病毒感染的检查方法与防治原则 ppt课件

病毒感染的检查方法与防治原则 病毒感染的检查方法与防治原则 1目的与要求目的与要求了解病毒的诊断，抗病毒治疗，病毒感染的预防。目的与要求2风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()细胞种类 二倍体细胞（diploid cell）埃可病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()早期抗体检测（IgM）应用：人群免疫情况的调查亚单位疫苗（subunit vaccine）应用：尚无敏感细胞的病毒培养病毒成分（抗原或核酸）临床诊断少用单层细胞培养（monolayer cell culture）细胞种类 二倍体细胞（diploid cell）单层细胞培养（monolayer cell culture）第一节第一节 病毒感染的检查方法病毒感染的检查方法风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()3病毒感染的检查病毒感染的检查检测内容检测内容查病毒查病毒查特异性查特异性抗体抗体 病毒颗粒病毒颗粒 病毒抗原病毒抗原 病毒核酸病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察电镜直接观察 光镜检查包涵体光镜检查包涵体 分离培养分离培养病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体 病毒颗粒 电镜4一、标本的采集与送检一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似原则基本与细菌相似，但，但应注意：应注意：1.1.标本用标本用“双抗双抗”或两性霉素或两性霉素B B处理处理 ，尽快送检尽快送检 一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意：5二、病毒的分离与鉴定二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养（一）病毒的分离培养 细胞培养细胞培养（cell culture）鸡胚接种鸡胚接种（egg inoculation）动物接种动物接种（animal inoculation）二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离培养61 1.鸡胚培养鸡胚培养 采用孵化采用孵化采用孵化采用孵化9 91414天的鸡胚天的鸡胚天的鸡胚天的鸡胚 绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜 痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔尿囊腔尿囊腔尿囊腔接种部位接种部位接种部位接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔羊膜腔羊膜腔羊膜腔 流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离 卵黄囊卵黄囊卵黄囊卵黄囊 嗜神经病毒嗜神经病毒嗜神经病毒嗜神经病毒 1.鸡胚培养 7病毒感染的检查方法与防治原则 ppt课件81 1、鸡胚培养、鸡胚培养优点：优点：易管理易管理，不带微生物，成本较低，不带微生物，成本较低缺点：缺点：操作程序复杂操作程序复杂1、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低9病毒感染的检查方法与防治原则 ppt课件102 2.动物接种动物接种 应用：应用：应用：应用：尚无敏感细胞的病毒培养尚无敏感细胞的病毒培养尚无敏感细胞的病毒培养尚无敏感细胞的病毒培养 动物：动物：动物：动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等兔、鼠、黑猩猩、猴等兔、鼠、黑猩猩、猴等兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：优点：优点：优点：结果易观察，可建立动物模型结果易观察，可建立动物模型结果易观察，可建立动物模型结果易观察，可建立动物模型 缺点：缺点：缺点：缺点：有饲养条件要求，费用高有饲养条件要求，费用高有饲养条件要求，费用高有饲养条件要求，费用高，动物，动物，动物，动物 体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒2.动物接种11病毒的分离培养病毒的分离培养 单层细胞培养单层细胞培养单层细胞培养单层细胞培养（monolayer cell culturemonolayer cell culture）分类分类 悬浮细胞培养悬浮细胞培养悬浮细胞培养悬浮细胞培养（suspended cell culturesuspended cell culture）原代细胞原代细胞原代细胞原代细胞（primary cellprimary cell）细胞种类细胞种类 二倍体细胞（二倍体细胞（二倍体细胞（二倍体细胞（diploid celldiploid cell）传代细胞系传代细胞系传代细胞系传代细胞系（continuous cell linecontinuous cell line）病毒的分离培养12病毒的细胞培养病毒的细胞培养细胞培养瓶细胞培养瓶细胞培养瓶细胞培养瓶单层细胞单层细胞单层细胞单层细胞病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞131 1病毒增殖鉴定病毒增殖鉴定 (1)(1)(1)(1)细胞病变效应细胞病变效应细胞病变效应细胞病变效应（cytopathcytopathicic effect,effect,CPE CPE）细细细细胞胞胞胞变变变变圆圆圆圆、聚聚聚聚集集集集、坏坏坏坏死死死死、溶溶溶溶解解解解或或或或脱脱脱脱落落落落等等等等（多数病毒）（多数病毒）（多数病毒）（多数病毒）；形形形形成成成成多多多多核核核核巨巨巨巨细细细细胞胞胞胞或或或或称称称称融融融融合合合合细细细细胞胞胞胞（麻麻麻麻疹疹疹疹病病病病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；在在在在培培培培养养养养细细细细胞胞胞胞中中中中形形形形成成成成包包包包涵涵涵涵体体体体（狂狂狂狂犬犬犬犬病病病病病病病病毒毒毒毒、麻疹病毒等）。麻疹病毒等）。麻疹病毒等）。麻疹病毒等）。（二）病毒的鉴定（二）病毒的鉴定 1病毒增殖鉴定（二）病毒的鉴定 14细胞种类 二倍体细胞（diploid cell）第二节 病毒感染的防治原则接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒鸡胚接种（egg inoculation）Northern blot早期抗体检测（IgM）进行血清流行病学调查等（plaque formation test）风疹病毒人胚肾细胞 病毒增殖，CPE()CPE(+)风疹病毒(-)单层细胞培养（monolayer cell culture）应用：人群免疫情况的调查电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；采用孵化914天的鸡胚病毒成分（抗原或核酸）应用：人群免疫情况的调查细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞种类 二倍体细胞（diploid cell）细胞15麻疹病毒麻疹病毒麻疹病毒麻疹病毒感染细胞感染细胞感染细胞感染细胞呼吸道合胞病呼吸道合胞病呼吸道合胞病呼吸道合胞病毒感染细胞毒感染细胞毒感染细胞毒感染细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞(1 1)细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞形成多核巨细胞或称融16形成包涵体形成包涵体形成包涵体形成包涵体(inclusion bodyinclusion bodyinclusion bodyinclusion body)(1 1)细胞病变效应细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)形成包涵体(inclusion body)(1)细胞病变效17腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞(2 2)红细胞吸附红细胞吸附（hemadsorption）病毒病毒病毒病毒囊膜表面血凝素囊膜表面血凝素囊膜表面血凝素囊膜表面血凝素(HAHAHAHA)红细胞表面红细胞表面红细胞表面红细胞表面HAHAHAHA受体受体受体受体腮腺炎病毒感染细胞(2)红细胞吸附（hemadsorptio18(3 3)干扰现象干扰现象（interference）风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，病毒增殖，病毒增殖，CPECPECPECPE()埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，病毒增殖，病毒增殖，CPECPECPECPE()人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞人胚肾细胞风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒？埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒CPE(-)CPE(-)CPE(-)CPE(-)风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒(+)+)+)+)埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒(-)(-)(-)(-)CPE(+)CPE(+)CPE(+)CPE(+)风疹病毒风疹病毒风疹病毒风疹病毒(-)(-)(-)(-)埃可病毒埃可病毒埃可病毒埃可病毒(+)(+)(+)(+)(3)干扰现象（interference）风疹病毒人胚肾细192.2.病毒数量与感染性测定病毒数量与感染性测定1 1 1 1.蚀斑形成试验蚀斑形成试验蚀斑形成试验蚀斑形成试验 （plaque formation testplaque formation test）2.2.2.2.50505050组织细胞感染量组织细胞感染量组织细胞感染量组织细胞感染量 （5050 tissue culturetissue culture infectious dose,infectious dose,TCIDTCID5050）感染性病毒量感染性病毒量2.病毒数量与感染性测定1.蚀斑形成试验感染性病毒量202 2.病毒形态学鉴定病毒形态学鉴定电子显微镜电子显微镜电子显微镜电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限：设备、操作复杂，应用受限：设备、操作复杂，应用受限：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），对一般病毒检测意义不大对一般病毒检测意义不大对一般病毒检测意义不大对一般病毒检测意义不大2.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限213 3.病毒血清学鉴定病毒血清学鉴定 用已知的抗体，鉴定病毒种、型、亚型用已知的抗体，鉴定病毒种、型、亚型 (1 1 1 1)血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验-正粘病毒型与亚型鉴定正粘病毒型与亚型鉴定正粘病毒型与亚型鉴定正粘病毒型与亚型鉴定 病毒病毒病毒病毒鸡鸡鸡鸡红细胞红细胞红细胞红细胞凝集凝集凝集凝集（血凝试验）（血凝试验）（血凝试验）（血凝试验）病毒病毒病毒病毒特异性抗体特异性抗体特异性抗体特异性抗体鸡鸡鸡鸡红细胞红细胞红细胞红细胞不凝集不凝集不凝集不凝集 （血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验血凝抑制试验）(2)(2)(2)(2)免疫标记法免疫标记法免疫标记法免疫标记法（FIAFIAFIAFIA、EIAEIAEIAEIA、RIARIARIARIA）多种病毒鉴定多种病毒鉴定多种病毒鉴定多种病毒鉴定3.病毒血清学鉴定 用已知的抗体，鉴定病毒种、型、亚型(222三、病毒分子生物学鉴定三、病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增核酸扩增核酸扩增核酸扩增 核酸杂交核酸杂交核酸杂交核酸杂交 基因芯片基因芯片基因芯片基因芯片 基因测序基因测序基因测序基因测序三、病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定23四、病毒感染的血清学诊断四、病毒感染的血清学诊断应用应用：采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚目目目目前前前前尚尚尚尚无无无无分分分分离离离离此此此此病病病病毒毒毒毒的的的的方方方方法法法法或或或或难难难难以以以以分分分分离的病毒离的病毒离的病毒离的病毒为证实所分离的病毒的临床意义为证实所分离的病毒的临床意义为证实所分离的病毒的临床意义为证实所分离的病毒的临床意义进行血清流行病学调查等进行血清流行病学调查等进行血清流行病学调查等进行血清流行病学调查等四、病毒感染的血清学诊断应用：241 1.中和试验中和试验（neutralizing test）病毒病毒病毒病毒中和抗体中和抗体中和抗体中和抗体 病毒失去感染性病毒失去感染性病毒失去感染性病毒失去感染性 特点：特点：特点：特点：特异性高，抗体维持时间长特异性高，抗体维持时间长特异性高，抗体维持时间长特异性高，抗体维持时间长应用：应用：应用：应用：人群免疫情况的调查人群免疫情况的调查人群免疫情况的调查人群免疫情况的调查 临床诊断少用临床诊断少用临床诊断少用临床诊断少用1.中和试验（neutralizing test）病毒中和25五、病毒感染的快速诊断五、病毒感染的快速诊断数小时内出结果数小时内出结果数小时内出结果数小时内出结果病毒颗粒病毒颗粒病毒颗粒病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸）早期抗体检测早期抗体检测早期抗体检测早期抗体检测（I IgMgM）五、病毒感染的快速诊断数小时内出结果26病毒的快速诊断病毒的快速诊断光镜光镜-包涵体电镜电镜免疫荧光免疫荧光ELISA分子生物学技术分子生物学技术杂交Southern blotPCRNorthern blot病毒的快速诊断光镜-包涵体电镜免疫荧光ELISA分子27第二节第二节 病毒感染的防治原则病毒感染的防治原则第二节 病毒感染的防治原则28灭活疫苗灭活疫苗灭活疫苗灭活疫苗（inactivated vaccineinactivated vaccine）活疫苗（活疫苗（活疫苗（活疫苗（living vaccineliving vaccine）重组载体疫苗（重组载体疫苗（重组载体疫苗（重组载体疫苗（recombinant carrier vaccinerecombinant carrier vaccine）亚单位疫苗（亚单位疫苗（亚单位疫苗（亚单位疫苗（subunit vaccinesubunit vaccine）化学提取或人工合成疫苗化学提取或人工合成疫苗化学提取或人工合成疫苗化学提取或人工合成疫苗 重组疫苗（重组疫苗（重组疫苗（重组疫苗（recombinant vaccinerecombinant vaccine）核酸疫苗（核酸疫苗（核酸疫苗（核酸疫苗（nucleic acid vaccinenucleic acid vaccine）一、人工主动免疫常用生物制品一、人工主动免疫常用生物制品灭活疫苗（inactivated vaccine）一、人工主29谢谢观看谢谢观看谢谢观看30谢谢观看谢谢观看谢谢观看31