试验1细菌形态检查课件

病原生物学实验主讲人:蒋培余病原生物学实验主讲人:蒋培余一、实验目的一、实验目的|1 1学习、掌握有关病原生物学的基本操作技术，如普通光学习、掌握有关病原生物学的基本操作技术，如普通光学显微镜油镜的使用和保养、涂片染色、分离接种与细菌培学显微镜油镜的使用和保养、涂片染色、分离接种与细菌培养、病原菌分离鉴定和免疫学诊断等基本操作技术，树立无养、病原菌分离鉴定和免疫学诊断等基本操作技术，树立无菌观念；菌观念；|2 2通过寄生虫标本的观察和基本实验技术操作，掌握常见人通过寄生虫标本的观察和基本实验技术操作，掌握常见人体寄生虫的辨认，掌握具有诊断价值的寄生虫形态特征和常体寄生虫的辨认，掌握具有诊断价值的寄生虫形态特征和常见寄生虫的病原学检查方法；见寄生虫的病原学检查方法；|3 3通过综合性、设计性实验项目，树立实事求是的科学态度通过综合性、设计性实验项目，树立实事求是的科学态度和培养独立分析问题与解决问题的能力，为开展有关疾病的和培养独立分析问题与解决问题的能力，为开展有关疾病的诊断与防治以及从事病原生物学的科学研究工作所必需的实诊断与防治以及从事病原生物学的科学研究工作所必需的实验方法与技术打下一定的基础。验方法与技术打下一定的基础。一、实验目的 1学习、掌握有关病原生物学的基本操作技术，如二、实验要求二、实验要求|1 1每次实验前必须做好预习，明确实验目的、原每次实验前必须做好预习，明确实验目的、原理、方法及操作中的注意事项等，避免和减少发生理、方法及操作中的注意事项等，避免和减少发生错误。错误。|2 2实验过程中必须持严肃认真的态度。实验过程中必须持严肃认真的态度。|3 3对实验结果必须进行仔细地观察和认真地记录，对实验结果必须进行仔细地观察和认真地记录，然后进行科学分析，得出恰当结论。然后进行科学分析，得出恰当结论。|4 4独立认真完成实验报告，书写实验报告格式要规独立认真完成实验报告，书写实验报告格式要规范、字迹要清楚，语言简练，表格清晰，画图应力范、字迹要清楚，语言简练，表格清晰，画图应力求反映实际标本的原状。求反映实际标本的原状。|5 5切实遵守实验室规则。切实遵守实验室规则。二、实验要求 1每次实验前必须做好预习，明确实验目的、原理1 1 1 1进实验室时必须穿好工作服，离室时需脱下反进实验室时必须穿好工作服，离室时需脱下反进实验室时必须穿好工作服，离室时需脱下反进实验室时必须穿好工作服，离室时需脱下反折，工作服要经常清洗消毒。折，工作服要经常清洗消毒。折，工作服要经常清洗消毒。折，工作服要经常清洗消毒。2 2 2 2书包、衣物等物品请放在实验室的贮物柜中，书包、衣物等物品请放在实验室的贮物柜中，书包、衣物等物品请放在实验室的贮物柜中，书包、衣物等物品请放在实验室的贮物柜中，随身只带必要的实验指导、笔记本和文具，进入实随身只带必要的实验指导、笔记本和文具，进入实随身只带必要的实验指导、笔记本和文具，进入实随身只带必要的实验指导、笔记本和文具，进入实验室后放入实验台的抽屉内。验室后放入实验台的抽屉内。验室后放入实验台的抽屉内。验室后放入实验台的抽屉内。3 3 3 3实验室内要保持肃静、守秩序，不得高声谈笑实验室内要保持肃静、守秩序，不得高声谈笑实验室内要保持肃静、守秩序，不得高声谈笑实验室内要保持肃静、守秩序，不得高声谈笑和随处走动，玩弄手机等。和随处走动，玩弄手机等。和随处走动，玩弄手机等。和随处走动，玩弄手机等。4 4 4 4实验室内禁止饮食和吸烟，不得用嘴舔湿铅笔实验室内禁止饮食和吸烟，不得用嘴舔湿铅笔实验室内禁止饮食和吸烟，不得用嘴舔湿铅笔实验室内禁止饮食和吸烟，不得用嘴舔湿铅笔和标签等。和标签等。和标签等。和标签等。5 5 5 5如遇有盛检验材料的器皿破损或污染其它物品如遇有盛检验材料的器皿破损或污染其它物品如遇有盛检验材料的器皿破损或污染其它物品如遇有盛检验材料的器皿破损或污染其它物品时，应即用时，应即用时，应即用时，应即用3%3%3%3%的来苏儿消毒；皮肤破伤时须向指导的来苏儿消毒；皮肤破伤时须向指导的来苏儿消毒；皮肤破伤时须向指导的来苏儿消毒；皮肤破伤时须向指导教师报告，采取适当的消毒及防止感染措施。教师报告，采取适当的消毒及防止感染措施。教师报告，采取适当的消毒及防止感染措施。教师报告，采取适当的消毒及防止感染措施。三、实三、实 验验 室室 规规 则则1进实验室时必须穿好工作服，离室时需脱下反折，工作服要经6 6用过的有菌器材或培养物等，应放于指定的地用过的有菌器材或培养物等，应放于指定的地点，不得随意抛置。点，不得随意抛置。7 7注意节约实验试剂，爱护实验器材。损坏器材注意节约实验试剂，爱护实验器材。损坏器材时，应立即报告指导教师，按有关规定处理。时，应立即报告指导教师，按有关规定处理。8 8易燃物品（酒精、二甲苯等）不准接近火源。易燃物品（酒精、二甲苯等）不准接近火源。一旦起火，应迅速用沾水的布类和沙土覆盖扑火。一旦起火，应迅速用沾水的布类和沙土覆盖扑火。9 9实验结束后，将实验台整理好，值日同学打扫实验结束后，将实验台整理好，值日同学打扫室内卫生，并检查水、电等开关是否关好，防止室内卫生，并检查水、电等开关是否关好，防止发生安全事故。发生安全事故。1010每次实验后均要用肥皂洗手，必要时用消毒每次实验后均要用肥皂洗手，必要时用消毒液泡手。液泡手。6用过的有菌器材或培养物等，应放于指定的地点，不得随意抛置实验一实验一 细菌的形态检查细菌的形态检查（1）1.1.掌握显微镜油镜的使用和保养方法；掌握显微镜油镜的使用和保养方法；2.2.学会观察细菌的基本形态和一些特殊结构；学会观察细菌的基本形态和一些特殊结构；3.3.掌握细菌涂片制作、革兰染色操作方法及意义；掌握细菌涂片制作、革兰染色操作方法及意义；实验目的：实验目的：实验一 细菌的形态检查（1）1.掌握显微镜油镜的使用和（一）显微镜油镜的使用和保养（一）显微镜油镜的使用和保养1.显微镜基本知识显微镜的构造显微镜的构造 （1 1）光学部分光学部分 （2 2）机械部分机械部分实验内容：实验内容：（一）显微镜油镜的使用和保养1.显微镜基本知识显微镜的构造|显微镜的放大倍数和分辨率显微镜的放大倍数和分辨率 1.1.放大倍数放大倍数=接物镜放大倍数接物镜放大倍数接目镜放接目镜放大倍数大倍数 2.2.显微镜的分辨力：显微镜的分辨力：是表示显微镜辨析是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为：用公式表示为：R=0.61/N.A R=0.61/N.A 式中式中R R：物镜分辨出物体两点间的最短距：物镜分辨出物体两点间的最短距离。离。：可见光的波长（平均：可见光的波长（平均0.550.55 m)m)N.A=nsin(/2)N.A=nsin(/2)为镜口率为镜口率|n:n:物镜和被检标本间介质的折射率。物镜和被检标本间介质的折射率。|：镜口角（即入射角）。：镜口角（即入射角）。|目前实用范围内物镜的最大镜口率为目前实用范围内物镜的最大镜口率为1.4,1.4,R=0.61*0.55/1.4=0.25 R=0.61*0.55/1.4=0.25|而人眼的分辨率为而人眼的分辨率为0.25mm,0.25mm,所以一个大小所以一个大小为为0.25 0.25 m m的微粒需经显微镜放大的微粒需经显微镜放大10001000倍便可以观察。倍便可以观察。显微镜的放大倍数和分辨率 2.2.油镜的使用和保养油镜的使用和保养（1 1）油镜头的识别）油镜头的识别 油镜头的下缘，一般刻有一白色圈，标有油油镜头的下缘，一般刻有一白色圈，标有油 90 90、100100、oeloel、oiloil等字样。等字样。显微镜的接物镜有低倍镜头，高倍镜头和油镜头，其中油显微镜的接物镜有低倍镜头，高倍镜头和油镜头，其中油镜头的放大倍数最大。镜头的放大倍数最大。（2 2）油镜的原理：）油镜的原理：uu当光线由反光镜通过玻片当光线由反光镜通过玻片当光线由反光镜通过玻片当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于与镜头之间的空气时，由于与镜头之间的空气时，由于与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使空气与玻片的密度不同，使空气与玻片的密度不同，使空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，光线受到曲折，发生散射，光线受到曲折，发生散射，光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中降低了视野的照明度。若中降低了视野的照明度。若中降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（间的介质是一层油（间的介质是一层油（间的介质是一层油（其折射其折射其折射其折射率率率率1.5151.5151.5151.515与玻片与玻片与玻片与玻片1.521.521.521.52的相近的相近的相近的相近），则几乎不发生折射，增加，则几乎不发生折射，增加，则几乎不发生折射，增加，则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物了视野的进光量，从而使物了视野的进光量，从而使物了视野的进光量，从而使物象更加清晰。象更加清晰。象更加清晰。象更加清晰。2.油镜的使用和保养（2）油镜的原理：当光线由反光镜通过玻片（3 3）油镜的使用方法）油镜的使用方法1 1 1 1）将显微镜直立于桌上，不要扳动倾斜关节，使载物台保持）将显微镜直立于桌上，不要扳动倾斜关节，使载物台保持）将显微镜直立于桌上，不要扳动倾斜关节，使载物台保持）将显微镜直立于桌上，不要扳动倾斜关节，使载物台保持水平。水平。水平。水平。2 2 2 2）对光：用低倍镜对光，检查染色标本时光线宜强。要抬高）对光：用低倍镜对光，检查染色标本时光线宜强。要抬高）对光：用低倍镜对光，检查染色标本时光线宜强。要抬高）对光：用低倍镜对光，检查染色标本时光线宜强。要抬高集光器，放大光圈。集光器，放大光圈。集光器，放大光圈。集光器，放大光圈。3 3 3 3）滴加香柏油一小滴于染色标本片上，将标本置于载物台上，）滴加香柏油一小滴于染色标本片上，将标本置于载物台上，）滴加香柏油一小滴于染色标本片上，将标本置于载物台上，）滴加香柏油一小滴于染色标本片上，将标本置于载物台上，移置待检部分于接物镜下。移置待检部分于接物镜下。移置待检部分于接物镜下。移置待检部分于接物镜下。4 4 4 4）换用油镜，眼睛从侧面看着物镜，转动粗调节器，使镜筒）换用油镜，眼睛从侧面看着物镜，转动粗调节器，使镜筒）换用油镜，眼睛从侧面看着物镜，转动粗调节器，使镜筒）换用油镜，眼睛从侧面看着物镜，转动粗调节器，使镜筒下降至油镜头浸入镜油并几乎接触标本片。下降至油镜头浸入镜油并几乎接触标本片。下降至油镜头浸入镜油并几乎接触标本片。下降至油镜头浸入镜油并几乎接触标本片。5 5 5 5）左眼看接目镜，一面观察，一面缓慢转动粗调节器，使）左眼看接目镜，一面观察，一面缓慢转动粗调节器，使）左眼看接目镜，一面观察，一面缓慢转动粗调节器，使）左眼看接目镜，一面观察，一面缓慢转动粗调节器，使镜筒上升，直到观察到模糊的物像时，再适当转动细调节器，镜筒上升，直到观察到模糊的物像时，再适当转动细调节器，镜筒上升，直到观察到模糊的物像时，再适当转动细调节器，镜筒上升，直到观察到模糊的物像时，再适当转动细调节器，使物像完全清晰，即可正式观察。使物像完全清晰，即可正式观察。使物像完全清晰，即可正式观察。使物像完全清晰，即可正式观察。（3）油镜的使用方法 1 1）标本观察完毕，向上转动粗调节器将镜筒）标本观察完毕，向上转动粗调节器将镜筒提起，取下标本，用擦镜纸将镜头上的油擦净。提起，取下标本，用擦镜纸将镜头上的油擦净。若油已干，可用擦镜纸沾少许二甲苯擦去油迹，若油已干，可用擦镜纸沾少许二甲苯擦去油迹，随即用擦镜纸擦去二甲苯。随即用擦镜纸擦去二甲苯。2 2）将物镜转成）将物镜转成“八八字形，以免损坏油镜。字形，以免损坏油镜。降低集光器，竖起反光镜，将显微镜放入镜箱。降低集光器，竖起反光镜，将显微镜放入镜箱。（4）油镜的保养方法）油镜的保养方法 1）标本观察完毕，向上转动粗调节器将镜筒提起，取下标本，葡萄球菌葡萄球菌大肠杆菌大肠杆菌霍乱弧菌霍乱弧菌（二）细菌的基本形态与特殊结构观察（二）细菌的基本形态与特殊结构观察1 1细菌的基本形态观察细菌的基本形态观察 细菌的基本形态可分为球菌、细菌的基本形态可分为球菌、杆菌、螺形菌（包括弧菌）三类。杆菌、螺形菌（包括弧菌）三类。葡萄球菌大肠杆菌霍乱弧菌（二）细菌的基本形态与特殊结构观察1变形杆菌（鞭毛）炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌炭疽芽胞杆菌 3-10 m 3-10 m 3-10 m 3-10 m肺炎链球菌（荚膜）破伤风杆菌（芽胞）2.细菌特殊结构的观察细菌特殊结构的观察变形杆菌（鞭毛）炭疽芽胞杆菌 3-10 m肺炎链球菌（荚膜细菌的形态学检查方法细菌的形态学检查方法染色标本检查法染色标本检查法观察细菌的形态、大小和排列，还能鉴别细菌。观察细菌的形态、大小和排列，还能鉴别细菌。细菌的形态学检查方法染色标本检查法观察细菌的形态、大小（三）革兰染色法（三）革兰染色法 该染色法是最常用最重要的染色法。是丹麦细菌该染色法是最常用最重要的染色法。是丹麦细菌该染色法是最常用最重要的染色法。是丹麦细菌该染色法是最常用最重要的染色法。是丹麦细菌学家革兰于学家革兰于学家革兰于学家革兰于18841884年创建的，至今仍广泛应用。年创建的，至今仍广泛应用。年创建的，至今仍广泛应用。年创建的，至今仍广泛应用。1.1.革兰染色法的原理革兰染色法的原理革兰染色法的原理革兰染色法的原理渗透学说：渗透学说：渗透学说：渗透学说：与与与与肽聚糖结构肽聚糖结构肽聚糖结构肽聚糖结构有关。有关。有关。有关。革兰阳性菌细胞壁中肽聚糖含量高，酒精不易渗透，而革兰阳性菌细胞革兰阳性菌细胞壁中肽聚糖含量高，酒精不易渗透，而革兰阳性菌细胞革兰阳性菌细胞壁中肽聚糖含量高，酒精不易渗透，而革兰阳性菌细胞革兰阳性菌细胞壁中肽聚糖含量高，酒精不易渗透，而革兰阳性菌细胞壁中肽聚糖含量少，脂类含量高，酒精易渗透进入细胞内，将结合的结晶壁中肽聚糖含量少，脂类含量高，酒精易渗透进入细胞内，将结合的结晶壁中肽聚糖含量少，脂类含量高，酒精易渗透进入细胞内，将结合的结晶壁中肽聚糖含量少，脂类含量高，酒精易渗透进入细胞内，将结合的结晶紫碘复合物脱出。紫碘复合物脱出。紫碘复合物脱出。紫碘复合物脱出。化学学说：化学学说：化学学说：化学学说：与细菌细胞质中与细菌细胞质中与细菌细胞质中与细菌细胞质中核糖核酸镁盐核糖核酸镁盐核糖核酸镁盐核糖核酸镁盐有关。有关。有关。有关。革兰阳性菌细胞质中的核糖核酸镁盐与结晶紫革兰阳性菌细胞质中的核糖核酸镁盐与结晶紫革兰阳性菌细胞质中的核糖核酸镁盐与结晶紫革兰阳性菌细胞质中的核糖核酸镁盐与结晶紫-碘结合形成更大的复碘结合形成更大的复碘结合形成更大的复碘结合形成更大的复合物，不易被酒精脱出。合物，不易被酒精脱出。合物，不易被酒精脱出。合物，不易被酒精脱出。等电点学说：等电点学说：等电点学说：等电点学说：与细菌与细菌与细菌与细菌所带电荷所带电荷所带电荷所带电荷有关。有关。有关。有关。革兰阳性菌等电点低（革兰阳性菌等电点低（革兰阳性菌等电点低（革兰阳性菌等电点低（pIpIpIpI）为）为）为）为2-32-32-32-3，在中性或碱性环境中所带负电，在中性或碱性环境中所带负电，在中性或碱性环境中所带负电，在中性或碱性环境中所带负电荷多；革兰阳性菌荷多；革兰阳性菌荷多；革兰阳性菌荷多；革兰阳性菌pIpIpIpI为为为为4-54-54-54-5，所带负电荷少，影响结合染色的多少。，所带负电荷少，影响结合染色的多少。，所带负电荷少，影响结合染色的多少。，所带负电荷少，影响结合染色的多少。（三）革兰染色法 该染色法是最常用最重要的染色法。是丹2.实验材料与方法实验材料与方法（1 1）材料）材料）材料）材料:菌种：菌种：菌种：菌种：葡萄球菌、大肠埃希菌培养物葡萄球菌、大肠埃希菌培养物葡萄球菌、大肠埃希菌培养物葡萄球菌、大肠埃希菌培养物 染液：染液：染液：染液：结晶紫染液、卢戈碘液结晶紫染液、卢戈碘液结晶紫染液、卢戈碘液结晶紫染液、卢戈碘液 95%95%酒清、稀释复红酒清、稀释复红酒清、稀释复红酒清、稀释复红 其他：其他：其他：其他：玻片、接种环、酒精灯玻片、接种环、酒精灯玻片、接种环、酒精灯玻片、接种环、酒精灯 无菌生理盐水、显微镜等无菌生理盐水、显微镜等无菌生理盐水、显微镜等无菌生理盐水、显微镜等（2 2）方法：方法：方法：方法：细菌涂片的制作：细菌涂片的制作：细菌涂片的制作：细菌涂片的制作：涂片、干燥、固定涂片、干燥、固定涂片、干燥、固定涂片、干燥、固定 革兰染色：革兰染色：革兰染色：革兰染色：初染、媒染、脱色、复染初染、媒染、脱色、复染初染、媒染、脱色、复染初染、媒染、脱色、复染 油镜使用：油镜使用：油镜使用：油镜使用：观察染色结果并记录观察染色结果并记录观察染色结果并记录观察染色结果并记录2.实验材料与方法（1）材料:染色标本检查的基本程序染色标本检查的基本程序涂片涂片干燥干燥固定固定染色染色涂片：涂片：接种环灭菌、平板取材、细菌涂布接种环灭菌、平板取材、细菌涂布干燥：干燥：自然干燥、热空气干燥自然干燥、热空气干燥固定：固定：通过火焰外焰三次通过火焰外焰三次染色：染色：初染、媒染、脱色、复染初染、媒染、脱色、复染染色标本检查的基本程序涂片干燥固定染色细细菌菌涂涂片片的的制制作作涂片涂片涂片涂片干燥干燥干燥干燥固定固定固定固定染色染色染色染色镜检镜检镜检镜检细菌涂片的制作涂片干燥固定染色镜检革兰染色法（革兰染色法（Gram染色）染色）|染液组成：染液组成：结晶紫染液、卢戈碘液结晶紫染液、卢戈碘液 95 95酒精、稀释复红酒精、稀释复红|染色方法：染色方法：结晶紫结晶紫结晶紫结晶紫 初染初染初染初染卢戈碘液卢戈碘液卢戈碘液卢戈碘液 媒染媒染媒染媒染95959595酒精酒精酒精酒精 脱色脱色脱色脱色稀释复红稀释复红稀释复红稀释复红 复染复染复染复染1 1 1 1分钟分钟分钟分钟1 1 1 1分钟分钟分钟分钟影响革兰染色的关键步骤是影响革兰染色的关键步骤是脱色脱色水洗水洗水洗水洗水洗水洗水洗水洗水洗水洗水洗水洗水洗水洗水洗水洗干燥干燥干燥干燥30S30S30S30S1min1min1min1min革兰染色法（Gram染色）染液组成：结晶紫卢戈碘液95酒精 Procedures of Gram Staining初染初染初染初染媒染媒染媒染媒染脱色脱色脱色脱色复染复染复染复染结晶紫结晶紫结晶紫结晶紫1 1 1 1分钟分钟分钟分钟卢戈氏碘液卢戈氏碘液卢戈氏碘液卢戈氏碘液1 1 1 1分钟分钟分钟分钟95%95%95%95%酒精酒精酒精酒精30303030秒秒秒秒稀释复红稀释复红稀释复红稀释复红30303030秒秒秒秒 Procedures of Gram Staining初3.革兰染色结果革兰染色结果|紫色紫色革兰阳性菌革兰阳性菌|红色色革革兰阴性菌阴性菌3.革兰染色结果紫色革兰阳性菌红色革兰阴性菌4.革兰染色意义革兰染色意义有助于鉴别细菌有助于鉴别细菌有助于选择用药有助于选择用药有助于了解细菌的致病性有助于了解细菌的致病性4.革兰染色意义有助于鉴别细菌影响革兰染色的因素影响革兰染色的因素1.1.操作因素操作因素 涂片的厚薄涂片的厚薄 脱色时间的长短脱色时间的长短2.2.染液因素染液因素 卢戈碘液放置时间过长卢戈碘液放置时间过长 95 95乙醇挥发乙醇挥发 结晶紫与草酸铵混合时间太长结晶紫与草酸铵混合时间太长3.3.细菌因素：细菌因素：细菌种类细菌种类 细菌菌龄细菌菌龄影响革兰染色的因素1.操作因素实验报告：实验报告：1、显微镜油镜的使用和保养方法以及使、显微镜油镜的使用和保养方法以及使用过程中的注意事项。用过程中的注意事项。2、请画图示意细菌的基本形态和特、请画图示意细菌的基本形态和特 殊殊结构。（标明：细菌名称、染色法、放结构。（标明：细菌名称、染色法、放 大倍数）大倍数）实验报告：实实验验报报告告基基本本格格式式湖州师范学院湖州师范学院病原生物学与免疫学实验病原生物学与免疫学实验 实验报实验报告告实验项目名称：实验项目名称：*一、实验目的要求：一、实验目的要求：二、实验原理：二、实验原理：三、实验材料：三、实验材料：四、实验方法和操作步骤：四、实验方法和操作步骤：五、实验结果：五、实验结果：六、实验结果分析和总结：六、实验结果分析和总结：实验报告基本格式湖州师范学院试验1细菌形态检查课件