第3章紫外-可见分光光度法-课件

1 1第三章第三章 紫外可见分光光度法紫外可见分光光度法2 2 概概 述述 第第1节节 基本原理基本原理 第第2节节 Lambert-Ber定律定律 第第3节节 显色反应及其显色条件的选择显色反应及其显色条件的选择 第第4节节 紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计 第第5节节 分析方法分析方法 第第6节节 应用与示例应用与示例3 3 主要内容主要内容紫外紫外-可见吸收光谱的基本概念可见吸收光谱的基本概念吸收光度法的基本原理吸收光度法的基本原理紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计定量分析定量分析定性分析定性分析有机化合物分子结构研究简介有机化合物分子结构研究简介应用应用4 4 概概 述述 一、定一、定 义义 二、常用的波长范围二、常用的波长范围 三、定量依据三、定量依据 四、特四、特 点点 五、发展趋势五、发展趋势5 5 一、定一、定 义义 紫外紫外-可见分光光度法：以紫外可见分光光度法：以紫外-可见光为光源，照射被测物质，可见光为光源，照射被测物质，研究其吸收光谱的分析方法。研究其吸收光谱的分析方法。属于电子光谱。属于电子光谱。6 6 二、常用的波长范围二、常用的波长范围紫外光区：紫外光区：200400nm可见光区：可见光区：400800nm7 7 三、定量依据三、定量依据Lambert-Beer 定律：定律：A=K L C8 8 四、特四、特 点点 一）方法灵敏度较高一）方法灵敏度较高 一般可测到一般可测到 104105g/ml 部分可达部分可达 107g/ml 二）测定准确度较高二）测定准确度较高 一般为一般为 0.50.2。三）不能表现整个分子的特征三）不能表现整个分子的特征 9 9 三）不能表现整个分子的特征三）不能表现整个分子的特征有机化合物的紫外吸收光谱主要反映有机化合物的紫外吸收光谱主要反映分子中发色团、助色团及其共轭的情分子中发色团、助色团及其共轭的情况，并不能表现整个分子的特征。况，并不能表现整个分子的特征。单独用紫外光谱不能完全确定化合物单独用紫外光谱不能完全确定化合物的分子结构的分子结构,必须与红外、核磁共振必须与红外、核磁共振和质谱等配合。和质谱等配合。1010 五、发展趋势五、发展趋势 1）仪器的发展）仪器的发展 2）方法的发展）方法的发展 3）定性技术的发展）定性技术的发展 4）定量技术的发展）定量技术的发展1111 1）仪器的发展）仪器的发展物理光学物理光学电子学电子学 性能优良的分光光度计性能优良的分光光度计计算机计算机1212 2）方法的发展）方法的发展数数 学学统计学统计学 计算分光光度法计算分光光度法计算机技术计算机技术1313 3）定性技术的发展）定性技术的发展不同官能团的化合物不同官能团的化合物不同化学结构的化合物不同化学结构的化合物 结构相似的不同化合物结构相似的不同化合物1414 4）定量技术的发展）定量技术的发展单一组分的测定单一组分的测定 复杂多组分的同时测定复杂多组分的同时测定1515第第1 1节节 基本原理基本原理 一、紫外可见吸收光谱的产生一、紫外可见吸收光谱的产生 二、电子跃迁的主要类型二、电子跃迁的主要类型 三、紫外可见光谱中一些常用术语三、紫外可见光谱中一些常用术语 四、吸收带四、吸收带 五、影响紫外吸收光谱的主要因素五、影响紫外吸收光谱的主要因素1616 一、紫外可见吸收光谱的产生一、紫外可见吸收光谱的产生原子或分子中的电子总是处于某一种原子或分子中的电子总是处于某一种运动状态之中，每一种状态都具有一运动状态之中，每一种状态都具有一定的能量，属于一定的能级。定的能量，属于一定的能级。吸收外来幅射吸收外来幅射被激发被激发从低能级跃从低能级跃迁到较高能级（从基态跃迁到电子激迁到较高能级（从基态跃迁到电子激发态）发态）电子光谱电子光谱。1717 分子总能量：分子总能量：E总总=E内内+E平平+E振振+E转转+E电子电子吸收辐射能：吸收辐射能：E=E振振+E转转+E电子电子其中：其中：E电子电子最大最大 一般一般1 20eV=1250 60nm 紫外可见区紫外可见区1818 小结小结 1分子只能吸收等于两个能阶之差的分子只能吸收等于两个能阶之差的能量，即具有能量，即具有量子化量子化的特征。的特征。2分子价电子跃迁而产生的光谱位于分子价电子跃迁而产生的光谱位于紫外可见光区。紫外可见光区。（200800nm）3电子光谱包含着振、转光谱，使谱电子光谱包含着振、转光谱，使谱带变宽，所以紫外可见吸收光谱为带变宽，所以紫外可见吸收光谱为带带状光谱状光谱。1919 二、电子跃迁的主要类型二、电子跃迁的主要类型 1）*跃迁跃迁 2）*跃迁跃迁 3）n*跃迁跃迁 4）n*跃迁跃迁2020 分子轨道分子轨道当两个原子靠近结合成分子时，当两个原子靠近结合成分子时，两个原子的原子轨道可以线性两个原子的原子轨道可以线性组合成两个分子轨道。组合成两个分子轨道。21 2222 成键成键轨道轨道 低低能量能量、分子轨道分子轨道 反键反键轨道轨道 高高能量能量*、*非键非键轨道轨道 n（分子中（分子中n电子电子的能级的能级，基本上保持，基本上保持原来原子状态的能级，比成键轨道能原来原子状态的能级，比成键轨道能级高，比反键轨道能级低。）级高，比反键轨道能级低。）2323 有机化合物分子价电子：有机化合物分子价电子：电子电子单键电子单键电子 电子电子复键电子复键电子 n 电子电子未成键电子未成键电子电子能级电子能级 n*24电子跃迁相应的吸收峰和能量示意图电子跃迁相应的吸收峰和能量示意图2525 跃迁所需能量排序跃迁所需能量排序 *n*n*26电子跃迁类型及特点电子跃迁类型及特点 跃迁跃迁类型类型出现波段出现波段 吸收吸收强度强度化合物化合物结构结构特点特点*200nm 弱弱 单键单键CCCH饱和烃类，对紫外无贡献，饱和烃类，对紫外无贡献，但可作溶剂但可作溶剂*200nm强强不饱和键不饱和键CCCC有共轭双键存在时，有共轭双键存在时，*跃迁所需能量降低，波长跃迁所需能量降低，波长红移红移n*250 500nm弱弱COCN等等必须是杂原子直接连在双必须是杂原子直接连在双键上键上n*200nm弱弱COHCNH2 CSCX含有未共用电子对的基团连接在含有未共用电子对的基团连接在键上键上杂原子极性杂原子极性，红移红移杂原子数目杂原子数目，红移红移271.2.3.2828 三、常用术语三、常用术语吸收曲线（吸收光谱）吸收曲线（吸收光谱）吸收峰、吸收谷吸收峰、吸收谷最大吸收波长、最小吸收波长最大吸收波长、最小吸收波长肩峰、末端吸收肩峰、末端吸收强带、弱带强带、弱带生色团、助色团生色团、助色团蓝移、红移蓝移、红移浓色效应、淡色效应浓色效应、淡色效应2929 吸收曲线（吸收光谱）吸收曲线（吸收光谱）以波长以波长（nm）为横坐标，以吸光）为横坐标，以吸光度度A 为纵坐标所绘制的曲线称为吸为纵坐标所绘制的曲线称为吸收曲线（或吸收光谱）。收曲线（或吸收光谱）。30吸收光谱示意图吸收光谱示意图200200nmnm3131最大吸收波长（最大吸收波长（max）：吸收曲线上的吸收峰所对应的波吸收曲线上的吸收峰所对应的波长。长。最小吸收波长（最小吸收波长（min）：吸收曲线上的吸收谷所对应的波吸收曲线上的吸收谷所对应的波长。长。3232肩峰（肩峰（sh）：在吸收曲线上一个吸收峰旁边产生在吸收曲线上一个吸收峰旁边产生的一个曲折，称为肩峰。的一个曲折，称为肩峰。末端吸收末端吸收：吸收曲线上吸收曲线上短波端只呈现强吸收而短波端只呈现强吸收而不成峰形的部分不成峰形的部分。3333强带强带：紫外可见光谱中摩尔吸光系数紫外可见光谱中摩尔吸光系数104的吸收峰的吸收峰弱带弱带：紫外可见光谱中摩尔吸光系数紫外可见光谱中摩尔吸光系数103的吸收峰的吸收峰3434 生色团（发色团）生色团（发色团）有机化合物分子结构中含有有机化合物分子结构中含有*或或n*n*跃迁的基团，能跃迁的基团，能在紫外可见光范围内产生吸收。在紫外可见光范围内产生吸收。35如：如：C CC C、CCCC 简单的双键或三键简单的双键或三键C CO O、C CN N、C CS S、N NO O、NONO2 2 等有杂原子渗入的双键或共轭双键等有杂原子渗入的双键或共轭双键 3636 助色团助色团 含有非键电子的杂原子饱和基团含有非键电子的杂原子饱和基团,本本身不能吸收波长大于身不能吸收波长大于200nm的辐射，的辐射，但与发色团或饱和烃相连时，能使该但与发色团或饱和烃相连时，能使该发色团或饱和烃的吸收峰向长波移动，发色团或饱和烃的吸收峰向长波移动，并使吸收强度增加的基团。并使吸收强度增加的基团。如：如：OH、NH2、Cl（Br、I）、）、SH、SR、OR等等37助色团饱和烃相连助色团饱和烃相连 产生产生n*n*，使吸收峰长移使吸收峰长移助色团苯环相连助色团苯环相连 不仅使吸收峰长移不仅使吸收峰长移助色团共轭双键相连助色团共轭双键相连 而且吸收强度而且吸收强度（）例：例：max256nm（220）max270nm（1450）3838蓝移（紫移、短移）蓝移（紫移、短移）：由取代基或溶剂效应等引起的吸由取代基或溶剂效应等引起的吸收峰向短波长方向移动的现象。收峰向短波长方向移动的现象。红移（长移）红移（长移）：由取代基或溶剂效应等引起的吸由取代基或溶剂效应等引起的吸收峰向长波长方向移动的现象。收峰向长波长方向移动的现象。3939增色增色效应（效应（浓色浓色效应）效应）：吸收强度增加吸收强度增加的效应。的效应。减色减色效应（效应（淡色淡色效应）效应）吸收强度减弱吸收强度减弱的效应。的效应。4040 四、吸收带四、吸收带 R带带Radikal(基团基团)K带带Konjugation(共轭作用共轭作用)B带带benzenoid(苯的苯的)E带带芳香族化合物特征吸收带芳香族化合物特征吸收带 41吸吸收收带带跃迁类型跃迁类型吸收峰吸收峰区域区域强强度度产生产生基团基团特点特点Rn*250500nm弱弱COCNNO2 1.强吸收峰在附近时，强吸收峰在附近时，R带红移或被掩盖带红移或被掩盖2.溶剂极性溶剂极性，R带蓝移带蓝移K*210250nm强强CC 大大共轭共轭1.共轭双键数目共轭双键数目，K红移，红移，2.K带不被其它带掩蔽，带不被其它带掩蔽，只会掩蔽其它带只会掩蔽其它带B苯环骨架苯环骨架振动振动*230270nm（重心在（重心在256nm）弱弱1.芳环特征吸收带芳环特征吸收带2.五指峰，有五指峰，有K带时迭合成肩峰带时迭合成肩峰E1E2*苯环中三个苯环中三个CHCH组成的环状组成的环状共轭系统共轭系统180nm200nm强强中中强强1.E1带紫外中看不见，不考虑带紫外中看不见，不考虑2.当苯环上有共轭发色团取代时，当苯环上有共轭发色团取代时，E2带与带与K带合并，长移，带合并，长移，B带同时长移带同时长移3.苯环上有助色团取代，苯环上有助色团取代，E2带红移，带红移，但但仍仍210nm42例：例：1.2.3.4.5.6.P16表表3-1电子结构和跃迁电子结构和跃迁4343 五、影响吸收带的因素五、影响吸收带的因素p16 位阻效应位阻效应 跨环效应跨环效应溶剂效应溶剂效应体系体系pH值的影响值的影响44空间空间位阻位阻（P16）n若化合物中两个发色团产生共轭，会若化合物中两个发色团产生共轭，会使使maxmax长移，但若立体位阻妨碍它们长移，但若立体位阻妨碍它们共平面，则：共平面，则：n位阻较小位阻较小改变改变 maxmax变化较小变化较小n位阻较大位阻较大 maxmax明显移动明显移动 n位阻最大位阻最大、maxmax 均显著改变均显著改变45 例：发色团发色团产生共轭例：发色团发色团产生共轭 max长移，若立体位阻长移，若立体位阻妨碍共平面，就会降低其共轭程度。妨碍共平面，就会降低其共轭程度。max（nm）247 253 17000 19000 max（nm）237 231 227（肩峰）（肩峰）10250 5600 结论：随着邻位取代基增加，空间位阻造成连接两结论：随着邻位取代基增加，空间位阻造成连接两个苯环的单键扭转，使两个苯环不在同一平面，个苯环的单键扭转，使两个苯环不在同一平面，不能有效共轭，使吸收峰蓝移。不能有效共轭，使吸收峰蓝移。4646 顺反异构顺反异构指双键或环上取代基在空间排列的指双键或环上取代基在空间排列的异构体。（空间位置的不同）异构体。（空间位置的不同）紫外光谱有明显差别紫外光谱有明显差别47 图图 二苯乙烯顺反式异构体的紫外吸收光谱二苯乙烯顺反式异构体的紫外吸收光谱48例：例：max 214nm max 239nm 16600 12000 max 244nm max 240nm 6300 5200结论：结论：、为为Scis型，有位阻，型，有位阻，max和和均有改变。均有改变。4949异构现象异构现象异构现象可使紫外吸收带产生明显异构现象可使紫外吸收带产生明显差异。不同异构体可使紫外吸收光差异。不同异构体可使紫外吸收光谱及谱及max、均不同。均不同。原因原因：1.异构延长了共轭体系异构延长了共轭体系2.异构产生了位阻异构产生了位阻3.异构体的存在形式与溶剂有关异构体的存在形式与溶剂有关50例：例：P52 鸯尾酮鸯尾酮 鸯尾酮鸯尾酮 共轭体系小共轭体系小 共轭体系大共轭体系大 顺式二苯乙烯顺式二苯乙烯 反式二苯乙烯反式二苯乙烯 max208(10500)max295.5(29000)51 异构体的存在形式与溶剂的关系异构体的存在形式与溶剂的关系例：乙酰乙酸乙酯的互变异构体例：乙酰乙酸乙酯的互变异构体 酮式（极性溶剂中）酮式（极性溶剂中）烯醇式（非极性溶剂中）烯醇式（非极性溶剂中）max（nm）272（n*）243（*）弱弱 强强 与与H2O形成分子间氢键形成分子间氢键 自身形成分子内氢键，自身形成分子内氢键，结构较稳定结构较稳定 结构更稳定，基态能量结构更稳定，基态能量，E，。5252 跨环效应跨环效应指非共轭基团之间的相互作用。指非共轭基团之间的相互作用。当分子中两个非共轭发色团处于一当分子中两个非共轭发色团处于一定的空间位置（环状体系）定的空间位置（环状体系）发色发色团分子轨道间相互作用。团分子轨道间相互作用。产生的光谱既非两个发色团的加合，产生的光谱既非两个发色团的加合，也不同于二者共轭的光谱。也不同于二者共轭的光谱。53 例：P51 二环庚烯（孤立双键）二环庚烯（孤立双键）二环庚二烯（两个非共轭双键）二环庚二烯（两个非共轭双键）max（nm）197 205，214，220，230（肩峰）（肩峰）7600 2100，214，870，200 在在200230nm范围，有一弱的范围，有一弱的 并具有精细结构的吸收带。并具有精细结构的吸收带。这是由于分子中两个双键相互平行，这是由于分子中两个双键相互平行，空间位置有利于相互作用。空间位置有利于相互作用。5454羰基与乙烯基的相互作用的跨环效应羰基与乙烯基的相互作用的跨环效应 在某些在某些、不饱和酮中，由于适不饱和酮中，由于适当的立体排列，使羰基氧的孤电子当的立体排列，使羰基氧的孤电子对和双键的对和双键的电子发生作用，使得电子发生作用，使得n*引起的引起的R吸收带长移，同时吸收带长移，同时。55 例：羰基与乙烯基的相互作用例：羰基与乙烯基的相互作用 （P52）(a)(b)(c)max（nm）296 233，296，307 225，275 32 2290，307，267 1200，33 56例：max 214nm，284nm（R带）带）max 238nm，25225757溶剂效应溶剂效应有机化合物在溶液中的紫外吸收光谱易受有机化合物在溶液中的紫外吸收光谱易受溶剂的影响，可引起其吸收峰位置、吸收溶剂的影响，可引起其吸收峰位置、吸收强度和光谱形状的改变。其中：强度和光谱形状的改变。其中：n*n*随溶剂随溶剂极性的增大极性的增大，吸收峰向吸收峰向短短波移动。波移动。*随溶剂随溶剂极性的增大极性的增大，吸收峰向吸收峰向长长波移动。波移动。用途：可区别两种跃迁引起的吸收谱带用途：可区别两种跃迁引起的吸收谱带585859溶剂极性对异丙叉丙酮的两种跃迁吸收峰的影响溶剂极性对异丙叉丙酮的两种跃迁吸收峰的影响跃迁跃迁类型类型正己烷正己烷氯仿氯仿甲醇甲醇水水迁移迁移*230nm230nm238nm238nm237nm237nm243nm243nm长移长移n*n*329nm329nm315nm315nm309nm309nm305nm305nm短移短移在溶解度允许范围内尽可能选用非极性溶剂或极性小的溶剂。在溶解度允许范围内尽可能选用非极性溶剂或极性小的溶剂。6060 体系体系pH值的影响值的影响 体系的体系的pH值对酸性、碱性的样品都值对酸性、碱性的样品都有明显影响，引起吸收峰位置、吸有明显影响，引起吸收峰位置、吸收强度和光谱形状的改变。收强度和光谱形状的改变。61 例：例：max 211，270 235，287 6200，1450 9400，2600 当有酚羟基存在时，化合物的吸收峰在碱性当有酚羟基存在时，化合物的吸收峰在碱性介质中将红移且吸收强度增加；若滴加介质中将红移且吸收强度增加；若滴加HCl溶液，溶液，则吸收峰的位置和强度又恢复原状。据此可推断则吸收峰的位置和强度又恢复原状。据此可推断芳香族化合物是否有羟基直接连在苯环上。芳香族化合物是否有羟基直接连在苯环上。62 例例：max 230，280 203，254 8600，1470 7500，160 当当N上未成对电子与上未成对电子与H离子形成配位键后，离子形成配位键后，苯胺共轭酸的吸收光谱与苯类似。可用该法鉴苯胺共轭酸的吸收光谱与苯类似。可用该法鉴别苯胺及其衍生物。别苯胺及其衍生物。苯：苯：max（nm）200，255 8000，215 6363第第2节节 Lambert-Beer定律定律一、Lambert-Beer定律定律二、偏离二、偏离Beer定律的因素定律的因素三、透光率测量误差三、透光率测量误差6464一、一、Lambert-Beer定律定律1.光吸收度的表示方法光吸收度的表示方法2.Lambert-Beer定律定律3.吸收度的加合性吸收度的加合性4.吸光系数吸光系数65 1.1.光吸收度的表示方法光吸收度的表示方法图图3-7 光辐射吸收示意图光辐射吸收示意图 66光吸收度的表示方法光吸收度的表示方法(1)透光率透光率(2)百分透光率百分透光率(3)吸光度吸光度(4)透光率与吸光度关系透光率与吸光度关系6767 2.Lambert-Beer定律定律(1)Lambert-Beer定律数学表达式定律数学表达式(2)Lambert-Beer定律物理意义定律物理意义(3)Lambert-Beer定律的适用条件定律的适用条件68(1)Lambert-Beer定律数学表达式定律数学表达式式中：式中：I0入射光强度入射光强度 T 透光率透光率 I 出射光强度出射光强度 C 溶液浓度溶液浓度 A 吸光度吸光度 b 液层厚度液层厚度 a系数系数nLambert定律：当溶液的浓度一定时，定律：当溶液的浓度一定时，AbnBeer定律：定律：当液层厚度一定时，当液层厚度一定时，AC 69 Lambert定律：定律：当溶液的浓度一定时，当溶液的浓度一定时，AbBeer定律：定律：当液层厚度一定时，当液层厚度一定时，AC7070 (2)Lambert-Beer定律物理意义定律物理意义 当一束平行单色光通过均匀溶液时，当一束平行单色光通过均匀溶液时，溶液的吸光度溶液的吸光度A与吸光物质的浓度与吸光物质的浓度C及液层厚度及液层厚度b的乘积成正比。的乘积成正比。7171 (3)Lambert-Beer定律的适用条件定律的适用条件1)平行单色光（入射光）平行单色光（入射光）2)稀溶液：稀溶液：105102mol/L7272 3.吸收度的加合性吸收度的加合性7373 4.吸光系数吸光系数物理意义：吸光物质在单位浓度及物理意义：吸光物质在单位浓度及单位厚度时的吸光度。单位厚度时的吸光度。吸光系数是定性和定量的依据。吸光系数是定性和定量的依据。吸光系数越大，表明该物质的吸光吸光系数越大，表明该物质的吸光能力越强，灵敏度越高。能力越强，灵敏度越高。74吸收系数的两种表示方法吸收系数的两种表示方法n摩尔吸收系数摩尔吸收系数：一定波长时，溶液浓度为一定波长时，溶液浓度为1mol/L，厚度为，厚度为1cm的吸光度，单位为的吸光度，单位为Lmol1cm1。n百分吸收系数百分吸收系数 ：一定波长时，溶液浓度为一定波长时，溶液浓度为1%（W/V），厚），厚度为度为1cm的吸光度，的吸光度，单位为单位为100mLg1cm1。(中国药典常用中国药典常用)n换算关系：换算关系：7575 二、二、偏离偏离Beer定律的因素定律的因素 1.化学因素化学因素 2.光学因素光学因素三、三、透光率透光率测量误差测量误差 1.透光率透光率测量量误差差 2.测量条件的量条件的选择7676 Beer定律的偏离现象定律的偏离现象根据根据Beer定律，当波长和入射光强定律，当波长和入射光强度一定时，吸光度度一定时，吸光度A与吸光物质的与吸光物质的浓度浓度C成正比。即成正比。即A C曲线应为一曲线应为一条通过原点的直线。条通过原点的直线。偏离偏离Beer定律的现象定律的现象:出现偏离直出现偏离直线的情况线的情况(特别是在溶液浓度较高特别是在溶液浓度较高时时)77 标准曲线的偏离标准曲线的偏离 7878偏离原因偏离原因化学因素化学因素光学因素光学因素7979化学因素化学因素溶液中溶质因浓度改变而有溶液中溶质因浓度改变而有离解离解、缔合缔合、与、与溶剂溶剂间的间的作用作用等原因而发等原因而发生偏离生偏离Beer定律的现象。定律的现象。80 例：8181光学因素光学因素非单色光非单色光杂散光杂散光散射光和反射光散射光和反射光非平行光非平行光8282 非单色光（偏离的主要因素）非单色光（偏离的主要因素）由于吸光物质对不同波长光的吸收能由于吸光物质对不同波长光的吸收能力不同，力不同，BeerBeer定律只适用于单色光。定律只适用于单色光。在实际测量中，往往难以得到纯粹的在实际测量中，往往难以得到纯粹的单色光，而只能得到一定波长范围的单色光，而只能得到一定波长范围的复合光，导致了对复合光，导致了对BeerBeer定律的偏离。定律的偏离。83 8484 解决方法：选择吸光物质的最解决方法：选择吸光物质的最大吸收波长作为测定波长，既大吸收波长作为测定波长，既保证测定有较高的灵敏度，又保证测定有较高的灵敏度，又保证较小的偏离。保证较小的偏离。85分析谱带的选择分析谱带的选择8686 杂散光杂散光：从单色器得到的单色光中，：从单色器得到的单色光中，一些不在谱带范围内的与所需波长相一些不在谱带范围内的与所需波长相隔甚远的光。隔甚远的光。产生原因：仪器光学系统缺陷或光学产生原因：仪器光学系统缺陷或光学元件受灰尘、霉蚀的影响元件受灰尘、霉蚀的影响。随着仪器制造工艺的提高，绝大部分随着仪器制造工艺的提高，绝大部分波长内杂散光的影响可忽略不计。波长内杂散光的影响可忽略不计。在紫外末端处，杂散光的比例相对增在紫外末端处，杂散光的比例相对增大，会干扰测定，有时会出现假峰。大，会干扰测定，有时会出现假峰。8787 散射光和反射光散射光和反射光：吸光质点对入射光：吸光质点对入射光有散射作用，吸收池内外界面之间入有散射作用，吸收池内外界面之间入射光通过时又有反射作用。射光通过时又有反射作用。散射光和反射光由入射光谱带宽度内散射光和反射光由入射光谱带宽度内光产生，对透射光强度有直接影响。光产生，对透射光强度有直接影响。散射和反射作用使透射光强度减弱。散射和反射作用使透射光强度减弱。真溶液散射作用较弱，可用真溶液散射作用较弱，可用空白空白进行进行补偿补偿。8888 非平行光非平行光：通过吸收池的光，一般都：通过吸收池的光，一般都不是真正的平行光，倾斜光通过吸收不是真正的平行光，倾斜光通过吸收池的实际光程将比垂直照射的平行光池的实际光程将比垂直照射的平行光的光程长，使吸光度增加。的光程长，使吸光度增加。这是同一物质用不同仪器测定吸收系这是同一物质用不同仪器测定吸收系数时，产生差异的主要原因之一。数时，产生差异的主要原因之一。89 三、透光率测量误差三、透光率测量误差n浓度测定结果与浓度测定结果与 透光率的关系：透光率的关系：n浓度相对误差：浓度相对误差：n结论：测定结果的相对误差取决于透光率结论：测定结果的相对误差取决于透光率T和透光率测量误差和透光率测量误差T的大小。的大小。90不同不同T%或或A时的浓度相对误差（假定时的浓度相对误差（假定T0.5）透光率透光率T%吸光度吸光度A浓度相对误差浓度相对误差C/C100透光率透光率T%吸光度吸光度A浓度相对误差浓度相对误差C/C100950.022 10.2400.399 1.36900.0465.336.80.4341.34800.0972.8300.5231.38700.1552.0200.6991.55600.2221.63101.0002.17500.3011.4491浓度相对误差与透光率的关系浓度相对误差与透光率的关系9292 透光率测量误差透光率测量误差 小结小结1.测量最适宜范围测量最适宜范围 （浓度相对误差较小）（浓度相对误差较小）透光率：透光率：6520 吸光度：吸光度：0.20.72.浓度相对误差最小时浓度相对误差最小时 透光率：透光率：36.8%吸光度：吸光度：0.4349393 测量条件的选择测量条件的选择测定波长的选择测定波长的选择溶液吸光度的范围溶液吸光度的范围9494 测定波长的选择原则测定波长的选择原则：“吸收最大，吸收最大，干扰最小干扰最小”。测定波长一般选择在被测组分最大测定波长一般选择在被测组分最大吸收波长处，因为吸光度越大，测定吸收波长处，因为吸光度越大，测定的灵敏度越高，准确度也容易提高。的灵敏度越高，准确度也容易提高。如果被测组分有几个最大吸收波长时，如果被测组分有几个最大吸收波长时，可选择不易出现干扰吸收、吸光度较可选择不易出现干扰吸收、吸光度较大而且峰顶比较平坦的最大吸收波长。大而且峰顶比较平坦的最大吸收波长。9595 溶液吸光度的范围溶液吸光度的范围：控制在控制在0.20.7之内。之内。通过调节溶液的浓度和吸收池通过调节溶液的浓度和吸收池的厚度来解决。的厚度来解决。9696 测量条件的选择测量条件的选择 小结小结1.测定波长选择在被测组分最大吸测定波长选择在被测组分最大吸收波长处收波长处2.测量值吸光度测量值吸光度A在在0.20.7范围内范围内9797 第第3节显色反应及显色条件的选择节显色反应及显色条件的选择显色反应的基本要求显色反应的基本要求显色反应类型显色反应类型显色反应条件的选择显色反应条件的选择干扰的消除干扰的消除9898 在紫外可见光区，除某些物质对可在紫外可见光区，除某些物质对可见光有吸收外，很多物质本身无吸见光有吸收外，很多物质本身无吸收或只有弱吸收，因此需在一定条收或只有弱吸收，因此需在一定条件下加入显色剂，经过显色反应将件下加入显色剂，经过显色反应将被测组分转变为有色化合物后再行被测组分转变为有色化合物后再行测定。测定。9999 显色反应显色反应：选用适当的试剂与不吸：选用适当的试剂与不吸收紫外可见光的被测物质定量反应收紫外可见光的被测物质定量反应生成对紫外可见光有较大吸收的物生成对紫外可见光有较大吸收的物质的反应质的反应。显色剂显色剂：与不吸收紫外可见光的被：与不吸收紫外可见光的被测物质定量反应生成对紫外可见光测物质定量反应生成对紫外可见光有较大吸收的物质的试剂。有较大吸收的物质的试剂。100100 显色反应类型显色反应类型 （1）配位反应）配位反应（2）氧化还原反应）氧化还原反应（3）缩合反应）缩合反应101101 显色反应的基本要求显色反应的基本要求 1.被测组分和所生成的有色物质之间必须被测组分和所生成的有色物质之间必须有稳定的有稳定的定量定量关系。关系。2.生成的有色物质必须有足够的生成的有色物质必须有足够的稳定性稳定性。3.生成的有色物质与显色剂的最大吸收波生成的有色物质与显色剂的最大吸收波长之差要长之差要60nm。4.生成的有色物质的生成的有色物质的需达到需达到1031055.显色反应必须有较好的显色反应必须有较好的选择性选择性。102102显色反应条件的选择显色反应条件的选择 显色剂的用量显色剂的用量溶液的酸度溶液的酸度显色时间显色时间温度温度溶剂溶剂103显色剂的用量n结论：显色剂用量可通过实验确定，作吸光结论：显色剂用量可通过实验确定，作吸光度随显色剂浓度变化曲线，选择恒定吸光度度随显色剂浓度变化曲线，选择恒定吸光度值时的显色剂用量。值时的显色剂用量。104 n溶液酸度溶液酸度 n很多显色剂是有机弱酸或弱碱，溶很多显色剂是有机弱酸或弱碱，溶液的酸度会直接影响显色剂存在的液的酸度会直接影响显色剂存在的形式和有色化合物的浓度变化，以形式和有色化合物的浓度变化，以致改变溶液的颜色。致改变溶液的颜色。n其它如氧化还原反应、缩合反应等，其它如氧化还原反应、缩合反应等，溶液的酸碱性也有重要的影响，需溶液的酸碱性也有重要的影响，需用缓冲溶液保持溶液在一定用缓冲溶液保持溶液在一定pH值下值下进行显色反应。进行显色反应。105 显色时间显色时间n显色反应的反应速度不同，完成反显色反应的反应速度不同，完成反应所需要的时间有差异。应所需要的时间有差异。n显色产物在放置过程中发生变化。有显色产物在放置过程中发生变化。有的颜色保持长时间不变，有的颜色会的颜色保持长时间不变，有的颜色会逐渐减退或加深，有的需一定时间才逐渐减退或加深，有的需一定时间才能显色。能显色。n因此，必须在一定条件下通过实验，因此，必须在一定条件下通过实验，作出吸收度时间关系曲线，才能确作出吸收度时间关系曲线，才能确定适宜的显色时间。定适宜的显色时间。106 温度温度n显色反应是通过化学反应来进行的，显色反应是通过化学反应来进行的，所以显色反应的结果与温度也有很所以显色反应的结果与温度也有很大关系。大关系。n如：原花青素与盐酸亚铁铵在硫酸如：原花青素与盐酸亚铁铵在硫酸/丙酮溶剂中的显色反应在室温和煮丙酮溶剂中的显色反应在室温和煮沸状态下就有很大不同。室温：显沸状态下就有很大不同。室温：显色产物吸收度极低；煮沸：显色产色产物吸收度极低；煮沸：显色产物吸收度明显增大。物吸收度明显增大。107 溶剂溶剂n溶剂的性质直接影响被测组分对光的吸溶剂的性质直接影响被测组分对光的吸收。收。n相同的物质溶解于不同的溶剂中，有时相同的物质溶解于不同的溶剂中，有时会出现不同的颜色。如：苦味酸的水溶会出现不同的颜色。如：苦味酸的水溶液呈黄色，而氯仿液呈无色。液呈黄色，而氯仿液呈无色。n显色反应产物的稳定性与溶剂有关。如显色反应产物的稳定性与溶剂有关。如红色的硫氰酸铁配合物在丁醇中比在水红色的硫氰酸铁配合物在丁醇中比在水溶液中稳定。溶液中稳定。108 结结 论论：显色反应的条件经过实验确定显色反应的条件经过实验确定。109109干扰的消除干扰的消除 干扰物质对显色反应和测定的影响：干扰物质对显色反应和测定的影响：1.干扰物质本身有色或无色，与显色剂形干扰物质本身有色或无色，与显色剂形成有色化合物，在测定条件下有吸收。成有色化合物，在测定条件下有吸收。2.干扰物质水解，析出沉淀使溶液混浊，干扰物质水解，析出沉淀使溶液混浊，影响吸光度的测定。影响吸光度的测定。3.与被测组分或显色剂形成更稳定的配合与被测组分或显色剂形成更稳定的配合物，使显色反应不能进行完全。物，使显色反应不能进行完全。110110消除干扰的方法消除干扰的方法控制酸度控制酸度选择适当的掩蔽剂选择适当的掩蔽剂生成惰性配合物生成惰性配合物选择适当的测定波长选择适当的测定波长选择适宜的空白溶液选择适宜的空白溶液预分离预分离111111选择适宜的空白溶液选择适宜的空白溶液空白溶液（参比溶液）的作用：空白溶液（参比溶液）的作用：1.校正仪器的透光率校正仪器的透光率100或吸光或吸光度度A为零为零2.用于消除来自于溶剂、试剂、器用于消除来自于溶剂、试剂、器皿及试样的干扰吸收。皿及试样的干扰吸收。112112常见的空白溶液常见的空白溶液 溶剂空白溶剂空白试剂空白试剂空白试样空白试样空白不显色空白不显色空白平行操作空白平行操作空白113113第第4节节 紫外紫外-可见分光光度计可见分光光度计一、仪器组成一、仪器组成二、主要部件二、主要部件三、分光光度计的光学性能与类型三、分光光度计的光学性能与类型四、分光光度计的校正四、分光光度计的校正114一、仪器组成一、仪器组成仪器的组成仪器的组成 115115工作程序工作程序 复合光源经过单色器后，被分成单复合光源经过单色器后，被分成单色光（如色光（如254nm、366nm、378nm等波等波长的光），经过装有样品溶液的吸收池，长的光），经过装有样品溶液的吸收池，样品中的吸光质点会吸收掉一部分光，样品中的吸光质点会吸收掉一部分光，而将剩余的光透射到检测器（光电管）而将剩余的光透射到检测器（光电管）上，从而测定出样品的吸收度，样品的上，从而测定出样品的吸收度，样品的吸收度与样品的浓度在一定范围内成正吸收度与样品的浓度在一定范围内成正比。比。116116 二、主要部件二、主要部件 1.光源光源 2.单色器单色器 3.吸收池吸收池 4.检测器检测器 5.讯号处理与显示器讯号处理与显示器117117 1.光源光源紫外光区紫外光区:氢灯或氢灯或氘灯氘灯 150400nm可见光区可见光区：钨灯钨灯或卤钨灯或卤钨灯 350800nm要求要求：符合所需波长范围，具有足够的发符合所需波长范围，具有足够的发射强度和稳定性，具有连续光谱。射强度和稳定性，具有连续光谱。118 2.单色器单色器 作用：将来自光源的连续光谱按波长顺序色散，作用：将来自光源的连续光谱按波长顺序色散，并从中分离出一定宽度的谱带并从中分离出一定宽度的谱带 进光狭缝进光狭缝 准直镜准直镜 棱镜（早期仪器）棱镜（早期仪器）单色器的组成单色器的组成 色散元件色散元件 光栅光栅（目前仪器）（目前仪器）聚焦透镜聚焦透镜 出光狭缝出光狭缝119 120120 3.吸收池吸收池光学光学玻璃玻璃吸收池：吸收池：可见可见光区光区熔融熔融石英石英吸收池：吸收池：紫外紫外可见可见光区光区吸收池厚度（吸收池厚度（L）规格：）规格：0.5、1、2、3cm定量分析前吸收池需作配对：定量分析前吸收池需作配对：使用注意事项：保持使用注意事项：保持透光面光洁透光面光洁。1214.4.检测器检测器作用：将光强度转换成相应的电讯号作用：将光强度转换成相应的电讯号 光电池光电池 光电管光电管检测器类型检测器类型 光电倍增管（目前常用）光电倍增管（目前常用）光二极管阵列检测器光二极管阵列检测器122 光电倍增管光电倍增管123 1241245.讯号处理与显示器讯号处理与显示器作用：作用：将检测器输出的微弱电信号加以放大显示将检测器输出的微弱电信号加以放大显示显示方式：透光率显示方式：透光率 吸光度吸光度 浓度浓度 吸光系数吸光系数125 三、分光光度计的类型三、分光光度计的类型1.光学性能光学性能波长范围：波长范围：195820nm波长准确度：显示波长与实际波长的误差波长准确度：显示波长与实际波长的误差0.5nm 波长重现性：重复同一波长的变动值波长重现性：重复同一波长的变动值0.5nm 透光率测量范围：透光率测量范围：0150%(T)吸光度测量范围：吸光度测量范围：0.17302.00（A）光度准确度：透光率满量程误差为光度准确度：透光率满量程误差为 0.5 光度重复性：重复测量透光率的变动性光度重复性：重复测量透光率的变动性 0.5分辨率：单色器分辨相近谱线的能力。分辨率：单色器分辨相近谱线的能力。0.3nm（260nm）杂散光：杂散光：1%NaI(220nm)0.5%126126 2.类型类型1）单光束分光光度计）单光束分光光度计2）双光束分光光度计）双光束分光光度计3）双波长分光光度计）双波长分光光度计127 n四、分光光度计的校正四、分光光度计的校正 氢灯、氘灯发射谱线氢灯、氘灯发射谱线n1.1.波长校正波长校正 镨钕玻璃、钬玻璃镨钕玻璃、钬玻璃 苯蒸气苯蒸气n2.2.吸光度校正：吸光度校正：硫酸铜、硫酸钴铵、铬酸钾标准溶液硫酸铜、硫酸钴铵、铬酸钾标准溶液n3.3.吸收池校正：参比和样品溶液吸收池校正：参比和样品溶液128128第第5 5节节 分析方法分析方法一、定性分析一、定性分析 二、结构分析二、结构分析 三、定量分析三、定量分析 129129一、一、定性方法定性方法定性鉴别定性鉴别1.1.主要依据主要依据2.2.定性鉴别的方法定性鉴别的方法130130 吸收光谱形状吸收光谱形状 1.主要依据主要依据 吸收峰数目吸收峰数目 各吸收峰的波长位置各吸收峰的波长位置 吸收强度吸收强度1311312.定性鉴别的方法定性鉴别的方法 对比吸收光谱特征数据对比吸收光谱特征数据max对比法对比法 对比吸光度（吸光系数）比值对比吸光度（吸光系数）比值A1/A2 对比吸收光谱的一致性对比吸收光谱的一致性132例：例：安宫黄体酮（安宫黄体酮（M386.53）炔诺酮（炔诺酮（M298.43）max2401nm max2401nm 408 571133 134134 结论结论：1）结构完全相同的化合物应）结构完全相同的化合物应有完全相同的吸收光谱。有完全相同的吸收光谱。2）吸收光谱相同的化合物不）吸收光谱相同的化合物不一定是同一个化合物。一定是同一个化合物。3）吸收光谱有明显差别的化）吸收光谱有明显差别的化合物肯定不是同一种物质。合物肯定不是同一种物质。135135小小 结结 用紫外吸收光谱数据或曲线进行定用紫外吸收光谱数据或曲线进行定性鉴别，有一定的局限性：性鉴别，有一定的局限性：紫外吸收光谱通常只有一个或几个紫外吸收光谱通常只有一个或几个宽吸收带，曲线形状变化不多，相宽吸收带，曲线形状变化不多，相同或相似的光谱较多。同或相似的光谱较多。单独用紫外光谱不能完全确定物质单独用紫外光谱不能完全确定物质的分子结构，需与红外、质谱和核的分子结构，需与红外、质谱和核磁共振相结合。磁共振相结合。136136 二、结构分析二、结构分析 p34推定分子的骨架推定分子的骨架判断发色团之间的共轭关系及判断发色团之间的共轭关系及估计共轭体系中取代基的种类、估计共轭体系中取代基的种类、位置及数目位置及数目判别异构体判别异构体137137 三、定量分析三、定量分析 (一一)单组分样品的定量方法单组分样品的定量方法 (二二)多组分样品的定量方法多组分样品的定量方法 计算分光光度法计算分光光度法138138(一一)单组分样品的定量方法单组分样品的定量方法基本要求基本要求 1.根据根据Beer定律，物质在一定波长处的吸定律，物质在一定波长处的吸收度与浓度之间呈线性关系。收度与浓度之间呈线性关系。2.测定波长常选被测组分最大吸收波长。测定波长常选被测组分最大吸收波长。3.选用的溶剂应在测定波长处无吸收。选用的溶剂应在测定波长处无吸收。139溶剂的极限波长溶剂的极限波长说明：说明：选择溶剂时，被测组分的测定波长必须大于溶剂的截止波长选择溶剂时，被测组分的测定波长必须大于溶剂的截止波长溶剂溶剂极限极限波长波长溶剂溶剂极限极限波长波长溶剂溶剂极限极限波长波长乙醚乙醚21821896%96%硫酸硫酸210210氯仿氯仿245245环己烷环己烷200200乙醇乙醇210210四氯化碳四氯化碳260260正丁醇正丁醇2102102,2,42,2,4三甲戊烷三甲戊烷220220蚁酸甲酯蚁酸甲酯260260水水200200对二氧六环对二氧六环220220苯苯260260异丙醇异丙醇210210正己烷正己烷190190甲苯甲苯285285甲基环己烷甲基环己烷210210甘油甘油230230吡啶吡啶305305二硫化碳二硫化碳3853851,21,2二氧己烷二氧己烷233233丙酮丙酮330330甲醇甲醇205205二氯甲烷二氯甲烷235235乙酸乙酯乙酸乙酯260260140140 单组分样品的定量方法单组分样品的定量方法 1.标准曲线法标准曲线法 2.标准对照法标准对照法 3.吸光系数法吸光系数法 4.差示光度法差示光度法1411.标准曲线法标准曲线法 n(1)配制一系列浓度不同的标配制一系列浓度不同的标准溶液准溶液.n(2)分别测其吸收度分别测其吸收度n(3)以浓度为横坐标，相应的以浓度为横坐标，相应的吸收度为纵坐标，绘制吸收度为纵坐标，绘制AC曲线或计算回归方程。曲线或计算回归方程。n(4)在相同条件下测定样品溶在相同条件下测定样品溶液的吸光度，从标线上或用液的吸光度，从标线上或用回归方程求得样品浓度。回归方程求得样品浓度。142 注意事项注意事项 (1)标准溶液至少要标准溶液至少要57点，并不得任意延长。点，并不得任意延长。(2)A样样必须包括在标线范围内。必须包括在标线范围内。(3)样品和对照品必须使用相同的溶剂系统和显样品和对照品必须使用相同的溶剂系统和显 色系统，并在相同条件下测定。色系统，并在相同条件下测定。(4)在固定仪器和方法后，标线可多次使用，但在固定仪器和方法后，标线可多次使用，但 要定期校正。要定期校正。143 n影响标准曲线不通过原点的原因影响标准曲线不通过原点的原因 n空白溶液的选择不当空白溶液的选择不当n显色反应的灵敏度不够显色反应的灵敏度不够n吸收池的光学性能不一致吸收池的光学性能不一致 n解决方法解决方法n采取适当措施加以改善。采取适当措施加以改善。1442.对照法对照法 n相同条件分别测量吸光度：相同条件分别测量吸光度：A标标abC标标A样样abC样样 145 注意事项注意事项1.标准曲线要过原点。标准曲线要过原点。2.仪器单色光纯度要高。仪器单色光纯度要高。3.C样样与与C标标要接近。要接近。146 3.吸光系数法吸光系数法 已知已知 b和吸光系数和吸光系数或或 ，可根据，可根据测量值测量值 A 值求被测物浓度。值求被测物浓度。注意：用注意：用 ，C 为为g/100ml 用用，C 为为mol/L147 例：中药蟾酥中脂蟾毒配基的含量测定例：中药蟾酥中脂蟾毒配基的含量测定精密称定试样精密称定试样0.472g，索氏提取后，滤，索氏提取后，滤液置液置100ml量瓶中，精密量取量瓶中，精密量取1ml置置25ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度。用量瓶中，加乙醇稀释至刻度。用1cm石英池在石英池在299nm波长处测得吸光度波长处测得吸光度为为0.459，计算脂蟾毒配基的百分含量。，计算脂蟾毒配基的百分含量。（已知（已知E标标154）148 解：解：法：先求试样中纯品浓度法：先求试样中纯品浓度试样浓度试样浓度结果结果149 法：先求试样的百分吸光系数法：先求试样的百分吸光系数结果结果 150150 4.差示光度法差示光度法-A法法 定义：用一与供试品浓度接近的标准定义：用一与供试品浓度接近的标准溶液溶液,代替空白溶液作参比，与供试品代替空白溶液作参比，与供试品溶液进行比较的方法。溶液进行比较的方法。基本原理：供试品溶液与参比溶液的基本原理：供试品溶液与参比溶液的吸光度吸光度(A)与两溶液的浓度差成正与两溶液的浓度差成正比。比。适用范围：高含量、稀溶液、高精度适用范围：高含量、稀溶液、高精度实质：透光率在表尺上的扩展。实质：透光率在表尺上的扩展。151151二、多组分样品的定量方法二、多组分样品的定量方法 计算分光光度法计算分光光度法 若样品中有两种或两种以上组分若样品中有两种或两种以上组分共存时，可根据吸收光谱相互重叠共存时，可根据吸收光谱相互重叠的情况分别采用不同的测定方法。的情况分别采用不同的测定方法。152 第一种：按单组分测定方法第一种：按单组分测定方法第二种：根据吸光度加和性原理计第二种：根据吸光度加和性原理计算出算出b的浓度的浓度Cb 第三种：计算分光光度法第三种：计算分光光度法153153 计算分光光度法计算分光光度法1.解线性方程组法解线性方程组法2.双波长分光光度法双波长分光光度法3.三波长测定法三波长测定法4.导数光谱法导数光谱法5.正交函数法正交函数法154154 1.解线性方程组法解线性方程组法(1)分别测定分别测定a、b两组分在两组分在1和和2处处各自的吸光系数各自的吸光系数E或或。(2)测定测定a、b两组分混合液在两组分混合液在1和和2处的处的A1a+b与与A2a+b(3)解线性方程组法计算出解线性方程组法计算出a、b两组两组分的浓度分的浓度155155 方法要求两组分浓度相差不大方法要求两组分浓度相差不大156156 2.双波长分光光度法双波长分光光度法1)等吸收点法等吸收点法2)系数倍率法系数倍率法157 n原理原理n利用两束不同波长的单色光利用两束不同波长的单色光1和和2，以以1为参比波长、为参比波长、2为测定波长，为测定波长，测定同一样品，可得两波长间的吸测定同一样品，可得两波长间的吸光度值之差与被测组分浓度成正比。光度值之差与被测组分浓度成正比。1581)等吸收点法等吸收点法 159159 等吸收点的选择：等吸收点的选择：确定确定a为被测组分，为被测组分，b为干扰组分。为干扰组分。选被测组分的最大吸收波长为测定选被测组分的最大吸收波长为测定波长波长2。从干扰组分曲线在从干扰组分曲线在2处的交点引平处的交点引平行线交于干扰组分曲线的另一点，行线交于干扰组分曲线的另一点，该点的波长即为该点的波长即为1。160 选择选择1和和2的原则：的原则：1.干扰组分干扰组分b应具有相同的吸光度，即应具有相同的吸光度，即 2.待测组分吸光度差值待测组分吸光度差值A 应足够大。应足够大。161 根据吸光度加和性原则：根据吸光度加和性原则：因为因为所以所以从式中可见：被测组分的浓度从式中可见：被测组分的浓度Ca只与其在两只与其在两个波长处的吸收度有关。个波长处的吸收度有关。162162 2）系数倍率法）系数倍率法适用情况：适用情况：有的干扰物质的吸收曲线无明显吸有的干扰物质的吸收曲线无明显吸收峰（如图中收峰（如图中5、6、7、8、9、10图图谱中的虚线），无法找出等吸收波谱中的虚线），无法找出等吸收波长，不能运用等吸收点法时，可以长，不能运用等吸收点法时，可以运用系数倍率法。运用系数倍率法。163 164 测定原理测定原理1.在干扰曲线在干扰曲线Y上选择上选择两个波长两个波长1和和2。注。注意使被测组分在这两意使被测组分在这两个波长处的吸光度差个波长处的吸光度差值值A 尽可能大。尽可能大。2.掩蔽系数掩蔽系数 K=Ay1/Ay2165165 3.令KAy2=Ay1，则A2K(AX2+Ay2)A1AX1+Ay1 AA2A1 K(AX2+Ay2)-(AX1+Ay1)=（KAX2-AX1)+(KAy2-Ay1)（KEX2-EX1)CX K CX结果表明：A与被测组分CX成正比。166 注意注意1.选择两个波长选择两个波长1和和2时，应使被测组时，应使被测组分在这两个波长处的吸光度差值分在这两个波长处的吸光度差值A 尽可能大。尽可能大。2.掩蔽系数掩蔽系数K的引入，使干扰组分和被的引入，使干扰组分和被测组分的测定都放大了测组分的测定都放大了K倍，提高了倍，提高了检测灵敏度，但检测灵敏度，但K值过大，会使噪声值过大，会使噪声增大。当增大。当K值值1时，系数倍率法就是时，系数倍率法就是等吸收点法。等吸收点法。167 等吸收点法和系数倍率法的测定步骤等吸收点法和系数倍率法的测定步骤1.配制一系列被测组分的标准溶液，在配制一系列被测组分的标准溶液，在1和和2处测得处测得A1和和A2，得出，得出A标标。2.以以C标标为横坐标，为横坐标，A标标为纵坐标，绘制为纵坐标，绘制标准曲线。标准曲线。3.测得被测组分样品溶液的测得被测组分样品溶液的A1和和A2，得，得出出A样样，根据标准曲线求得，根据标准曲线求得C样样，计算，计算含量。含量。168 第六节第六节 有机化合物分子结构研究简介有机化合物分子结构研究简介 有机化合物的紫外吸收光谱主要取决于分子有机化合物的紫外吸收光谱主要取决于分子中发色团、助色团及它们的共轭情况，