生化试剂注意事项课件

生化生化试剂在全自在全自动生化分析生化分析仪中中应用的注意事用的注意事项.生化试剂在全自动生化分析仪中应用的注意事项.1Contents1.1.试剂试剂的保存的保存的保存的保存2.2.实验实验室有关室有关室有关室有关试剂试剂使用的使用的使用的使用的SOPSOP的建立的建立的建立的建立 3.3.试剂类试剂类型和机器的匹配型和机器的匹配型和机器的匹配型和机器的匹配4.4.校准和校准和校准和校准和质质控与控与控与控与试剂试剂的匹配性的匹配性的匹配性的匹配性7 7.对对外外外外观观异常的异常的异常的异常的标标本的本的本的本的处处理理理理8 8.对对特殊特殊特殊特殊项项目目目目进进行特殊的行特殊的行特殊的行特殊的处处理理理理6 6.合理的合理的合理的合理的试剂试剂上机上机上机上机顺顺序序序序9 9.对对异常异常异常异常结结果的果的果的果的标标本的本的本的本的处处理理理理5.5.机器性能和水机状机器性能和水机状机器性能和水机状机器性能和水机状态对检测态对检测的影响的影响的影响的影响 Contents1.试剂的保存2.实验室有关试剂使用的SOP21.试剂的保存的保存1.1.合适的温度和避合适的温度和避光保存：大部分光保存：大部分为2-8少部分少部分为2-26。1.2.试剂摆放放时注意注意不要不要贴近冰箱后背的近冰箱后背的内胆，防止内胆，防止试剂结冰。冰。试剂放置的偏后，放置的偏后，贴贴近后背的内胆，近后背的内胆，现现在的冷凝器在在的冷凝器在两两侧侧，后背有制冷，后背有制冷管路就会造成管路就会造成结结冰。冰。1.试剂的保存1.1.合适的温度和避光保存：大部分为2-832.实验室有关室有关试剂使用的使用的SOP的建立的建立2.1.不同不同项目在同一目在同一型号机器上型号机器上SOP的的建立。建立。2.2.同一个同一个项目在不目在不同型号上同型号上SOP的建的建立。立。HBA1C的溶血的溶血剂D-D标本本类型型三三试剂HCYHBA1C在在AU5400和和AU5800的的应用区用区别2.实验室有关试剂使用的SOP的建立2.1.不同项目在同一型43.试剂类型和机器的匹配型和机器的匹配3.试剂类型和机器的匹配54.校准和校准和质控与控与试剂的匹配性的匹配性首先必首先必须须明确生化分析明确生化分析仪仪不不论论如何先如何先进进，它，它还还是是一个比一个比较较器，它器，它测试测试出来的出来的标标本本结结果是随着果是随着标标准准限的限的设设置不同而置不同而变变化的。所以，在化的。所以，在卫卫生部生部临临床床检检验验中心中心拟拟定的定的“临临床床实验实验室（定量室（定量测测定）室内定）室内质质控控工作指南工作指南”中明确指出中明确指出“对测对测定定标标本的本的仪仪器一定要器一定要求求进进行校准，校准行校准，校准时时要要选择选择合适的（配套的）合适的（配套的）标标准品准品/校准品；如有可能，校准品校准品；如有可能，校准品应应能溯源到参能溯源到参考方法或考方法或/和参考物和参考物质质；对对不同的分析不同的分析项项目要根目要根据其特性确立各自的校准据其特性确立各自的校准频频率。率。”4.校准和质控与试剂的匹配性首先必须明确生化分析仪不论如6校准品（校准品（Calibrationmaterials）含有已知量的欲）含有已知量的欲测测物，用以校准物，用以校准该测该测定方法的数定方法的数值值，它与，它与该该方法方法及及试剂试剂、仪仪器是相关器是相关联联的。校准品的作用是的。校准品的作用是为为了了减少或消除减少或消除仪仪器、器、试剂试剂等造成的系等造成的系统误统误差。因此差。因此最好最好为为人血清基人血清基质质，以减少基，以减少基质质效效应应造成的造成的误误差。差。质质控品（控品（Controlmaterials）只用于和待）只用于和待测标测标本本同同时测时测定的，定的，为为了控制了控制标标本的本的测测定定误误差，因此要差，因此要求保存求保存时间时间十分十分稳稳定。定。校准品（Calibrationmaterials）含有7生化试剂注意事项课件8生化试剂注意事项课件9生化试剂注意事项课件10生化试剂注意事项课件115.机器性能和水机状机器性能和水机状态对检测的影响的影响5.1.优良的机器状良的机器状态是是实验结果准确的前提。果准确的前提。5.2.合格且合格且稳定的水定的水质是保障是保障结果准确性和果准确性和稳定性定性的重要因素。的重要因素。5.机器性能和水机状态对检测的影响5.1.优良的机器状态是实125.1.有关机器状有关机器状态对测量量结果影响果影响搅拌系统出现问题5.1.有关机器状态对测量结果影响搅拌系统出现问题13某医院反某医院反馈CL比色法最近比色法最近结果果特特别异常，异常，结果在果在-1000和和2000之之间波波动。而且。而且仅仅CL结果异常，其它果异常，其它项目目结果果没没问题。灯泡在450的波长下不稳定。所有项目仅仅CL在450的波长下反应。某医院反某医院反馈最近所有最近所有项目忽目忽高忽低，特高忽低，特别是是酶类，怀疑疑试剂出出现问题冲洗站最外面的打水针出现问题，打水量时多时少。当打水偏多的时候，水会溢到隔壁反应杯。某医院反馈CL比色法最近结果特别异常，结果在-1000和20145.2.有关水机状有关水机状态对测量量结果影响果影响5.2.有关水机状态对测量结果影响15ABS空白：33ABS27.4：47510:1949.8:1919.69.29.19.0合格且合格且稳定的定的水水质是是保障保障结果准确果准确性和性和稳定性的定性的重要因重要因素素。ABS空白：33ABS27.4：47510:1949.69166.合理的合理的试剂上机上机顺序序合理的合理的试剂测试顺序是防止序是防止试剂针交叉交叉污染的重要方法之一。染的重要方法之一。TG试剂内含有高活性的脂肪酶，浓度为6000U/L。TG和LPS的检测之间尽量隔开。6.合理的试剂上机顺序合理的试剂测试顺序是防止试剂针交叉污染17生化试剂注意事项课件18生化试剂注意事项课件197.对外外观异常的异常的标本的本的处理理随着科学技随着科学技术的的发展，生化展，生化检验测定的精密度和准定的精密度和准确度都大大的提高了，但是确度都大大的提高了，但是这却却时一些一些实验人人员忽忽视了了对血清血清标本外本外观的的观测。事。事实上，血清上，血清标本的外本的外观对其生化其生化结果有着很直接的影响。果有着很直接的影响。溶血黄疸乳糜血7.对外观异常的标本的处理随着科学技术的发展，生化检验测定的20溶血：溶血：血血红红蛋白的吸收峰在蛋白的吸收峰在500nm，500-560nm都有影响。又因都有影响。又因为为血血红红蛋白本身是氧化蛋白本身是氧化还还原原剂剂，可以与，可以与试剂试剂中的中的过过氧化物氧化物发发生反生反应应，致，致使使检测结检测结果受到影响。果受到影响。黄疸：黄疸：严严重的黄疸重的黄疸对对比色有影响，例如比色有影响，例如ALT，Crea，GGT等等项项目受影响更目受影响更为为明明显显。脂血：造成散射，波脂血：造成散射，波长长越短越明越短越明显显，对对任何任何测测定都定都有影响。有影响。建建议：对于外于外观异常的异常的标本采取其它的本采取其它的检测手段手段进行分析。行分析。溶血：血红蛋白的吸收峰在500nm，500-560nm都有影218.对特殊特殊项目目进行特殊的行特殊的处理理HbA1C：溶血：溶血剂处理半个小理半个小时以上。以上。CO2：试剂盒不能盒不能长期敞开盖子，期敞开盖子，标本尽快本尽快处理防理防止止挥发。NH3：含氨的抗凝：含氨的抗凝剂、未去氨材、未去氨材质做的做的试管、分析管、分析过程中受到氨的程中受到氨的污染。染。标本放置会本放置会导致氨的逸出。致氨的逸出。CU：不能使用肝素抗凝的采血管。：不能使用肝素抗凝的采血管。8.对特殊项目进行特殊的处理HbA1C：溶血剂处理半个小时以229.对异常异常结果果标本的本的处理理对于异常于异常结果的果的标本不本不仅要要结合合临床情况床情况进行分析，行分析，而且也要而且也要结合反合反应曲曲线进行全面分析。行全面分析。前白蛋白前白蛋白结果果为“0”TBA大批量做偶大批量做偶尔出出现负值，单独没独没有有问题肝肝脏的的损伤程度程度机器交叉机器交叉污染的染的情况情况9.对异常结果标本的处理对于异常结果的标本不仅要结合临床情况23Hot spot:有关双有关双试剂R1剩余的剩余的问题在生化分析仪器的长期使用过程中，出现双试剂的R1剩余很多，R2已经用完。其原因是仪器在设计过程中，为了避免试剂污染，试剂探针在加入设定量的同时多加一些试剂（模拟量），设定量加入反应杯，模拟量被弃去，其模拟量随设定量不同而不同，由于R2设定试剂量小,其相对模拟量大，造成R2短缺。R1体积：80mlR2体积：40mlR1：R2=200:100R1：R2=100：50实际测试数：347，R1剩余量2.6ml实际测试数：634，R1剩余量7.1mlHotspot:有关双试剂R1剩余的问题在生化分析仪器的24Hot spot:有关交叉有关交叉污染的分析染的分析1.部件部件间化学化学污染的来源染的来源2.试剂间化学化学污染的染的类型型3.试剂间化学化学污染的判染的判别4.消除消除试剂间化学化学污染的方法染的方法Hotspot:有关交叉污染的分析1.部件间化学污染的来源251.部件部件间化学化学污染的来源染的来源全自全自动动生化分析生化分析仪发仪发展迅速，具有多展迅速，具有多项项目、多目、多样样本本的的处处理能力，理能力，检测检测速度不断的提高，但由于共用速度不断的提高，但由于共用吸吸样针样针、试剂针试剂针、搅搅拌棒以及比色杯，当生化拌棒以及比色杯，当生化仪仪长长期使用致其清洗能力下降、比色杯老化后引起期使用致其清洗能力下降、比色杯老化后引起吸附力增加、生化吸附力增加、生化仪仪内内污污垢的垢的积积聚、聚、测试顺测试顺序安序安排不当，且常排不当，且常规规清洗不能有效消清洗不能有效消除交叉除交叉污污染染时时，就会增加就会增加试剂间试剂间化学化学污污染的可能性，引起染的可能性，引起测测定定结结果不准确。果不准确。1.部件间化学污染的来源全自动生化分析仪发展迅速，具有多项目261.1.试剂针污染：当染：当试剂针在清洗不完全，或黏附在清洗不完全，或黏附力增加力增加时，残留残留试剂可能会可能会对下一相下一相临检测结果果造成影响。造成影响。1.2.搅拌棒拌棒污染：染：搅拌拌绑若清洗不完全，或黏附力若清洗不完全，或黏附力增加增加时，残留残留试剂可能会可能会对下一相下一相临检测结果造果造成影响。成影响。1.3.比色杯比色杯污染：当某个比色杯清洗不完全染：当某个比色杯清洗不完全时，吸，吸附在比色杯上的上一个附在比色杯上的上一个项目的目的残留残留试剂，可能会，可能会对在在这个比色杯中个比色杯中进行的下一个行的下一个项目的目的检测结果果造成影响。造成影响。1.1.试剂针污染：当试剂针在清洗不完全，或黏附力增加时，残272.试剂间化学化学污染的染的类型型2.1.试剂成分的直接成分的直接污染染2.2.试剂成分参与反映成分参与反映2.3.反反应进程相同程相同2.4.影响反映条件影响反映条件2.试剂间化学污染的类型2.1.试剂成分的直接污染282.1.试剂成分的直接成分的直接污染：上一染：上一测定定试剂中含有下中含有下一一测定所需要定所需要测定的物定的物质，直接干，直接干扰下一下一检测的的测定定结果。如：果。如：AMY试剂中含有中含有较高高浓度的度的Ca2+；ALP（IFCC法）、法）、CK（NAC法）、法）、CK-MB（NAC法）、法）、CO2（PEPC法）、法）、AMY（EPS法）、法）、TG等等试剂中含有中含有Mg2+。2.1.试剂成分的直接污染：上一测定试剂中含有下一测定所需要292.2.试剂成分参与反映：上一个成分参与反映：上一个试剂中含有的某种中含有的某种试剂成分与下一反成分与下一反应所要所要测定的底物有作用，因定的底物有作用，因而干而干扰下一反下一反应的的测定定结果。如：（果。如：（1）镁测定定试剂的的络合合剂亦能与亦能与铁结合，影响合，影响铁有有铁络合合剂的的结合（合（2）CHOL试剂中含有胆固醇中含有胆固醇酯酶，可水解胆，可水解胆固醇固醇酯形成游离胆固醇，而引起形成游离胆固醇，而引起对游离胆固醇游离胆固醇测定的干定的干扰。2.2.试剂成分参与反映：上一个试剂中含有的某种试剂成分与下302.3.反反应进程相同：上一程相同：上一试剂所引所引导的反的反应对下一下一个个项目的反目的反应进程程带来来间接的干接的干扰，下一，下一项目所目所测定的是前后两个定的是前后两个项目反目反应的的综合作用合作用结果。如：果。如：当上一个反当上一个反应产物物为H2O2时则对以以Trinders反反应产生生颜色的色的测定定结果引起干果引起干扰。如。如UA对CHOL结果的影响；果的影响；CHOL对CREA（酶法）法）测定定结果的影响；果的影响；GLU（氧化（氧化酶法）法）对CREA测定定结果的影响。果的影响。2.3.反应进程相同：上一试剂所引导的反应对下一个项目的反应312.4影响反映条件：影响下一影响反映条件：影响下一项项目的反目的反应应条件如条件如pH等，从而改等，从而改变变反反应应速率。如：（速率。如：（1）直接胆）直接胆红红素素（钒钒酸酸盐盐氧化法）氧化法）试剂试剂中含有表面活性中含有表面活性剂剂的酒石的酒石酸酸盐缓盐缓冲液会影响冲液会影响ALT活性，活性，对测对测定定结结果有果有负负干干扰扰。（。（2）CREA（苦味酸速率法）反（苦味酸速率法）反应应条件条件为为碱碱性，果糖胺（性，果糖胺（动动力学法）反力学法）反应应条件条件为为酸性，受到酸性，受到污污染后反染后反应应速率会减慢。速率会减慢。2.4影响反映条件：影响下一项目的反应条件如pH等，从而改变323.试剂间化学化学污染的判染的判别 3.1.一份一份样本分成两份，一份加生理本分成两份，一份加生理盐水或其他适水或其他适当的稀当的稀释液，另一份加等量的某液，另一份加等量的某试剂，同，同时测定，定，观察察结果的果的变化，化，进而确定而确定发生生试剂交叉交叉污染染时造成直接干造成直接干扰的的项目。目。3.试剂间化学污染的判别3.1.一份样本分成两份，一份加生333.2.1.假假设有有3个个项目目A，B，C，以一混合血清，以一混合血清作作为标本，按以下本，按以下顺序序测试：A，A，A，A，A，B，A，C，A，B，B，B，B，B，C，B，C，C，C，C，C。得到的。得到的结果分果分别为：A1，A2，A3，A4，A5，BA-B，AB-A，CA-C，AC-A，B1，B2，B3，B4，B5，CB-C，BC-B，C1，C2，C3，C4，C5。（AB-A：表示：表示B项目目对A项目目污染染时A项目的目的测定定值，其余表示，其余表示类同）。以同）。以A2A5、B2B5、C2C5的的4次次测定平均定平均值分分别作作为A、B、C项目无目无污染染时的的测定定值。若（。若（AB-A/A100%）105%则强烈支持烈支持B试剂对A有交叉有交叉污染。染。3.2.1.假设有3个项目A，B，C，以一混合血清作为标本343.1.2.若上述初若上述初试验结果果B对A有有污染，染，则可可进行行以下以下试验进行确行确认，测定定顺序序为：B,A,A,A,结果果为：B，A1，A2，A3。若。若（A1/A3100%）105%，则强烈烈支持支持B对A有交叉有交叉污染。染。A1A3的的结果可果可观察受察受B污染的程度是否逐染的程度是否逐渐减减轻。3.1.2.若上述初试验结果B对A有污染，则可进行以下试验进354.消除消除试剂间化学化学污染的方法染的方法 4.1.要求要求检验人人员对仪器工作流程、器工作流程、试剂组成、成、测定原理要了如指掌，定原理要了如指掌，对试剂交叉交叉污染的各种可能染的各种可能性加以考性加以考虑，合理，合理设计程序。更程序。更换试剂时应仔仔细研究研究说明明书，发现和避免可能存在的和避免可能存在的试剂交叉交叉污染。染。4.2.合理安排合理安排检测项目的目的顺序，在有交叉序，在有交叉污染的染的检测项目中目中间插入一个或两个非插入一个或两个非污染染项目。最目。最彻底底的做法的做法则是将被干是将被干扰项目置于干目置于干扰项目之前，以目之前，以消除干消除干扰发生的可能。生的可能。4.消除试剂间化学污染的方法4.1.要求检验人员对仪器工作364.3.当合理当合理设置置测试顺序无法消除交叉序无法消除交叉污染染时，可，可使用生化使用生化仪的的试剂针、比色杯清晰程序，、比色杯清晰程序，对试剂针、比色杯、比色杯进行行2次或多次清洗。用碱性清洗掖次或多次清洗。用碱性清洗掖及酸性清洗掖冲洗及酸性清洗掖冲洗试剂针可以有效地避免携可以有效地避免携带污染。染。4.4.选用具有抗交叉用具有抗交叉污染的染的试剂盒：如在游离胆固盒：如在游离胆固醇醇试剂中添加胆固醇中添加胆固醇酯酶抑制抑制剂，以减少胆固醇，以减少胆固醇酯酶水解胆固醇水解胆固醇酯而引起而引起对游离胆固醇游离胆固醇测定的定的污染。染。4.3.当合理设置测试顺序无法消除交叉污染时，可使用生化仪的37Hot spot:不同型号生化不同型号生化仪器工作注意事器工作注意事项贝克曼克曼库尔特：特：CX,LX/DXC,旧旧AU,新新AU西西门子：子：ADVIA1200/1650/1800/2400,DIMENSION日立：日立：7020/7060,7080/7100/7180/7180,7600,008/003罗氏：氏：P800,C311/C501/C502,C701/C702雅培：雅培：Areset,C4000/C8000/C16000东芝：芝：TBA40,TBA120,TBA2000其他其他Hotspot:不同型号生化仪器工作注意事项贝克曼库尔特：38.ThankYou!.39