生物分工程双水相萃取-课件

双水相萃取u 双水相分离理论u 双水相体系建立的操作方法u 双水相萃取技术的应用u 双水相萃取技术的研究进展发展历史l1955 年,瑞典Lund 大学学者Albertson 首次利用双水相技术来分离生物分子；l20世纪70 年代中期,前联邦德国的Kula 和Kroner 等率先将双水相体系应用于从细胞匀浆液中提取酶和蛋白质,大大地改善了胞内酶的提取效果。l20 世纪80 年代初期起,双水相萃取技术开始应用于工业生产。l目前,双水相萃取技术已实现了细胞器、细胞膜、病毒等多种生物体和生物组织以及蛋白质、酶、核酸、多糖、生长素等大分子生物物质的分离与纯化,取得了较好的成效。近年来,双水相萃取技术的分离对象进一步扩大,已包括了抗生素、多肽和氨基酸、重金属离子和植物有效成分中的小分子物质。一、双水相分离理论u 双水相的形成u 相图u 物质在两相中的分配双水相现象是当两种聚合物或一种聚合物与一种盐溶于同一溶剂时，由于聚合物之间或聚合物与盐之间的不相溶性，当聚合物或无机盐浓度达到一定值时，就会分成不互溶的两相。双水相萃取是利用物质在不相溶的，两水相间分配系数的差异进行萃取的方法。1、双水相体系的形成、双水相体系的形成双水相系统的类型双水相系统的类型（1）高聚物）高聚物-高聚物体系，以聚乙二醇高聚物体系，以聚乙二醇PEG/Dextran（葡聚糖）和（葡聚糖）和PEGDextran硫酸硫酸 盐体系为常见；盐体系为常见；(分子间的斥力）分子间的斥力）（2）高聚物）高聚物-低分子物质体系，以高聚物低分子物质体系，以高聚物/无机盐无机盐 体系为常见，如体系为常见，如PEG/硫酸盐、硫酸盐、PEG/磷酸盐磷酸盐 等等（盐析作用）。）。2 常见的各种双水相系统常见的各种双水相系统聚合物1聚合物2或盐聚合物1聚合物2或盐甲基聚丙二醇乙基羟乙基纤维素葡聚糖聚乙二醇聚乙烯醇羟丙基葡聚糖葡聚糖聚丙二醇聚乙烯吡咯烷酮羟丙基葡聚糖聚蔗糖葡聚糖葡聚糖聚乙烯醇聚丙二醇聚乙二醇聚乙烯吡咯烷酮甲氧基聚乙二醇磷酸钾葡聚糖聚乙二醇聚蔗糖聚乙烯吡咯烷聚乙烯醇甲基纤维素硫酸镁或羟丙基葡聚糖聚乙二醇硫酸铵聚乙烯咯烷酮葡聚糖硫酸钠甲酸钠甲基纤维素羟丙基葡聚糖酒石酸钾钠葡聚糖双水相组成的选择依据相图PEG-Dextran体系的相图物质在两相中的分配分配系数1.静电作用l表面自由能的影响l表面电荷的影响2.疏水作用l氨基酸在其等电点处的分配系数l蛋白质的疏水性l盐对疏水性的影响l盐浓度增加引起相间电位变化的影响影响分配平衡的因素l1）成相聚合物 成相聚合物的相对分子量降低、浓度升高有利于增大溶质的分配系数。系线长度趋于零时,上相和下相组成相同,分配系数为1.0 系线长度增加,上相和下相相对组成差别增大,被分离物质在两相中的表面张力差也增大,从而影响分配系数 如用PEG/(NH4)2SO4体系分离脂肪酶时,PEG质量分数为0.1、(NH4)2SO4质量分数为0.21组成的体系,为1.7,而当PEG质量分数为0.12、(NH4)2SO4质量分数为0.129时,为0.85;浓度影响到系线的长度 在双水相体系中加入电解质,由于阴、阳离子在两相中的分配差异,形成穿过相界面的电位,从而影响带电大分子物质在两相中分配。如在PEG/Dextran系统中加入NaClO4或KI时,可增加上相对带正电荷物质的亲和效应,并使带负电荷的物质进入下相;2 2）电解质的影响）电解质的影响3 3）pHpH值的影响值的影响 pH值的变化会导致组成体系的物质电性发生变化,也会使被分离物质的电荷发生改变,从而影响分配的进行。例如在PEG/盐组成的体系中,通常可在相当小的pH变化范围内,使蛋白质在其中的分配系数有很大的改变。4）外加电场的影响外加电场的影响 当在两相分界的垂直方面上加上电场时由于电位差增加而使分配系数发生改变 如用PEG8000/Dextran 500体系分离肌红蛋白,在外加48.1/cm的电场强度40 min后,分配系数从0.81变为38.7,上相回收率从44.7%增高到98.0%。5)温度的影响温度的影响 由于温度的变化影响液相的物理性质，如黏度和密度，影响待分离物在两相中的分配。此外，成相聚合物对蛋白质有稳定化作用，在室温操作活性回收率依然很高。二、双水相体系建立的操作方法1 1双水相体系组成成分的选择双水相体系组成成分的选择 分配系数 经济性 高聚物对目的成分的影响 如各种细胞、噬菌体等的分配系数或大于l00，或小于0.01；蛋白质(如酶)的分配0.1至10之间；无机盐的分配系数一般接近于1.0。这种不同物质分配系数的差异，构成了双水相萃取分离物质的基础。2 双水相体系的系线和相图的制作双水相体系的系线和相图的制作 在双水相体系组成成分确定以后,首先要配制双水相体系,而双水相体系的配制依据是体系的相图,所以,在配制双水相体系以前应先把该体系的相图(包括系线)制作出来 以 PEG/(NH4)2SO4 体系为例:从 PEG/(NH4)2SO4 的量可得出体系组成的质量分数,混合分相后,测出上相和下相中PEG、(NH4)2SO4的含量,由此可得到3个点即加料点、上相点和下相点,然后调整PEG或(NH4)2SO4的量,重将得到的所有的上相点和下相点在坐标图上用光滑曲线连接起来组成双节曲线,而每1次的加料点、上相点和下相点的连线则为系线。（3）双水相的制备：）双水相的制备：双水相萃取的特点双水相萃取的特点:(1)条件温和条件温和 双水相萃取体系中两相中的大部分(质量分数0.7)是水,所形成的两相不涉及有机溶剂,对被分离的物质不会起破坏作用,所使用的聚合物有时还对被分离物质起保护作用,无三废处理之需,所以特别适合生物活性物质的分离提纯;(2)操作方便操作方便 所使用的设备简单,操作方便,即使在常温下操作亦不易导致失活;由于是双水相,两相间的表面张力小,有利于萃取,且可直接与后续提纯工序相连接,无需进行特殊的处理;(3)回收率高回收率高 提纯倍数可达2-20倍,如体系选择适当,回收率可达80%-90%以上,且分离速度快。三、双水相体系的应用三、双水相体系的应用应用：在生物化学、细胞生物学、生物化工等有机物分离提纯方面得到了较为广泛的应用，如：分离提纯蛋白质、生物酶、菌体、细胞、氨基酸、抗生素以及亲水性生物大分子等。1)蛋白质、酶的纯化 2)多肽的分离纯化3)核酸的分离纯化4)、病毒、细胞、细胞器的分离传统双水相体系的特点传统双水相体系的特点优点：分离条件温和，质量传输快，易操作，可调节缺点：高聚物黏度较大，难挥发，成本高，需要反萃取,使后续的分离较为麻烦，不适宜大规模工业化生产。开发开发廉价廉价双水相体系双水相体系成为双水相萃取分离成为双水相萃取分离技术发展的方向技术发展的方向 由亲水性醇类（甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等）与无机盐（硫酸铵、磷酸盐等）组成的新型双水相体系。独特优点独特优点：a.溶剂成本低，原料丰富廉价；溶剂成本低，原料丰富廉价；b.溶剂粘度小，传质和分相速度快，无相乳化现象；溶剂粘度小，传质和分相速度快，无相乳化现象；c.溶剂挥发度大，可省去反萃步骤，降低操作费用；溶剂挥发度大，可省去反萃步骤，降低操作费用；d.体系简单，易放大，溶剂回收容易。体系简单，易放大，溶剂回收容易。四四 双水相萃取技术研究进展双水相萃取技术研究进展新型双水相萃取的应用新型双水相萃取的应用大宗发酵产品的双水相萃取（大宗发酵产品的双水相萃取（1,3-丙二醇丙二醇和和2,3-丁二醇）丁二醇）蛋白的双水相萃取（血清白蛋白）蛋白的双水相萃取（血清白蛋白）天然产物有效成分的双水相萃取（薯蓣皂天然产物有效成分的双水相萃取（薯蓣皂苷、白藜芦醇、丹酚酸苷、白藜芦醇、丹酚酸B和花青素等）和花青素等）新型新型ATPS分离分离1,3-丙二醇丙二醇的研究的研究1传统的分离传统的分离1,3-丙二醇丙二醇手段手段絮凝法絮凝法：壳聚糖絮凝发酵液中菌体：壳聚糖絮凝发酵液中菌体 缺点缺点：体系受发酵液组成影响较大：体系受发酵液组成影响较大醇沉法醇沉法:通过乙醇沉降发酵浓缩液，去除其中生物大分子通过乙醇沉降发酵浓缩液，去除其中生物大分子 缺点缺点：乙醇用量较大，且沉降过程中：乙醇用量较大，且沉降过程中1,3-1,3-丙二醇损失丙二醇损失硫酸铵沉降法硫酸铵沉降法:通过硫酸铵沉降去除发酵液中生物大分子通过硫酸铵沉降去除发酵液中生物大分子 缺点缺点：盐用量较多，：盐用量较多，1,3-1,3-丙二醇沉降过程中有损失丙二醇沉降过程中有损失醇沉醇沉+硫酸铵沉降硫酸铵沉降=新型双水相萃取新型双水相萃取萃取萃取1,3-PD的双水相系统的双水相系统 实验材料：实验材料：有机溶剂：甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇等有机溶剂：甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇等 无无 机机 盐：磷酸钾、磷酸氢二钾、硫酸铵、氯化钠、盐：磷酸钾、磷酸氢二钾、硫酸铵、氯化钠、碳酸钠等碳酸钠等分配系数：分配系数：相比：相比：回收率：回收率：参数定义：参数定义：u乙醇乙醇/硫酸铵体系硫酸铵体系发酵液中发酵液中1,3-丙二醇的分配系数和回收率分别可达丙二醇的分配系数和回收率分别可达 4.77和和93.7%u 甲醇甲醇/磷酸氢二钾体系磷酸氢二钾体系发酵液中发酵液中1,3-丙二醇的分配系数和回收率分别可达丙二醇的分配系数和回收率分别可达 13.03和和96.2%u碳酸钠碳酸钠/乙醇体系乙醇体系发酵液中发酵液中1,3-丙二醇的分配系数和回收率分别可达丙二醇的分配系数和回收率分别可达 7.03和和93.8%研究结果研究结果结论l首次将亲水性有机溶剂/无机盐双水相体系用于发酵液中1,3-PD的分离，1,3-PD主要分配在上相中。对多种双水相体系萃取能力进行了测定，并确定了磷酸氢二钾/甲醇体系、硫酸铵/乙醇体系、碳酸钠/乙醇体系具有较好的萃取效果。l在碳酸钠/乙醇体系中，下相能够代替氢氧化钠作为碱液调节发酵过程的pH，并获得了更高浓度的目标产物，从而达到回收下相中盐和甘油的效果。新型新型ATPS分离分离2,3-丁二醇丁二醇的研究的研究2异丙醇异丙醇/硫酸铵双水相体系的相图硫酸铵双水相体系的相图 图图4.1 异丙醇异丙醇/硫酸铵双水相体系的相图硫酸铵双水相体系的相图新型新型ATPS萃取萃取2,3-丁二醇的研究丁二醇的研究u乙醇乙醇/硫酸铵体系硫酸铵体系发酵液中发酵液中2,3-丁二醇的分配系数和回收率分别可达丁二醇的分配系数和回收率分别可达 6.1和和86.4%u 乙醇乙醇/磷酸氢二钾体系磷酸氢二钾体系发酵液中发酵液中2,3-丁二醇的分配系数和回收率分别可达丁二醇的分配系数和回收率分别可达 28.3和和98.1%u乙醇乙醇/碳酸钠体系碳酸钠体系发酵液中发酵液中2,3-丁二醇的分配系数和回收率分别可达丁二醇的分配系数和回收率分别可达 15.1和和94.3%u异丙醇异丙醇/硫酸铵体系硫酸铵体系发酵液中发酵液中2,3-丁二醇的分配系数和回收率分别可达丁二醇的分配系数和回收率分别可达 8.3和和91.4%上相乙醇浓度上相乙醇浓度上相硫酸铵浓度上相硫酸铵浓度下相乙醇浓度下相乙醇浓度下相硫酸铵浓度下相硫酸铵浓度10g体系体系537.535.5211.520.4262.352.68356.487.66200g体系体系538.706.7311.740.6662.683.63358.339.06500g体系体系540.545.4212.770.5664.332.35350.648.201000g体系体系531.976.8913.170.6365.503.02352.417.66分配系数分配系数(K)回收率回收率(Y)相比相比10g体系体系6.970.2089.23%0.00281.18200g体系体系6.880.3389.62%0.00441.24500g体系体系6.820.2390.33%0.00361.361000g体系体系6.810.3589.96%0.00241.32乙醇乙醇/硫酸铵硫酸铵APTE放大实验放大实验表2.4体系放大过程中相组成的变化表2.3体系放大过程中2,3-丁二醇分配的变化异丙醇异丙醇/硫酸铵双水相体系直接萃取发酵液中硫酸铵双水相体系直接萃取发酵液中2,3-丁二醇丁二醇 表表4.14.1 在在10 g体系中双水相直接萃取发酵液体系中双水相直接萃取发酵液表表4.2 在在3000 g体系中双水相直接萃取发酵液体系中双水相直接萃取发酵液双水相体系中的细胞循环发酵双水相体系中的细胞循环发酵 图4.5利用不同的种子细胞批式流加发酵培养2,3-丁二醇。(a)摇瓶培养的菌体作为种子细胞；(b)双水相分离a批次发酵液所得的菌体作为种子细胞；(c)双水相分离b批次发酵液所得的菌体作为种子细胞发酵液发酵液固液分离固液分离初分离初分离终分离终分离产品产品传统分离工艺：传统分离工艺：双水相分离工艺：双水相分离工艺：发酵液发酵液双水相分离双水相分离终分离终分离产品产品优点：优点：1.操作工艺简便；设备简单；操作工艺简便；设备简单；2,3-丁二醇收率高丁二醇收率高 2.分离过程容易放大；分离过程容易放大；3.残糖分配于下相，可重复利用残糖分配于下相，可重复利用新型新型ATPS萃取萃取2,3-丁二醇的优点丁二醇的优点小小 结结l在在异异丙丙醇醇/硫硫酸酸铵铵双双水水相相体体系系中中，2,3-丁丁二二醇醇、产产品品主主要要富富集集在在上上相相，而而葡葡萄萄糖糖主主要要分分配配在在下下相相；当当异异丙丙醇醇和和硫硫酸酸铵铵的的质质量量浓浓度度分分别别是是34%和和20%时时，2,3-丁丁二二醇醇的的回回收收率率可可达达93%，细细胞胞的的去去除除率率在在99%以以上上，可可溶溶性性蛋蛋白白去除率可达去除率可达85%。l经经过过双双水水相相萃萃取取后后所所得得的的菌菌体体，可可以以直直接接作作为为下下一一批批发发酵酵的的种种子子，与与摇摇瓶瓶培培养养的的种种子子接接种种相相比比，发发酵酵的的产产物物浓浓度度并并没没有有降降低低。细细胞胞循循环环发发酵酵可可以以减减少少种种子子培培养养步步骤骤，节约发酵时间。节约发酵时间。新型新型ATPS分离蛋白的研究分离蛋白的研究3目前，仅此一篇文献运用新型目前，仅此一篇文献运用新型ATPS提取蛋白提取蛋白一、多种无机盐一、多种无机盐/乙醇体系乙醇体系 Tab.1 The high partition coefficients and recoveries of BSA in inorgnic salts/ethanol systemsAqueoustwo-phasesystemsSaltEthanol(%,w/w)Y%RKK2HPO4/ethanol181894.011.2611.52Na2CO3/ethanol131893.611.2411.24Na2SO4/ethanol201876.350.625.50(NH4)2SO4/ethanol152880.071.812.19结论：白蛋白主要分布在上相。原因可能是由于盐的盐析作用、乙醇与蛋白之间的亲水作用；在碱性盐体系中的蛋白收率相比较高。分析原因可能是由于BSA是酸性蛋白，在这四个体系中均带负电荷，而在碱性盐体系中，与下相的电荷斥力相对较大，因此更有利于蛋白分配到上相；Tab.2 Comparisons between traditional and novel ATPSAqueoustwo-phasesystemsSaltEthanol(%,w/w)Y%RKK2HPO4/PEG400172290.451.188.75K2HPO4/PEG600142188.601.106.47K2HPO4/PEG1000121768.951.151.84K2HPO4/PEG200010164.781.170.042K2HPO4/PEG40009164.441.250.037K2HPO4/PEG60008121.311.120.011K2HPO4/ethanol181894.001.2611.5结论：将相比R控制在1.2左右，在传统双水相体系中，蛋白收率随着PEG分子量的增加有向下相分配的趋势。主要原因是随着PEG分子量的增加，上相疏水作用增大，因此使亲水性的BSA不断往下相分配。蛋白质在新型双水相与低分子量PEG的传统双水相体系中主要被萃取到上相。对照白蛋白异丙醇 乙醇 丙酮 甲醇 1,3-丙二醇2,3-丁二醇1,2-丙二醇Fig.3.3 PAGE analysis of the partition of BSABSA in ATPS结论：在新型双水相体系中，蛋白易产生多聚体；1，3-丙二醇、1，2-丙二醇和2，3-丁二醇体系相比来说单体蛋白纯度较高。对照白蛋白PEG600PEG400 发酵液（发酵液（2019-800L-6-4保藏保藏3天）确定最佳操作点天）确定最佳操作点在上清确定最佳操作点附近，考察真实发酵液的最佳操作点在上清确定最佳操作点附近，考察真实发酵液的最佳操作点考察条件：盐考察条件：盐 25%/醇醇 12%盐盐 25%/醇醇 20%盐盐 25%/醇醇 10%盐盐 30%/醇醇 18%盐盐 30%/醇醇 11%盐盐 21%/醇醇 23%盐盐 20%/醇醇 20%盐盐 20%/醇醇 17%盐盐 20%/醇醇 15%盐盐 20%/醇醇 14%盐盐 18%/醇醇 16%盐盐 18%/醇醇 20%高盐和高醇都不利于发高盐和高醇都不利于发酵液的处理，处理后粘酵液的处理，处理后粘度大，不分相；或分相度大，不分相；或分相慢，上相体积少慢，上相体积少盐盐20%/醇醇20%,及更低及更低的浓度有利于分相，的浓度有利于分相，上相澄清，下相浑浊上相澄清，下相浑浊,可操作时间在可操作时间在6小时内小时内上相蛋白浓度及收率的测定上相蛋白浓度及收率的测定 21小时小时 4小时小时 上相体积上相体积 蛋白回收率蛋白回收率发酵液离心发酵液离心 5.065(mg/ml)5.783 200*0.721号（盐号（盐25%醇醇12%）7.498 7.372 90 81.0%4号（盐号（盐21%醇醇23%）1.727 1.669 6号（盐号（盐20%醇醇20%）4.622 4.631 150 83.3%8号（盐号（盐20%醇醇17%）5.303 5.002 170 108%9号（盐号（盐18%醇醇16%）4.191 3.801 200 100.6%10号（盐号（盐18%醇醇20%）4.636 4.304 160 89.1%8、9、10号操作点具有较好的回收率，且分相明显，上相澄清号操作点具有较好的回收率，且分相明显，上相澄清电泳小胶照片电泳小胶照片 4 3 2 11 1道：血源人血清白蛋白道：血源人血清白蛋白2 2道：原工艺道：原工艺3 3道：道：8 8号上相号上相4 4道：道：1010号上相号上相.双水相样品，不用通过加热处理，经后续纯化工艺后，所得样双水相样品，不用通过加热处理，经后续纯化工艺后，所得样品电泳纯度较高，与原工艺相似品电泳纯度较高，与原工艺相似新型新型ATPS的其它应用的其它应用4丹参有效成分的双水相提取（丹参有效成分的双水相提取（1）乙醇乙醇/硫酸铵体系萃取丹酚酸硫酸铵体系萃取丹酚酸B对水提液进行双水相萃取，最佳体系为20%（w/w)乙醇/25%（w/w）硫酸铵，在此体系中丹酚酸B的分配系数和回收率分别是95.58和97.9%；对丹参60目的粉末进行双水相萃取，最佳体系为24%（w/w)乙醇/22%（w/w）硫酸铵，在此体系中丹酚酸B的分配系数和回收率分别是27.39和89.9%。乙醇乙醇/硫酸铵体系萃取丹参酮硫酸铵体系萃取丹参酮A丹参酮A为脂溶性成分，丹参酮A只分配在双水相的上相，即分配系数为，回收率为100%丹参有效成分的双水相提取（丹参有效成分的双水相提取（2）花青素的双水相萃取花青素的双水相萃取花青素在花青素在酸性条件酸性条件下稳定，因此也采用下稳定，因此也采用乙乙醇醇/硫酸铵体系硫酸铵体系首先对含蓝莓进行匀浆处理（低速，5min），然后采用ATPS萃取蓝莓果残渣中的花青素最佳萃取条件为30%（w/w）乙醇/19%（w/w）硫酸铵，在此体系中花青素的分配系数和回收率分别是10.67和96.1%。辣椒碱的双水相萃取辣椒碱的双水相萃取辣椒碱在辣椒碱在碱性条件碱性条件下稳定，因此采用下稳定，因此采用乙乙醇醇/磷酸氢二钾体系磷酸氢二钾体系对80目的辣椒粉进行双水相萃取，最佳体系是20%（w/w）乙醇/20%磷酸氢二钾，在此体系中辣椒碱的分配系数和回收率分别为和100%，但收率只有碱化乙醇法的61.7%，只有二氧六环法的34.1%。辣椒有效成分的双水相萃取（辣椒有效成分的双水相萃取（1）辣椒红素的双水相萃取辣椒红素的双水相萃取辣椒红素为辣椒红素为脂溶性色素脂溶性色素，采用，采用乙醇乙醇/磷酸磷酸氢二钾体系氢二钾体系对80目的辣椒粉进行双水相萃取，辣椒红素只分配在上相中，即分配系数和回收率分别为和100%，但收率只有二氧六环法的14.13%，索氏提取法的9.97%。辣椒有效成分的双水相萃取（辣椒有效成分的双水相萃取（2）三相萃取三相萃取为同时提取分离水溶性成分和脂溶性成分，在双水相体系加入有机溶剂，形成三相，使脂溶性成分富集在有机相，而水溶性成分富集在双水相中的一相。由于脂溶性成分不受双水相体系的变化，因此依据水溶性成分确定的最佳双水相体系进行三相萃取。l辣椒的三相萃取照片辣椒有效成分的三相萃取采用向20%（w/w）乙醇/20%磷酸氢二钾体系中加入10%正己烷，辣椒碱主要集中在中相，收率是碱式乙醇法的106.7%；辣椒红素主要集中在 上 相，收 率 是 索 氏 提 取 法 的20.33%，在40下进行三相萃取，辣椒红素的收率也只有索氏提取法的30%左右。热分离聚合物lAlred 采用乙烯基氧与丙烯基氧的共聚物(商品名UCON)和PEG可形成温敏性双水相体系。常温条件下,PEG、UCON 和水混合后为均相体系,当加热到40 时,形成两相体系,上相为PEG和UCON,下相为水,这种体系可以实现PEG和UCON 的循环利用。热分离聚合物l环氧乙烷(EO)和环氧丙烷(PO)的随机共聚物(简称EOPO 聚合物)。水-EOPO 热分离两相体系由几乎纯水的上相和富含聚合物的下相组成热诱导相分离热分离聚合物lKula 等开发了一种表面活性剂Triton 和水形成的热分离双水相体系,当温度高于体系浑浊点时,表面活性剂和水形成双水相,上相为表面活性剂相,下相为水。表面疏水性强的蛋白质易于分配在表面活性剂相中,而菌体和亲水性蛋白质主要分配在水相中,利用这种表面活性剂双水相体系纯化胆固醇氧化酶,酶收率高达90%。阴阳离子表面活性剂双水相体系l由正离子表面活性剂(如十二烷基硫酸钠)和负离子表面活性剂(如十六烷基三甲基溴化铵)组成的混合水溶液在一定条件下会形成双水相,平衡的两相均为很稀的溶液。正、负离子混合表面活性剂双水相系统的发现为生物活性物质分离提供了一种新的双水相系统。与高分子双水相系统和非离子型表面活性剂双水相系统相比,它具有含水量高(质量分数可达99%)、两相容易分离、表面活性剂的用量很小且可循环使用等独特优点。亲和双水相体系l是在组成相系统的聚合物(如PEG、葡聚糖等)上耦联一定的亲和配基。根据配基性质不同,常用于亲和双水相系统的配基有3种:染料亲和配基型和生物亲和配基型以及金属螯合型。谢谢！