菌；金黄色葡萄球菌多阳性7/16/202428细菌的生理生化反应 原理原理：B B群链球菌能产生群链球菌能产生CAMPCAMP因子，可促进葡萄球菌的因子，可促进葡萄球菌的溶溶血毒素活性，在两菌的交界处溶血力加强，出现矢形溶血区血毒素活性，在两菌的交界处溶血力加强，出现矢形溶血区 培养基培养基：BAPBAP 方法方法：先以产：先以产溶血毒素的金葡菌划一横线接种于溶血毒素的金葡菌划一横线接种于BAPBAP，再再将被测菌与前一划线作垂直划线接种，两线不能相交，将被测菌与前一划线作垂直划线接种，两线不能相交，0.5-0.5-1 1cmcm，37 37 培养培养18-2418-24小时观察结果，设阴阳性对照小时观察结果，设阴阳性对照 结果结果：在两划线交界处出现箭头样溶血区为阳性：在两划线交界处出现箭头样溶血区为阳性 意义意义：B B群链球菌阳性，马红球菌出现反群链球菌阳性，马红球菌出现反CAMPCAMP现象现象7/16/202429细菌的生理生化反应 原理原理：胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，使细菌发生自：胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，使细菌发生自溶溶 试剂试剂：10%10%去氧胆酸钠或纯牛胆汁去氧胆酸钠或纯牛胆汁 方法方法：平板法：平板法：滴加滴加10%10%去氧胆酸钠一环于被测菌落上去氧胆酸钠一环于被测菌落上3535 30min 30min观察结果观察结果 。试管法：试管法：0.90.9mlml被测菌培养物加被测菌培养物加入入10%10%去氧胆酸钠去氧胆酸钠0.10.1mlml后置后置35 35 水浴水浴10-3010-30minmin观察结果观察结果 结果结果：菌落消失，或培养物变透明为阳性：菌落消失，或培养物变透明为阳性 意义意义：肺炎链球菌阳性：肺炎链球菌阳性7/16/202430细菌的生理生化反应 主要用于厌氧菌的鉴定主要用于厌氧菌的鉴定 产气夹膜梭菌卵磷脂酶阳性产气夹膜梭菌卵磷脂酶阳性 中间类杆菌脂酶阳性中间类杆菌脂酶阳性 致病性葡萄球菌硷性磷酸酶阳性，如金黄色葡萄致病性葡萄球菌硷性磷酸酶阳性，如金黄色葡萄球菌等球菌等7/16/202431细菌的生理生化反应 原理原理：O/129O/129（二氨基喋啶）对弧菌属有抑制作用，二氨基喋啶）对弧菌属有抑制作用，而对气单胞菌属无抑制作用而对气单胞菌属无抑制作用 培养基培养基：碱性琼脂培养基：碱性琼脂培养基 方法方法：纸片法药敏：纸片法药敏 40 40gg/片片 结果结果：有抑菌环为敏感，无抑菌环为耐药：有抑菌环为敏感，无抑菌环为耐药 意义意义：弧菌、邻单胞菌敏感；气单胞菌属耐药：弧菌、邻单胞菌敏感；气单胞菌属耐药7/16/202432细菌的生理生化反应 原理原理：A A群链球菌对杆菌肽几乎全敏感，而其他链群链球菌对杆菌肽几乎全敏感，而其他链球菌则耐药球菌则耐药 培养基培养基：BAPBAP 方法方法：同纸片法药敏：同纸片法药敏0.040.04U/U/片片 结果结果：1010mmmm敏感；敏感；1010mmmm耐药耐药 意义意义：A A群链球菌敏感群链球菌敏感7/16/202433细菌的生理生化反应 原理原理：肺炎链球菌对：肺炎链球菌对OptochinOptochin敏感，其他链球菌无敏感，其他链球菌无抑制作用抑制作用 培养基培养基：BAPBAP 方法方法：同纸片法药敏：同纸片法药敏 5 5gg/片片 结果结果：抑菌环直径：抑菌环直径1414mmmm敏感；敏感；1414mmmm耐药此时耐药此时加做胆汁溶菌试验证实加做胆汁溶菌试验证实 意义意义：肺炎链球菌对：肺炎链球菌对OptochinOptochin敏感敏感7/16/202434细菌的生理生化反应 本试验可同时观察乳糖和蔗糖发本试验可同时观察乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气（变黄）；产生酵产酸或产酸产气（变黄）；产生硫化氢（变黑）。葡萄糖被分解产硫化氢（变黑）。葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。类不被氧化，所以仍保持黄色。a.uninoculated b.little change/alkaline/-/-c.alkaline/acid/-/+d.acid/acid/+/+e.acid/acid/+/-7/16/202435细菌的生理生化反应沙门氏菌的沙门氏菌的TSI试验试验7/16/202436细菌的生理生化反应Principle The lower agar concentration in the medium allows limited movement of motile bacteria from the area of the stab.Motility will be detectable as diffuse growth radiating from the stab line.A special dye,a tetrazolium salt(TTC)may be added to make the radiating growth more visible as the reddish diffuse area.MOTILITY TEST1.Pseudomonas aeruginosa（铜绿假单胞菌）：Motile 2.Staphylococcus aureus：Non-motile 3.Bacillus subtilis：Motile 7/16/202437细菌的生理生化反应