苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究ppt课件

苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究 孙宏莉王辉陈民钧苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究1苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对研究背景研究背景苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究2研究背景苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查S.aureusPenicillin1944Penicillin-resistantS.aureusEvolution of Drug Resistance in S.aureusMethicillin1962Methicillin-resistantS.aureus(MRSA)Vancomycin-resistantenterococci(VRE)Vancomycin1990s1997VancomycinintermediateS.aureus(VISA)2002Vancomycin-resistantS.aureusCDC,MMWR2002;51(26):565-567研究背景研究背景研究背景研究背景苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究3S.aureusPenicillin1944Penic苯唑西林耐药的金黄色葡萄球（MRSA）是引起医院感染的主要病因，常发生于免疫力低下的住院患者。世界首例MRSA：1961年，英国目前在许多国家仍在增长：研究背景研究背景研究背景研究背景苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究4研究背景苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生世界约世界约100,000人人/年感染年感染MRSA国疾病控制和预防中心国疾病控制和预防中心（CDC）统计统计研究背景研究背景研究背景研究背景苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究5世界约100,000人/年感染MRSA欧洲部分国家欧洲部分国家MRSA发生率比较发生率比较%Tiemersma EW,et al.MRSA in Europe 1999-2002.Emerging infetious Diseases,2004,10(9)1627-1634研究背景苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究6欧洲部分国家MRSA发生率比较%TiemersmaEW1989-2001年美国年美国ICU病房病房MRSA发病率发病率 美国国家医院感染监测中心（美国国家医院感染监测中心（美国国家医院感染监测中心（美国国家医院感染监测中心（NNISNNISNNISNNIS）提供提供提供提供研究背景研究背景研究背景研究背景苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究71989-2001年美国ICU病房MRSA发病率美国国家医2001-2003年协和医院年协和医院MRSA发生率比较发生率比较研究背景苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究82001-2003年协和医院MRSA发生率比较研究背景苯唑西内酰胺类抗生素对金黄色葡萄球菌的作用机制 青霉素结合蛋白（PBP）是参与细胞壁肽聚糖成分合成的酶。-内酰胺类抗生素能与细菌胞膜的PBP结合使其失活，从而细胞壁合成受到抑制，导致细菌死亡研究背景研究背景研究背景研究背景苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究9内酰胺类抗生素对金黄色葡萄球菌的作用机制研究背景苯唑西林对对 内酰胺类抗生素（如苯唑西林）耐药机制内酰胺类抗生素（如苯唑西林）耐药机制：低水平耐药：产生过量的内酰胺酶、PBPs过量表达、PBP与苯唑西林亲和力下降；高水平耐药：产生由mecA基因编码的PBP2a，可替代其它PBP合成细胞壁，但与内酰胺类抗生素亲和力差，而产生耐药。对其它抗生素耐药机制对其它抗生素耐药机制：mecA基因位于一个可移动元件SCCmecDNA，该元件由不同的整合子、转座子等组成，分别编码不同抗生素的耐药基因。MRSA耐药机制耐药机制研究背景研究背景研究背景研究背景苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究10MRSA耐药机制研究背景苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学MRSA治疗上的困难治疗上的困难 多重耐药有效治疗药物：万古霉素、替考拉宁、利萘唑烷、链阳霉素、甲氧苄啶/磺胺甲恶唑、氯霉素等已出现对万古霉素敏感性下降的金黄色葡萄球菌：多为MRSA 在住院患者间易传播，造成爆发流行研究背景研究背景研究背景研究背景苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究11MRSA治疗上的困难多重耐药研究背景苯唑西林耐药金黄色葡萄MRSA耐药性及流行病学研究对于正确治耐药性及流行病学研究对于正确治疗其引起的感染、防止其播散有重要意义。疗其引起的感染、防止其播散有重要意义。研究意义研究意义研究意义研究意义苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究12MRSA耐药性及流行病学研究对于正确治疗其引起的感染、防止其技术路线技术路线苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究13技术路线苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗 从协和医院2002年住院患者分离212株MRSA（表型测定）MRSA的确证（苯唑西林盐琼脂筛选法 mecA-femB 双重PCR法)ICU、RCU病房的MRSA 耐药性检测 回顾性分子流行病学调查（琼脂稀释法；抗生素纸片琼脂扩散法）（脉冲场凝胶电泳）替考拉宁和万古霉素对葡萄球体外活性替考拉宁和万古霉素对葡萄球体外活性 技术路线技术路线为临床正确防治并减少MRSA的感染提供参考依据同源性分析，跟踪爆发流行趋势，区分新生感染/复发感染、污染菌/病原菌苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究14技术路线为临床正确防治MRSA的筛选及耐药性检测MRSA医院流行病学调查MRSA感染病例临床资料分析 Part 1Part 2Part 3苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究15MRSA的筛选及耐药性检测Part1Part2Pa第一部分：第一部分：MRSA的筛选及耐药性检测的筛选及耐药性检测苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究16第一部分：MRSA的筛选及耐药性检测苯唑西林耐药金黄色葡萄球MRSAMRSA的表型鉴定的表型鉴定的表型鉴定的表型鉴定MRSAMRSA的确证试验的确证试验的确证试验的确证试验,平板平板平板平板/PCRPCRMRSAMRSA耐药性检测耐药性检测耐药性检测耐药性检测药敏结果数据分析及处理药敏结果数据分析及处理药敏结果数据分析及处理药敏结果数据分析及处理苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究17MRSA的表型鉴定MRSA的确证试验,平板/PCRMRSA 一、MRSA的表型鉴定的表型鉴定 待测菌株 革兰氏染色 触酶试验（）（阳性且呈双、链、葡萄状球菌）胶乳凝集试验（测凝集因子、蛋白A）（）疑难菌：API系统和VITEK系统鉴定 苯唑西林药敏试验 （抑菌圈直径 10mm）苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究18一、MRSA的表型鉴定二、二、MRSA的确证试验的确证试验mecAfemB双重PCR法苯唑西林-盐琼脂筛选法苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究19二、MRSA的确证试验苯唑西林-盐琼脂筛选法苯唑西林耐药金黄苯唑西林盐琼脂筛选试验检测苯唑西林盐琼脂筛选试验检测MRSA方法：（参照NCCLS M100-S13文件中的规定）待测新鲜菌悬液（0.5号比浊管浊度）点种于苯唑西林盐琼脂筛选平皿（含4%NaCl、6g/ml 苯唑西林的M-H平皿）空气，35孵育24-48小时生长菌落数1检测结果：212株中有165株金葡菌在筛选平皿生长MRSAMRSA检测检测检测检测苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究20苯唑西林盐琼脂筛选试验检测MRSAMRSA检测苯唑西林耐mecAmecAfemB femB 双重双重PCRPCR法检测法检测MRSAMRSA（原理及方法）原理及方法）mecAmecA：编码编码PBP2aPBP2a，苯唑西林耐药的决定子。苯唑西林耐药的决定子。femBfemB：某些葡萄球菌属染色体辅助基因，编码某些葡萄球菌属染色体辅助基因，编码细胞壁合成所需的一种重要酶。细胞壁合成所需的一种重要酶。MRSAMRSA检测检测检测检测苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究21mecAfemB双重PCR法检测MRSA（原理及方法）mmecAmecAfemB femB 双重双重PCRPCR法检测法检测MRSAMRSA（原理及方法）原理及方法）mecA、femB基因在不同种类葡萄球菌中的表达*MRSA MSSA MRSCoN MSSCoN mecA femB 注：MRSA苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌；MRSCoN苯唑西林耐药的凝固酶阴性葡萄球菌 MSSA苯唑西林敏感的金黄色葡萄球菌；MSSCoN苯唑西林敏感的凝固酶阴性葡萄球菌 *JCM.May 2002,P.1821-1823MRSAMRSA检测检测检测检测苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究22mecAfemB双重PCR法检测MRSA（原理及方法）mecA mecAfemB femB 双重双重PCRPCR法检测法检测MRSAMRSA（原理及方法）原理及方法）PCR PCR PCR PCR扩增扩增扩增扩增mecAmecAmecAmecA和和和和femBfemBfemBfemB基因所用引物基因所用引物基因所用引物基因所用引物*引物名引物序列扩增片段长度MecA1 5-GTA GAA ATG ACT GAA CGT CCG ATA A 3 310bp MecA2 5-CCA ATT CCA CAT TGT TTC GGT CTA A-3 FemB1 5-TTA CAG AGT TAA CTG TTA CC-3 651bp FemB2 5-ATA CAA ATC CAG CAC GCT CT-3 PCR产物产物310bp、651b处出现荧光条带为阳性处出现荧光条带为阳性 *Eur J Clin Microbiol Infect Dis,1999,18:643-647.MRSAMRSA检测检测检测检测苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究23mecAfemB双重PCR法检测MRSA（原理及方法mecAmecAfemB femB 双重双重PCRPCR法检测法检测MRSAMRSA（结果）结果）结果）结果）165株筛选平皿确证的MRSA经双重PCR法进一步确证，均为MRSA。M:marker;16:PCR producs of MRSA;7:ATCC25923（MSSA）MRSAMRSA检测检测检测检测M 1 2 3 4 5 6 7苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究24mecAfemB双重PCR法检测MRSA（结果）三、三、MRSA的耐药性检测（方法）的耐药性检测（方法）抗生素纸片琼脂扩散法：万古霉素、替考拉宁、复方新诺明、四环素 琼脂稀释法：万古霉素、替考拉宁、苯唑西林、庆大霉素、左氧氟沙星、红霉素、氯霉素参照NCCLS M100-S13文件：待测菌悬液：0.5号比浊管浊度 药敏培养基：M-H平皿 培养条件：35，空气，孵育24小时 判读结果：按NCCLS M100-S13文件规定的标准数据分析及处理：WHONET-5.3软件MRSAMRSA检测检测检测检测苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究25三、MRSA的耐药性检测（方法）抗生素纸片琼脂扩散法：万古MRSA的耐药性检测的耐药性检测（结果（结果1）165165种种种种MRSAMRSA对对对对9 9种抗生素的药敏结果：种抗生素的药敏结果：种抗生素的药敏结果：种抗生素的药敏结果：抗生素R%I%S%MIC50MIC90MIC值范围苯唑西林10000646432-64替考拉宁00100220.5-8万古霉素001000.510.25-2庆大霉素1000025651232-512红霉素93.91.84.2128128125-128氯霉素0.60.698.8884-64左氧氟沙星 98.21.8016324-128甲氧苄啶3.60.695.8/磺胺甲恶唑四环素96.31.22.5耐药性检测耐药性检测耐药性检测耐药性检测苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究26MRSA的耐药性检测（结果1）165种MRSA对9种抗生素的MRSA的耐药性检测的耐药性检测（结果（结果2）MIC法测定的万古霉素和替考拉宁对165株MRSA的MICs的散点图耐药性检测耐药性检测耐药性检测耐药性检测苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究27MRSA的耐药性检测（结果2）第二部分：第二部分：MRSAMRSA医院流行病学调查医院流行病学调查 （ICUICU、RCURCU病房）病房）苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究28第二部分：MRSA医院流行病学调查（ICU脉冲场凝胶电泳（PFGE）耐药表型和基因型比较苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究29脉冲场凝胶电泳（PFGE）耐药表型和基因型比较苯唑西林耐药金 一、一、MRSA的脉冲场凝胶电泳的脉冲场凝胶电泳（原理）（原理）PFGEPFGE5Kb50Kb500Kb苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究30一、MRSA的脉冲场凝胶电泳（原理）PFGE5Kb50KbMRSA的脉冲场凝胶电泳的脉冲场凝胶电泳（结果分型（结果分型2 2）1 2 3 4 5 6 7 8 9 M 10 11 12 13 14 2002年ICU及RCU病房MRSA主要流行株(A1亚型)114lanes:A1亚型（共55株）;M:ladder markerPFGEPFGE苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究31MRSA的脉冲场凝胶电泳（结果分型2）MRSA的脉冲场凝胶电泳的脉冲场凝胶电泳（结果判读）（结果判读）PFGEPFGECDCTenover*等人推荐的方法判读：突变位点数酶切后DNA片断区别亲缘关系基因分型 0 无区别同型12-3条亲缘关系密切同型但不同亚型24-6条可能存在亲缘关系同型但不同亚型37条无亲缘关系不同型1.*Tenover FC,JCM,1995,33:2233-2239.苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究32MRSA的脉冲场凝胶电泳（结果判读）PFGECDCTMRSA的脉冲场凝胶电泳的脉冲场凝胶电泳（结果分型（结果分型1 1）5种：A（A1、A2）、B（B1、B2、B3）C、D、E型ICU及及RCU病房病房6565株株MRSA的的PFGE图谱图谱MA1A2B1B1B2B2B3DDCEMPFGEPFGE苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究33MRSA的脉冲场凝胶电泳（结果分型1）ICU及RCU病房6 MRSA部分病例调查结果（三）部分病例调查结果（三）A1亚型爆发流行株（55/65株）分离时间遍布2002全年临床资料临床资料苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究34MRSA部分病例调查结果（三）A1亚型爆二、二、MRSA的耐药表型和基因型比较的耐药表型和基因型比较不同基因型（不同克隆来源）相同耐药谱表型表型与与基因型基因型苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究35二、MRSA的耐药表型和基因型比较不同基因型（不同克隆来源）序号病房分离时间标本类型耐药谱PFGE分型 1RCU2002-2-1痰OGLERA1 2 ICU 2002-8-1 痰OGLERA1 3 ICU 2002-10-3痰OGLERA1 4 ICU 2002-10-8痰OGLERA1 5 ICU 2002-10-14痰OGLERA1 6 ICU 2002-1-2血液OGLERA1 7 ICU 2002-1-8痰OGLERA1 8 ICU 2002-2-4痰OGLERA1 9 ICU 2002-4-8痰OGLERA1 10 ICU 2002-4-10导管OGLERA1 11 ICU 2002-10-3痰OGLERA2 12 RCU 2002-10-3痰OGLERB1 13 RCU 2002-1-14痰OGLERB1 14 RCU 2002-6-2痰OGLERB2 15 RCU 2002-12-2痰OGLERB2 16 ICU 2002-2-5腹水OGLERB3 17 RCU 2002-5-10导尿管OGLERC18RCU2002-11-10 痰OGLERD19ICU2002-7-4 痰OGLERD20ICU2002-3-2 痰OGLERE表型表型与与基因型基因型注：O苯唑西林、G庆大霉素、L左氧氟沙星、E红霉素、R四环素苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究36序号病房分MRSA的脉冲场凝胶电泳的脉冲场凝胶电泳（结果小结）（结果小结）ICU和RCU病房2002全年都在流行着A1亚型MRSA。耐药谱分型与PFGE分型可不一致。苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究37MRSA的脉冲场凝胶电泳（结果小结）苯唑西林耐药金黄色葡萄球 第三部分：临床资料分析第三部分：临床资料分析苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究38第三部分：临床资料分析苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病本研究MRSA为多重耐药，基因分型同源性高，造成治疗困难。为找到合理使用抗生素策略及爆发流行源头和传播途径，对部分病例进行了回顾性调查分析，结果发现：临床资料临床资料苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究39本研究MRSA为多重耐药，基因分型同源性高，造成治疗困难。临MRSA部分病例调查结果（一）部分病例调查结果（一）调查项目调查项目调查结果调查结果疾病严重感染12/30;癌症7/30;多器官功能衰竭6/30;心、肺、肾衰各1/30年龄20岁以下1/35;20-40岁4/35;40-70岁21/35;70岁以上9/35标本来源痰51/65;血液4/65;导尿管3/65;支气管刷、洁尿各2/65；其它3/65器械治疗呼吸机17/30；置管18/30；大手术11/30临床资料临床资料苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究40MRSA部分病例调查结果（一）调查项目MRSA部分病例调查结果（二）部分病例调查结果（二）调查项目调查项目调查结果调查结果抗菌素使用史25/30住院期间使用过第三、四代头孢菌素、氟喹诺酮类、碳青霉烯类等广谱抗生素。改用万古霉素或替考拉宁后转归MRSA所致感染好转者占23/29；未好转者6/29同一患者不同分离株时间间隔8/65采集到不止一株MRSA（间隔至少二周，其中一位长达半年）。MRSA分离时间2002年1月12月间无明显波动临床资料临床资料苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究41MRSA部分病例调查结果（二）调查项目第四部分：第四部分：替考拉宁和万古霉素对葡萄球菌替考拉宁和万古霉素对葡萄球菌的体外活性检测的体外活性检测苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究42第四部分：替考拉宁和万古霉素对葡萄球菌的体外活性检测苯唑西林替考拉宁和万古霉素对葡萄球体外活性检测替考拉宁和万古霉素对葡萄球体外活性检测（方法）（方法）测定替考拉宁和万古霉素的MIC及抑菌圈直径 （琼脂稀释法、K-B法）不同种葡萄球菌 （MRSA、溶血葡萄球菌、表皮葡萄球菌）不同接种浓度菌液（104 cfu、106 cfu）活性区别对MIC结果的影响琼脂稀释法与抗生素纸片扩散法药敏结果的相关性苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究43替考拉宁和万古霉素对葡萄球体外活性检测（方法）测替考拉宁和万古霉素对葡萄球菌体外活性检测（结替考拉宁和万古霉素对葡萄球菌体外活性检测（结果果1 1）不同接种浓度菌液对二种抗生素外活性影响二种抗生素对不同葡萄球菌的活性区别菌名（各10株）接种浓度（cfu）VanMIC(ug/ml)TeiMIC(ug/ml)平均值MIC值范围平均值MIC值范围溶血葡萄球菌1041.61-211.62-321065.42-846.416-64表皮葡萄球菌1041.20.5-22.270.125-161062.150.5-417.850.5-64MRSA1040.850.5-11.450.25-41061.71-27.82-16苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究44替考拉宁和万古霉素对葡萄球菌体外活性检测（结果1）替考拉宁和万古霉素对葡萄球菌的体外活性检测替考拉宁和万古霉素对葡萄球菌的体外活性检测（结果（结果2 2）TEC、VAN对葡萄球菌的MIC法与纸片扩散法之间的相关性菌种标本类型TECVANK-B(mm)MIC(ug/ml)K-B(mm)MIC(ug/ml)Etest法琼脂稀释法Etest法琼脂稀释法判读折点10-148-328-32154-324-32溶葡痰8r24i16i18s3s2s溶葡脑脊液8r24i16i19s2s1s溶葡痰8r24i16i18s3s2s溶葡痰10r12i16i18s4s2s溶葡脓液10r8s8s18s1.5s2s溶葡血液10.5i12s8s18.5s1.5s1.s表葡脓肿12i4s4s18.5s2s2s溶葡脓液8r32r16i19s3s1s溶葡分泌物13i12i32r19s3s2s溶葡血液11i24i16i18.5s4s2s表葡脓液13i8s16i20s2s1s苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究45替考拉宁和万古霉素对葡萄球菌的体外活性检测（结果2）TEC、替考拉宁和万古霉素对葡萄球菌的体外活性检测替考拉宁和万古霉素对葡萄球菌的体外活性检测（结果小结）万古霉素替考拉宁MRSA表葡溶葡MRSA表葡溶葡活性区别（MIC）接种浓度升高，MIC升高幅度MIC法与K-B法相符性较好不好苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究46替考拉宁和万古霉素对葡萄球菌的体外活性检测（结果小结）万古霉讨讨 论论苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究47讨论苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学 MRSA引起的医院感染与治疗（一）引起的医院感染与治疗（一）是医院感染主要病因，常发生抵抗力低下的住院患者。可引起住院患者的长期感染，不易消除。爆发流行主要途径：共用的医疗器械（如呼吸机）、MRSA携带者（患者、医护人员等）讨论苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究48MRSA引起的医院感染与治疗（一）讨论苯唑西林耐药金黄色葡MRSA引起的医院感染与治疗（二）引起的医院感染与治疗（二）抗生素选择压力下的后果。使用或改用合理抗生素治疗：多数病人迅速好转；抗生素治疗无效组：病人身体状况太差，药物很难到达有效部位或到达有效部位的抗生素浓度不足，不能完全杀灭耐药菌。讨论苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究49MRSA引起的医院感染与治疗（二）抗生素选择压力下的后果。讨 替考拉宁和万古霉素对葡萄球菌的体外抗菌替考拉宁和万古霉素对葡萄球菌的体外抗菌活性活性替考拉宁受多种因素影响：在琼脂中扩散系数接种菌量以K-B法检测的替考拉宁耐药菌株，应进一步测定其MIC。通常敏感株金黄色葡萄球菌不稳定敏感株凝固酶阴性葡萄球菌（如溶血葡萄球菌）：细胞膜39kD的蛋白质，阻碍替考拉宁与靶位的结合。万古霉素对葡萄球菌活性较稳定，但对肠球菌活性较差。讨论苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究50替考拉宁和万古霉素对葡萄球菌的体外抗菌活性替考拉宁讨论苯唑结论结论MRSA耐药性特点万古霉素和替考拉宁高敏100复方新诺明和氯霉素敏感率较高 其它所测抗生素多重高耐2002年ICU、RCU病房发生了A1基因型MRSA流行 MRSA流行病学调查苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究51结论MRSA耐药性特点万古霉素和替考拉宁高敏100其它所测治疗及预防MRSA感染及爆发流行的关键：合理使用抗生素合理使用抗生素加强消毒隔离观念加强消毒隔离观念正确的药敏实验正确的药敏实验苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究52治疗及预防MRSA感染及爆发流行的关键：合理使用抗生素加强消MRSA的检测苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究53MRSA的检测苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖MRSA：homoMRSA MIC100mg/l hetero-MRSA MIC 1-100mg/l生长缓慢，常规检测易漏检 苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究54MRSA：homoMRSAMIC100mg/PBP2a的表达 mecA FOX：better inductor of mecA OXA：weak inductor of mecA苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究55PBP2a的表达mecA苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行 OXA(1ug)FOX(30ug)MRSA 30 100%100%35 93.3%94.7%MRCNS 30 100%100%35 100%100%最佳检测方法FOX(30ug)30 苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究56FOX（K-B)筛选MRSA20mmMRSA20-23mm中度敏感PCR、乳胶凝集试验24mmMSSA苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究57FOX（K-B)筛选MRSA20mmMRSA苯唑西林耐药苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素对葡萄球菌体外活性研究58谢谢！苯唑西林耐药金黄色葡萄球分子流行病学调查及糖肽类抗生素