生态毒理学专题知识讲座培训课件

第一章第一章 结结 语语生态毒理学是现代社会毒物环境污染催生的一门新的生态毒理学是现代社会毒物环境污染催生的一门新的交叉学科交叉学科是研究环境毒物对生态系统的毒害作用及其是研究环境毒物对生态系统的毒害作用及其环境归宿的科学环境归宿的科学生态毒理学过程涉及多个层次，生物反应也表现在不生态毒理学过程涉及多个层次，生物反应也表现在不同水平上；同水平上；研究者可以使用不同的方法进行研究。但各种研究方研究者可以使用不同的方法进行研究。但各种研究方法均有利弊，通常需要综合各种研究数据，才能获得法均有利弊，通常需要综合各种研究数据，才能获得真实的资料；真实的资料；生态毒理学研究的目的是准确评价化合物的环境毒性生态毒理学研究的目的是准确评价化合物的环境毒性和风险，促进政府立法进行环境治理，通过法律和科和风险，促进政府立法进行环境治理，通过法律和科学来保护生态环境。学来保护生态环境。1生态毒理学专题知识讲座7/8/2024第二章第二章 结结 语语毒物毒物Toxicants是在低剂量下就会破坏生物有机体结构和功能，甚至是在低剂量下就会破坏生物有机体结构和功能，甚至产生致死作用的物质。产生致死作用的物质。生态毒物生态毒物Ecotoxicants是人为释放、在低浓度下即可对生态系统产生是人为释放、在低浓度下即可对生态系统产生毒害作用的有毒物质。毒害作用的有毒物质。毒物的毒性与其来源无关；不同毒物的急性毒性和慢性毒性并不一致；毒物的毒性与其来源无关；不同毒物的急性毒性和慢性毒性并不一致；各种毒物都具有一定的选择性；毒物都具有剂量效应、生物适应性、各种毒物都具有一定的选择性；毒物都具有剂量效应、生物适应性、联合效应、构效关系，有时还有明显的蓄积毒性联合效应、构效关系，有时还有明显的蓄积毒性化合物的许多特性影响其与环境的相互作用，可以根据化合物的特性化合物的许多特性影响其与环境的相互作用，可以根据化合物的特性预测其可能的生态毒性预测其可能的生态毒性生态毒物可以按生物效应、化学结构和物化性质进行分类。这样可以生态毒物可以按生物效应、化学结构和物化性质进行分类。这样可以根据类似化合物了解特定化合物的生态毒性。根据类似化合物了解特定化合物的生态毒性。毒物的生物效应与毒物的特性、接触剂量和接触时间有关毒物的生物效应与毒物的特性、接触剂量和接触时间有关 2生态毒理学专题知识讲座7/8/2024第三章第三章 结结 语语毒物进入环境后会通过一系列的物理化学过程，进行分配毒物进入环境后会通过一系列的物理化学过程，进行分配扩散和降解转化，最后在不同的环境相中趋于平衡。扩散和降解转化，最后在不同的环境相中趋于平衡。环境相环境相Environmental phase是质地相对均一、化合物在是质地相对均一、化合物在其内部的行为也比较一致的，环境的确切组成部分。其内部的行为也比较一致的，环境的确切组成部分。毒物在环境不同相中的分布可以通过两相分配和逸度定律毒物在环境不同相中的分布可以通过两相分配和逸度定律进行测定和预测。进行测定和预测。环球污染主要是指个别地方释放的污染物，通过大气和海环球污染主要是指个别地方释放的污染物，通过大气和海水环流的运输作用，使之趋于全球均匀分布的过程。环球水环流的运输作用，使之趋于全球均匀分布的过程。环球污染应该引起各国的重视，治理必须形成国际共识。污染应该引起各国的重视，治理必须形成国际共识。3生态毒理学专题知识讲座7/8/2024毒物的降解转化遵循一级化学动力学，可以用毒物在特定环境下降解毒物的降解转化遵循一级化学动力学，可以用毒物在特定环境下降解转化一半所需的时间转化一半所需的时间半衰期来表示。半衰期来表示。生物有效性生物有效性Bioavailability是指环境中的化合物能否被生物吸收的性是指环境中的化合物能否被生物吸收的性能。毒物的有效性主要取决于毒物的物理化学状态，以及生物接触和能。毒物的有效性主要取决于毒物的物理化学状态，以及生物接触和吸收的途径。吸收的途径。取食者体内的化合物浓度通常高于食物中的浓度，这一积累过程称为取食者体内的化合物浓度通常高于食物中的浓度，这一积累过程称为生物放大生物放大biomagnification。生物放大因子。生物放大因子BF=CB/CF化合物的结构特性与其生物活性之间存在着定量关系，被称为定量结化合物的结构特性与其生物活性之间存在着定量关系，被称为定量结构活性关系构活性关系(QSARs)。利用这种关系，由易得的结构参数来推测活性。利用这种关系，由易得的结构参数来推测活性参数，是一种简便有效的方法。但要注意预测与实际的可能差异。参数，是一种简便有效的方法。但要注意预测与实际的可能差异。目前了解和预测化合物的环境分布过程已经建立了较好的方法，也做目前了解和预测化合物的环境分布过程已经建立了较好的方法，也做了大量的工作。但要准确地模拟环境，还需要考虑并提取更多的环境了大量的工作。但要准确地模拟环境，还需要考虑并提取更多的环境参数，同时也需要建立更有效的方法。参数，同时也需要建立更有效的方法。4生态毒理学专题知识讲座7/8/2024第四章第四章 结结 语语毒物必须从环境中被吸收后，并运输至靶标位点，才能发挥毒物必须从环境中被吸收后，并运输至靶标位点，才能发挥毒效。毒效。毒物代谢动力学毒物代谢动力学toxicokinetics过程包括：吸收、运输、代过程包括：吸收、运输、代谢、贮存和分泌谢、贮存和分泌5个方面，它决定有多少毒物分子进入靶标个方面，它决定有多少毒物分子进入靶标位点并与之作用。又称毒理宏观动力学位点并与之作用。又称毒理宏观动力学化合物的吸收必须经过生物膜，涉及的跨膜运输机制有化合物的吸收必须经过生物膜，涉及的跨膜运输机制有4种，种，不同毒物的跨膜机制和运输速率取决于化合物的性质。不同毒物的跨膜机制和运输速率取决于化合物的性质。毒物在特定位点吸收后，可以通过体液循环运输至不同的组毒物在特定位点吸收后，可以通过体液循环运输至不同的组织器官（体内分布）。织器官（体内分布）。生物的解毒主要通过生物的解毒主要通过3种途径，即解毒代谢、分泌排泄、结种途径，即解毒代谢、分泌排泄、结合贮存。合贮存。5生态毒理学专题知识讲座7/8/2024毒物代谢通常包括两级代谢，初级代谢主要是在毒物分子内引入水毒物代谢通常包括两级代谢，初级代谢主要是在毒物分子内引入水溶性的活性基团；次级代谢是内源性代谢中间体与初级代谢产物结溶性的活性基团；次级代谢是内源性代谢中间体与初级代谢产物结合，形成极性更强，可溶于水的代谢物。合，形成极性更强，可溶于水的代谢物。多功能氧化酶是毒物代谢的重要酶，可以被诱导，不同物种或个体多功能氧化酶是毒物代谢的重要酶，可以被诱导，不同物种或个体的活力有明显差异。的活力有明显差异。毒物的代谢，大多是解毒代谢，但也有一些代谢是增毒的毒物的代谢，大多是解毒代谢，但也有一些代谢是增毒的吸持作用吸持作用sequestration(贮存代谢贮存代谢)即将毒物贮存在惰性组织中，即将毒物贮存在惰性组织中，避免其与靶标结合的解毒途径避免其与靶标结合的解毒途径毒物可以诱导生物产生大量特殊的蛋白质，如金属硫蛋白、应激蛋毒物可以诱导生物产生大量特殊的蛋白质，如金属硫蛋白、应激蛋白等，它们可以结合毒物分子使之失活，保护生物功能大分子，或白等，它们可以结合毒物分子使之失活，保护生物功能大分子，或修复受伤害的生物大分子。其量的变化可以作为接触毒物的测试指修复受伤害的生物大分子。其量的变化可以作为接触毒物的测试指标。标。贮存解毒有明显的缺点：饱和、置换和库的消耗。贮存解毒有明显的缺点：饱和、置换和库的消耗。6生态毒理学专题知识讲座7/8/2024分泌排泄分泌排泄excretion是通过分泌系统从体内是通过分泌系统从体内清除毒物及其代谢物的重要解毒途径清除毒物及其代谢物的重要解毒途径不同性质的毒物的主要分泌排泄途径不同；不同性质的毒物的主要分泌排泄途径不同；毒物在生物体内的滞留时间通常用生物半衰毒物在生物体内的滞留时间通常用生物半衰期表示。期表示。毒理动力学毒理动力学toxicodynamics过程：主要是过程：主要是毒物如何作用于靶标，并产生毒理学效应。毒物如何作用于靶标，并产生毒理学效应。又称毒理微观动力学又称毒理微观动力学干扰和破坏干扰和破坏DNA分子的毒物，都具有遗传毒分子的毒物，都具有遗传毒性。性。7生态毒理学专题知识讲座7/8/2024大多数致癌、致变毒物都是强亲电的生物烷化剂和酰化剂，大多数致癌、致变毒物都是强亲电的生物烷化剂和酰化剂，或者是带有可与或者是带有可与DNA分子反应的自由基。分子反应的自由基。有些化合物本身不致癌，但经生物转化后，可致癌。有些化合物本身不致癌，但经生物转化后，可致癌。致癌致变毒物导致的大部分致癌致变毒物导致的大部分DNA分子损伤都可以由细胞修复。分子损伤都可以由细胞修复。只有修复失败时才产生遗传毒性。只有修复失败时才产生遗传毒性。致畸剂通过选择性抑制特定类型的组织和细胞，导致畸形或致畸剂通过选择性抑制特定类型的组织和细胞，导致畸形或败育。败育。致畸剂有很强的发育阶段敏感性。致畸剂有很强的发育阶段敏感性。致癌、致变、致畸的生态效应是不一样的致癌、致变、致畸的生态效应是不一样的三致作用可以利用动物活体、离体细胞和单细胞生物进行测三致作用可以利用动物活体、离体细胞和单细胞生物进行测定。但不同方法各有优缺点，通常不能依靠单一的方法。定。但不同方法各有优缺点，通常不能依靠单一的方法。8生态毒理学专题知识讲座7/8/2024除攻击除攻击DNA导致三致作用外，生态毒物还会攻击导致三致作用外，生态毒物还会攻击其他功能分子，并在生化、生理和行为水平上产其他功能分子，并在生化、生理和行为水平上产生毒效反应。生毒效反应。一般低水平的损伤反应可以通过体内平衡进行补一般低水平的损伤反应可以通过体内平衡进行补偿，否则就会转移到高层次上反应。偿，否则就会转移到高层次上反应。损害适应性性状（生长、繁殖、基因池的更新和损害适应性性状（生长、繁殖、基因池的更新和改变）的化合物，都会使物种的生存受到严重威改变）的化合物，都会使物种的生存受到严重威胁，也是生态毒理学密切关注的化合物。胁，也是生态毒理学密切关注的化合物。毒理学过程与毒物的选择性？毒理学过程与毒物的选择性？9生态毒理学专题知识讲座7/8/2024毒物对种群的影响主要是因为敏感个体和年龄组毒物对种群的影响主要是因为敏感个体和年龄组的死亡，导致基因池和基因频率的变化、种群结的死亡，导致基因池和基因频率的变化、种群结构的变化。构的变化。毒物对群落和生态系统的影响主要反应在两个方毒物对群落和生态系统的影响主要反应在两个方面，即结构和功能。面，即结构和功能。群落和生态系统的结构和功能均有许多可以测定群落和生态系统的结构和功能均有许多可以测定和计算的描述参数，生态毒理学研究可以通过比和计算的描述参数，生态毒理学研究可以通过比较群落和生态系统的这些参数，分析污染前后或较群落和生态系统的这些参数，分析污染前后或处理和对照的变化，确定毒物对群落和生态系统处理和对照的变化，确定毒物对群落和生态系统的作用和危害。的作用和危害。第五章第五章 结语结语10生态毒理学专题知识讲座7/8/2024物种多样性物种多样性species diversity测定的物种多样性指数有多种，测定的物种多样性指数有多种，常用的如常用的如Margalefs species richness：D=(S-1)/lnNS物种总数，物种总数，N所有物种的个体总数。所有物种的个体总数。群落相似性群落相似性similarity between communities测定常用的相似测定常用的相似性指数有：性指数有：Jaccords index=C/(A+B+C)100%Sorensons index=2C/(A+B+2C)100%相似性指数相似性指数50表明样本间高度相似，表明样本间高度相似，25是中度和是中度和低度的界限。低度的界限。生态恢复能力生态恢复能力resilience是生态系统固有的、从自然或人为胁是生态系统固有的、从自然或人为胁迫下恢复的能力，常用生态系统恢复到影响之前状态所需要的迫下恢复的能力，常用生态系统恢复到影响之前状态所需要的时间表示。时间表示。11生态毒理学专题知识讲座7/8/2024关键物种关键物种key species是对维持群落结构具有关键作是对维持群落结构具有关键作用的物种。用的物种。指示物种指示物种indictor species是可以表明毒物危害的物是可以表明毒物危害的物种，包括敏感物种种，包括敏感物种susceptible species和耐污染的和耐污染的机会物种机会物种opportunistic species。重要功能物种重要功能物种functionally important species是在是在维持生态系统功能方面发挥重要作用的物种。维持生态系统功能方面发挥重要作用的物种。附属物种附属物种redundancy是在维持生态系统功能方面作是在维持生态系统功能方面作用不显著的物种。用不显著的物种。12生态毒理学专题知识讲座7/8/2024许多生态毒理学的研究都是以单一物种为对象的，许多生态毒理学的研究都是以单一物种为对象的，这类方法的主要缺点是其不适于预测化合物对生这类方法的主要缺点是其不适于预测化合物对生态系统的效应和毒害作用。态系统的效应和毒害作用。首先自然生态系统比室内实验系统复杂得多，而首先自然生态系统比室内实验系统复杂得多，而且自然环境的许多物理、化学和生物因子，在室且自然环境的许多物理、化学和生物因子，在室内无法模拟。但这些因子却可以显著改变毒物在内无法模拟。但这些因子却可以显著改变毒物在自然环境中的形式、生物有效性、量和毒性。自然环境中的形式、生物有效性、量和毒性。人工生态系统是测定毒物的群落和生态系统效应人工生态系统是测定毒物的群落和生态系统效应的较好途径。它可以为鉴定受影响的重要生态过的较好途径。它可以为鉴定受影响的重要生态过程和参数提供有用的资料，有助于定量证实室内程和参数提供有用的资料，有助于定量证实室内生测的结果，同样有助于解释低生物层次的实验生测的结果，同样有助于解释低生物层次的实验结果，并确定其实际价值。结果，并确定其实际价值。13生态毒理学专题知识讲座7/8/2024人工生态系统是在人为隔离的空间内，模拟建立的生态系统。人工生态系统是在人为隔离的空间内，模拟建立的生态系统。它具有确切物理边界，并含有整套维持生态系统的生物物种，它具有确切物理边界，并含有整套维持生态系统的生物物种，小型的被称为微宇宙小型的被称为微宇宙microcosm，中型的被称为中宇宙，中型的被称为中宇宙mesocosm。人工生态系统作为自然生态系统的简洁模拟，具有以下特性：人工生态系统作为自然生态系统的简洁模拟，具有以下特性：（1）生物组分均来自自然环境）生物组分均来自自然环境（2）系统是物理封闭性的，并与自然生态系统分离）系统是物理封闭性的，并与自然生态系统分离（3）与自然生态系统的物种和物质交换被关闭或部分关闭）与自然生态系统的物种和物质交换被关闭或部分关闭（4）具有重要的生态过程。如光合作用、呼吸作用、生产、代谢、）具有重要的生态过程。如光合作用、呼吸作用、生产、代谢、营养循环、竞争、捕食、降解等营养循环、竞争、捕食、降解等（5）具有自我调节平衡机制）具有自我调节平衡机制人工生态系统的主要缺陷是：重复困难、费用昂贵、实验条件难人工生态系统的主要缺陷是：重复困难、费用昂贵、实验条件难以控制（包括无法模拟真实环境和实验设置的困难）。以控制（包括无法模拟真实环境和实验设置的困难）。14生态毒理学专题知识讲座7/8/2024第六章第六章 毒物的剂量效应关系毒物的剂量效应关系15生态毒理学专题知识讲座7/8/2024一、引言一、引言剂量通常指生物接触毒物的量，它涉及到生物接触毒物的浓度剂量通常指生物接触毒物的量，它涉及到生物接触毒物的浓度和持续的时间。剂量可以进一步区分为外剂量和内剂量，前者和持续的时间。剂量可以进一步区分为外剂量和内剂量，前者是指生物接触环境毒物的量，后者是到达靶组织内的量。是指生物接触环境毒物的量，后者是到达靶组织内的量。由于到达靶组织内的量很难测定，因此常用进入生物体内的量由于到达靶组织内的量很难测定，因此常用进入生物体内的量代替内剂量，但此时必需考虑不同毒物在体内的代谢情况。代替内剂量，但此时必需考虑不同毒物在体内的代谢情况。而使用外剂量时，必须考虑毒物的环境有效性和生物有效性。而使用外剂量时，必须考虑毒物的环境有效性和生物有效性。环境有效性环境有效性environmental availability是指自然环境中的毒是指自然环境中的毒物，可以参与环境物理化学和生物过程的比率。而生物有效性物，可以参与环境物理化学和生物过程的比率。而生物有效性bioavailability是指环境有效毒物通过扩散和主动运输，跨生是指环境有效毒物通过扩散和主动运输，跨生物膜进入生物体内，最终可以在生物体内参与毒理作用或代谢物膜进入生物体内，最终可以在生物体内参与毒理作用或代谢过程的比率。过程的比率。16生态毒理学专题知识讲座7/8/2024效应是环境毒物对生物体作用后，引起的生物学改变，包效应是环境毒物对生物体作用后，引起的生物学改变，包括质效应和量效应。前者如致死、三致等。后者如呼吸量、括质效应和量效应。前者如致死、三致等。后者如呼吸量、生长量和内禀增长率的改变、种群密度变化等。生长量和内禀增长率的改变、种群密度变化等。有些毒物进入生物体内，可以发挥非专一性的毒性（如强有些毒物进入生物体内，可以发挥非专一性的毒性（如强酸强碱使蛋白变性、组织溶解），而更多的化合物是专一酸强碱使蛋白变性、组织溶解），而更多的化合物是专一性的与靶标结合后，才对生物系统产生特定的效应。性的与靶标结合后，才对生物系统产生特定的效应。由于毒物的作用机理以及生物接触毒物的剂量不同，反应由于毒物的作用机理以及生物接触毒物的剂量不同，反应的速度有明显的差异。一般依据反应速度的快慢，可以将的速度有明显的差异。一般依据反应速度的快慢，可以将反应分为不同的类型，如急性毒性反应、亚急性毒性反应反应分为不同的类型，如急性毒性反应、亚急性毒性反应和慢性毒性反应等。和慢性毒性反应等。17生态毒理学专题知识讲座7/8/2024急性毒性急性毒性acute toxicity：生物在高剂量毒物的作用下，在极短的时：生物在高剂量毒物的作用下，在极短的时间内（通常小于间内（通常小于24小时），产生组织和机能障碍等中毒症状，如眩晕、小时），产生组织和机能障碍等中毒症状，如眩晕、呕吐、抽搐痉挛、呼吸困难、大小便失禁，甚至死亡。急性毒性常用呕吐、抽搐痉挛、呼吸困难、大小便失禁，甚至死亡。急性毒性常用效应中值来表示。如呼吸毒剂和神经毒剂通常具有很强的急性毒性。效应中值来表示。如呼吸毒剂和神经毒剂通常具有很强的急性毒性。测试时间多为测试时间多为2496小时。小时。如果在接触毒物后，立即（几分钟甚至几秒钟）产生中毒症状的，则如果在接触毒物后，立即（几分钟甚至几秒钟）产生中毒症状的，则又称为即时毒性又称为即时毒性immediate toxicity。亚急性毒性亚急性毒性subacute toxicity：生物在较长时间内（：生物在较长时间内（36个月），连个月），连续接触较低剂量的毒物，由于毒物的积累，最终导致急性中毒症状的续接触较低剂量的毒物，由于毒物的积累，最终导致急性中毒症状的产生。亚急性毒性常用最大无作用剂量和最小有作用剂量表示。测试产生。亚急性毒性常用最大无作用剂量和最小有作用剂量表示。测试时间多为时间多为3个月以上。个月以上。慢性毒性慢性毒性chronic toxicity：生物长时间（：生物长时间（6个月以上）接受低浓度毒个月以上）接受低浓度毒物的作用，在生理机能、组织器官和繁殖等方面出现病变，如肝、肾、物的作用，在生理机能、组织器官和繁殖等方面出现病变，如肝、肾、神经和生殖组织细胞的不可逆损伤，三致和不育等。慢性毒性常用最神经和生殖组织细胞的不可逆损伤，三致和不育等。慢性毒性常用最大无作用剂量和最小有作用剂量表示。测试时间为生物的一生或大半大无作用剂量和最小有作用剂量表示。测试时间为生物的一生或大半生。世界卫生组织建议小鼠为生。世界卫生组织建议小鼠为1.5年、大鼠为年、大鼠为2年、犬为年、犬为6年。年。18生态毒理学专题知识讲座7/8/2024二、剂量二、剂量效应关系效应关系毒物的作用剂量与生物毒效反应之间的关系，即为剂量毒物的作用剂量与生物毒效反应之间的关系，即为剂量效应关系，通常用数学方程（毒力回归线）描述。效应关系，通常用数学方程（毒力回归线）描述。不同毒物的剂量不同毒物的剂量效应关系不同。由于有些物质是生物必效应关系不同。由于有些物质是生物必需的，有些是不必需的，但所有物质达到足够剂量后，都需的，有些是不必需的，但所有物质达到足够剂量后，都可能产生毒害。因此，必需物质在极小剂量和超常剂量下可能产生毒害。因此，必需物质在极小剂量和超常剂量下都有毒效，毒效随剂量的两极化而逐步加重。而非必需物都有毒效，毒效随剂量的两极化而逐步加重。而非必需物质在低剂量下是没有毒害的，只有超过一定的阈值，才表质在低剂量下是没有毒害的，只有超过一定的阈值，才表现出毒害，并随着剂量的加大而逐步加重，直至死亡。现出毒害，并随着剂量的加大而逐步加重，直至死亡。毒理学研究的剂量毒理学研究的剂量效应关系，通常是高剂量端的剂量效应关系，通常是高剂量端的剂量效应关系。效应关系。19生态毒理学专题知识讲座7/8/2024毒物的剂量效应毒物的剂量效应毒物有两大类，即生物必需物质和非必需物毒物有两大类，即生物必需物质和非必需物质。前者如铜、锌、镁，后者如滴滴涕。质。前者如铜、锌、镁，后者如滴滴涕。它们对个体生物的一般剂量效应如下图它们对个体生物的一般剂量效应如下图死亡死亡不可逆伤害不可逆伤害可逆伤害可逆伤害无害无害剂量剂量有益有益20生态毒理学专题知识讲座7/8/20241、剂量的表示方法剂量的表示方法：由于毒物处理的生物有机体的大小不一，因：由于毒物处理的生物有机体的大小不一，因此剂量一般用浓度，而不是绝对量。动物实验通常用单位体重此剂量一般用浓度，而不是绝对量。动物实验通常用单位体重的施用量（的施用量（mg/kg body weight或或 mg/kg body weight/day）或单位体表面积的施用量）或单位体表面积的施用量2、效应评价终点效应评价终点：应该易于重复定量、且与所研究的毒作用过程：应该易于重复定量、且与所研究的毒作用过程有关。另外，由于生物个体的遗传和表型差异，化合物的毒效有关。另外，由于生物个体的遗传和表型差异，化合物的毒效评估还需要经过统计分析评估还需要经过统计分析死亡率是毒物研究常用的效应评价终点，因为其容易鉴别、生死亡率是毒物研究常用的效应评价终点，因为其容易鉴别、生物学上容易解释、统计学上容易重复。因此死亡率测定提供了物学上容易解释、统计学上容易重复。因此死亡率测定提供了比较大量化合物毒性的简便方法，也无须事先了解其作用机理比较大量化合物毒性的简便方法，也无须事先了解其作用机理死亡率测定通常用于短期（急性）毒性的测定。实验包括预试死亡率测定通常用于短期（急性）毒性的测定。实验包括预试摸索浓度范围，设置系列浓度进行实验，每个浓度处理适当数摸索浓度范围，设置系列浓度进行实验，每个浓度处理适当数量的动物，观察一定时间后的死亡率，获得剂量反应曲线量的动物，观察一定时间后的死亡率，获得剂量反应曲线21生态毒理学专题知识讲座7/8/20243、剂量剂量效应曲线效应曲线由于生物群体的异质性（遗传、年龄、性别、体重、营养由于生物群体的异质性（遗传、年龄、性别、体重、营养状况等），不同取样对剂量状况等），不同取样对剂量效应曲线有一定的影响效应曲线有一定的影响剂量mg/kg剂量对数log(mg/kg)死亡率死亡率几率值505Log(LD50)y=a+bx22生态毒理学专题知识讲座7/8/20244、急性毒性测定常用的效应中值急性毒性测定常用的效应中值致死中量致死中量LD50：导致群体半数个体死亡的毒物剂：导致群体半数个体死亡的毒物剂量。量。致死中浓度致死中浓度LC50：导致群体半数个体死亡的毒物：导致群体半数个体死亡的毒物浓度。浓度。有效中量有效中量ED50：导致群体半数个体产生反应的毒：导致群体半数个体产生反应的毒物剂量。物剂量。有效中浓度有效中浓度EC50：导致群体半数个体产生反应的：导致群体半数个体产生反应的毒物浓度。毒物浓度。23生态毒理学专题知识讲座7/8/20245、毒性的比较、毒性的比较不同毒物对同种生物或同种毒物对不同生物的毒不同毒物对同种生物或同种毒物对不同生物的毒性可以用其效应中值的大小进行比较。性可以用其效应中值的大小进行比较。相对毒力指数相对毒力指数relative toxicity index是表示不同是表示不同化合物对同种生物毒性大小的常用参数。即试验化合物对同种生物毒性大小的常用参数。即试验时设标准毒物（时设标准毒物（S）对照，被测化合物（）对照，被测化合物（A、B、C）的相对毒力指数可以按下式求出：）的相对毒力指数可以按下式求出：A的相对毒力指数的相对毒力指数 S的的LD50/A的的LD5024生态毒理学专题知识讲座7/8/20246、毒物的联合作用、毒物的联合作用joint action自然环境中的毒物通常不是单一存在的，自然环境中的毒物通常不是单一存在的，它们通常同时作用于生物。毒物的互作关它们通常同时作用于生物。毒物的互作关系可以分为系可以分为4种类型种类型:独立作用独立作用independent:乙醇和氯乙烯引起乙醇和氯乙烯引起鼠肝细胞脂质过氧化效应，实际上乙醇导鼠肝细胞脂质过氧化效应，实际上乙醇导致线粒体脂质过氧化，而氯乙烯是微粒体致线粒体脂质过氧化，而氯乙烯是微粒体脂质过氧化；脂质过氧化；增效作用增效作用Synergistic、相加作用、相加作用additional和拮抗作用和拮抗作用antagonistic。25生态毒理学专题知识讲座7/8/2024毒物的联合作用可以通过测定共毒系数毒物的联合作用可以通过测定共毒系数co-toxicity coefficient(CTC)来确来确定定：首先测定混合毒物首先测定混合毒物M及其各个组分及其各个组分A、B、C的毒性，再分析混合毒物中的毒性，再分析混合毒物中各组分所占的百分率各组分所占的百分率p，随后选定组分，随后选定组分A为标准毒物，计算出混合毒物及为标准毒物，计算出混合毒物及其各个组分的实测相对毒力指数其各个组分的实测相对毒力指数k，然后按下式计算：，然后按下式计算：理论理论kM=kA.pA+kB.pB+kC.pC+CTC=100.实测实测kM/理论理论kM农药混配常用农药混配常用CTC大于大于120为增效作用，小于为增效作用，小于80为拮抗作用，介于二者之间为拮抗作用，介于二者之间为相加作用。而生态毒理学上常用小于为相加作用。而生态毒理学上常用小于40、40250和大于和大于250为标准。为标准。如：如：A的的LD50为为2微克微克/头，头，B的为的为4，A和和B的的4：1混剂混剂M的为的为1。则：则：kA1，kB0.5，实测，实测kM2，pA0.8，pB0.2 故：理论故：理论kM1x0.8+0.5x0.2=0.9 CTC100 x2/0.9222 该混剂有显著的增效作用。该混剂有显著的增效作用。26生态毒理学专题知识讲座7/8/2024三、影响剂量三、影响剂量效应的因素效应的因素1、影响化合物进入生物体内的因素：接触吸收方式及化合物的性质、水、影响化合物进入生物体内的因素：接触吸收方式及化合物的性质、水溶性、分子大小、环境溶性、分子大小、环境pH值，主要影响跨膜运输途径和速度。值，主要影响跨膜运输途径和速度。2、影响靶标作用浓度的因素：解毒代谢、贮存和分泌。、影响靶标作用浓度的因素：解毒代谢、贮存和分泌。3、生物对不同毒物的敏感性差异：不同物种及同一物种不同个体之间的、生物对不同毒物的敏感性差异：不同物种及同一物种不同个体之间的差异，通常会影响实验结果。差异，通常会影响实验结果。选择测试物种时，通常选择敏感物种、环境中有一定丰度的物种、室选择测试物种时，通常选择敏感物种、环境中有一定丰度的物种、室内易于饲养的物种、可以指示群落中其他物种反应的物种（代表性）。内易于饲养的物种、可以指示群落中其他物种反应的物种（代表性）。选择测试样本生物时，要尽量减小重复组之间的变异，注意个体大小、选择测试样本生物时，要尽量减小重复组之间的变异，注意个体大小、性别、年龄或发育阶段、饲料和营养状况、健康状况等性别、年龄或发育阶段、饲料和营养状况、健康状况等另外，遗传背景（品系、生物型、地理宗）也会影响测试结果。因此，另外，遗传背景（品系、生物型、地理宗）也会影响测试结果。因此，野外采集的生物，在测试前通常需要驯化饲养，以便最大限度的降低野外采集的生物，在测试前通常需要驯化饲养，以便最大限度的降低其变异度。另一方面，也要注意室内长期饲养后，微进化对生物敏感其变异度。另一方面，也要注意室内长期饲养后，微进化对生物敏感性的影响。性的影响。4、环境参数：温度、环境参数：温度、pH、水质（软水或硬水）、气或水流、基质、光、水质（软水或硬水）、气或水流、基质、光照等。试验中通常需要对这些因素进行标准化。照等。试验中通常需要对这些因素进行标准化。27生态毒理学专题知识讲座7/8/2024四、室内毒性测定四、室内毒性测定1、室内毒性测定的一般原则。室内测定一般从小规模的简单实验开始，随后在、室内毒性测定的一般原则。室内测定一般从小规模的简单实验开始，随后在此结果上设计更大规模的复杂实验。不同层次的实验的操作不同，但基本设此结果上设计更大规模的复杂实验。不同层次的实验的操作不同，但基本设计原则相似：计原则相似：（1）测试条件控制：如温度、光照、）测试条件控制：如温度、光照、pH、基质成分、气或水流等。、基质成分、气或水流等。（2）处理方式：测试生物以相同的方式接受系列剂量的毒物。如水生生物在系）处理方式：测试生物以相同的方式接受系列剂量的毒物。如水生生物在系统的玻璃缸中接受确定时间的不同浓度的毒物。统的玻璃缸中接受确定时间的不同浓度的毒物。（3）毒性判别标准的标准化：如死亡率、生长量和繁殖率等。）毒性判别标准的标准化：如死亡率、生长量和繁殖率等。（4）设置对照。通常有三种类型的对照。）设置对照。通常有三种类型的对照。阴性对照阴性对照negative control：其他处理相同，只是没有测试物及其载体：其他处理相同，只是没有测试物及其载体/溶剂。溶剂。载体载体/溶剂对照溶剂对照carrier/solvent control：其他处理相同，有载体：其他处理相同，有载体/溶剂，只是溶剂，只是没有测试物。没有测试物。阳性对照阳性对照positive control又称参比对照又称参比对照reference control：其他处理相同，：其他处理相同，只是用已知具有良好毒性反应的毒物代替测试物。这不仅可以监测测试系统只是用已知具有良好毒性反应的毒物代替测试物。这不仅可以监测测试系统是否适宜，有时还可以提供毒性比较的参照标准。是否适宜，有时还可以提供毒性比较的参照标准。一般情况下，如果阴性对照或载体一般情况下，如果阴性对照或载体/溶剂对照的死亡率超过溶剂对照的死亡率超过10，实验视为无效。，实验视为无效。如果低于如果低于10，处理死亡率则需要校正。即：，处理死亡率则需要校正。即：校正死亡率（实测死亡率对照死亡率）校正死亡率（实测死亡率对照死亡率）/（1对照死亡率）对照死亡率）28生态毒理学专题知识讲座7/8/20242、生态预测室内实验应该考虑的因素：、生态预测室内实验应该考虑的因素：（1）生物种类：可能时，每一营养层次至少选一种生物，而不是单个物）生物种类：可能时，每一营养层次至少选一种生物，而不是单个物种。种。（2）选用的不同物种对毒物反应的浓度范围要宽。）选用的不同物种对毒物反应的浓度范围要宽。（3）选用的生物要来源于不同的地理区域，变异度要大。）选用的生物要来源于不同的地理区域，变异度要大。（4）尽可能选用当地物种。）尽可能选用当地物种。（5）尽可能选用生态重要物种。）尽可能选用生态重要物种。（6）尽可能选用人或重要动物食物链中的物种。）尽可能选用人或重要动物食物链中的物种。（7）优先选择经济和娱乐重要的物种。）优先选择经济和娱乐重要的物种。（8）优先选择室内易于饲养繁殖的物种，如寿命和生活周期短、生长快、）优先选择室内易于饲养繁殖的物种，如寿命和生活周期短、生长快、抗病、抗寄生、抗物理伤害等。抗病、抗寄生、抗物理伤害等。（9）优先选择生物学背景清楚的物种，以利于后期结果的分析和应用。）优先选择生物学背景清楚的物种，以利于后期结果的分析和应用。29生态毒理学专题知识讲座7/8/20243、室内实验的处理方式。常用的有、室内实验的处理方式。常用的有4种处理方式：种处理方式：（1）静态测试）静态测试static test：在测试期间不更换介质。简便廉价，需要的：在测试期间不更换介质。简便廉价，需要的空间和时间少，废物少。适合急性毒性测定，尤其是筛选。缺点是剂空间和时间少，废物少。适合急性毒性测定，尤其是筛选。缺点是剂量不准、有代谢物污染、不适合长期慢性和亚急性毒性测定，仅适合量不准、有代谢物污染、不适合长期慢性和亚急性毒性测定，仅适合静态环境生物的测定。静态环境生物的测定。（2）更新测试）更新测试renewal test：定期（如：定期（如24小时）更换全部或部分介质。小时）更换全部或部分介质。类似静态测试，只是毒物的剂量更接近名义剂量。但对测试生物有一类似静态测试，只是毒物的剂量更接近名义剂量。但对测试生物有一定的干扰，工作量大。定的干扰，工作量大。（3）循环测试）循环测试recirculation test：测试介质在储备室和测试室之间封闭：测试介质在储备室和测试室之间封闭循环。优点是可以减少测试胁迫作用，如介质缺氧等。缺点是费用高、循环。优点是可以减少测试胁迫作用，如介质缺氧等。缺点是费用高、设备复杂、循环设备可能对结果产生影响。设备复杂、循环设备可能对结果产生影响。（4）流通式测试）流通式测试flow-through test：测试介质由储备室流过测试室排：测试介质由储备室流过测试室排除。测试条件更一致更稳定，结果重复性更好，适于长期测试，和急、除。测试条件更一致更稳定，结果重复性更好，适于长期测试，和急、慢性毒性测试，尤其适合高耗氧量的测试，可以使用激流环境生物进慢性毒性测试，尤其适合高耗氧量的测试，可以使用激流环境生物进行测定。缺点是费用高、设备复杂、废物排放多。行测定。缺点是费用高、设备复杂、废物排放多。30生态毒理学专题知识讲座7/8/20244、资料记录、资料记录实验记录：精确记录实验毒物的名称、类型、浓度（剂量）实验记录：精确记录实验毒物的名称、类型、浓度（剂量），测试生物的来源、状态、数量，处理的方法、接触时间、，测试生物的来源、状态、数量，处理的方法、接触时间、结果检测标准等。结果检测标准等。通常情况下只报告名义浓度（称量计算），但测试化合物通常情况下只报告名义浓度（称量计算），但测试化合物可能因降解、蒸发、吸附等而减少，有时希望用化学监测可能因降解、蒸发、吸附等而减少，有时希望用化学监测确定真实浓度。确定真实浓度。实验的标准化：有利于不同实验室之间的重复、比较、和实验的标准化：有利于不同实验室之间的重复、比较、和资料共享。资料共享。31生态毒理学专题知识讲座7/8/20245、慢性毒性测定、慢性毒性测定尽管这些急性测定对比较化合物的急性毒性很有用，但对尽管这些急性测定对比较化合物的急性毒性很有用，但对生态毒理学来说，更希望测定低浓度长时间的慢性毒性。生态毒理学来说，更希望测定低浓度长时间的慢性毒性。慢性毒性测定主要是用亚致死剂量处理，持续观察其生长慢性毒性测定主要是用亚致死剂量处理，持续观察其生长抑制、生殖力降低、接触后的存活力等慢性效应，这些测抑制、生殖力降低、接触后的存活力等慢性效应，这些测定均可为化合物的生态风险预测提供有用的资料。定均可为化合物的生态风险预测提供有用的资料。卵到卵的全生活史慢性测定是经典的方法。但难度较大。卵到卵的全生活史慢性测定是经典的方法。但难度较大。敏感期的慢性毒性测定相应较简单，但仍需了解关于测试敏感期的慢性毒性测定相应较简单，但仍需了解关于测试生物的生物学信息，如生活周期、营养和生理要求、行为、生物的生物学信息，如生活周期、营养和生理要求、行为、捕食关系、物理需求（光、温、湿、光周期、基质等）捕食关系、物理需求（光、温、湿、光周期、基质等）32生态毒理学专题知识讲座7/8/20246、慢性毒性的表示方法：、慢性毒性的表示方法：最大剂量最大剂量maximum dose，是指不引起生物产生统计显著反应的毒物，是指不引起生物产生统计显著反应的毒物剂量，并用无作用浓度剂量，并用无作用浓度no observable effect concentration(NOEC)或无毒害浓度或无毒害浓度no observable adverse effect concentration(NOAEC)表示。表示。最小剂量最小剂量minimum dose，是指引起生物产生统计显著反应的毒物最，是指引起生物产生统计显著反应的毒物最小剂量，并用最低有效浓度小剂量，并用最低有效浓度lowest observable effect concentration(LOEC)或最低有害浓度或最低有害浓度lowest observable adverse effect concentration(LOAEC)表示。表示。最大容许毒物浓度最大容许毒物浓度maximum acceptable toxicant concentration(MATC)：是：是NOEC和和LOEC之间的浓度范围，有时用二者的数学平均之间的浓度范围，有时用二者的数学平均数作为控制指标。数作为控制指标。早期曾用短期资料预测长期慢性毒性常使用人为的应用系数，如将早期曾用短期资料预测长期慢性毒性常使用人为的应用系数，如将LD50乘以乘以0.1、0.01、0.001、0.0001，作为环境安全浓度。其最大的，作为环境安全浓度。其最大的缺点是：急性毒性和慢性毒性的机理不同，这样预测没有科学依据。缺点是：急性毒性和慢性毒性的机理不同，这样预测没有科学依据。33生态毒理学专题知识讲座7/8/2024五、室内个体测定观察的毒效五、室内个体测定观察的毒效1、死亡率、死亡率mortality：是易于确定、：是易于确定、“全或无全或无”的可定量反应，结果的可定量反应，结果容易进行生态学解释，因此被广泛应用，并建有数据库。但死亡容易进行生态学解释，因此被广泛应用，并建有数据库。但死亡率测定通常需要处理后观察一段时间，并用刺激反应证实是否死率测定通常需要处理后观察一段时间，并用刺激反应证实是否死亡。这对于有麻痹作用的化合物尤其重要。亡。这对于有麻痹作用的化合物尤其重要。2、生长、生长growth：是易于测定的个体适应性特征，同时它趋向于累计：是易于测定的个体适应性特征，同时它趋向于累计综合反应多种可能影响种群的亚致死效应，因此常用于慢性毒性综合反应多种可能影响种群的亚致死效应，因此常用于慢性毒性测定。有时间接测定食物转化率测定。有时间接测定食物转化率food conversion efficiency(FCE)和生长潜能和生长潜能scope for growth(SfG)。但必需注意有些毒物。但必需注意有些毒物在低浓度下可以刺激生长。在低浓度下可以刺激生长。3、生殖、生殖reproduction：是对慢性毒性和亚致死效应最敏感的、具有：是对慢性毒性和亚致死效应最敏感的、具有重大生物学意义的评价重点。具体指标包括性成熟期、生殖率、重大生物学意义的评价重点。具体指标包括性成熟期、生殖率、孵化率、幼仔成活率等。对生殖的影响可以是短期的，主要是影孵化率、幼仔成活率等。对生殖的影响可以是短期的，主要是影响配子发生或生殖组织细胞的永久损伤。生殖测定费用常较高。响配子发生或生殖组织细胞的永久损伤。生殖测定费用常较高。34生态毒理学专题知识讲座7/8/20244、发育、发育development：因为发育可以影响生物的因为发育可以影响生物的适合度，因此毒物可以通过影响发育导致不良的适合度，因此毒物可以通过影响发育导致不良的生态后果。理想的慢性毒性测定应该观察实验动生态后果。理想的慢性毒性测定应该观察实验动物整个生活史、甚至几代的反应。如乙烯雌酚物整个生活史、甚至几代的反应。如乙烯雌酚diethylstilbestrol(DES)是防治妇女流产的非类是防治妇女流产的非类固醇药物，目前已经查实，服用这种药物后，孕固醇药物，目前已经查实，服用这种药物后，孕育的女儿在青春期易患阴道和宫颈肿瘤。育的女儿在青春期易患阴道和宫颈肿瘤。这类测定耗费大用时长，因此常用敏感阶段测定这类测定耗费大用时长，因此常用敏感阶段测定代替。代替。35生态毒理学专题知识讲座7/8/20245、形态学变化、形态学变化morphological change：是确定和评估环境：是确定和评估环境污染影响的生物学普查指标。如污染水体中鱼鳍溃烂、骨污染影响的生物学普查指标。如污染水体中鱼鳍溃烂、骨骼变型、肿瘤等。摇蚊幼虫畸形已经被用来评估淡水生态骼变型、肿瘤等。摇蚊幼虫畸形已经被用来评估淡水生态系统慢性毒性胁迫的长期效果。由于自然种群中也存在基系统慢性毒性胁迫的长期效果。由于自然种群中也存在基因性和表型变异的畸形，但污染胁迫会增加发生率，因此因性和表型变异的畸形，但污染胁迫会增加发生率，因此需要室内实验提出评估参数。需要室内实验提出评估参数。6、细胞学或组织病理学变化、细胞学或组织病理学变化cytological or histopathological change：是对细胞器和细胞结构功能是对细胞器和细胞结构功能可能毒效的有用指标。如细胞器的数量、大小、性状，尤可能毒效的有用指标。如细胞器的数量、大小、性状，尤其是涉及蛋白合成和解毒的细胞器，可以诊断接触毒物造其是涉及蛋白合成和解毒的细胞器，可以诊断接触毒物造成的损害和早期细胞学的变化。如接触有机污染物多环芳成的损害和早期细胞学的变化。如接触有机污染物多环芳烃和多氯联苯，可以导致内质网增生、溶酶体和自吞噬囊烃和多氯联苯，可以导致内质网增生、溶酶体和自吞噬囊泡增多。泡增多。36生态毒理学专题知识讲座7/8/20247、生化改变、生化改变biochemical change：这一指标过去使用的很：这一指标过去使用的很少，近年来逐步增加，它不仅灵敏，而且可以明确毒物的少，近年来逐步增加，它不仅灵敏，而且可以明确毒物的作用机理。过去曾经利用发光细菌进行监测，现在涌现出作用机理。过去曾经利用发光细菌进行监测，现在涌现出许多生化和分子生物学方法。许多生化和分子生物学方法。8、行为改变、行为改变behavioral change：行为是神经和肌肉的综合：行为是神经和肌肉的综合反应，它可以影响猎食、交配、避敌和栖所选择，从而影反应，它可以影响猎食、交配、避敌和栖所选择，从而影响物种的适合度。如果是重要物种，则会影响生态系统的响物种的适合度。如果是重要物种，则会影响生态系统的结构和功能。植物的光反应以及海洋生物的光定向，已被结构和功能。植物的光反应以及海洋生物的光定向，已被用来评价污染的亚致死效应。鱼类的避敌行为也有许多研用来评价污染的亚致死效应。鱼类的避敌行为也有许多研究。目前，还有利用神经电生理技术进行的研究。但这些究。目前，还有利用神经电生理技术进行的研究。但这些研究尚需要标准化。研究尚需要标准化。37生态毒理学专题知识讲座7/8/2024六、动物毒性测定资料的外推分析六、动物毒性测定资料的外推分析1、由一个物种推测另一个物种：选择代表物种测试，可以代表一类。但、由一个物种推测另一个物种：选择代表物种测试，可以代表一类。但这种推测常出问题。这种推测常出问题。2、由单一物种推测多物种群体：根据生物学和生态学关系，可以推测一、由单一物种推测多物种群体：根据生物学和生态学关系，可以推测一个物种受到毒害后对其他物种的影响。但由于生态学关系复杂，且许个物种受到毒害后对其他物种的影响。但由于生态学关系复杂，且许多间接关系难以确定，因此这种推测问题较多。多间接关系难以确定，因此这种推测问题较多。3、由个体水平推测高层次水平：这一推测分析使用的较多，如由个体影、由个体水平推测高层次水平：这一推测分析使用的较多，如由个体影响推测对种群的影响，由敏感物种推测对群落和生态系统的影响。但响推测对种群的影响，由敏感物种推测对群落和生态系统的影响。但单一物种很难反应生态系统的不同营养层次和其他指标，因此常利用单一物种很难反应生态系统的不同营养层次和其他指标，因此常利用不同营养层次的敏感物种同时测定，以便提高推测的可靠性。不同营养层次的敏感物种同时测定，以便提高推测的可靠性。4、由室内推测野外：适应性性状和人工生态系统的测试结果能较好地用、由室内推测野外：适应性性状和人工生态系统的测试结果能较好地用于推测，但由于野外环境的复杂性，常需要相互验证。于推测，但由于野外环境的复杂性，常需要相互验证。38生态毒理学专题知识讲座7/8/2024结结 语语剂量通常用相对量表示。分为生物接触毒物的量剂量通常用相对量表示。分为生物接触毒物的量（外剂量）和进入生物体内与靶标作用的毒物的（外剂量）和进入生物体内与靶标作用的毒物的量（内剂量）。量（内剂量）。效应是毒物作用后引起的生物学改变，包括质效效应是毒物作用后引起的生物学改变，包括质效应和量效应。通常依据效应时间分成急性、亚急应和量效应。通常依据效应时间分成急性、亚急性和慢性毒性性和慢性毒性毒物的作用剂量与生物毒效反应之间的关系，即毒物的作用剂量与生物毒效反应之间的关系，即为剂量为剂量效应关系，可以用数学方程来表示，即效应关系，可以用数学方程来表示，即毒力回归方程。毒力回归方程。39生态毒理学专题知识讲座7/8/2024急性毒性通常用效应中值表示，而慢性毒性常用最大无作急性毒性通常用效应中值表示，而慢性毒性常用最大无作用剂量和最小有作用剂量来表示。用剂量和最小有作用剂量来表示。效应中值可以代表种群个体的平均敏感水平，而毒力回归效应中值可以代表种群个体的平均敏感水平，而毒力回归方程的斜率则反映了群体的变异度。方程的斜率则反映了群体的变异度。不同毒物对同种生物或同一毒物对不同生物的毒性大小可不同毒物对同种生物或同一毒物对不同生物的毒性大小可以用相对毒力系数来比较。以用相对毒力系数来比较。不同毒物之间的联合作用，可以有不同毒物之间的联合作用，可以有3种不同的互作关系种不同的互作关系（增效作用（增效作用Synergistic、相加作用、相加作用additional和拮抗作用和拮抗作用antagonistic）。）。CTC大于大于120为增效作用，小于为增效作用，小于80为拮为拮抗作用，介于二者之间为相加作用。而生态毒理学上常用抗作用，介于二者之间为相加作用。而生态毒理学上常用小于小于40、40250和大于和大于250为标准。为标准。40生态毒理学专题知识讲座7/8/2024室内毒性测定要注意：室内毒性测定要注意：测试生物标准化测试生物标准化控制测试条件控制测试条件毒物处理方式、剂量和重复毒物处理方式、剂量和重复毒性判别标准毒性判别标准设置对照：阴性对照设置对照：阴性对照negative control；载体；载体/溶剂对溶剂对照照carrier/solvent control；阳性对照；阳性对照positive control又称参比对照又称参比对照reference control：校正死亡率（实测死亡率对照死亡率）校正死亡率（实测死亡率对照死亡率）/（1对照对照死亡率）死亡率）41生态毒理学专题知识讲座7/8/2024室内实验常用室内实验常用4种处理方式：静态测试种处理方式：静态测试static test、更新测试更新测试renewal test、循环测试、循环测试reci