牙周病分子生物学课件

一、概述一、概述一、概述一、概述二、牙周病的分子致病二、牙周病的分子致病二、牙周病的分子致病二、牙周病的分子致病1.1.1.1.微生物的毒力因子微生物的毒力因子微生物的毒力因子微生物的毒力因子2.2.2.2.宿主因子宿主因子宿主因子宿主因子三、核酸杂交法检测牙周病有关细菌三、核酸杂交法检测牙周病有关细菌三、核酸杂交法检测牙周病有关细菌三、核酸杂交法检测牙周病有关细菌一、概述1定义（定义（定义（定义（DefinitionDefinition）分子生物学技术研究与牙周病密切分子生物学技术研究与牙周病密切分子生物学技术研究与牙周病密切分子生物学技术研究与牙周病密切相关生物大分子（蛋白、核酸）的一相关生物大分子（蛋白、核酸）的一相关生物大分子（蛋白、核酸）的一相关生物大分子（蛋白、核酸）的一门新兴学科门新兴学科门新兴学科门新兴学科前瞻性、交叉性。前瞻性、交叉性。前瞻性、交叉性。前瞻性、交叉性。定义（Definition）分子生物学技术研究与牙2研究内容研究内容研究内容研究内容宿主基因水平或分子水平阐明牙周宿主基因水平或分子水平阐明牙周宿主基因水平或分子水平阐明牙周宿主基因水平或分子水平阐明牙周病发病机制和流行规律病发病机制和流行规律病发病机制和流行规律病发病机制和流行规律牙周病原菌的蛋白和核酸牙周病原菌的蛋白和核酸牙周病原菌的蛋白和核酸牙周病原菌的蛋白和核酸(DNA(DNA、RNA)RNA)分子结构分子结构分子结构分子结构追踪病原菌传播追踪病原菌传播追踪病原菌传播追踪病原菌传播途径、发现病原体变异。途径、发现病原体变异。途径、发现病原体变异。途径、发现病原体变异。牙周病的发生发展规律与微观的病牙周病的发生发展规律与微观的病牙周病的发生发展规律与微观的病牙周病的发生发展规律与微观的病原菌或宿主基因特征联系起来原菌或宿主基因特征联系起来原菌或宿主基因特征联系起来原菌或宿主基因特征联系起来牙周病临床的分子诊断、分子指征、牙周病临床的分子诊断、分子指征、牙周病临床的分子诊断、分子指征、牙周病临床的分子诊断、分子指征、分子预后乃至基因治疗分子预后乃至基因治疗分子预后乃至基因治疗分子预后乃至基因治疗研究内容3牙周病的分子致病牙周病的分子致病牙周病的分子致病牙周病的分子致病Molecular Pathogenesis of Molecular Pathogenesis of Molecular Pathogenesis of Molecular Pathogenesis of Periodontal DiseasePeriodontal DiseasePeriodontal DiseasePeriodontal Disease牙周病的分子致病4微生物的毒力因子微生物的毒力因子微生物的毒力因子微生物的毒力因子 研究牙周病原菌的蛋白和核酸分研究牙周病原菌的蛋白和核酸分研究牙周病原菌的蛋白和核酸分研究牙周病原菌的蛋白和核酸分子结构，评价毒力因子的作用。子结构，评价毒力因子的作用。子结构，评价毒力因子的作用。子结构，评价毒力因子的作用。宿主因子宿主因子宿主因子宿主因子 研究细胞因子和遗传因子的作用。研究细胞因子和遗传因子的作用。研究细胞因子和遗传因子的作用。研究细胞因子和遗传因子的作用。微生物的毒力因子 5微生物的毒力因子微生物的毒力因子微生物的毒力因子微生物的毒力因子Microbial Viralence FactorsMicrobial Viralence FactorsMicrobial Viralence FactorsMicrobial Viralence Factors微生物的毒力因子6内毒素内毒素内毒素内毒素(lipopolysaccharide,(lipopolysaccharide,LPS)LPS)G-G-菌胞壁外膜的脂多糖成分菌胞壁外膜的脂多糖成分菌胞壁外膜的脂多糖成分菌胞壁外膜的脂多糖成分（磷脂多糖蛋白质）。（磷脂多糖蛋白质）。（磷脂多糖蛋白质）。（磷脂多糖蛋白质）。内毒素(lipopolysaccharide,LPS)7十二烷基磺酸钠聚丙烯凝胶电泳十二烷基磺酸钠聚丙烯凝胶电泳十二烷基磺酸钠聚丙烯凝胶电泳十二烷基磺酸钠聚丙烯凝胶电泳 PAGE-SDS gelPAGE-SDS gel银染色银染色银染色银染色Silver stainSilver stain内毒素免疫印迹内毒素免疫印迹内毒素免疫印迹内毒素免疫印迹LPS-immuno-blottingLPS-immuno-blotting十二烷基磺酸钠聚丙烯凝胶电泳 PAGE-SDS ge8牙龈素牙龈素牙龈素牙龈素(gingipains)(gingipains)最初称为胰酶样蛋白酶最初称为胰酶样蛋白酶最初称为胰酶样蛋白酶最初称为胰酶样蛋白酶(trypsin-(trypsin-like protease,TLP),like protease,TLP),又称卟啉素又称卟啉素又称卟啉素又称卟啉素(porphypains)(porphypains)存在于存在于存在于存在于PgPg的外膜、膜泡或胞外的一的外膜、膜泡或胞外的一的外膜、膜泡或胞外的一的外膜、膜泡或胞外的一组蛋白酶组蛋白酶组蛋白酶组蛋白酶超速离心超速离心超速离心超速离心(10000g20min,4(10000g20min,4)提取提取提取提取胞外膜泡胞外膜泡胞外膜泡胞外膜泡高凝胶液相色谱法高凝胶液相色谱法高凝胶液相色谱法高凝胶液相色谱法(GF-HPLC)(GF-HPLC)分离纯化。分离纯化。分离纯化。分离纯化。牙龈素(gingipains)9精氨酸牙龈素精氨酸牙龈素精氨酸牙龈素精氨酸牙龈素(Arginine-gingipains,(Arginine-gingipains,Rgps):Rgps):特异性切断蛋白质与精氨酸残基结合的特异性切断蛋白质与精氨酸残基结合的特异性切断蛋白质与精氨酸残基结合的特异性切断蛋白质与精氨酸残基结合的肽段，由肽段，由肽段，由肽段，由rgpA(rgpA(前肽区、蛋白酶区、粘前肽区、蛋白酶区、粘前肽区、蛋白酶区、粘前肽区、蛋白酶区、粘附区附区附区附区)和和和和rgpB(rgpB(无粘附区无粘附区无粘附区无粘附区)二个基因编码二个基因编码二个基因编码二个基因编码赖氨酸牙龈素赖氨酸牙龈素赖氨酸牙龈素赖氨酸牙龈素(Lysine-gingipain,(Lysine-gingipain,Kgp):Kgp):特异性切断蛋白质与赖氨酸残基结合的特异性切断蛋白质与赖氨酸残基结合的特异性切断蛋白质与赖氨酸残基结合的特异性切断蛋白质与赖氨酸残基结合的肽段，由肽段，由肽段，由肽段，由kgp(kgp(前肽区、蛋白酶区、粘附前肽区、蛋白酶区、粘附前肽区、蛋白酶区、粘附前肽区、蛋白酶区、粘附区区区区)单个基因编码单个基因编码单个基因编码单个基因编码精氨酸牙龈素(Arginine-gingipains,R10PgPg同源突变株的性状改变同源突变株的性状改变同源突变株的性状改变同源突变株的性状改变 突变株突变株突变株突变株性状改变性状改变性状改变性状改变rgpArgpA粘附能力部分丧失粘附能力部分丧失粘附能力部分丧失粘附能力部分丧失降解降解降解降解I I型胶原能力丧失型胶原能力丧失型胶原能力丧失型胶原能力丧失rgpArgpA、rgpBrgpB抑制中性粒细胞功能丧失抑制中性粒细胞功能丧失抑制中性粒细胞功能丧失抑制中性粒细胞功能丧失菌毛缺失菌毛缺失菌毛缺失菌毛缺失kgpkgp菌落无法变黑菌落无法变黑菌落无法变黑菌落无法变黑(影响利用影响利用影响利用影响利用血红蛋白血红蛋白血红蛋白血红蛋白)rgpArgpA、rgpBrgpB、kgpkgp胞外蛋白水解活性丧胞外蛋白水解活性丧胞外蛋白水解活性丧胞外蛋白水解活性丧失失失失Pg同源突变株的性状改变11牙龈素功能牙龈素功能牙龈素功能牙龈素功能有助于粘附定植：对纤维蛋白的亲和力。有助于粘附定植：对纤维蛋白的亲和力。有助于粘附定植：对纤维蛋白的亲和力。有助于粘附定植：对纤维蛋白的亲和力。毒性作用：破坏宿主组织细胞的活性成毒性作用：破坏宿主组织细胞的活性成毒性作用：破坏宿主组织细胞的活性成毒性作用：破坏宿主组织细胞的活性成分分分分(蛋白、多肽蛋白、多肽蛋白、多肽蛋白、多肽)、降解胶原；促进缓激、降解胶原；促进缓激、降解胶原；促进缓激、降解胶原；促进缓激肽释放，提高血管通渗性，增加龈沟肽释放，提高血管通渗性，增加龈沟肽释放，提高血管通渗性，增加龈沟肽释放，提高血管通渗性，增加龈沟液量，组织水肿。液量，组织水肿。液量，组织水肿。液量，组织水肿。帮助细胞生长：将组织蛋白质降解为短帮助细胞生长：将组织蛋白质降解为短帮助细胞生长：将组织蛋白质降解为短帮助细胞生长：将组织蛋白质降解为短肽链，扩大细菌营养摄取范围，为细肽链，扩大细菌营养摄取范围，为细肽链，扩大细菌营养摄取范围，为细肽链，扩大细菌营养摄取范围，为细菌生长和毒力发挥提供养分。菌生长和毒力发挥提供养分。菌生长和毒力发挥提供养分。菌生长和毒力发挥提供养分。干扰宿主免疫反应：影响中性白细胞功干扰宿主免疫反应：影响中性白细胞功干扰宿主免疫反应：影响中性白细胞功干扰宿主免疫反应：影响中性白细胞功能，降解宿主细胞的能，降解宿主细胞的能，降解宿主细胞的能，降解宿主细胞的LPSLPS受体受体受体受体CD14CD14，降解细胞因子降解细胞因子降解细胞因子降解细胞因子IL-1IL-1、IL-6IL-6、IL-8IL-8及及及及TNFTNF等。等。等。等。牙龈素功能12菌毛亚单位蛋白结构基因菌毛亚单位蛋白结构基因菌毛亚单位蛋白结构基因菌毛亚单位蛋白结构基因(fim A)(fim A)粘附有关的毒力因子粘附有关的毒力因子粘附有关的毒力因子粘附有关的毒力因子 纤毛素纤毛素纤毛素纤毛素(fimbrilin)(fimbrilin)粘附素粘附素粘附素粘附素(adhesin)(adhesin)血细胞凝集血细胞凝集血细胞凝集血细胞凝集素素素素(hemagglutinin)(hemagglutinin)菌毛亚单位蛋白结构基因(fim A)13 1988 1988年年年年DickinsonDickinson等首先获得含编码等首先获得含编码等首先获得含编码等首先获得含编码PgPg纤毛素基因的克隆质粒纤毛素基因的克隆质粒纤毛素基因的克隆质粒纤毛素基因的克隆质粒PUC 13Bg12.1PUC 13Bg12.1，该基，该基，该基，该基因为染色体上的单拷贝基因，它的氨基酸序列因为染色体上的单拷贝基因，它的氨基酸序列因为染色体上的单拷贝基因，它的氨基酸序列因为染色体上的单拷贝基因，它的氨基酸序列与其他菌毛无同源性，可利用该特异基因作探与其他菌毛无同源性，可利用该特异基因作探与其他菌毛无同源性，可利用该特异基因作探与其他菌毛无同源性，可利用该特异基因作探针鉴定针鉴定针鉴定针鉴定PgPg，可进一步研究，可进一步研究，可进一步研究，可进一步研究PgPg菌毛的致病作用。菌毛的致病作用。菌毛的致病作用。菌毛的致病作用。1988年Dickinson等首先获得含编码14胶原酶基因胶原酶基因胶原酶基因胶原酶基因(prtc)(prtc)Pg Pg的胶原酶能降解的胶原酶能降解的胶原酶能降解的胶原酶能降解I I型胶原，型胶原，型胶原，型胶原，破坏牙周组织附着。破坏牙周组织附着。破坏牙周组织附着。破坏牙周组织附着。已测知表达胶原酶活性的已测知表达胶原酶活性的已测知表达胶原酶活性的已测知表达胶原酶活性的prtcprtc基因序列，它存在于基因序列，它存在于基因序列，它存在于基因序列，它存在于PgPg的三的三的三的三种主要血清型中，编码种主要血清型中，编码种主要血清型中，编码种主要血清型中，编码1 1个个个个37501.3837501.38蛋白质。蛋白质。蛋白质。蛋白质。胶原酶基因(prtc)15白细胞毒素基因白细胞毒素基因白细胞毒素基因白细胞毒素基因(lkt A(lkt A、B B、C C、D)D)Aa Aa是口腔中唯一能产生白细胞是口腔中唯一能产生白细胞是口腔中唯一能产生白细胞是口腔中唯一能产生白细胞毒素毒素毒素毒素(leukotoxin,LKT)(leukotoxin,LKT)的细菌，白的细菌，白的细菌，白的细菌，白细胞毒素仅能杀死人或灵长类的多细胞毒素仅能杀死人或灵长类的多细胞毒素仅能杀死人或灵长类的多细胞毒素仅能杀死人或灵长类的多形核白细胞、单核细胞和巨噬细胞，形核白细胞、单核细胞和巨噬细胞，形核白细胞、单核细胞和巨噬细胞，形核白细胞、单核细胞和巨噬细胞，抑制破坏宿主的免疫防御机制。抑制破坏宿主的免疫防御机制。抑制破坏宿主的免疫防御机制。抑制破坏宿主的免疫防御机制。现已克隆和测知现已克隆和测知现已克隆和测知现已克隆和测知lkt Alkt A的序列，的序列，的序列，的序列，且在受体菌中得到表达。编码毒素且在受体菌中得到表达。编码毒素且在受体菌中得到表达。编码毒素且在受体菌中得到表达。编码毒素结构，激活白细胞毒素。结构，激活白细胞毒素。结构，激活白细胞毒素。结构，激活白细胞毒素。白细胞毒素基因(lkt A、B、C、D)16牙周病分子生物学课件17牙周病分子生物学课件18牙周病分子生物学课件19牙周病分子生物学课件20牙周病分子生物学课件21宿主因子宿主因子宿主因子宿主因子Host FactorsHost FactorsHost FactorsHost Factors宿主因子22细胞因子细胞因子细胞因子细胞因子(cytokines)(cytokines)细胞生物学细胞生物学细胞生物学细胞生物学 细胞因子细胞因子细胞因子细胞因子cytokine(CK)cytokine(CK)免疫学免疫学免疫学免疫学淋巴因子淋巴因子淋巴因子淋巴因子lymphokine lymphokine interleukincytikine(LI)interleukincytikine(LI)血液学血液学血液学血液学集落刺激因子集落刺激因子集落刺激因子集落刺激因子 colony colony stimulation stimulation factor(CSF)factor(CSF)分子生物学分子生物学分子生物学分子生物学生长因子生长因子生长因子生长因子growth growth factors(GFS)factors(GFS)细胞因子(cytokines)23活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌的微量活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌的微量活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌的微量活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌的微量生物活性物质。生物活性物质。生物活性物质。生物活性物质。本质是蛋白质或多肽。本质是蛋白质或多肽。本质是蛋白质或多肽。本质是蛋白质或多肽。在体内发挥广泛的生物学作用，与生长、分在体内发挥广泛的生物学作用，与生长、分在体内发挥广泛的生物学作用，与生长、分在体内发挥广泛的生物学作用，与生长、分化、免疫、肿瘤、造血和创伤愈合等多种生化、免疫、肿瘤、造血和创伤愈合等多种生化、免疫、肿瘤、造血和创伤愈合等多种生化、免疫、肿瘤、造血和创伤愈合等多种生理、病理状态有关。理、病理状态有关。理、病理状态有关。理、病理状态有关。正常情况下发挥广泛生理功能，一旦失调异正常情况下发挥广泛生理功能，一旦失调异正常情况下发挥广泛生理功能，一旦失调异正常情况下发挥广泛生理功能，一旦失调异常分泌，又与疾病相关。常分泌，又与疾病相关。常分泌，又与疾病相关。常分泌，又与疾病相关。活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌的微量生物活性物质。24 目前发现的细胞因子有目前发现的细胞因子有目前发现的细胞因子有目前发现的细胞因子有1010余族，每余族，每余族，每余族，每族又有若干亚族，共族又有若干亚族，共族又有若干亚族，共族又有若干亚族，共100100多种，功能大多种，功能大多种，功能大多种，功能大多已阐明，部分已克隆成功，其基因定多已阐明，部分已克隆成功，其基因定多已阐明，部分已克隆成功，其基因定多已阐明，部分已克隆成功，其基因定位、结构与受体结合机制等均有大量研位、结构与受体结合机制等均有大量研位、结构与受体结合机制等均有大量研位、结构与受体结合机制等均有大量研究。究。究。究。目前发现的细胞因子有10余族，每族又有若干亚256 6白介素白介素白介素白介素(1-18(1-18型糖蛋白型糖蛋白型糖蛋白型糖蛋白)(interleukin,IL)(interleukin,IL)6 6肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子肿瘤坏死因子(tumor nocrosis factor,(tumor nocrosis factor,TNF)TNF)6 6粘附分子粘附分子粘附分子粘附分子(adhesion molecule,AM)(adhesion molecule,AM)6 6干扰素干扰素干扰素干扰素(interferan,IFN)(interferan,IFN)6 6转化生长因子转化生长因子转化生长因子转化生长因子-(transforming growth-(transforming growth factor-,TGF-)factor-,TGF-)6 6成纤维细胞生长因子成纤维细胞生长因子成纤维细胞生长因子成纤维细胞生长因子(fibroblast growth(fibroblast growth factors,FGFs)factors,FGFs)白介素(1-18型糖蛋白)(interleukin,IL)26细胞因子作用特点细胞因子作用特点细胞因子作用特点细胞因子作用特点特异性特异性特异性特异性(自分泌、旁分泌作用自分泌、旁分泌作用自分泌、旁分泌作用自分泌、旁分泌作用)对靶细胞存在不同程度特异性。对靶细胞存在不同程度特异性。对靶细胞存在不同程度特异性。对靶细胞存在不同程度特异性。多样性、多功能性多样性、多功能性多样性、多功能性多样性、多功能性对不同靶细胞、不同浓度或不同生对不同靶细胞、不同浓度或不同生对不同靶细胞、不同浓度或不同生对不同靶细胞、不同浓度或不同生理状态靶细胞可有不同作用。理状态靶细胞可有不同作用。理状态靶细胞可有不同作用。理状态靶细胞可有不同作用。整体性整体性整体性整体性对细胞、组织的调控不是仅靠对细胞、组织的调控不是仅靠对细胞、组织的调控不是仅靠对细胞、组织的调控不是仅靠1 1种，种，种，种，而是多因子参与及多步骤反应，由而是多因子参与及多步骤反应，由而是多因子参与及多步骤反应，由而是多因子参与及多步骤反应，由几种因子协同或拮抗配合形成网络几种因子协同或拮抗配合形成网络几种因子协同或拮抗配合形成网络几种因子协同或拮抗配合形成网络(network)(network)发挥作用。发挥作用。发挥作用。发挥作用。细胞因子作用特点27遗传因子遗传因子遗传因子遗传因子(genetic factors)(genetic factors)基因水平阐明牙周病发基因水平阐明牙周病发基因水平阐明牙周病发基因水平阐明牙周病发生、发展和流行规律。生、发展和流行规律。生、发展和流行规律。生、发展和流行规律。遗传因子(genetic factors)28 细菌是引发牙周炎必不可少的因素，但不细菌是引发牙周炎必不可少的因素，但不细菌是引发牙周炎必不可少的因素，但不细菌是引发牙周炎必不可少的因素，但不是唯一因素，宿主也起重要作用。是唯一因素，宿主也起重要作用。是唯一因素，宿主也起重要作用。是唯一因素，宿主也起重要作用。单纯遗传能为患严重牙周炎提供单纯遗传能为患严重牙周炎提供单纯遗传能为患严重牙周炎提供单纯遗传能为患严重牙周炎提供50%50%以上以上以上以上危险性，如：危险性，如：危险性，如：危险性，如：白细胞减少症白细胞减少症白细胞减少症白细胞减少症 白细胞粘附缺陷病白细胞粘附缺陷病白细胞粘附缺陷病白细胞粘附缺陷病 Down Down综合征综合征综合征综合征 掌跖角化牙周破坏综合征掌跖角化牙周破坏综合征掌跖角化牙周破坏综合征掌跖角化牙周破坏综合征 细菌是引发牙周炎必不可少的因素，但不是唯一因29牙周病的基因研究牙周病的基因研究牙周病的基因研究牙周病的基因研究6 6号染色体组织相容性位点变异号染色体组织相容性位点变异号染色体组织相容性位点变异号染色体组织相容性位点变异产生产生产生产生IgG2IgG2能力降低，能力降低，能力降低，能力降低，IgG2 IgG2是保护性的，能调是保护性的，能调是保护性的，能调是保护性的，能调理识别细菌，以利吞噬杀死。理识别细菌，以利吞噬杀死。理识别细菌，以利吞噬杀死。理识别细菌，以利吞噬杀死。染色体染色体染色体染色体1q H1311q H131残基多态性残基多态性残基多态性残基多态性组氨酸纯合子组氨酸纯合子组氨酸纯合子组氨酸纯合子 吞噬细胞识别吞噬细胞识别吞噬细胞识别吞噬细胞识别IgG2IgG2的的的的hFcrRhFcrRa a 受体亲和力高受体亲和力高受体亲和力高受体亲和力高(IgG(IgG包裹包裹包裹包裹的致病的致病的致病的致病 菌易被吞噬清除菌易被吞噬清除菌易被吞噬清除菌易被吞噬清除)精氨酸纯合子精氨酸纯合子精氨酸纯合子精氨酸纯合子 受体亲和力低受体亲和力低受体亲和力低受体亲和力低组组组组/精氨酸杂合子精氨酸杂合子精氨酸杂合子精氨酸杂合子 亲和力居中亲和力居中亲和力居中亲和力居中牙周病的基因研究30染色体染色体染色体染色体2q 132q 13的的的的IL-1IL-1基因多态性基因多态性基因多态性基因多态性产生的产生的产生的产生的IL-1IL-1约为该基因阴性的约为该基因阴性的约为该基因阴性的约为该基因阴性的4 4倍，倍，倍，倍，4040岁后患重度牙周炎的可能性是阴性个体岁后患重度牙周炎的可能性是阴性个体岁后患重度牙周炎的可能性是阴性个体岁后患重度牙周炎的可能性是阴性个体的的的的2020倍倍倍倍6 6号染色体号染色体号染色体号染色体TNF-TNF-基因多态性基因多态性基因多态性基因多态性产生大量产生大量产生大量产生大量TNF-TNF-，增强对感染的反应性，增强对感染的反应性，增强对感染的反应性，增强对感染的反应性染色体2q 13的IL-1基因多态性产生的IL-1约为31牙周病分子生物学课件32牙周病分子生物学课件33牙周病分子生物学课件34牙周病分子生物学课件35核酸杂交法核酸杂交法核酸杂交法核酸杂交法(molecular(molecular hybridization)hybridization)检测牙周病相关细菌检测牙周病相关细菌检测牙周病相关细菌检测牙周病相关细菌核酸杂交法(molecular hybridization36概概概概 述述述述概 述37细菌分类学四个水平细菌分类学四个水平细菌分类学四个水平细菌分类学四个水平细菌形态和行为水平：显微结细菌形态和行为水平：显微结细菌形态和行为水平：显微结细菌形态和行为水平：显微结构、运动性、酶、生化及营养构、运动性、酶、生化及营养构、运动性、酶、生化及营养构、运动性、酶、生化及营养需要等需要等需要等需要等细菌组分水平：胞壁组分、脂细菌组分水平：胞壁组分、脂细菌组分水平：胞壁组分、脂细菌组分水平：胞壁组分、脂类、细胞色素及噬菌体系分析类、细胞色素及噬菌体系分析类、细胞色素及噬菌体系分析类、细胞色素及噬菌体系分析蛋白质水平：氨基酸系列、可蛋白质水平：氨基酸系列、可蛋白质水平：氨基酸系列、可蛋白质水平：氨基酸系列、可溶性蛋白凝胶电泳及血清学溶性蛋白凝胶电泳及血清学溶性蛋白凝胶电泳及血清学溶性蛋白凝胶电泳及血清学基因水平：基因水平：基因水平：基因水平：GGC mol%C mol%，DNA-DNADNA-DNA杂交，质粒及遗传物杂交，质粒及遗传物杂交，质粒及遗传物杂交，质粒及遗传物质的转导质的转导质的转导质的转导细菌分类学四个水平38牙周病有关的特殊细菌牙周病有关的特殊细菌牙周病有关的特殊细菌牙周病有关的特殊细菌证据充分的致病菌证据充分的致病菌证据充分的致病菌证据充分的致病菌中等证据的中等证据的中等证据的中等证据的致病菌致病菌致病菌致病菌伴放线放线杆菌伴放线放线杆菌伴放线放线杆菌伴放线放线杆菌AaAa直肠弯曲菌直肠弯曲菌直肠弯曲菌直肠弯曲菌(Actinobacillus(Actinobacillus actinomycetemcomitans)actinomycetemcomitans)(campylobacter rectus)(campylobacter rectus)牙龈卟啉单胞菌牙龈卟啉单胞菌牙龈卟啉单胞菌牙龈卟啉单胞菌PgPg缠结优杆菌缠结优杆菌缠结优杆菌缠结优杆菌(Porphyromonas gingivalis)(Porphyromonas gingivalis)(Eubacterium nodatum)(Eubacterium nodatum)福塞似杆菌福塞似杆菌福塞似杆菌福塞似杆菌BfBf具核梭杆菌具核梭杆菌具核梭杆菌具核梭杆菌FnFn (Bacteroides forsythus)(Bacteroides forsythus)(Fusobacteruim nucleatum)(Fusobacteruim nucleatum)中间普氏菌中间普氏菌中间普氏菌中间普氏菌PiPi(prevotella intermedia)(prevotella intermedia)微小消化链球菌微小消化链球菌微小消化链球菌微小消化链球菌Pm Pm(Peptostreptocoscus(Peptostreptocoscus micros)micros)中间链球菌群中间链球菌群中间链球菌群中间链球菌群(Intermedius(Intermedius streptococci)streptococci)牙密螺旋体牙密螺旋体牙密螺旋体牙密螺旋体TdTd(Treponema denticola)(Treponema denticola)牙周病有关的特殊细菌39常规方法不能鉴定牙周大量标本细菌的原因：常规方法不能鉴定牙周大量标本细菌的原因：常规方法不能鉴定牙周大量标本细菌的原因：常规方法不能鉴定牙周大量标本细菌的原因：大多为厌氧菌大多为厌氧菌大多为厌氧菌大多为厌氧菌培养条件要求高培养条件要求高培养条件要求高培养条件要求高鉴定繁杂鉴定繁杂鉴定繁杂鉴定繁杂每牙周袋至少取每牙周袋至少取每牙周袋至少取每牙周袋至少取2 2个区样本个区样本个区样本个区样本每样本至少分离每样本至少分离每样本至少分离每样本至少分离1010株以上可疑菌株以上可疑菌株以上可疑菌株以上可疑菌常规方法不能鉴定牙周大量标本细菌的原因：40原理原理原理原理 所有生物体都以所有生物体都以所有生物体都以所有生物体都以DNADNA形式通过形式通过形式通过形式通过4 4种种种种碱基顺序来贮存遗传信息，同种生物含碱基顺序来贮存遗传信息，同种生物含碱基顺序来贮存遗传信息，同种生物含碱基顺序来贮存遗传信息，同种生物含相同的相同的相同的相同的DNADNA序列，生物种差别越大，序列，生物种差别越大，序列，生物种差别越大，序列，生物种差别越大，DNADNA碱基顺序差别越大。碱基顺序差别越大。碱基顺序差别越大。碱基顺序差别越大。鸟嘌呤鸟嘌呤鸟嘌呤鸟嘌呤 腺嘌呤腺嘌呤腺嘌呤腺嘌呤 胞嘧啶胞嘧啶胞嘧啶胞嘧啶 胸腺胸腺胸腺胸腺嘧啶嘧啶嘧啶嘧啶G G A A C C T T C T C T 示踪剂标记的特定碱基序列的核酸示踪剂标记的特定碱基序列的核酸示踪剂标记的特定碱基序列的核酸示踪剂标记的特定碱基序列的核酸片段，能和互补碱基配对、特异地结合。片段，能和互补碱基配对、特异地结合。片段，能和互补碱基配对、特异地结合。片段，能和互补碱基配对、特异地结合。原理41ww4 4种核苷酸组成种核苷酸组成种核苷酸组成种核苷酸组成DNADNAww2 2条互补链绕成双螺旋结构条互补链绕成双螺旋结构条互补链绕成双螺旋结构条互补链绕成双螺旋结构(氢键氢键氢键氢键)严严严严格配对规律牢固结合，使格配对规律牢固结合，使格配对规律牢固结合，使格配对规律牢固结合，使DNADNA具遗传信具遗传信具遗传信具遗传信息贮存库功能（恒定性、专一性）息贮存库功能（恒定性、专一性）息贮存库功能（恒定性、专一性）息贮存库功能（恒定性、专一性）wwDNADNA上相邻上相邻上相邻上相邻3 3个核苷酸编排个核苷酸编排个核苷酸编排个核苷酸编排1 1个密码子，个密码子，个密码子，个密码子，决定决定决定决定1 1个特定氨基酸个特定氨基酸个特定氨基酸个特定氨基酸wwDNADNA核苷酸顺序决定蛋白质的氨基酸顺核苷酸顺序决定蛋白质的氨基酸顺核苷酸顺序决定蛋白质的氨基酸顺核苷酸顺序决定蛋白质的氨基酸顺序决定细胞结构和功能序决定细胞结构和功能序决定细胞结构和功能序决定细胞结构和功能4种核苷酸组成DNA42核酸探针核酸探针核酸探针核酸探针(probe)(probe)定义定义定义定义 能与特定核酸序列发生特异性能与特定核酸序列发生特异性能与特定核酸序列发生特异性能与特定核酸序列发生特异性互补的已知核酸片段，用于检测待测样互补的已知核酸片段，用于检测待测样互补的已知核酸片段，用于检测待测样互补的已知核酸片段，用于检测待测样品中是否存在与探针相同或相近的品中是否存在与探针相同或相近的品中是否存在与探针相同或相近的品中是否存在与探针相同或相近的DNADNA序列。序列。序列。序列。核酸探针(probe)43 牙周病相关菌的核酸探针是牙周病相关菌牙周病相关菌的核酸探针是牙周病相关菌牙周病相关菌的核酸探针是牙周病相关菌牙周病相关菌的核酸探针是牙周病相关菌染色体染色体染色体染色体DNADNA上的有种属特异性的一小段上的有种属特异性的一小段上的有种属特异性的一小段上的有种属特异性的一小段DNADNA（或（或（或（或RNARNA）分子的碱基序列，为带标记的单股）分子的碱基序列，为带标记的单股）分子的碱基序列，为带标记的单股）分子的碱基序列，为带标记的单股核苷酸，能以互补方式与相应核苷酸，能以互补方式与相应核苷酸，能以互补方式与相应核苷酸，能以互补方式与相应DNADNA键结合。用键结合。用键结合。用键结合。用已知细菌的已知细菌的已知细菌的已知细菌的DNADNA探针去探测未知细菌的探针去探测未知细菌的探针去探测未知细菌的探针去探测未知细菌的DNADNA，若能杂交形成若能杂交形成若能杂交形成若能杂交形成DNADNA双链则认为该菌为与探针相双链则认为该菌为与探针相双链则认为该菌为与探针相双链则认为该菌为与探针相同的菌。同的菌。同的菌。同的菌。牙周病相关菌的核酸探针是牙周病相关菌染色体D44放射性同位素标记：如放射性同位素标记：如放射性同位素标记：如放射性同位素标记：如 32P 32P、35S35S、3H3H灵敏度高灵敏度高灵敏度高灵敏度高理化影响小理化影响小理化影响小理化影响小污染环境污染环境污染环境污染环境使用某些半抗原：如使用某些半抗原：如使用某些半抗原：如使用某些半抗原：如 生物素、地高辛、荧光素生物素、地高辛、荧光素生物素、地高辛、荧光素生物素、地高辛、荧光素特异性较低特异性较低特异性较低特异性较低敏感性较低敏感性较低敏感性较低敏感性较低放射性同位素标记：如 32P、35S、3H灵敏度高45合成小段单链合成小段单链合成小段单链合成小段单链DNADNA方法日臻完善方法日臻完善方法日臻完善方法日臻完善寡核苷酸的化学合成可由高度自动化寡核苷酸的化学合成可由高度自动化寡核苷酸的化学合成可由高度自动化寡核苷酸的化学合成可由高度自动化的仪器完成的仪器完成的仪器完成的仪器完成核酸杂交技术得到发展核酸杂交技术得到发展核酸杂交技术得到发展核酸杂交技术得到发展合成小段单链DNA方法日臻完善寡核苷酸的化学合成可由高度自46探针类型探针类型探针类型探针类型全基因探针：属内代表菌株分离出全基因探针：属内代表菌株分离出全基因探针：属内代表菌株分离出全基因探针：属内代表菌株分离出DNADNA并进行并进行并进行并进行标记，制备简便，特异性较差，有时可与相标记，制备简便，特异性较差，有时可与相标记，制备简便，特异性较差，有时可与相标记，制备简便，特异性较差，有时可与相近属菌种发生杂交近属菌种发生杂交近属菌种发生杂交近属菌种发生杂交克隆克隆克隆克隆DNADNA片段探针片段探针片段探针片段探针随意探针：代表菌随意探针：代表菌随意探针：代表菌随意探针：代表菌DNADNA用限制性内切酶酶切，用限制性内切酶酶切，用限制性内切酶酶切，用限制性内切酶酶切，随意克隆一些片段，找到仅能与本属内菌株随意克隆一些片段，找到仅能与本属内菌株随意克隆一些片段，找到仅能与本属内菌株随意克隆一些片段，找到仅能与本属内菌株杂交的杂交的杂交的杂交的DNADNA片段片段片段片段特异性高，但需大量试验方能验证其特异性特异性高，但需大量试验方能验证其特异性特异性高，但需大量试验方能验证其特异性特异性高，但需大量试验方能验证其特异性特定探针：克隆属内代表菌特异性蛋白或毒力因特定探针：克隆属内代表菌特异性蛋白或毒力因特定探针：克隆属内代表菌特异性蛋白或毒力因特定探针：克隆属内代表菌特异性蛋白或毒力因子的基因，从该基因中取一段作为探针，检子的基因，从该基因中取一段作为探针，检子的基因，从该基因中取一段作为探针，检子的基因，从该基因中取一段作为探针，检验致病菌具独特作用，但需对其特异性、敏验致病菌具独特作用，但需对其特异性、敏验致病菌具独特作用，但需对其特异性、敏验致病菌具独特作用，但需对其特异性、敏感性验证感性验证感性验证感性验证探针类型47探针的验证探针的验证探针的验证探针的验证特异性验证：特异性验证：特异性验证：特异性验证：必须与必须与必须与必须与5050种菌属的种菌属的种菌属的种菌属的8030080300株菌株进行杂交株菌株进行杂交株菌株进行杂交株菌株进行杂交必须与相近细菌属中的大量菌间排除必须与相近细菌属中的大量菌间排除必须与相近细菌属中的大量菌间排除必须与相近细菌属中的大量菌间排除“交交交交叉杂交叉杂交叉杂交叉杂交”如伴放线放线杆菌嗜血杆菌属菌株如伴放线放线杆菌嗜血杆菌属菌株如伴放线放线杆菌嗜血杆菌属菌株如伴放线放线杆菌嗜血杆菌属菌株敏感性验证：敏感性验证：敏感性验证：敏感性验证：必须与同属各地区分离的必须与同属各地区分离的必须与同属各地区分离的必须与同属各地区分离的100100株以上菌种进株以上菌种进株以上菌种进株以上菌种进行杂交行杂交行杂交行杂交如核酸杂交结果与生化反应鉴定结果有出如核酸杂交结果与生化反应鉴定结果有出如核酸杂交结果与生化反应鉴定结果有出如核酸杂交结果与生化反应鉴定结果有出入，应进一步验证生化结果。入，应进一步验证生化结果。入，应进一步验证生化结果。入，应进一步验证生化结果。探针的验证48寡核苷酸寡核苷酸寡核苷酸寡核苷酸(oligonucleotide)(oligonucleotide)探针序列探针序列探针序列探针序列细菌细菌细菌细菌 探针名称探针名称探针名称探针名称 序列序列序列序列AaAaAa-2Aa-2CTTCGGGCACYAGGGCTAAACCCCCTTCGGGCACYAGGGCTAAACCCCPgPgPg-1Pg-1CAATACTCGTATCGCCCGTTATTCCAATACTCGTATCGCCCGTTATTCPg-3Pg-3CTGTGGAATCTTGACGGTATATCGCTGTGGAATCTTGACGGTATATCGPg-4Pg-4GTATAAAAGAAGTTTAAAYCCTTGTATAAAAGAAGTTTAAAYCCTTPg-5Pg-5CCGATGCTTATTCTTACGGTACATCCGATGCTTATTCTTACGGTACATPg-6Pg-6CCTTAGGACAGTCTTCCTTCACGCCCTTAGGACAGTCTTCCTTCACGCBfBfBf-2Bf-2CGTATCTCATTTTATTCCCCTGTACGTATCTCATTTTATTCCCCTGTABf-4Bf-4CTGTAGAGCTTACACTATATCGCACTGTAGAGCTTACACTATATCGCAPiPiPi-1Pi-1GGTCCTTATTCGAAGGGTAAATGCGGTCCTTATTCGAAGGGTAAATGCPi-2Pi-2CCCTAGGYGCGCTCCTCGCGGTTACCCTAGGYGCGCTCCTCGCGGTTA寡核苷酸(oligonucleotide)探针序列49特定特定特定特定DNADNA片段探针序列（基因探针）片段探针序列（基因探针）片段探针序列（基因探针）片段探针序列（基因探针）细菌细菌细菌细菌 靶基因靶基因靶基因靶基因 序列序列序列序列 长度长度长度长度AaAaLktaLkta5-CAGCAAGCTGCACAGTTTGCAAA-5-CAGCAAGCTGCACAGTTTGCAAA-33238bp238bp5-CATTAGTTAATGCCGGGCCGTCT-35-CATTAGTTAATGCCGGGCCGTCT-316Sr DNA16Sr DNA5-5-GCTAATACCGCGTAGAGTCGG-3GCTAATACCGCGTAGAGTCGG-3443bp443bp5-ATTTCACCCTCACTTAAAGGT-35-ATTTCACCCTCACTTAAAGGT-3 16Sr DNA 16Sr DNA 5-5-CTCAGAGATGGTTTGTGCC-3CTCAGAGATGGTTTGTGCC-3273bp273bp5-AGATTCACTCCCCATCGCTG-35-AGATTCACTCCCCATCGCTG-3PgPg Fim A Fim A 5-ATAATGGAGAACAGCAGGAA-35-ATAATGGAGAACAGCAGGAA-3131bp131bp5-TCTTGCCAACCAGTTCCATTGC-35-TCTTGCCAACCAGTTCCATTGC-3Prt CPrt C5-ACAATCCACGAGACCATC-35-ACAATCCACGAGACCATC-3584bp584bp5-TTCAGCCACACCGAGACG-35-TTCAGCCACACCGAGACG-316Sr DNA16Sr DNA5-5-AGGCAGCTTGCCATACTGCG-3AGGCAGCTTGCCATACTGCG-3404bp404bp5-ACTGTTAGCAACTACCGATGT-35-ACTGTTAGCAACTACCGATGT-3 特定DNA片段探针序列（基因探针）50续表续表细菌细菌 靶基因靶基因 序列序列 长度长度PgPg 16Sr RNA16Sr RNA 5-GCGTATGCAACTTGCCTTAC-35-GCGTATGCAACTTGCCTTAC-3518bp518bp5-GTTTCAACGGCAGGCTGAAC-35-GTTTCAACGGCAGGCTGAAC-3FnFn504750475-CAAATGCTTGTGTCAATAATACT-35-CAAATGCTTGTGTCAATAATACT-30.5Kb0.5Kb5-TTTAGAAGAAATGGTAGAATAAT-35-TTTAGAAGAAATGGTAGAATAAT-350590505905-ATTGTGGCTAAAATTASTAGTT-35-ATTGTGGCTAAAATTASTAGTT-31Kb1Kb5-ACCCTCACTTTGAGGATTATAG-35-ACCCTCACTTTGAGGATTATAG-3Pi 18Sr RNAPi 18Sr RNA5-CCTAATACCCGATGTCCACA-35-CCTAATACCCGATGTCCACA-3855bp855bp5-AAGGAGTCAACATCTCTGTATCC-35-AAGGAGTCAACATCTCTGTATCC-3TdTdTdpATdpA5-AAGGCGGTAGAGCCGCTCA-35-AAGGCGGTAGAGCCGCTCA-3311bp311bp5-AGCCGCTGTCGAAAAGCCA-35-AGCCGCTGTCGAAAAGCCA-3续表51PCRPCR扩增扩增扩增扩增16SrRNA 16SrRNA 基因病原菌检测遗基因病原菌检测遗基因病原菌检测遗基因病原菌检测遗传学分类传学分类传学分类传学分类 rRNA rRNA是细胞中最多的一种是细胞中最多的一种是细胞中最多的一种是细胞中最多的一种RHARHA，很多分子组成核蛋白体很多分子组成核蛋白体很多分子组成核蛋白体很多分子组成核蛋白体(核糖体核糖体核糖体核糖体)，rRNArRNA分子大小一般用超速离心的沉降系数分子大小一般用超速离心的沉降系数分子大小一般用超速离心的沉降系数分子大小一般用超速离心的沉降系数S S表表表表示，示，示，示，S S越大，分子也越大。越大，分子也越大。越大，分子也越大。越大，分子也越大。PCR扩增16SrRNA 基因病原菌检测遗传学分类5216SrRNA16SrRNA基因：细菌染色体上编码基因：细菌染色体上编码基因：细菌染色体上编码基因：细菌染色体上编码rRNArRNA相对应的相对应的相对应的相对应的DNADNA序列序列序列序列保守区稳定性（细菌共有，称保守区稳定性（细菌共有，称保守区稳定性（细菌共有，称保守区稳定性（细菌共有，称“分子分子分子分子化石化石化石化石”）可变区特异性（保守区间有可变区特异性（保守区间有可变区特异性（保守区间有可变区特异性（保守区间有V1V1V10V10可变区，含种属差异信息，如出现可变区，含种属差异信息，如出现可变区，含种属差异信息，如出现可变区，含种属差异信息，如出现3 3个个个个碱基以上差异，便可判定不同属）碱基以上差异，便可判定不同属）碱基以上差异，便可判定不同属）碱基以上差异，便可判定不同属）多拷贝敏感性（约多拷贝敏感性（约多拷贝敏感性（约多拷贝敏感性（约15001500个核苷酸，个核苷酸，个核苷酸，个核苷酸，每细菌含每细菌含每细菌含每细菌含5 51010个拷贝）个拷贝）个拷贝）个拷贝）16SrRNA基因：细菌染色体上编码rRNA相对应的DNA序5316SrRNA16SrRNA编码基因编码基因编码基因编码基因保守区的引物：对所有细菌均适宜的保守区的引物：对所有细菌均适宜的保守区的引物：对所有细菌均适宜的保守区的引物：对所有细菌均适宜的引物引物引物引物可变区的引物：可变区的引物：可变区的引物：可变区的引物：PCRPCR扩增，凝胶电泳扩增，凝胶电泳扩增，凝胶电泳扩增，凝胶电泳可鉴别细菌种属可鉴别细菌种属可鉴别细菌种属可鉴别细菌种属间隔区的引物：间隔区的引物：间隔区的引物：间隔区的引物：16SrRNA16SrRNA和和和和23SrRNA23SrRNA编码基因间存在编码基因间存在编码基因间存在编码基因间存在0.5Kb0.5Kb间隔间隔间隔间隔区，不同种属间隔区长度的序列有特区，不同种属间隔区长度的序列有特区，不同种属间隔区长度的序列有特区，不同种属间隔区长度的序列有特异性，可鉴别细菌种属异性，可鉴别细菌种属异性，可鉴别细菌种属异性，可鉴别细菌种属16SrRNA编码基因54牙周病分子生物学课件55牙周病分子生物学课件56优点优点优点优点灵敏度高、特异性强、提高检测质量灵敏度高、特异性强、提高检测质量灵敏度高、特异性强、提高检测质量灵敏度高、特异性强、提高检测质量不依赖培养，可直接从标本检测不依赖培养，可直接从标本检测不依赖培养，可直接从标本检测不依赖培养，可直接从标本检测可鉴别营养要求复杂，生长缓慢微生物，特别可鉴别营养要求复杂，生长缓慢微生物，特别可鉴别营养要求复杂，生长缓慢微生物，特别可鉴别营养要求复杂，生长缓慢微生物，特别目前不能体外培养繁殖的细菌目前不能体外培养繁殖的细菌目前不能体外培养繁殖的细菌目前不能体外培养繁殖的细菌能克服表型变异影响：形态变化、死菌、混杂能克服表型变异影响：形态变化、死菌、混杂能克服表型变异影响：形态变化、死菌、混杂能克服表型变异影响：形态变化、死菌、混杂菌菌菌菌能鉴定菌种、毒种及亚种（提供不同病原体能鉴定菌种、毒种及亚种（提供不同病原体能鉴定菌种、毒种及亚种（提供不同病原体能鉴定菌种、毒种及亚种（提供不同病原体DNADNA分子分子分子分子“指纹指纹指纹指纹”图，未解释病因学、流图，未解释病因学、流图，未解释病因学、流图，未解释病因学、流行病学行病学行病学行病学可检测细菌对抗生素的耐药现象可检测细菌对抗生素的耐药现象可检测细菌对抗生素的耐药现象可检测细菌对抗生素的耐药现象优点57缺点缺点缺点缺点技术过于苛求，需一定条件和设备技术过于苛求，需一定条件和设备技术过于苛求，需一定条件和设备技术过于苛求，需一定条件和设备 大部分探针需进口，化费较大大部分探针需进口，化费较大大部分探针需进口，化费较大大部分探针需进口，化费较大缺点58应用应用应用应用牙周细菌分类、分型、快速检测牙周细菌分类、分型、快速检测牙周细菌分类、分型、快速检测牙周细菌分类、分型、快速检测评估细菌毒力因子作用评估细菌毒力因子作用评估细菌毒力因子作用评估细菌毒力因子作用检测细菌基因异常及异常表达检测细菌基因异常及异常表达检测细菌基因异常及异常表达检测细菌基因异常及异常表达临床检测、流行规律临床检测、流行规律临床检测、流行规律临床检测、流行规律应用59小小小小 结结结结 牙周病分子生物学是研究牙周病原体的蛋白和牙周病分子生物学是研究牙周病原体的蛋白和牙周病分子生物学是研究牙周病原体的蛋白和牙周病分子生物学是研究牙周病原体的蛋白和核酸核酸核酸核酸(DNA,RNA)(DNA,RNA)分子结构，用分子生物学分子结构，用分子生物学分子结构，用分子生物学分子结构，用分子生物学方法追踪病原体传播途径，发现病原体变方法追踪病原体传播途径，发现病原体变方法追踪病原体传播途径，发现病原体变方法追踪病原体传播途径，发现病原体变异；从宿主基因水平或分子水平阐明牙周异；从宿主基因水平或分子水平阐明牙周异；从宿主基因水平或分子水平阐明牙周异；从宿主基因水平或分子水平阐明牙周病的发病机制和流行规律，将宏观的牙周病的发病机制和流行规律，将宏观的牙周病的发病机制和流行规律，将宏观的牙周病的发病机制和流行规律，将宏观的牙周病发生发展规律与微观的宿主或病原体基病发生发展规律与微观的宿主或病原体基病发生发展规律与微观的宿主或病原体基病发生发展规律与微观的宿主或病原体基因特征联系起来，逐步建立牙周病临床的因特征联系起来，逐步建立牙周病临床的因特征联系起来，逐步建立牙周病临床的因特征联系起来，逐步建立牙周病临床的分子诊断、分子指征、分子预后乃至基因分子诊断、分子指征、分子预后乃至基因分子诊断、分子指征、分子预后乃至基因分子诊断、分子指征、分子预后乃至基因治疗。治疗。治疗。治疗。小 结 60ww细菌分类已从表型特性鉴定深化为基因特征细菌分类已从表型特性鉴定深化为基因特征细菌分类已从表型特性鉴定深化为基因特征细菌分类已从表型特性鉴定深化为基因特征分类，从形态、生化提高到基因、分子水平。分类，从形态、生化提高到基因、分子水平。分类，从形态、生化提高到基因、分子水平。分类，从形态、生化提高到基因、分子水平。快速、经济、简便的核酸杂交法给牙周病的快速、经济、简便的核酸杂交法给牙周病的快速、经济、简便的核酸杂交法给牙周病的快速、经济、简便的核酸杂交法给牙周病的病因研究和临床检测带来很大便利。病因研究和临床检测带来很大便利。病因研究和临床检测带来很大便利。病因研究和临床检测带来很大便利。细菌分类已从表型特性鉴定深化为基因特征分类，从形态、生化提高61