骨髓细胞学检验培训ppt课件

骨髓骨髓细胞学胞学检验骨髓细胞学检验1 目的与要求l掌握掌握骨髓骨髓细胞学胞学检测的的临床床应用；有核用；有核细胞增生程度分胞增生程度分级；血；血细胞胞发育的一般育的一般规律律 。l熟悉熟悉血血细胞化学染色（胞化学染色（POXPOX、NAPNAP、NAENAE、PASPAS、铁染色）染色）的的临床意床意义，免疫学分型、，免疫学分型、遗传学分析在血液病中的学分析在血液病中的应用。用。l了解了解各系各系统血血细胞的正常形胞的正常形态学特征；低倍学特征；低倍镜、高倍、高倍镜、油油镜下骨髓的下骨髓的检查内容。内容。2骨髓细胞学检验 目的与要求2骨髓细胞学检验2 教学内容l骨髓骨髓细胞学胞学检测的的临床床应用用l骨髓骨髓细胞学胞学检测的方法和内容的方法和内容 l血血细胞成熟胞成熟过程中形程中形态演演变的一般的一般规律律 l血血细胞的正常形胞的正常形态学特征学特征 l血血细胞的胞的细胞化学染色胞化学染色 l细胞免疫学分型胞免疫学分型l细胞胞遗传学分析学分析3骨髓细胞学检验 教学内容骨髓细胞学检测的临床应用3骨髓细胞3一.骨髓骨髓细胞形胞形态学学检测的的临床床应用用4骨髓细胞学检验一.骨髓细胞形态学检测的临床应用4骨髓细胞学检验42.血液系统疾病的常见体征l发热发热:是最常见的临床表现之一是最常见的临床表现之一l黄疸黄疸:血清胆红素增高而使巩膜、皮肤和粘膜发生血清胆红素增高而使巩膜、皮肤和粘膜发生 黄染黄染l淋巴结肿大淋巴结肿大:全身或局部全身或局部l肝脾肿大肝脾肿大:仰卧位或侧卧位在肋缘下能触及的肝脾仰卧位或侧卧位在肋缘下能触及的肝脾l贫血贫血:血细胞分析的血细胞分析的HbHb、RBC RBC 或或HCTHCT低于正常值低于正常值l出血倾向出血倾向:eg.:eg.皮肤和粘膜自发性出血或轻微创伤后皮肤和粘膜自发性出血或轻微创伤后 凝血时间延长凝血时间延长l骨痛或关节痛骨痛或关节痛:白血病细胞浸润刺激骨膜白血病细胞浸润刺激骨膜5骨髓细胞学检验2.血液系统疾病的常见体征5骨髓细胞学检验5l诊断造血系统疾病诊断造血系统疾病 eg.eg.白血病、恶组、白血病、恶组、MM MM、AAAA、巨幼贫等、巨幼贫等 以及评价疗效和判断预后以及评价疗效和判断预后l辅助诊断某些疾病辅助诊断某些疾病 eg.eg.骨髓转移癌、淋巴瘤浸润、骨髓转移癌、淋巴瘤浸润、MDSMDS、增生性疾病、缺铁贫、溶血性贫血、脾亢、增生性疾病、缺铁贫、溶血性贫血、脾亢、ITP ITP 等等l提高某些疾病的诊断率提高某些疾病的诊断率 eg.eg.疟原虫、黑热病原虫等疟原虫、黑热病原虫等2.2.临床床应用用6骨髓细胞学检验诊断造血系统疾病2.临床应用6骨髓细胞学检验6l外周血细胞成分及形态异常外周血细胞成分及形态异常l不明原因发热，肝、脾、淋巴结肿大不明原因发热，肝、脾、淋巴结肿大 l骨质破坏、肾功能异常、紫癜等骨质破坏、肾功能异常、紫癜等l化疗后疗效观察化疗后疗效观察l其他：其他：l禁忌症：出血性疾病、晚期妊娠禁忌症：出血性疾病、晚期妊娠 3.3.适适应症和禁忌症症和禁忌症7骨髓细胞学检验外周血细胞成分及形态异常3.适应症和禁忌症7骨髓细胞学检7 二二.骨髓骨髓细胞学胞学检测的方法和内容的方法和内容8骨髓细胞学检验8骨髓细胞学检验81.肉眼观察 取材、取材、制片、制片、染色染色9骨髓细胞学检验1.肉眼观察 9骨髓细胞学检验92.低倍镜检查l 判断骨髓增生程度判断骨髓增生程度 有核细胞与成熟红细胞的比例，骨髓小粒的结构，五级分类法有核细胞与成熟红细胞的比例，骨髓小粒的结构，五级分类法l 计数巨核细胞计数巨核细胞 低倍镜浏览全片，尤其是片头尾部和边缘，计数全片的巨核细胞数，低倍镜浏览全片，尤其是片头尾部和边缘，计数全片的巨核细胞数，ITPITPl观察有无特殊细胞及其他观察有无特殊细胞及其他 eg.eg.骨髓转移癌细胞、异常组织细胞等骨髓转移癌细胞、异常组织细胞等10骨髓细胞学检验2.低倍镜检查 判断骨髓增生程度 10骨髓细胞学检验102.油镜检查l 有核细胞分类计数有核细胞分类计数 连续计数连续计数 200200个有核细胞，并按细胞个有核细胞，并按细胞的不同系列和发育阶段的形态特征进行分类，累计粒细胞总数和幼红细的不同系列和发育阶段的形态特征进行分类，累计粒细胞总数和幼红细胞总数，计算粒红比值胞总数，计算粒红比值l观察细胞形态观察细胞形态 观察包括粒、单、淋、巨核系及成熟红细胞的形观察包括粒、单、淋、巨核系及成熟红细胞的形态有无异常，估计血小板数量态有无异常，估计血小板数量11骨髓细胞学检验2.油镜检查 有核细胞分类计数 连续计数 200个有核细11 三三.血血细胞胞发育育过程中形程中形态演演变的一般的一般规律律 12骨髓细胞学检验 12骨髓细胞学检验12 l血细胞起源血细胞起源：造血干细胞造血干细胞l造血干细胞特点：造血干细胞特点：具有高度自我更新的能力具有高度自我更新的能力 具有多向分化的能力具有多向分化的能力l干细胞的增殖分化的影响因素：干细胞的增殖分化的影响因素：造血微环境、造血细胞生长因子、造血微环境、造血细胞生长因子、白细胞介素、神经和体液因子白细胞介素、神经和体液因子 1.1.血血细胞的生成和胞的生成和发育育13骨髓细胞学检验 1.血细胞的生成和发育13骨髓细胞学检验13 图1 1 血血细胞的胞的发育育过程程14骨髓细胞学检验14骨髓细胞学检验14 2.血细胞发育过程形态学演变规律l 细胞体积细胞体积：由大变小（巨核系细胞除外）由大变小（巨核系细胞除外）l细胞质细胞质：量：少：量：少多多 ；染色：由深蓝；染色：由深蓝浅染浅染 ；颗粒：无颗粒；颗粒：无颗粒嗜天青颗粒嗜天青颗粒特异性颗粒特异性颗粒l细胞核细胞核：大小：大大小：大小（巨核细胞除外）小（巨核细胞除外）染色质：细致疏松染色质：细致疏松粗躁、致粗躁、致密或凝集成块，着色浅密或凝集成块，着色浅蓝蓝,l核仁核仁：有：有无无,2.2.4,2.2.4 核膜：不明显核膜：不明显明显明显l细胞核细胞核/细胞质比例细胞质比例：大大小小(巨核系细胞除外巨核系细胞除外)15骨髓细胞学检验 2.血细胞发育过程形态学演变规律 细胞体积：由大变小（巨15 四四.血血细胞的正常形胞的正常形态学特征学特征16骨髓细胞学检验 16骨髓细胞学检验16q 原红细胞原红细胞（normoblastnormoblast）:圆形或椭圆形，细胞边缘可见圆形或椭圆形，细胞边缘可见半球状或瘤状突起半球状或瘤状突起。核染色质呈细砂状或细粒状核染色质呈细砂状或细粒状，核仁核仁1-31-3个个,胞质深蓝色，有胞质深蓝色，有核周淡染区，无颗粒。核周淡染区，无颗粒。早幼红细胞早幼红细胞（basophilic normo-blastbasophilic normo-blast）：染色质凝染色质凝集成小块状集成小块状,核仁消失。胞质不透明核仁消失。胞质不透明,深蓝色，有深蓝色，有核周核周淡染区，不含颗粒。淡染区，不含颗粒。4.1 4.1 红细胞系胞系统17骨髓细胞学检验 4.1 红细胞系统17骨髓细胞学检验17 中幼红细胞中幼红细胞（polychromatic normo-blastpolychromatic normo-blast）：）：染色质凝集成染色质凝集成团块状或粗索状团块状或粗索状，似，似碎砚碎砚状状排列，胞质量较多，因内含血红蛋白排列，胞质量较多，因内含血红蛋白逐渐增多，呈不同程度的逐渐增多，呈不同程度的嗜多色性嗜多色性。晚幼红细胞晚幼红细胞（ortho-ortho-chromatic normo-blast chromatic normo-blast）：）：核染核染色质凝聚成大块状或固缩成团，呈紫褐色质凝聚成大块状或固缩成团，呈紫褐色或紫黑色，胞质量多，呈均匀的淡红色或紫黑色，胞质量多，呈均匀的淡红色或灰紫色。色或灰紫色。4.1 4.1 红细胞系胞系统18骨髓细胞学检验 中幼红细胞（polychromatic normo-b18 原粒细胞原粒细胞（myeloblastmyeloblast）：）：圆形或椭圆形，圆形或椭圆形，染色质呈淡紫色红色细粒状，核仁染色质呈淡紫色红色细粒状，核仁2-52-5个个，胞质量少，透明天蓝色，不含颗粒或有少胞质量少，透明天蓝色，不含颗粒或有少量颗粒。量颗粒。早幼粒细胞早幼粒细胞（promyeocytepromyeocyte）：）：胞体较原粒大胞体较原粒大，染色质开始聚集呈粗网粒状，核仁可见或染色质开始聚集呈粗网粒状，核仁可见或消失，胞质内含有大小不均的消失，胞质内含有大小不均的紫红色非特紫红色非特异性嗜天青颗粒异性嗜天青颗粒。4.2 4.2 粒粒细胞系胞系统19骨髓细胞学检验 19中幼粒细胞中幼粒细胞（myelocytemyelocyte）：圆形，）：圆形，胞核内侧缘开始变扁平，或稍呈凹陷，胞核内侧缘开始变扁平，或稍呈凹陷，染色质染色质凝聚成粗索状或小块状，核仁消失凝聚成粗索状或小块状，核仁消失，胞质量多，胞质量多，根据胞质特异性颗粒分为根据胞质特异性颗粒分为:a a.中性中幼粒细胞中性中幼粒细胞,b b.嗜酸性中幼粒细胞嗜酸性中幼粒细胞,c c.嗜碱性中幼粒细胞嗜碱性中幼粒细胞。晚幼粒细胞晚幼粒细胞（metamyelocytemetamyelocyte）：）：胞核明显凹陷呈肾形，凹陷程度一般不超过假胞核明显凹陷呈肾形，凹陷程度一般不超过假设核直径的一半设核直径的一半,核染质粗糙呈粗块状，紧密核染质粗糙呈粗块状，紧密,胞质量多，呈淡红色。胞质量多，呈淡红色。4.2 4.2 粒粒细胞系胞系统20骨髓细胞学检验中幼粒细胞（myelocyte）：圆形，胞核内侧缘开始变扁平20 杆状核粒细胞杆状核粒细胞(stab stab granulocytegranulocyte)：胞核狭长，弯曲呈胞核狭长，弯曲呈带状带状，两端钝圆。核染色质粗糙呈块状，染深紫红两端钝圆。核染色质粗糙呈块状，染深紫红色色。分叶核粒细胞分叶核粒细胞(segmented granulocytesegmented granulocyte)：胞核胞核分叶状，分叶状，常分为常分为2-52-5叶，叶与叶之间有细丝相叶，叶与叶之间有细丝相连或完全断开连或完全断开，核染色质浓集或呈小块状，核染色质浓集或呈小块状，染深紫红色。染深紫红色。4.2 4.2 粒粒细胞系胞系统21骨髓细胞学检验 杆状核粒细胞(stab granulocyte)：胞核21 嗜碱性粒细胞嗜酸性粒细胞22骨髓细胞学检验 22 原淋巴细胞原淋巴细胞：圆形或椭圆圆形或椭圆形，核圆形或椭圆形，偏位。核染色质细形，核圆形或椭圆形，偏位。核染色质细致颗粒状，较原粒细胞稍粗，致颗粒状，较原粒细胞稍粗，核仁核仁1-21-2个个，胞质量少胞质量少，呈透明天蓝色，无颗粒。，呈透明天蓝色，无颗粒。幼淋巴细胞幼淋巴细胞：圆形或椭圆形，圆形或椭圆形，核圆形或椭圆形，有切迹，染色质较致密核圆形或椭圆形，有切迹，染色质较致密粗糙，核仁模糊或消失，胞质量较少，淡粗糙，核仁模糊或消失，胞质量较少，淡蓝色，一般无颗粒，或有蓝色，一般无颗粒，或有嗜天青颗粒嗜天青颗粒。4.3 4.3 淋巴淋巴细胞系胞系统原淋细胞23骨髓细胞学检验 4.23 淋巴细胞：淋巴细胞：大淋巴细胞：大淋巴细胞：直径直径13-1813-18mm。胞。胞核圆形或椭圆形，偏于一侧。染色质常呈块状，核圆形或椭圆形，偏于一侧。染色质常呈块状，紫红色。胞质丰富，呈透明天蓝色，可有紫红色。胞质丰富，呈透明天蓝色，可有少量少量大而稀疏的嗜天青颗粒大而稀疏的嗜天青颗粒。小淋巴细胞：小淋巴细胞：直径直径6-106-10mm。胞核。胞核圆形或椭圆形，或有切迹，染色质粗糙致密呈圆形或椭圆形，或有切迹，染色质粗糙致密呈大块状，深紫红色大块状，深紫红色,胞质量极少，似裸核，胞质量极少，似裸核，无无颗粒颗粒。淋巴细胞24骨髓细胞学检验 淋巴细胞：淋巴细胞24骨髓细胞学检验24 原浆细胞原浆细胞(plasmablastplasmablast)：圆形或椭圆形，胞核圆形，常圆形或椭圆形，胞核圆形，常偏位偏位。核染色质。核染色质呈粗颗粒网状，紫红色。核仁呈粗颗粒网状，紫红色。核仁2-52-5个。胞质量多，个。胞质量多，呈灰蓝色，不透明，有呈灰蓝色，不透明，有核周淡染区核周淡染区，不含颗粒。，不含颗粒。幼浆细胞幼浆细胞(proplasmacyteproplasmacyte)：椭圆形，胞核圆形，椭圆形，胞核圆形，偏位。核染色质开始聚集，可呈偏位。核染色质开始聚集，可呈车轮状排列车轮状排列，核仁基本消失。胞质量多，呈不透明灰蓝色，核仁基本消失。胞质量多，呈不透明灰蓝色，有核周淡染区，有时可见有核周淡染区，有时可见空泡空泡或少数嗜天青颗或少数嗜天青颗粒。粒。4.4 4.4 浆细胞系胞系统原始浆细胞25骨髓细胞学检验 4.4 浆细胞系统原始浆细胞25骨髓细胞学检验25浆细胞浆细胞(plasmacyteplasmacyte)：圆形或卵：圆形或卵圆形，直径圆形，直径8-208-20mm。胞核圆形，偏位。胞核圆形，偏位。核染色质凝聚成块，深染，排列呈车核染色质凝聚成块，深染，排列呈车轮状轮状。胞质丰富，呈。胞质丰富，呈不透明深蓝色或不透明深蓝色或蓝紫色蓝紫色，有明显的核周淡染区，常见有明显的核周淡染区，常见小空泡，偶见少数嗜天青颗粒。小空泡，偶见少数嗜天青颗粒。成熟浆细胞26骨髓细胞学检验浆细胞(plasmacyte)：圆形或卵圆形，直径8-2026 4.5 单核细胞系统 原单核细胞原单核细胞(monoblastmonoblast)：圆形或椭圆形，核较大，圆形或椭圆形。圆形或椭圆形，核较大，圆形或椭圆形。染色质纤细疏松呈网状染色质纤细疏松呈网状，淡紫红色。核，淡紫红色。核仁仁1-31-3个，大而清楚。个，大而清楚。胞质丰富，浅灰胞质丰富，浅灰蓝色蓝色，半透明如毛玻璃样，边缘不整齐，半透明如毛玻璃样，边缘不整齐，可见伪足状突起，无可见伪足状突起，无颗粒。颗粒。原单细胞27骨髓细胞学检验 4.5 单核细胞系统 27 幼单核细胞幼单核细胞(promonocytepromonocyte)：圆形或：圆形或不规则形，胞核圆形或不规则形，有不规则形，胞核圆形或不规则形，有凹陷、切迹、扭凹陷、切迹、扭曲或折叠曲或折叠。染色质较粗，。染色质较粗，疏松丝网状疏松丝网状，淡紫红色。核，淡紫红色。核仁模糊或消失。胞质量多，呈灰蓝色，仁模糊或消失。胞质量多，呈灰蓝色，边缘可有伪足边缘可有伪足突出突出，浆内可见许多细小、分布均匀，浆内可见许多细小、分布均匀嗜天青颗粒嗜天青颗粒。单核细胞单核细胞(monocytemonocyte)：圆形或不规则：圆形或不规则形，形，边缘常见伪足突出。胞核不规则形，呈肾形、马边缘常见伪足突出。胞核不规则形，呈肾形、马蹄形、笔架形、蹄形、笔架形、“S S”形等，并有明显扭曲折叠形等，并有明显扭曲折叠。染色。染色质疏松细致，呈淡紫红色丝网状。胞质丰富，质疏松细致，呈淡紫红色丝网状。胞质丰富，淡灰蓝淡灰蓝色或淡粉红色，可见细小细尘样淡紫红色颗粒色或淡粉红色，可见细小细尘样淡紫红色颗粒。成熟单核细胞28骨髓细胞学检验 28 原巨核细胞原巨核细胞(megakaryoblastmegakaryoblast)：圆形或椭圆形，胞体：圆形或椭圆形，胞体较大，较大，胞核大，圆形胞核大，圆形或椭圆形。或椭圆形。染色质呈染色质呈深紫红色，深紫红色，粗粒状，可见核仁粗粒状，可见核仁2-32-3个，胞个，胞质量较少，呈不透明深蓝色，边缘常有不质量较少，呈不透明深蓝色，边缘常有不规则突起。规则突起。幼巨核细胞幼巨核细胞(promegakayrocytepromegakayrocyte)：圆形或不规则形，：圆形或不规则形，胞体明显增大，胞核开始分叶，核形不规胞体明显增大，胞核开始分叶，核形不规则。染色质凝聚呈粗颗粒或小块状，核仁则。染色质凝聚呈粗颗粒或小块状，核仁模糊或消失。模糊或消失。4.6 4.6 巨核巨核细胞系胞系统原幼巨核细胞29骨髓细胞学检验4.6 巨核细胞系统原幼巨核细胞29骨髓细胞学检验29 颗粒型巨核细胞颗粒型巨核细胞(granular megakayrocytegranular megakayrocyte)：胞体胞体明显增大，外形不规则。胞核高度分叶，明显增大，外形不规则。胞核高度分叶，染色质粗糙，排列致密呈团块状，染深染色质粗糙，排列致密呈团块状，染深紫红色。胞质极丰富，呈淡紫红色，其紫红色。胞质极丰富，呈淡紫红色，其内充满大量细小紫红色颗粒，但无血小内充满大量细小紫红色颗粒，但无血小板形成。板形成。颗粒巨核细胞30骨髓细胞学检验 颗粒型巨核细胞(granular megakayrocy30产血小板型巨核细胞产血小板型巨核细胞(thronbocytogenousmegaka-yrocytethronbocytogenousmegaka-yrocyte)：胞质内有血小板形成，胞质周：胞质内有血小板形成，胞质周缘部分已裂解成血小板，其内侧和外侧常有成簇的血小板出现。缘部分已裂解成血小板，其内侧和外侧常有成簇的血小板出现。巨核细胞裸核巨核细胞裸核(naked nucleousnaked nucleous)：产血小板型巨核细胞的胞质裂解成血小板完全脱落后，仅剩细胞：产血小板型巨核细胞的胞质裂解成血小板完全脱落后，仅剩细胞核时。核时。31骨髓细胞学检验产血小板型巨核细胞(thronbocytogenousmeg31 五五.血血细胞的胞的细胞化学染色胞化学染色32骨髓细胞学检验 32骨髓细胞学检验32 1.过氧化物酶染色 l原理原理：血细胞内的过氧化物酶能分解底物中的血细胞内的过氧化物酶能分解底物中的H H2 2O O2 2，释出新生，释出新生态的氧，使无色联苯胺氧化为蓝色联苯胺，后者与亚硝基铁氰化态的氧，使无色联苯胺氧化为蓝色联苯胺，后者与亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色颗粒，主要分布于细胞浆。钠结合形成蓝黑色颗粒，主要分布于细胞浆。l 临床意义临床意义:急性白血病的鉴别诊断，急粒为阳性，急淋为阴性急性白血病的鉴别诊断，急粒为阳性，急淋为阴性33骨髓细胞学检验 1.过氧化物酶染色 原理33图 过氧化物酶染色34骨髓细胞学检验图 过氧化物酶染色34骨髓细胞学检验342.苏丹黑B染色l 原理原理：苏丹黑苏丹黑B B是一种脂溶性染料，可溶于细胞质的是一种脂溶性染料，可溶于细胞质的脂类物质，使脂类物质呈棕黑色或深黑色颗粒。脂类物质，使脂类物质呈棕黑色或深黑色颗粒。l 临床意义临床意义:同过氧化物酶染色。同过氧化物酶染色。35骨髓细胞学检验2.苏丹黑B染色35骨髓细胞学检验353.氯化醋酸AS-D萘酚酯酶染色原理：原理：氯化醋酸氯化醋酸AS-DAS-D萘酚酯酶又称特异性酯酶，能将基质中的氯化醋酸萘酚酯酶又称特异性酯酶，能将基质中的氯化醋酸AS-DAS-D萘酚水解萘酚水解AS-DAS-D萘酚萘酚+重氮盐重氮盐GBCGBC不溶性蓝色沉淀（细胞质）。不溶性蓝色沉淀（细胞质）。结果结果：粒系原粒：粒系原粒-/-/弱阳性，早幼粒以后细胞强阳性；淋巴细胞、单核细胞弱阳性，早幼粒以后细胞强阳性；淋巴细胞、单核细胞及幼红细胞阴性。及幼红细胞阴性。临床意义临床意义：鉴别急性粒细胞白血病（阳性）：鉴别急性粒细胞白血病（阳性）急性单核细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病（阴性）急性淋巴细胞白血病（阴性）36骨髓细胞学检验3.氯化醋酸AS-D萘酚酯酶染色36骨髓细胞学检验364.-醋酸萘酚酯酶染色原理：原理：-醋酸萘酚酯酶又称非特异性酯酶，能将基质中的醋酸萘酚酯酶又称非特异性酯酶，能将基质中的-醋酸萘醋酸萘酚水解酚水解-萘酚萘酚+重氮染料重氮染料棕褐色沉淀。棕褐色沉淀。结果：结果：原单原单-/-/弱阳性，幼单和单核细胞阳性，阳性反应可被弱阳性，幼单和单核细胞阳性，阳性反应可被NaFNaF抑制；抑制；粒系细胞阴性或弱阳性，阳性反应不被粒系细胞阴性或弱阳性，阳性反应不被NaFNaF抑制。抑制。临床意义临床意义：鉴别急性粒细胞白血病：鉴别急性粒细胞白血病急性单核细胞白血病，前者阴急性单核细胞白血病，前者阴性或弱阳性，阳性反应不被性或弱阳性，阳性反应不被NaFNaF抑制，后者强阳性，阳性反应可被抑制，后者强阳性，阳性反应可被NaFNaF抑抑制。制。37骨髓细胞学检验4.-醋酸萘酚酯酶染色原理：-醋酸萘酚酯酶又称非特异性酯37 急性白血病组化染色程序 外周血或骨髓发现白血病细胞外周血或骨髓发现白血病细胞 过氧化物酶染色（阴性）过氧化物酶染色（阴性）急性淋巴细胞急性淋巴细胞白血病或白血病或 急性髓细胞白血病急性髓细胞白血病-M7 （阳性）（阳性）氯化醋酸氯化醋酸AS-D萘酚酯酶萘酚酯酶 -醋酸萘酚酯酶醋酸萘酚酯酶 阳性阳性 阴性阴性 急性粒细胞白血病急性粒细胞白血病（M1-3)阴性（弱阳性）阴性（弱阳性）阳性阳性 急性单核细胞白血病急性单核细胞白血病(M5)阳性阳性 阳性阳性 急性粒单细胞白血病急性粒单细胞白血病(M4)备注：急性单核细胞白血病备注：急性单核细胞白血病-醋酸萘酚酯酶阳性被醋酸萘酚酯酶阳性被NAF抑抑制，急性粒细胞白血病弱阳性时，阳性反应不被制，急性粒细胞白血病弱阳性时，阳性反应不被NAF抑抑制。制。38骨髓细胞学检验 急性白血病组化染色程序 外周血38 5.酸性磷酸酶染色原理原理：硫化铅法：硫化铅法血细胞内的酸性磷酸酶在酸性条件下将基质中血细胞内的酸性磷酸酶在酸性条件下将基质中-甘油磷酸钠水解甘油磷酸钠水解磷酸钠磷酸钠+硝酸铅硝酸铅磷酸铅磷酸铅+硫化铵硫化铵棕黑色硫化铅沉棕黑色硫化铅沉淀（细胞质）淀（细胞质）临床意义临床意义：毛细胞白血病：毛细胞白血病ACPACP阳性，且不被阳性，且不被L L-酒石酸抑制；鉴别酒石酸抑制；鉴别T T淋巴淋巴细胞（阳性）细胞（阳性）B B淋巴细胞（阴性）；鉴别淋巴细胞（阴性）；鉴别GaucherGaucher细胞（阳性）细胞（阳性）NiemannNiemann-PickPick细胞（阴性）细胞（阴性）39骨髓细胞学检验 5.酸性磷酸酶染色39骨髓细胞学检验396.中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）原理：原理：偶氮偶联法偶氮偶联法血细胞内的碱性磷酸酶在血细胞内的碱性磷酸酶在pH 9.4-9.6pH 9.4-9.6时，使时，使基质中的基质中的-磷酸萘酚钠水解磷酸萘酚钠水解-萘酚萘酚+重氮盐重氮盐灰黑色沉淀（细胞质）灰黑色沉淀（细胞质）钙钙-钴法钴法碱性磷酸酶在硷性条件下使碱性磷酸酶在硷性条件下使-甘油磷酸钠水解甘油磷酸钠水解磷酸磷酸钠钠+硝酸钙、硝酸钴、硫化铵硝酸钙、硝酸钴、硫化铵棕黑色硫化钴（细胞质）棕黑色硫化钴（细胞质）40骨髓细胞学检验6.中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）40骨髓细胞学检验40结果计算：结果计算：观察观察100100个成熟中性粒细胞，计算阳性百分率，再将阳性细个成熟中性粒细胞，计算阳性百分率，再将阳性细胞按反应强度分级（胞按反应强度分级（-，1+1+，2+2+，3+3+，4+4+），最后将阳性百分率乘以级数，），最后将阳性百分率乘以级数，然后相加，得到积分。然后相加，得到积分。正常参考值：正常参考值：NAP NAP 阳性率阳性率10%-40%10%-40%；积分；积分40-8040-80。临床意义临床意义:鉴别感染性疾病（活性明显增高）；鉴别鉴别感染性疾病（活性明显增高）；鉴别CMLCML（活性明显减（活性明显减低）和类白；鉴别低）和类白；鉴别AAAA（活性增高）和（活性增高）和PNH PNH（活性减低）；鉴别急粒和急（活性减低）；鉴别急粒和急淋淋41骨髓细胞学检验结果计算：观察100个成熟中性粒细胞，计算阳性百分率，再将阳417.糖原染色原理：原理：糖原染色即过碘酸糖原染色即过碘酸-SchiffSchiff反应，过碘酸将血细胞内的糖原氧反应，过碘酸将血细胞内的糖原氧化化醛基醛基+无色品红（无色品红（SchiffSchiff液）液）紫红色化合物（细胞质）紫红色化合物（细胞质）结果：结果：粒系、淋系和单核均呈不同程度的阳性反应粒系、淋系和单核均呈不同程度的阳性反应临床意义：临床意义：红血病和红白血病（红血病和红白血病（AML-M6AML-M6）阳性反应；鉴别急单）阳性反应；鉴别急单-急急粒粒-急淋急淋42骨髓细胞学检验7.糖原染色42骨髓细胞学检验42图 糖原染色43骨髓细胞学检验图 糖原染色43骨髓细胞学检验43 原理：原理：即普鲁氏蓝反应，人体内的铁以铁蛋白和含铁血黄素的形式储存在即普鲁氏蓝反应，人体内的铁以铁蛋白和含铁血黄素的形式储存在骨髓的单核骨髓的单核-吞噬细胞胞质中，含铁血黄素还存在于幼红细胞中，这些铁吞噬细胞胞质中，含铁血黄素还存在于幼红细胞中，这些铁与低铁氰化钾在酸性条件下生成铁氰化铁（细胞质）与低铁氰化钾在酸性条件下生成铁氰化铁（细胞质）细胞外铁细胞外铁:低倍镜观察骨髓的低倍镜观察骨髓的单核单核-吞噬细胞胞质中铁吞噬细胞胞质中铁，阳性为，阳性为绿色绿色或或蓝绿蓝绿色珠状色珠状/块状块状物质，分为物质，分为-、1+1+、2+2+、3+3+、4+4+共五级共五级 细胞内铁细胞内铁:幼红细胞内的铁，幼红细胞内的铁，油镜计数油镜计数100100个有核红细胞，计算阳性百分率个有核红细胞，计算阳性百分率 环状铁粒幼细胞：环状铁粒幼细胞：幼红细胞内的铁粒在幼红细胞内的铁粒在6-106-10个以上，绕核排列超过个以上，绕核排列超过2/32/3直直径，称为环状铁粒幼细胞，多见于径，称为环状铁粒幼细胞，多见于MDS-RASMDS-RAS 8.8.铁 染染 色色44骨髓细胞学检验 原理44 临床意义临床意义:IDAIDA:细胞外铁阴性，细胞内铁百分率细胞外铁阴性，细胞内铁百分率15%15%。在铁剂治疗。在铁剂治疗IDA IDA 时细胞内铁时细胞内铁先出现，细胞外铁在治疗一段时间后才会出现先出现，细胞外铁在治疗一段时间后才会出现 非缺铁性贫血非缺铁性贫血:eg.:eg.AAAA、珠蛋白生成障碍性贫血、溶血性贫血、巨幼细胞性、珠蛋白生成障碍性贫血、溶血性贫血、巨幼细胞性贫血等，细胞外铁增加贫血等，细胞外铁增加 铁粒幼细胞性贫血铁粒幼细胞性贫血:细胞内外铁增加，环状铁粒幼细胞细胞内外铁增加，环状铁粒幼细胞15%15%，eg.eg.MDS-RASMDS-RAS45骨髓细胞学检验 45骨髓细胞学检验45 六六.细 胞胞 免免 疫疫 分分 型型46骨髓细胞学检验 46骨髓细胞学检验46 1 1 定义：定义：用用单克隆抗体及免疫学技术对细胞膜表单克隆抗体及免疫学技术对细胞膜表面和（或）细胞质存在的特异性抗原进行检测，面和（或）细胞质存在的特异性抗原进行检测，借以分析细胞所属系列，分化程度和功能状态的借以分析细胞所属系列，分化程度和功能状态的一种方法一种方法47骨髓细胞学检验 47骨髓细胞学检验472检测方法免疫荧光法免疫荧光法免疫酶染色法：免疫酶染色法：APAAPAPAAP、PAPPAP、ABCABC48骨髓细胞学检验2检测方法免疫荧光法48骨髓细胞学检验483.临床应用3.1 3.1 有助于有助于识别不同系列的不同系列的细胞胞识别识别髓系髓系细胞的抗体细胞的抗体:CDCD1313、CDCD1414、CDCD1515、CDCD3333等等识别识别淋系淋系细胞的抗体细胞的抗体:CDCD1 1、CDCD2 2、CDCD3 3、CDCD4 4、CDCD5 5、CDCD1010、CDCD1919、CDCD2020等等识别识别巨核细胞和血小板巨核细胞和血小板的抗体的抗体:CDCD4141、CDCD4242、CDCD6161等等识别识别红细胞红细胞系列的抗体系列的抗体:血型糖蛋白血型糖蛋白A A或或B B49骨髓细胞学检验3.临床应用3.1 有助于识别不同系列的细胞49骨髓细胞49 3.2 3.2 识别不同的淋巴不同的淋巴细胞胞识别成熟识别成熟T T 淋巴细胞的抗体淋巴细胞的抗体:CDCD2 2、CDCD3 3、CDCD4 4、CDCD7 7、CDCD8 8 等等识别成熟识别成熟B B 淋巴细胞的抗体淋巴细胞的抗体:CDCD1919、CDCD2020、CDCD2222等等识别识别NK NK 细胞的抗体细胞的抗体:CDCD1616、CDCD56 56 50骨髓细胞学检验 3.2 识别不同的淋巴细胞50骨髓细胞学检验503.3 3.3 用于用于检测T T淋巴淋巴细胞胞亚群群临床上常用临床上常用CDCD3 3、CDCD4 4和和CDCD8 8单抗检测全单抗检测全T T(CDCD3)3)细胞，并将外周淋巴器官和细胞，并将外周淋巴器官和血液中的血液中的T T细胞分为辅助性细胞分为辅助性T T细胞细胞THTH(CDCD4 4+，CDCD8 8+)和抑制性和抑制性T T细胞细胞TsTs(CDCD4-4-，CDCD8 8+)两个主要亚群两个主要亚群THTHTSTS(CDCD4 4+/CDCD8 8+)比值作为机体免疫状态、某些疾病诊断、病期分析、比值作为机体免疫状态、某些疾病诊断、病期分析、监测治疗和判断预后的参数监测治疗和判断预后的参数51骨髓细胞学检验3.3 用于检测T淋巴细胞亚群51骨髓细胞学检验51 3.4 3.4 识别不同分化不同分化阶段的段的细胞胞造血干细胞造血干细胞:CDCD34 34+、CDCD9090+、LinLin-造血干细胞向髓系定向的标志造血干细胞向髓系定向的标志:CDCD34 34+、CDCD33 33+T T淋巴细胞系祖细胞淋巴细胞系祖细胞:CDCD34 34+、TDTTDT +、CDCD10 10+、CDCD7 7+B B淋巴细胞系祖细胞淋巴细胞系祖细胞:CDCD34 34+、CDCD19 19+为标志。为标志。根据不同抗体组合可将根据不同抗体组合可将T T、B B淋巴细胞区分为不同的分化阶段淋巴细胞区分为不同的分化阶段52骨髓细胞学检验 3.4 识别不同分化阶段的细胞52骨髓细胞学检验523.53.5有助于识别不同功能状态的细胞有助于识别不同功能状态的细胞3.6 3.6 有助于对不同系列和不同分化阶段的细胞进行有助于对不同系列和不同分化阶段的细胞进行分离和研究分离和研究:用免疫荧光法标记的活细胞可经流式细胞仪或免疫磁珠法将其分离出来，用免疫荧光法标记的活细胞可经流式细胞仪或免疫磁珠法将其分离出来，并进行研究并进行研究3.7 3.7 可用于各种白血病细胞的免疫表型分析可用于各种白血病细胞的免疫表型分析53骨髓细胞学检验3.5有助于识别不同功能状态的细胞53骨髓细胞学检验533.83.8用于白血病微小残留病的检测用于白血病微小残留病的检测 完全缓解的白血病病人骨髓细胞中，出现完全缓解的白血病病人骨髓细胞中，出现CDCDl9l9、CDCD2222、CDCD1010、CDCD7 7、CDCD5 5、CDCDl3l3、CDCD3737、CDCD3434等任一种抗原阳性等任一种抗原阳性,伴伴TbT TbT+,则可诊断微小残留病则可诊断微小残留病存在存在 54骨髓细胞学检验3.8用于白血病微小残留病的检测 54骨髓细胞学检验54 4.4.急性白血病急性白血病细胞免疫表型特点胞免疫表型特点55骨髓细胞学检验 55骨髓细胞学检验554.1 急淋的免疫表型特点B B 细胞型细胞型ALLALL:CDCD19,19,CDCD20,20,CDCD22,22,CDCD10,10,HLA-DRHLA-DR,CDCD34,34,CDCD3838T T 细胞型细胞型ALLALL:CDCD3,3,CDCD5,5,CDCD7,7,HLA-DRHLA-DR56骨髓细胞学检验4.1 急淋的免疫表型特点56骨髓细胞学检验56 表 急性髓细胞白血病的免疫学分类 亚型 典型的蛋白标记 亚型 典型的蛋白标记 M M0 0 CD34,33,13 M M4 4 CD34,33,15,13 M M1 1 CD34,33,13 M M5 5 CD33,15,14,13 M M2 2 CD34,33,15,13 M M6 6 CD33,血型糖蛋白 M M3 3 CD33,13 M M7 7 CD33,41,42,61 (HLA-DR阴性)4.2 4.2 急粒的免疫表型特点急粒的免疫表型特点57骨髓细胞学检验 表 急性髓细胞白血病的免疫学分类 亚型57 七七.细胞胞遗传学分析学分析58骨髓细胞学检验 七.细胞遗传学分析58骨髓细胞学检验58表表 急性白血病的染色体异常急性白血病的染色体异常59骨髓细胞学检验表 急性白血病的染色体异常59骨髓细胞学检验59 八、常见血液病的血液学特征60骨髓细胞学检验 60骨髓细胞学检验60 1.1 1.1 定定义义:缺缺铁铁性性贫贫血血是是体体内内铁铁的的储储存存不不能能满满足足正正常常红红细细胞胞生生成成的的需需要要而而发发生生的的贫贫血血。是是由由于于铁铁摄摄入入量量不不足足、吸吸收收量量减减少少、需需要要量量增增加加、铁铁利利用用障碍或丢失过多所至。形态学表现为障碍或丢失过多所至。形态学表现为小细胞低色素性贫血小细胞低色素性贫血。1 1、缺、缺铁性性贫血血(iron deficiency anemia)61骨髓细胞学检验 1.1 定义:缺铁性贫血是体内铁的储存不能满足正常红细胞61 1.2.1 1.2.1 血象血象:红细胞和血红蛋红细胞和血红蛋白减少白减少,严重缺铁有典型的小严重缺铁有典型的小细胞低色素型贫血细胞低色素型贫血,体积减少体积减少,中心苍白区扩大中心苍白区扩大,呈环状呈环状,嗜多嗜多色性红细胞和点彩红细胞增多。色性红细胞和点彩红细胞增多。红细胞压积、红细胞压积、MCVMCV、MCHMCH、MCHCMCHC均减低均减低。1.2 IDA 1.2 IDA 血血 髓髓 象象IDA血象血象62骨髓细胞学检验 1.2.1 血象:红细胞和血红蛋白减少,严重缺铁有典621.2.2 1.2.2 髓象髓象:骨髓增生明显活跃，粒红比例降低，骨髓增生明显活跃，粒红比例降低，红细胞系统增红细胞系统增生明显活跃生明显活跃。中、晚幼红细胞比例增多，体积略小，边缘不整齐，。中、晚幼红细胞比例增多，体积略小，边缘不整齐，胞浆少，胞浆少，染色偏兰，晚幼红细胞核固缩，染色偏兰，晚幼红细胞核固缩，”炭核炭核”.巨核细胞数量巨核细胞数量和形态均正常。和形态均正常。骨髓铁染色显示骨髓小粒可染铁消失，铁粒幼红细骨髓铁染色显示骨髓小粒可染铁消失，铁粒幼红细胞胞1515。血清铁血清铁10.7mmol/L64.44mmol/L64.44mmol/L，运铁蛋白饱和度，运铁蛋白饱和度0.150.15。血清铁蛋白。血清铁蛋白14mg/L10%,10%,圆形圆形,核偏位核偏位,染色质疏松或凝集成块染色质疏松或凝集成块,胞浆胞浆深蓝深蓝,有泡沫感有泡沫感,颗粒有或无颗粒有或无,见双核、多核或火焰状瘤细胞。见双核、多核或火焰状瘤细胞。成熟红细胞呈缗钱状分布。成熟红细胞呈缗钱状分布。6.3 MM 髓象骨髓瘤细胞103骨髓细胞学检验骨髓增生明显活跃或活跃。6.3 MM 髓象骨髓瘤细胞103103MM髓象髓象104骨髓细胞学检验MM髓象104骨髓细胞学检验104.九白血病九白血病MICMMICM分型取代形态学分型（分型取代形态学分型（FABFAB）M M:形态学形态学(morphologymorphology）I I:免疫学免疫学(immunologyimmunology）C C:细胞遗传学细胞遗传学(cytogeneticscytogenetics）M M:分子特征（分子特征（molecularmolecular）分型）分型 105骨髓细胞学检验.105骨髓细胞学检验105 复习思考题:1 1.血液血液细胞胞发育育过程形程形态学的一般学的一般规律律?2.2.各各项组化染色的化染色的临床意床意义?106骨髓细胞学检验 复习思考题:106骨髓细胞学检验106 谢谢谢谢107骨髓细胞学检验 107